一种改善视觉功能的保健品的制作方法

专利名称：一种改善视觉功能的保健品的制作方法
技术领域：
本发明涉及保健品，具体涉及一种能改善视觉功能的保健品。
随着科学技术的发展，办公条件改善，人们日常生活工作每天都离不开电视、电脑，电视、电脑终端对人体会产生一定程度的危害，主要表现在眼睛、骨骼皮肤及神经系统等，其中以对眼睛的影响最为突出。眼疲劳现象不仅发生在在校学生中，而且在中青年甚至老年人群中也经常发生。另外玻璃幕墙大量使用，局部光强度过高有可能损伤视网膜。同时随年龄增大，年老体衰、肝肾亏损、气血不畅及体内大量自由基过剩等，致使慢性白内障形成，造成老年视力障碍。为此开发食之有效的眼保护产品有着广泛市场前景。
本发明的目的在于结合中西医理论，制备一种能改善视觉功能的保健品。
本发明提供了一种改善视觉功能的保健品(昂立明视胶囊)，该保健品是由按重量计枸杞5～15份、菊花5～15份、银杏叶浸膏粉2～5份、牛磺酸5～15份、维生素C1～3份，葡萄糖酸锌2～5份、维生素B10.01～0.1份、维生素B20.01～0.1份和β-胡萝卜素0.01～0.1份的任意配比组成的。
上述银杏叶浸膏粉是市售得到的。
本发明的一种改善视觉功能的保健品的抗白内障试验结果如下(经江苏省药物研究所试验)1、药品明视胶囊由上海交大昂立股份有限公司提供，批号980618；障眼明片由广东省惠州市中药厂生产，批号950905；D-半乳糖为上海试剂二厂生产，批号970722；MDA和蛋白质测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所，批号分别为980620和980714。
2、动物SD大鼠50只，体重80-100g，雌雄各半，由本所动物房供应，合格证苏动质97007。苏动环97007。
3、实验方法3.1分组大鼠经裂隙灯检查眼部无异常，按性别、体重随机分为5组，每组10只。分别为正常对照组、白内障模型组、障眼明组和明视胶囊高、低剂量组。
3.2白内障模型制备半乳糖溶于蒸馏水配成50％溶液，经灭菌后，腹腔注射，剂量为10g/kg，每日一次，连续11天。另在饮水中加5％半乳糖，连给5天。
3.3给受试物方法于给糖前一周开始给受试物，明视胶囊内容物以1％CMC配成混悬液，障眼明片研细后也以1％CMC配成混悬液，灌胃给药。剂量分别为高剂量组1g/kg，低剂量组0.25g/kg，障眼明组1.65g/kg，每日一次。正常组和模型组灌等量1％CMC(1ml/100g体重)。连续给药36天。给药一周后，除正常组外，其余各组按3.2所述方法给半乳糖诱发白内障。
3.4疗效评价3.4.1晶体浑浊度观察与评分造模开始后，每周观察2次。先以1％阿托品滴眼扩瞳，然后用手持裂隙灯检查并按表1评分、记录。必要时在照相裂隙灯下复核并照相。
表1 大鼠晶体浑浊度评分标准阶段 级别晶体浑浊度 分值正常 晶体澄清01 A 晶体周边出现细小空泡0.1B 赤道部有空泡细带0.4C 空泡占晶体前皮质面积的1/3 0.7D 空泡占晶体前皮质面积的2/3 1.02 空泡液化或出现乳光或出现极少量点状、条状白色浑2.03 晶体散在片状白色沉淀3.04 晶体核开始浑4.05 晶体核全部浑5.03.4.2晶体纤维超微结构观察及生化指标测定停药后1天，将大鼠拉颈处死，解剖取出两眼晶体。右眼晶体随机每组取8个制备电镜观察标本，左眼晶体匀浆后，测定MDA、不溶性蛋白和高分子量蛋白含量。
3.4.2.1晶体纤维超微结构观察及定量分析晶体经4％戊二醛固定数天，4％锇酸后固定，丙酮梯度脱水，沿前后轴断裂样品，醋酸异戊酯置换，液态CO2临界点干燥，IB-3型离子溅射仪镀膜后，以SX-40型扫描镜观察并摄影。观察晶体前浅皮质和前深皮质层纤维的超微结构，并计算各晶体8um长4根纤维上的指突数(n)，5根纤维的宽度(Tum)，及10um宽度内晶体纤维数即纤维密度(D)。
