红城红球菌在降解酿造调味品或其原料中的黄曲霉毒素b1中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种对酿造调味品或其原料中的黄曲霉毒素BI (AFBl)进行微生物 脱毒的方法与用途，具体而言，本发明涉及将能高效降解AFBl的红城红球菌（Rhodococcus erythropolis)用于酿造调味品或其原料中的AFBl的微生物降解脱毒的方法与用途。
【背景技术】
[0002] 霉菌毒素是霉菌生长过程中产生的次级代谢产物。霉菌毒素污染一直是全球食 品、酿造调味品及农产品等行业的重大威胁，每年都给生产带来巨大的经济损失。黄曲霉毒 素是所有真菌毒素中毒性最强的一种，广泛存在于各种酿造调味品或其原料中。黄曲霉毒 素（Aflatoxin，AFT)现已分离出 AFBl、AFB2、AFGl、AFG2、AFMl、AFM2、AFB2a、AFG2a、AFBM2a 及AFGM2a等18种之多，其中AFBl的毒性最强且化学性质最稳定，它具有很强的致癌性、致 突变性和致畸形性，是国际上认可的A类致癌物。黄曲霉毒素中毒（Aflatoxicosis)主要 表现在动物采食量降低、生长速度缓慢、组织器官受损以及影响原始细胞的发育和胎儿的 分化等。
[0003] 黄曲霉毒素广泛存在于湿度较大的酿造调味品或其原料的混合、储存及运输等各 个环节之中，既严重影响我国相关产品的进出口及国内贸易，带来了巨大的经济损失；又严 重影响了我国的酿造调味品品质与食用安全。
[0004] 然而，针对酿造调味品或其原料中黄曲霉毒素脱毒的方法目前尚未见专利报道。 因此，发明和推广一种对酿造调味品或其原料中的黄曲霉毒素进行脱毒的方法与应用，对 保障酿造调味品质量安全和确保消费者健康安全显得尤为重要。
[0005] 目前对黄曲霉毒素脱毒方法的研究主要都集中在化学处理法和物理脱毒法等，包 括氨化法、碱法、介质吸附法、混合溶剂萃取法、高温法、紫外线照射法、超滤_渗滤法、霉粒 挑选法等，这些方法存在效果不稳定、效率低、需要添加防毒害的安全设备、难以规模化生 产等缺点，有些方法需要的设备价格昂贵，从而限制了实际生产中的应用。
[0006] 因此，黄曲霉毒素微生物脱毒法由于效率高、条件温和、无副作用等越来越受到关 注。利用微生物脱毒的方法和应用近十五年国内外逐渐见报道，所采用菌株多集中在乳酸 菌、双歧杆菌、酵母菌、白腐真菌、橙色黄杆菌、假密环菌及根霉菌等。国内相关研究主要包 括刘大岭等报道(真菌提取液对黄曲霉毒素降解作用的研究[J].广东药学院学报，1995， 11 (2) :92~94)发现一种真菌代谢产物具有降解毒素作用；计成等报道（降解黄曲霉毒素 枯草芽孢杆菌的解毒性、抗菌性及抗逆性研究，饲料工业，2011，32 (24) : 23~27)发现一株 芽孢杆菌具有降解毒素作用；及刘阳等报道(高产漆酶平菇的筛选及其在降解黄曲霉毒素 Bl中的用途，核农学报，2012, 26 (7) :1025-1030)发现一株平菇具有降解毒素作用等。但对 这些细菌及真菌的脱毒研究发现，大部分菌的毒素降解效率不高，通常低于50%。此外，降解 效率影响因素较多，包括作用时间、溶液PH值、溶液成分、菌体数量、毒素浓度和金属离子 等，同时降解操作工艺复杂，难以大规模实施。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的旨在克服现有黄曲霉毒素生物脱毒技术的不足而提供一种高效的、 适用面广的、温和的、安全的、工艺简单的酿造调味品或其原料中的黄曲霉毒素的降解方 法。
[0008] 至今为止，国内外尚无关于利用红城红球菌降解黄曲霉毒素的报道。本发明人则 通过深入研究，首次发现红城红球菌能够高效率地降解AFB1，由此提供了一种红城红球菌 在降解酿造调味品或其原料中AFBl的用途，从而完成了本发明。
[0009] 本发明提供的利用红城红球菌进行酿造调味品或其原料中AFBl的脱毒的方法及 用途具有以下有益效果，从而有效解决了传统黄曲霉毒素脱毒方法中存在的问题：
[0010] (1)本发明提供的降解酿造调味品或其原料中AFBl的方法具有脱毒活性高、操作 简单、安全、反应条件温和、能耗低、设备要求低、废液(渣）产量小及环境污染少等优势；
[0011] (2)本发明提供的用途特别适于酿造调味品或其原料中的AFBl的脱毒，可用于高 效去除酿造调味品或其原料中的AFB1。
【具体实施方式】
