一种柳枝稷青贮加工方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种柳枝稷青贮加工方法，属于农业技术领域。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着我国畜牧业的发展，带动了草地禾本科牧草产业的迅速发展。优质 禾本科牧草越来越受到人们的青睐。但是随着家畜头数的不断增加，天然生长的这些牧草 已不能满足家畜全年的营养需要，因此生产者通过人工种植优质高产的牧草来解决这一矛 盾。柳枝稷等禾本科牧草，生产力高，具有优良牧草特性和水土保持能力，且抗逆性极强，可 在干旱和半干旱地区、低洼易涝和盐碱地区、土壤贫瘠的山区和半山区种植，作为引种牧草 的研宄逐步受到关注。
[0003] 目前，国内对柳枝稷的研宄集中在栽培和管理方面，在贮存方面鲜有报道。从世界 范围来看，牧草的保藏主要以晒制干草和制作青贮为主。干草调制主要以自然干燥为主，但 在牧草收获季节通常面临雨季，由于雨淋等原因造成的干物质的损失可达20% -30%。就 目前来来，青贮技术是牧草保藏的理想措施。因为青贮保藏期间生成乙醇、乙酸、乳酸等高 能物质，使总能的损失降低，同时也可以减少营养成分的损失，保持青绿饲料的营养成分。 青贮饲料还具有适口性好，消化率高，调制方便，保藏投入低等优点。微生物添加剂作为有 机添加剂，具有生态安全，应用方便、价格低廉等优点。目前，市场上已有很多此种微生物产 品，其中乳酸菌、纤维素分解菌和酶制剂等微生态制剂的开发和应用受到广泛关注。添加的 酶制剂主要有纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶和淀粉酶等，在青贮中应用较多的酶是纤维素 分解酶，其存在于黑曲霉和木霉的培育物中。青贮发酵时，乳酸菌只能利用可溶性糖而不能 利用纤维素或半纤维素，鲜作物中WSC含量过低时，乳酸菌添加剂不会发生作用。禾本科牧 草中含有大量的纤维素和半纤维素，葡萄糖等可溶性糖含量较低，在青贮时结合使用乳酸 菌和纤维素酶，把纤维素和半纤维素分解为葡萄糖、木糖等单糖，从而在促进乳酸发酵的同 时也可以提高动物的消化率。
[0004] 在稻草、玉米秸杆青贮过程中同时添加乳酸菌和纤维素酶均有报道。如 CN1568755A公开了一种用于制备青贮饲料的添加剂，该添加剂包含混合菌粉、混合酶粉。 CN1409986A公开了一种青贮专用乳酸菌接种剂，其中含有植物乳杆菌原粉，戊糖片球菌原 粉，纤维素酶，半纤维素酶等。但由于选用的菌种及酶的来源、使用剂量不同，作用的底物 也不一样，故将这类添加剂用于柳枝稷青贮过程中，效果并不理想。
【发明内容】
[0005] 本发明目的是提供一种柳枝稷青贮加工方法，可有效改善青贮饲料的发酵品质。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0007] -种柳枝稷青贮加工方法，即在柳枝稷青贮同时添加复合菌剂和纤维素复合酶进 行厌氧发酵。
[0008] 其中，所述复合菌剂添加量为4. 5X 107-5. 5X 107CFU/g鲜质量（FM)，优选 5· 2X 107CFU/g鲜质量（FM);所述纤维素复合酶的添加量为2· 0-10. Omg/kg干物质（DM);优 选8mg/Kg干物质（DM)。
[0009] 其中，所述复合菌剂是由植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳球菌分别发酵，再将所得 发酵液混合而得；其中混合发酵液中植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸乳球菌的菌落形成单 位数目比为90-96 :3. 5-6 :0. 5-4,且菌落形成单位总数目为0. 8 X IO12-L 2 X 1012CFU/ml。。
[0010] 其中，所述植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)，保藏编号为JCM 1149T ;
[0011] 所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)，保藏编号为CGMCC No. 6733 ;
[0012] 所述乳酸乳球菌（Lactococcus Iactis)，保藏编号为ATCCl 1007。