3.4.2.2晶体中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量测定取出大量左眼晶体，吸干表面水分秤重，各置入试管内加1.2ml生理盐水，冰浴中匀浆。各管匀浆吸取0.2ml，按MDA测定试剂盒所示方法(TBA法)测定MDA含量。
3.4.2.3晶体中不溶性蛋白和高分子量蛋白含量测定剩余晶体匀浆每管再加1ml生理盐水，以9544×g4℃离心30分钟(BeckmanCS-15R型离心机)，沉淀为不溶性蛋白。取出上清液，再以57300×g4℃离心15分钟(Beckman Optima 9708LE-8K离心机)，沉淀为高分子量蛋白。将溶性蛋白和高分子量蛋白分别用7mol/L尿素溶解，按蛋白测定试剂盒(双缩脲法)所示方法分别测定蛋白含量4、结果给半乳糖结束时，模型组大鼠晶体浑浊度评分已达1分以上，停止给糖后继续发展，至实验结束时均分达3分以上，表明白内障造模成功。
4.1.裂隙灯观察下大鼠晶体浑浊度评分结果见表2表2 明视胶囊对大鼠晶体浑浊度分值的影响组别 晶体数给药后18天 给药后36天正常对照组 20 00模型组 20 1.260±0.9853.350±0.745明视高剂量 20 0.560±0.2841.755±1.244**胶囊低剂量 20 0.625±0.2151.970±1.063**障眼明组 20 0.710±0.5061.950±0.999**与模型组比较*P＜0.05**P＜0.01(下同)结果表明，给受试物18天(给糖结束当天)明视胶囊各组晶体浑浊度评分均低于模型组，表明明视胶囊有延缓大鼠晶体白内障进展的趋势，但统计学检验无显著意义。给药36天，明视胶囊各组晶体浑浊度评分均显著低于模型组，显示了明视胶囊抗糖性白内障的作用。
表3明视胶囊对大鼠晶体超微结构的影响组别晶体数 前浅皮质 深浅皮质指突数(n) 宽度(T) 密度(D) 指突数(n) 宽度(T)密度(D)正常对照组893.4±9.9 5.92±0.557.2±0.7 89.1±9.8 6.30±0.67 6.7±0.7模型组828.9±22.4 8.26±2.165.4±1.7 41.5±27.2 7.16±0.67 5.8±0.6明视 高剂量 882.0±11.8**5.19±0.56* 7.0±0.8*79.8±7.1**6.29±0.73*6.8±0.7*胶囊 低剂量 885.4±10.6**6.08±0.53* 7.0±0.9*80.9±12.2** 6.45±0.66 6.5±0.9*障眼明组 881.3±18.2**6.04±0.81* 7.1±0.9*81.9±9.0**6.04±0.45** 6.9±0.5**电镜观察和定量分析的结果表明，正常晶体纤维排列整齐，指突较清晰；白内障膜型组晶体明显肿胀，宽度增加，密度下降，排列紊乱，指突数明显减少甚至消失，尤以前浅皮质更为明显；明视胶囊各组晶体纤维的病理改变显著轻于模型组纤维排列均较整齐，指突较清晰且数目显著多于模型组。表明明视胶囊能减轻白内障造模时大鼠晶体纤维的病变。
4.2大鼠晶体MDA、不溶性蛋白和高分子量蛋白的测定结果见表4、表5。表4 明视胶囊对大鼠晶体MDA含量的影响组别晶体数 MDA含量(umol/mg)正常对照组10 0.359±0.060模型组10 0.634±0.232明视高剂量10 0.368±0.147**胶囊低剂量10 0.414±0.158*障眼明组 10 0.373±0.186*表5 明视胶囊对大鼠晶体蛋白含量的影响组别晶体数 不溶性蛋白(ug/mg )高分子蛋白(ug/mg)正常对照组10 41.01±11.49 11.96±3.73模型组10 80.83±39.10 33.69±5.56明视高剂量10 44.24±29.43**12.84±8.03**胶囊低剂量10 69.84±31.92 31.21±3.15障眼明组 10 52.83±12.76* 23.78±2.44**结果表明，明视胶囊和障眼明均能显著抑制晶体内MDA含量的增加，显示有抗脂质过氧化作用。明视胶囊高剂量组和障眼明组尚能降低晶体内不溶性蛋白和高分子量蛋白的含量。
