一种具有抗氧化、延缓衰老作用的当归多肽在制备食品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品技术领域，进一步属于保健食品技术领域（也称之为健康食品或 功能食品），具体涉及一种具有抗氧化、延缓衰老作用的当归多肽在制备食品或保健食品中 的应用。 技术背景
[0002] 随着全球人口老龄化趋势逐年走高，与衰老相关的疾病的发展态势也日益严峻， 成为严重危害人类生命健康和生活质量的重大疾病，引起了国际生物医药领域的广泛和深 入关注。尽管衰老及其相关疾病的发生和发展机制较为复杂，但是大量研宄表明，氧化胁迫 损伤是其重要特征之一。根据衰老的自由基理论，当生物体处于氧化胁迫环境时，体内氧化 还原代谢失衡，促使内源性活性氧自由基增加，进而与各类生物大分子反应，引起细胞损伤 和凋亡出现机体老化和器官功能衰退的现象。因此，通过减少体内的自由基聚集，缓解氧化 胁迫是延缓衰老进程的重要策略。
[0003] 我国拥有丰富的中药材资源，为研宄具有抗氧化、延衰老的作用的生物活性物质 提供了庞大的药用和保健资源库。当归为伞形科多年生草本植物当归的干燥根茎，传统药 效作用包括补血活血；调经止痛；润燥滑肠等，已体现出宝贵的药用保健价值。现代研宄表 明，某些植物中提取制备的多肽具有镇痛、抗炎、抗肿瘤、抗凝血、抗氧化和抗衰老等广泛的 药理活性和功能，在保健品领域具有巨大的开发和应用潜力。然而，目前对当归多肽活性功 能的研宄开发尚较少，缺乏其在抗氧化与延缓衰老方面的相关研宄。因此，积极开发具有抗 氧化与延衰作用的中药多肽将对衰老相关疾病的预防和治疗均具有重大的意义，也将为多 肽类产品的开发应用和中药新功能的研宄做出贡献。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种具有抗氧化、延缓衰老作用的当归多肽在制备食品中 的应用，采用该具有抗氧化、延缓衰老作用的当归多肽作为唯一或主要活性成分制成的食 品或保健食品，具有抗氧化、延缓衰老功效。
[0005] 本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：一种具有抗氧化、延缓衰老作 用的当归多肽在制备食品中的应用。
[0006] 本发明所述的食品优选为保健食品。
[0007] 本发明所述的当归多肽可以单独或者与其它活性成分合用。
[0008] 本发明所述的保健食品是以具有抗氧化、延缓衰老作用的当归多肽作为唯一活性 成分或主要活性成分加上保健食品上可接受的辅料制备获得的。
[0009] 本发明所述的保健食品的剂型优选为粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、 泡腾剂、合剂、口服液或膏剂。
[0010] 其中所述的抗氧化、延缓衰老作用是指对以病理或生理条件下发生的氧化应激反 应所产生的变化为主要特征的衰老及衰老相关疾病的防治作用。
[0011] 本发明中所述的当归多肽优选通过以下方法制备获得：一种当归多肽的制备方 法，以当归为原料，经蛋白提取、盐析、透析和双酶解制备获得。
[0012] 采用本发明上述方法获得的当归多肽，经试验验证，具有抗氧化及延缓衰老的作 用，可用于制备具有抗氧化和延缓衰老作用的食品或保健食品。
[0013] 作为本发明的一种优选的实施方式，本发明中的当归多肽具体通过以下方法制备 获得：取当归，进行蛋白提取，获得蛋白提取液，将蛋白提取液进行盐析，盐析后离心，取蛋 白沉淀，将蛋白沉淀采用透析袋进行透析处理，取透析截留液，将透析截留液干燥获得沉淀 物，将沉淀物用水溶解后加入双酶进行酶解，酶解产物干燥后获得当归多肽。
[0014] 在上述当归多肽的制备过程中，各工序的具体参数如下：
[0015] 蛋白提取时，采用Tris-HCl缓冲液提取，其中Tris-HCl缓冲液的浓度为1? 20mmol/L，Tris-HCl缓冲液与当归的用量关系为5?50mL :lg，Tris-HCl缓冲液的pH值为 7. 0?9. 0,提取时间优选为8?24h。
[0016] 盐析时采用硫酸铵，在蛋白提取后获得的蛋白提取液中加入硫酸铵至其饱和度为 50 ?90%。
[0017] 透析时，透析袋的截留分子量为1. 0?5. OkD。
[0018] 双酶为胰酶和木瓜酶，酶解温度为37?80°C，酶解时间为2?10h。
[0019] 上述方法获得的当归多肽采用超滤法进行截留分段，可得到不同分子量范围的多 肽组分。
[0020] 所述截留分段为依次使用截留分子量为5kDa和3kDa超滤离心管离心，加入当归 多肽溶液后于6000?SOOOrpm下离心进行截留分段，按照分子量大小依次分为大于5kDa、 3?5kDa和小于3kDa的三个组分，干燥后获得相应当归多肽组分。