[0013] 所述混合发酵液中植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸乳球菌的菌落形成单位数目 比优选为94 :4. 5 :1. 5,菌落形成单位总数目为I X 1012CFU/ml。
[0014] 本发明所述的复合菌剂可以使接种的乳酸菌迅速成为发酵饲料中的优势菌，有效 控制发酵饲料的微生物区系。
[0015] 所述纤维素复合酶选自崩溃酶D9515、纤维素酶V2010、纤维素酶C9748或半纤维 素酶笑果中一种或两种以上。优选纤维素酶C9748。
[0016] 其中所述崩溃酶D9515来源于Basidiomycetes sp.;所述纤维素酶V2010来源 于 Aspergillus sp.;所述纤维素酶 C9748 来源于 Trichoderma Iongibrachiatum;所述 半纤维素酶笑果来源于Aspergills oryzae ;其中，所述D9515、V2010、C9748均购自美国 Sigma-Aldrich公司，所述半纤维素酶笑果由浙江湖州笑果生物科技公司提供。
[0017] 作为本发明优选的实施方式，所述柳枝稷青贮加工方法如下：
[0018] 将复合菌剂与纤维素复合酶C9748混合，加少量水均匀喷洒柳枝稷表面，厌氧发 酵；
[0019] 其中复合菌剂添加量为5. 2X 107CFU/g FM，纤维素复合酶添加量为8mg/Kg DM ;
[0020] 其中，所述复合菌剂中植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸乳球菌的菌落形成单位数 目比为94 :4. 5 :1. 5,且菌落形成单位总数目为I. 0 X 1012CFU/ml。
[0021] 本发明所述的青贮加工方法有效改善柳枝稷青贮的发酵水平。发酵产物中pH值 低，粗蛋白含量和体外干物质消化率高，洗涤纤维、纤维素、半纤维素和木质素含量均一定 程度的降低。本发明所述青贮加工方法生态安全，应用简易，成本低廉，显著提高青贮效果。
【具体实施方式】
[0022] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0023] 实施例1复合菌剂的制备
[0024] 将植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸乳球菌分别接种于MRS-S培养基中，30°C静置 培养72h，所得发酵液按比例混合，其中植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸乳球菌的菌落形成 单位数目比为94 :4. 5 :1. 5,且菌落形成单位总数目为I X 1012CFU/ml，即得青贮接种剂。
[0025] 实施例2柳枝稷青贮加工方法
[0026] 步骤如下：
[0027] 将实施例1所得复合菌剂与纤维素复合酶C9748混合，加少量水均匀喷砂柳枝稷 表面，其中复合菌剂添加量为5. 2X 107CFU/gFM，纤维素复合酶添加量为8mg/Kg DM ;将柳枝 稷装入2L螺口瓶中压实密封，进行厌氧发酵30天。
[0028] 实施例3柳枝稷青贮加工方法
[0029] 按照实施例2所述青贮加工方法进行发酵，区别在于：
[0030] 1)所述纤维素复合酶为崩解酶D9515, CAS号85186-71-6,来源于Basidiomycetes sp.，购自 Sigma-Aldrich 公司；
[0031] 2)复合菌剂添加量为4. 5X 107CFU/g FM，纤维素复合酶添加量为10mg/Kg DM.
[0032] 实施例4柳枝稷青贮加工方法
[0033] 按照实施例2所述青贮加工方法进行发酵，区别在于：
[0034] 1)所述纤维素复合酶为细胞壁降解酶V2010, Sigma Viscozyme? L，来源于 Basidiomycetes sp.，购自 Sigma-Aldrich 公司。
[0035] 2)复合菌剂添加量为5. 5X 107CFU/g FM，纤维素复合酶添加量为2mg/Kg DM.
[0036] 实施例5柳枝稷青贮加工方法
[0037] 按照实施例2所述青贮加工方法进行发酵，区别在于：
[0038] 1)所述纤维素复合酶为木聚糖酶笑果，来源于Aspergills oryzae购自浙江湖州 笑果生物科技公司。
[0039] 2)复合菌剂添加量为5. 3X 107CFU/g FM，纤维素复合酶添加量为4mg/Kg DM.