5、试验结论综合裂隙灯观察评分、扫描电镜对晶体纤维超微结构观察和定量分析及MDA、不溶性蛋白和高分子量蛋白生化测定的结果，认为明视胶囊对大鼠半乳糖白内障有显著的防治效果。
本发明的一种改善视觉功能的保健品对大鼠和家兔视网膜先化学损伤的防护性作用研究结果如下(经华东师大生物系研究)一、实验方法1、实验材料实验动物SD大鼠，购自上海计划生育所，属洁净级正常饲养时光照度251.17±127.69Lx购入后开始给样体重为75.52克，实验时300±14.32克2、胶囊样品的灌喂给样组大鼠分高剂量组和低剂量组，高剂量组大鼠喂昂立明视胶囊样份137mgkg体重/天，低剂量组喂68.5mg/kg体重/天，连续灌喂至实验取眼球前，共30天。
3、光照损伤模型的建立大鼠饲养于正常光照，光照度251.17±127.69Lx中，于光照前在暗室中先关闭36小时，关闭后放置于钢丝光照笼中，自由进食和饮水，笼的四周和顶面放置60W白色荧光灯12盏(光照度2986.67±1236.96Lx)，光照笼保持通风，控制温度不上升。持续光照48小时，光照结束后处死，取眼球测视紫红质、SOD和MDA。
4、视紫红质的测定在暗室中急性处死大鼠，迅速摘取眼球，用PBS(0.1mol/L，pH7.0)冲洗，剪去眼球上的血管和结缔组织，在滤纸上吸去PBS，在匀浆器内剪碎，加入含有15％Trtonx-100的PBS2ml，在冰浴中匀浆，将匀浆液低温高速离心(4℃，1500RPM，15min)，取上清液，用分光光度计于500nm处测吸光度A1，然后上清液置于100W白炽灯下照射10min，分光光度计500nm处测吸光度A2，视紫红质含量按吸光度A＝A1－A2计算，按视紫红质克分子吸收系数将其表示成每只眼球的nmol数。
5、视网膜、晶状体SOD和MDA的测定摘取眼球，在冰PBS中剪去眼球上的血管和结缔组织，在滤纸上吸去PBS，沿角膜缘剪开眼球，分别获取视网膜脉络膜和晶状体角膜，分装于两个Eppendorf管中，称湿重，按湿重∶体积＝1∶9用PBS稀释，用匀浆器研磨成百分之十的匀浆。在冰冻高速离心机上离心(3000RPM、4℃、10min)，取上清液。用SOD、MDA试剂盒分别测定上清液的SOD、MDA含量。
6、家兔视网膜电图的测定动物分组新西兰白兔，购自上海生物供应站，体重2.770±0.378kg，随机分为正常组和给样组，每组3只，自由取食饮水。
胶囊样品的灌喂昂立明视胶囊样粉用双蒸水溶解为悬浊液(45mg/ml)，用灌喂器插入食道直接灌喂。给样组的家兔每日灌喂一次，样量为45mg/kg体重/天。连续灌喂12天。
光损伤模型的建立家兔用氨基甲酸乙酯半麻醉，将动物固定，拉开眼睑，用冷光灯正对家兔的瞳孔照光，光照度为3500Lx，持续光照时间为4小时。
视网膜电图的测定动物半麻醉，固定，用悬浮球面电极作为记录电极置于角膜上，无关电极置家兔额前皮下，记录电极和无关电极与MASTER-A生物信号处理系统(华东师范大学生物学系研制)放大器联接，使用闪光刺激，刺激光点正对瞳孔，暗适应15分钟后，给予闪耀刺激，将引导到的视网膜电图输入MASTER-A生物信号处理系统记录、数据处理和保存。
分别记录正常组和给样组光损伤前后的视网膜电图。测量视网膜电图的b波潜伏期和b波的幅值。
二、实验结果；1、视紫红质含量如下表1所示表1昂立明视胶囊对大鼠视网膜光损伤致视紫红质含量变化的影响
强光损伤后，光损伤组视紫红质含量较正常组明显降低，差异显著(P＜0.05)。给样后，低剂量组和高剂量组视紫红质含量上升，其中高剂量组与光损伤对照组之间差异显著(P＜0.05)，其含量几乎达到正常水平。低剂量组与光损伤对照组之间差异不显著。
2、视网膜、晶状体MDA含量如表2所示表2昂立明视胶囊对大鼠视网膜光损伤致视网膜、晶状体MDA含量变化的影响