[0012] 本发明提供的利用红城红球菌进行酿造调味品或其原料中AFBl的脱毒的方法及 用途适用范围广泛，可用于各种酿造调味品或其原料的AFBl脱毒。根据本发明的一些实施 方式，所述酿造调味品或其原料选自于各种农产品原材料(包括豆类、谷物类及果蔬类等） 及各种农产品初级加工产品（包括豆饼柏、谷物麸皮和果蔬皮渣等)，但本发明并不限于此。 在本发明一个优选的实施方式中，可利用红城红球菌在大豆粉、玉米粉及大米粉的混合物 中进行AFBl脱毒。
[0013] 根据本发明的一个实施方式，可将红城红球菌菌株发酵液或其发酵液上清均匀混 入污染了 AFBl的目的酿造调味品或其原料中，从而进行AFBl脱毒处理。
[0014] 根据本发明一个优选的实施方式，所述红城红球菌菌株发酵液或其发酵液上清同 污染了 AFBl的目的酿造调味品或其原料的混合比例分别为：5%-12%及10%-25% (均为体积 /重量比）。
[0015] 对于上述发酵液上清，可基于本领域技术人员掌握的常规方法由发酵液获得，例 如，采用离心的方式。
[0016] 根据本发明一个优选的实施方式，所述污染了 AFBl的目的酿造调味品或其原料 可先经过粉碎处理。
[0017] 根据本发明的一些实施方式，所述脱毒处理在温度25-35 °C、湿度80%-100%、 pH5. 5-8. 5的条件下通风反应30-48h。优选地，所述脱毒处理在恒温条件下进行。在本发 明一些优选的实施方式中，可采用7. 2-7. 4的pH值。
[0018] 根据本发明的一些实施方式，可用于本发明方法及用途中的红城红球菌可分别为 红城红球菌（Rhodococcus erythropolis)菌株 NHRI-1、NHRI-2、NHRI-3、NHRI-4、NHRI-5、 NHRI-6及NHRI-7,所述菌株于2013年12月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心（CGMCC)(北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)， 保藏编号分别为 CGMCC No. 8590、CGMCC No. 8591、CGMCC No. 8592、CGMCC No. 8593、CGMCC No. 8594、CGMCC No. 8595 及 CGMCC No. 8596,但本发明并不限于此。
[0019] 根据本发明的一些实施方式，可用于本发明方法及用途中的红城红球菌还可分别 为购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC4. 1491及 CGMCC1. 2362的红城红球菌菌株，但本发明并不限于此。
[0020] 根据本发明一个最为优选的实施方式，可用于本发明方法及用途中的红城红球菌 菌株为NHRI-1，所述菌株于2013年12月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心（CGMCC)，保藏编号为CGMCC No. 8590。
[0021] 对于黄曲霉毒素脱毒的效果检测，可采用本领域常规的检测方法进行，包括但不 限于HPLC-MS方法。根据本发明的一个实施方式，可在反应完成后采用可商购的试剂盒来 提取反应样品中残留的黄曲霉毒素，并采用HPLC-MS检测反应样品中残留的黄曲霉毒素的 含量。
[0022] 除非另有说明，本文中的含量百分比是指重量体积百分比。例如，"培养基中含有 0. 10%的AFB1"是指每100mL培养基中含有0.1 Og AFBl。
[0023] 在利用红城红球菌对酿造调味品或其原料中的AFBl进行处理时，术语"降解"及 "脱毒"在本文中可互换使用。
[0024] 本发明可由以下编号的段落中的任一项表示：
[0025] 1.红城红球菌在降解酿造调味品或其原料中的黄曲霉毒素BI (AFBl)中的用途。
[0026] 2.如段1中所述的用途，其中，所述酿造调味品或其原料选自于各种农产品原材 料及各种农产品初级加工产品。
[0027] 3.如段2中所述的用途，其中，所述农产品原材料为豆类、谷物类或果蔬类；所述 农产品初级加工产品为豆饼柏、谷物麸皮或果蔬皮渣。
[0028] 4.如段1中所述的用途，其中，所述酿造调味品或其原料为大豆粉、玉米粉及大米 粉的混合物。
[0029] 5.如段1-4中任一项所述的用途，其中，将所述红城红球菌的菌株发酵液或发酵 液上清均匀混入污染了 AFBl的目的酿造调味品或其原料中，从而进行AFBl的降解。
[0030] 6.如段5中所述的用途，其中，所述红城红球菌的菌株发酵液或发酵液上清与所 述污染了 AFBl的目的酿造调味品或其原料的混合比例分别为：5%-12%及10%-25%，所述比 例均为体积/重量比。
[0031] 7.如