[0040] 实验例1青贮效果试验
[0041] 对比例1 :采用CN1568755A实施例1所得接种剂按照实施例2方法对柳枝稷进行 青贮，发酵30天。
[0042] 对比例2 :采用CN1409986A实施例1所得接种剂按照实施例2方法对柳枝稷进行 青贮，发酵30天。
[0043] 空白对照组：将柳枝稷不添加任何添加剂，直接按照实施例2方法进行青贮，发酵 30天。
[0044] 对实施例2-5以及对比例1、2所得发酵产物进行检测，并以空白对照组计算，其结 果如下表。
[0045]
【主权项】
1. 一种柳枝稷青贮加工方法，其特征在于，向柳枝稷中同时添加复合菌剂和纤维素复 合酶进行厌氧发酵； 其中，所述复合菌剂是由植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳球菌分别发酵，再将所得发酵 液混合而得； 所述纤维素复合酶选自来源于Basidiomycetes sp.的崩溃酶D9515、来源于 Aspergillus sp.的纤维素酶 V2010、来源于 Trichoderma Iongibrachiatum 的纤维素酶 C9748或来源于Aspergills oryzae的半纤维素酶笑果中一种或两种以上。
2. 根据权利要求1所述的加工方法，其特征在于，所述复合菌剂添加量为 4· 5X 107-5· 5X 107CFU/g 鲜质量。
3. 根据权利要求2所述的加工方法，其特征在于，所述复合菌剂添加量为 5. 2X107CFU/g 鲜质量。
4. 根据权利要求1所述的加工方法，其特征在于，所述混合发酵液中植物乳杆菌、枯草 芽孢杆菌、乳酸乳球菌的菌落形成单位数目比为90-96 :3. 5-6 :0. 5-4,且菌落形成单位总 数目为 0· 8 X IO12-L 2 X 1012CFU/ml。
5. 根据权利要求4所述的加工方法，其特征在于，所述混合发酵液中植物乳杆菌、枯 草芽孢杆菌、乳酸乳球菌的菌落形成单位数目比为94 :4. 5 :1. 5,且菌落形成单位总数目为 1. 0X1012CFU/ml〇
6. 根据权利要求1所述的加工方法，其特征在于，所述纤维素复合酶的添加量为 2. 0-10. Omg/kg 干物质。
7. 根据权利要求6所述的加工方法，其特征在于，所述纤维素复合酶的添加量为8mg/ Kg干物质。
8. 根据权利要求1所述的加工方法，其特征在于，所述纤维素复合酶选自来源于 Trichoderma Iongibrachiatum 的纤维素酶 C9748〇
9. 根据权利要求1所述的加工方法，其特征在于，将复合菌剂与纤维素复合酶C9748混 合，加少量水均匀喷洒柳枝稷表面，厌氧发酵； 其中复合菌剂添加量为5. 2X 107CFU/g FM，纤维素复合酶添加量为8mg/Kg DM ; 其中，所述复合菌剂中植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸乳球菌的菌落形成单位数目比 为94 :4. 5 :1. 5,且菌落形成单位总数目为I. 0 X 1012CFU/ml。
【专利摘要】本发明涉及一种柳枝稷青贮加工方法，向柳枝稷中同时添加复合菌剂和纤维素复合酶进行厌氧发酵；其中，所述复合菌剂是由植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳球菌分别发酵，再将所得发酵液混合而得；所述纤维素复合酶选自崩溃酶D9515、纤维素酶V2010、纤维素酶C9748或半纤维素酶笑果中一种或两种以上。本发明所述的青贮加工方法有效改善柳枝稷青贮的发酵水平，发酵产物中pH值低，粗蛋白含量和体外干物质消化率高，洗涤纤维、纤维素、半纤维素和木质素含量均一定程度的降低。本发明所述青贮加工方法生态安全，应用简易，成本低廉，显著提高青贮效果。
【IPC分类】A23K3-03
【公开号】CN104543602
【申请号】CN201410764350
【发明人】王小芬, 崔宗均, 刘晶晶, 袁旭峰, 朱万斌
【申请人】中国农业大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月11日