视网膜中的MDA含量，强光损伤后对照组MDA含量上升，差异性显著(P＜0.05)，给样后MDA含量下降，但差异不显著(P＞0.05)。
晶状体和角膜中的MDA含量，整体无显著差异。
3、视网膜、晶状体SOD含量如表3所示表3昂立明视胶囊对大鼠视网膜光损伤致视网膜、晶状体SOD含量变化的影响
注依据酶的定义每ml反应液中SOD抑制率达50％时所对应的SOD量为一个亚硝酸单位。(NU/ml)对于视网膜的SOD含量，光损伤时出现代偿性的增加，给样后SOD含量明显上升，其中低剂量组与光损伤对照组相比效果极显著(P＜0.01)，高剂量组SOD含量也有上升，但差异不显著(P＞0.05)。在晶状体与角膜中，给样组SOD无上升趋势。
4、家兔视网膜电图家兔视网膜电图见附件

图1-4。
对实验记录到视网膜电图b波，进行潜伏期和幅值测量，计算其平均值和标准误差。用t检验检测各组的差异显著性，结果如表4所示。
表4昂立明视胶囊对家兔视网膜光损伤致视网膜电图b波潜伏期及幅值变化的影响
结果显示，正常组家兔视网膜电图b波的幅值在光损伤后有明显的减小，相互间差异极显著(P＜0.001)，给样组家兔光损伤前视网膜电图b波幅值略大于正常组，但差异不显著(P＜0.05)，给样组家兔视网膜电图b波幅值在光损伤后有大幅度的减少，差异极显著(P＜0.001)，而比正常组家兔光损伤后的b波幅值高，差异显著(P＜0.05)，但尚未见恢复到正常组光损伤前的b波水平，正常组家兔光损伤后的b波潜伏期明显延长(P＜0.05)，给样组和给样光损伤后b波潜伏期与正常组之间差异不显著(P＞0.05)。
三、结论从实验结果看，昂立明视胶囊对光化学损伤具有一定的保护作用。其作用方式表现在以下几点1、通过增加眼球内的视紫红质含量未增强对视杆、视椎细胞的保护。
2、通过抑制体内，尤其是视网膜内的脂质氧化过程，减少脂质过氧化物对视网膜的损伤。
3、通过增加眼球，尤其是视网膜内的SOD含量，增强视网膜内清除氧自由基的能力。
在本实验中，高剂量组在增加大鼠视网膜视紫红质上效果明显，差异显著。低剂量组对增强SOD活性效果明显，差异极显著。其余作用虽然有平均值上的差异，但t-检验差异不显著。
4、视网膜电图b波反映视网膜给光型双极细胞的活动，是视网膜兴奋性的一个有用的指标。给家兔喂以昂立明视胶囊，与光损伤组相比，其视网膜电图b波的幅值增高，差异显著(P＜0.05)，提示昂立明视胶囊可提高视网膜兴奋性。
本发明的一种改善视觉功能的保健品对抗疲劳作用检验结果如下(经上海市疾病预防控制中心检验)一、抗疲劳作用1、样品性状及处理黄色粉末，以蒸馏水调制成各浓度，供试。
2、剂量设计本品人体推荐剂量为每日1.2g/60kg。本实验设低、中、高三个剂组，分别为0.1、0.2、0.68g/kg，另设空白对照组(蒸馏水)。
3、实验动物昆明种小白鼠，雄性，20-22克，由上海医科大学动物房提供的清洁级动物(本站SPF动物房饲养)，合格证号02-22-1。
4、给样途径灌胃。
5、实验方法与结果5.1负重游泳试验取昆明种小白鼠40只，随机分为四组，每组10只，按剂量设计连续喂养28天，于末次灌胃后30分钟，将小鼠放入水中游泳，水深30cm，水温25±0.5℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间。
样品对小鼠负重游泳时间的影响(X±SD)组别 动物数(只)负重游泳时间(秒)空白对照10 419.1±247.5低剂量 10 487.9±220.3中剂量 10 511.7±210.2高剂量 10 786.7±296.4**P＜0.05与空白对照组相比(经方差分析)由上表可见，样品高剂量组与空白对照组相比，有显著差异。
5.2肝糖元测定取昆明种小白鼠40只，随机分为四组，每组10只，按剂量设计连续喂培养28天，于末次灌胃后30分钟，将小鼠放入30℃水中游泳90分钟，取出，立刻取鼠肝脏，测肝糖元。