[0021] 截留分段的当归多肽组分经过凝胶层析再纯化，利用氨基酸测序技术和数据库比 对法测定可得到多肽组成和氨基酸序列。
[0022] 上述小于3kDa的当归多肽组分经过凝胶层析再纯化，利用氨基酸测序技术和数 据库比对法测定已得到多肽组成和氨基酸序列。具体如下：
[0023] AGLQFPVGR、AMPVEVVQF、AGFAGDDAPR、AVFPSIVGRPR、AAPFPGQKSLQR、DLTDFL、 ESTAKQVIR、EGGDGGYGGGGGGSRW、EGGGGGYGGGGGGYGGR、GGVLPNINPVL、GTIAGGGVIPH、 GGGGYGGGGGGYGGGGGGY、 IGGIGTVPVGR、 IKGTIAGGGVIPH、 IIGATNPAESAPGTIR、 KKVGYNPDKIPFVPISGFE⑶NMIER、LTADILPR、LASSGIDHEGRLPR、MIAFNKEQDTDLQSK、PSIVGRP、 QTVAVGVIK、REGGGGGYGGGGGGYGGR、TTAGILLPEK、TKMDEGWTKK、VWNIPPTLK、VETGVIKPGM、 VLVSGSIHYPR、YGVSGYPTLK(即如序列表中 SEQ ID NO. 1 ?SEQ ID N0. 28 所示）。
[0024] 所述的凝胶层析柱的填充材料优选为葡聚糖凝胶、修饰葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺 凝胶、琼脂糖类凝胶或多孔玻璃微球。
[0025] 本发明提供的当归多肽具有抗氧化、延缓衰老作用，主要表现在能够在整体动物 水平上缓解由氧化应激引发的早衰和正常衰老，并延长寿命，因此可用于延缓衰老和防治 氧化、衰老有关的疾病方面产品的开发和应用。
[0026] 本发明具有如下优点：
[0027](1)本发明中的当归多肽在体外，以一定的羟自由基清除率为特征显示其具有清 除活性氧的能力；在整体动物水平上，以氧化应激模型和衰老相关的模型进行试验，揭示 其能够显著延长氧化胁迫条件下秀丽线虫的存活时间，减少衰老线虫体内的脂褐素水平， 延长其平均寿命等表征，并证实当归多肽在氧化应激和衰老条件下是通过降低体内活性氧 自由基（ROS)水平，降低脂质过氧化物的含量来实现其显著的抗氧化和延缓衰老作用的； 其中分子量小于3kDa的当归多肽组分具备更为显著的体内外抗氧化活性和延缓衰老的作 用，如可显著地提高秀丽线虫氧化胁迫条件下的生存率、延长寿命、减少衰老相关代谢产物 的沉积、降低体内外氧化自由基的水平等；
[0028] (2)本发明经研宄发现，当归多肽在动物整体水平上对氧化应激诱发的早衰具有 抑制作用，并能延长正常衰老状况下生物群体的平均寿命、延缓衰老，表明其可应用于具有 抗氧化、延缓衰老功效的保健食品中，从而为中药现代化和多肽产品深入应用提供了新方 向，也可为延缓衰老和防治衰老相关疾病做出贡献；
[0029] (3)本发明中当归多肽的制备方法具有周期短，试剂消耗少，工艺简单，安全无毒， 稳定高效等特点，适合工业化生产。
【附图说明】
[0030] 下面通过具体的实施方式及药效学研宄结果对本发明作进一步说明。
[0031] 图1为实施例4中当归多肽一定梯度的浓度下呈剂量依赖型地延长氧化胁迫条 件下秀丽线虫的生存时间，提高存活率，说明当归多肽能够缓解由氧化胁迫引起的早衰现 象；
[0032] 图2为实施例5中当归多肽在一定梯度的浓度下随着浓度增加而增强对羟自由基 的清除能力，说明当归多肽具有能够清除以羟自由基为代表的活性氧的作用；
[0033] 图3为实施例6中当归多肽在一定梯度浓度下随着浓度增加而增强对羟自由基的 清除能力，说明浓度当归多肽具有能够清除以羟自由基为代表的活性氧的作用；
[0034] 图4为实施例8中当归多肽各组分在体外对羟自由基具有一定清除率，说明经超 滤截留分段后得到的当归多肽各组分均具有清除羟自由基的能力；
[0035] 图5为实施例9中当归多肽各组分能延长氧化胁迫条件下秀丽线虫的生存时间， 提高存活率，说明经超滤截留分段后得到的当归多肽三个组分均能缓解氧化胁迫引起的早 衰现象，且小于3kDa的多肽组分效果最优；
[0036] 图6为实施例10中小于3kDa的当归多肽组分在一定梯度浓度下成呈剂量依赖型 地延长氧化胁迫条件下秀丽线虫的生存时间，提高存活率，说明当归多肽能够缓解由氧化 胁迫引起的早衰现象；
[0037] 图7为实施例11中小于3kDa的当归多肽组分在各浓度时能够延长秀丽线虫寿命 的作用；
[0038] 图8为实施例12中小于3kDa的当归多肽组分在各浓度下可减少衰老相关的体内 自发荧光标记物脂褐素的沉积量；
[0039] 图9为实施例13中小于3kDa的当归多肽组分相应浓度下对降低衰老早期（图 9A)和外界氧化胁迫条件（