样品对小鼠动物后肝糖元的影响(X±SD)组别 动物数(只)肝糖元(秒)空白对照 10 503.7±76.4低剂量10 694.4±99.8中剂量10 801.5±95.3高剂量10 995.9±101.2**P＜0.05与空白对照组相比(经方差分析)由上表可见，样品高剂量组与空白对照组相比，有显著差异。
5.3乳酸测定昆明种小白鼠40只，随机分为四组，每组10只，按剂量设计连续喂养28天后测血乳酸并在末次给样后30分钟，负重2％(体重)在温度25-30℃水中游泳60分钟，取出，测血乳酸，热风烘干，安静60分钟后，再测血乳酸。
样品对小鼠运动后血乳酸的影响(X±SD)组别动物数血乳酸(mmol/l)(只)实验前 实验后0分钟实验后60分钟空白对照 10 4.32±0.69 11.59±1.547.72±1.09低剂量10 4.43±0.40 11.51±2.015.65±1.81中剂量10 4.28±0.44 11.89±3.185.57±4.02高剂量10 4.26±0.53 12.00±3.464.50±2.03**P＜0.05与空白对照组相比(经方差分析)由上表可见，样品高剂量组实验后60分钟动物血乳酸含量与空白对照组相比，有显著性差异。
尿素氮测定取昆明种小白鼠40只，随机分为为四组，每组10只，按剂量设计连续喂养28天，于末次灌胃后30分钟，将小鼠放入30℃水中游泳90分钟，取出，热风烘干，使安静，取鼠血，离心，取血清测尿素氮。
样品对小鼠运动后血清尿素氮的影响(X±SD)组别 动物数(只)尿素氮(mmol/l)空白对照 10 7.71±0.86低剂量10 6.76±2.07中剂量10 6.01±1.68高剂量10 5.17±1.98**P＜0.05与空白对照组相比(经方差分析)由上表可见，样品高剂量组与空白对照组相比，有显著性差异。
本发明的一种改善视觉功能的保健品对改善视力功效人体试验结果如下(经上海市食品卫生监督检验所检验)1.材料与方法1.1诊断标准(根据卫生部中药新药临床研究指导原则)1.1.1中医诊断标准1.1.1.1视近物清，视远物蒙、视物双影、常须眯目而视。1.1.1.2眼睛疲劳，眼胀头痛。1.1.2中医辨证标准肝肾阴虚证除具有上述症状外，兼有眼干涩不适，不能久视，睑疲欲闭，咽干口燥或视物模糊，或头晕目眩，或耳鸣健忘，舌红少津，少苔或无苔，脉细或细数。1.1.3西医诊断标准1.1.3.1定义假性近视学龄儿童在常态调节下远视力降低＜1.0，近视力正常≥1.0，小瞳孔检影为近视性屈光不正，使用复球镜片可提高远视力的近视状态，但使用阿托品扩瞳后，近视消失，呈现为正视或远视。1.1.3.2临床表现视物模糊不清，眼易疲劳，严重时视物有双影，或眼胀，前额头痛等。1.2受试者纳入标准1.2.1符合诊断标准及中医辨证者；1.2.2年龄6-15岁学生；1.2.3裸眼远视力≥0.1，＜1.0裸眼近视力≥1.0；1.2.4扩瞳检影，屈光度为0。1.3排除标准1.3.1不符合纳入年龄标准的患者，对本品过敏者；1.3.2患有感染性眼部疾患者，角膜云翳、圆雉角膜；1.3.3患有眼底疾病或合并有心血管、脑血管、肝、肾、造血系统等严重原发性疾病，精神病患者。1.3.4长期服用其它有关治疗药物或使用其它治疗方法，未能终止者；1.3.5不符合纳入标准，未按规定使用本品，无法判断试验结果，或资料不全等影响效果判断或安全性判断者。2.观察指标2.1视力观察2.1.1远视力观察用国际标准远视力表检查；2.1.2近视力观察用国际标准近视力表检查；2.1.3近视屈光度小瞳孔下检影，使用负性球镜片矫正近视，阿托品扩瞳后检影(屈光度数0)。2.1.4眼部自觉症状观察与分级A、眼胀无眼胀0分偶然眼胀 1分经常眼胀，但不影响学习、生活 2分持续眼胀，影响学习、生活 3分B、眼痛无眼痛 0分偶然眼痛 1分经常眼痛，但不影响学习、生活 2分持续眼痛，影响学习、生活 3分C、眼涩无眼干涩 0分眼干涩不爽，泪液浸湿滤纸＞5mm＜10mm 1分眼干涩痛，泪液浸湿滤纸1mm～5mm 2分眼干灼痛，泪液浸湿滤纸＜1mm 3分D、口干无口干 0分口干咽燥轻微 1分口干咽燥可耐受 2分口干咽燥难忍 3分E、头晕目眩无头晕 0分偶然头晕 1分经常头晕，不影响学习、生活 2分持续头晕，影响学习、生活 3分F、耳鸣无耳鸣 0分偶然有耳鸣 1分经常耳鸣，不影响学习、生活 2分持续耳鸣，影响学习、生活 3分2.2视力改善功效判定标准2.2.1视力临床治愈远视力恢复正常≥1.0，小瞳孔下屈光度消失，症状消失。
显效裸眼视力提高四排以上，症状明显改善。
有效裸眼视力提高二排以上，临床症状改善。
无效裸眼视力无提高或下降，临床症状无改善。2.2.2屈光度有效小瞳孔下屈光度减低≥-0.50。
无效小瞳孔下屈光度减低不足-0.50。2.3安全性观察2.3.1服用前后各查一次血常规；2.3.2服用前后各进行一次常规体格检查。3.试验方法及试验周期本试验设立试验组和对照组，根据随机、双盲、对照方法，将70例假性近视患者分为两组，每组为35人。
试验组口服昂立明视胶囊(由交大昂立股份有限公司提供)，每粒300mg，每板12粒，每袋2板，批号990113。每日2次，每次2粒，30天为一观察周期，每二周随访一次。
对照组口服与受试组外观完全一致的空白淀粉胶囊，每日2次，每次2粒，30天为一观察周期，每二周随访一次。4.结果4.1一般资料本组70例假性近视患者，男性28例，女性42例；年龄最小6岁，最大15岁，平均11.2±2.26岁。表一试验组与对照组分组情况(X±SD)分组例数 男 女年龄 远视力 近视屈光度 试验前症状积分试验组 3513 22 11.31±2.430.43±0.19 -1.17±0.46 2.34±1.45对照组 3515 20 11.11±2.110.40±0.17 -1.31±0.45 2.66±1.00经统计学检验，两组在性别、年龄、远视力、近视屈光度及临床自觉症状方面，P＞0.05，两组间无统计学差异，具有可比性。4.2改善视力功效情况试食前后，试验组与对照组的视力改善情况详见表二表二试验组与对照组视力改善情况比较分组 例数痊愈显效 有效 无效 显效率 有效率试验组35 4 7 159 31.43％ 74.29％※对照组35 1 2 8 248.57％ 31.43％※经X2试验，X2＝13.54 P＜0.05，两组间有显著差异。表明试验组视力改善情况明显优于对照组。4.3视力变化表三两组试食前后远视力变化的比较(X＋SD)分组 眼数 试食前远视力试食后14天 试食后30天差值试验组700.43±0.19 0.56±0.23 0.66±0.30※△0.23对照组700.40±0.17 0.47±0.19 0.51±0.200.11※表示经t检验，P＜0.05表三可见，试食30天后，与试食前比较，试验组远视力有显著性差异。
△表示经t试验P＜0.05。
表明试食后，试验组与对照组比较，远视力有显著性差异。4.4屈光度改善情况比较表四两组试食前后屈光度变化情况比较分组 眼数 有效眼数无效眼数有效率(％)试验组70 49 2170％※对照组70 7 6310％※经X2试验P＜0.05，表四表明试验组与对照组比较有显著差异。4.5近视屈光度变化表五两组试食前后眼屈光度的比较(X±SD)分组 眼数 试验前 试验后差值试验组70-1.17±0.46-0.73±0.57※△ 0.44对照组70-1.31±0.45-1.20±0.53 0.11※表示试验组试食前后，近视屈光度自身比较P＜0.05有显著性差异。
△表示试食前后近视屈光度，试验组与对照组比较P＜0.05有显著性差异。4.6眼部自觉症状变化4.6.1眼部症状积分比较表六试验组与对照组症状积分统计(X±SD)分组 观察例数 试食前症状积分试食后症状积分差值试验组352.34±1.45 0.71±1.07※△1.63对照组352.66±1.00 2.06±1.550.60※表示经t检验P(0.05，表明试食前后，试验组自身对照有显著性差异。
△表示经t检验P＜0.05，表明试验组与对照组之间比较，有显著性差异。4.6.2眼部自觉症状比较表七试验组与对照组试食前后症状变化(X±SD)症状 试验组 对照组试食前 试食后 试食前 试食后眼胀0.37±0.55 0.09±0.28※0.54±0.65 0.37±0.65眼痛0.29±0.46 0.09±0.28※0.37±0.55 0.26±0.56眼干涩 0.40±0.50 0.03±0.17※0.71±0.62 0.49±0.51口干0.94±0.73 0.34±0.48※0.89±0.68 0.71±0.79头晕目眩0.26±0.44 0.11±0.32 0.14±0.36 0.11±0.32耳鸣0.11±0.32 0.03±0.17 0.09±0.28 0.03±0.17※表示经t检验P＜0.05有显著性差异。
表七可见，试验组试食后眼胀、眼干涩、口干症状即有明显改善。眼痛症状自试验后天有明显改善。头晕目眩、耳鸣试食后积分有所下降，但无统计学差异。4.7试验前后安全性比较试验组和对照组试验前后经查血常规和常规体格检查，各项检查指标均在正常范围内。5.讨论5.1昂立明视胶囊具有改善视力的保健作用。与对照组比较，试验组视疲劳感明显减轻，远视力平均提高0.23，有效率为74.39％，眼近视屈光度平均降低0.44，有效率为70.00％，经统计学处理差异有显著性。5.2与对照组比较，昂立明视胶囊对于视力障碍者的视物模糊、眼胀、眼痛、眼干涩、口干等视疲劳症状具有较好的改善作用。5.3试食组与对照组比较，血液指标及体格检查指标均无异常，在试食过程中未观察到过敏及其他不良反应，对试食者身体健康无明显影响。
本发明的一种改善视觉功能的保健品的急性毒性、微核、精子畸形、Ames及30天喂养试验结果如下(经上海市疾病预防控制中心试验)1.急性毒性(经口LD50)试验1.1样品性状深黄色粉末，部分溶于水。1.2样品的处理及配制取样品20000mg加蒸馏水至20ml，供试。1.3实验动物1.3.1来源上海医科大学实验动物部，合格证号02-22-1。1.3.2种属与品系昆明种小鼠1.3.3性别雌性和雄性1.3.4体重18-22克1.4实验方法1.4.1试验前，实验动物禁食16小时。1.4.2将动物随机分组，雌雄各一组，每组10只，称重，按0.4ml/20g体重，采用灌胃法进行一次给样。1.4.3观察给样后两周内，实验动物的中毒表现及死亡情况。1.4.4计算LD50及95％可信区间。1.5结果表雌雄小鼠急性经口毒性试验结果动物性别剂量动物数死亡数死亡率(mg/kg)(只) (只) (％)雌性小鼠 20000 10 00雄性小鼠 20000 10 001.5.1主要症状表现实验期间各组动物活动正常，毛色光泽度好，未发现任何症状。1.5.2半数致死量，雌性小鼠LD50＞20000mg/kg。
雄性小鼠LD50＞20000mg/kg。1.6结论以急性毒性半数致死量毒性分级，属实际无毒级物质。2.微核试验2.1样品性状深黄色粉末，部分溶于水。2.2样品的处理及配制取样品10000mg、5000mg、2500mg分别加蒸馏水至20ml，各成浓度为500mg/ml、250mg/ml、125mg/ml的混悬液，供试。2.3实验动物2.3.1来源上海医科大学实验动物部，(合格证号02-22-1)。2.3.2种属与品系昆明种小鼠2.3.3性别雌性和雄性2.3.4体重25-30克2.4实验方法2.4.1将动物随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别作为样品三个剂量组及蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组。2.4.2采用30小时两次灌胃法，动物称重，将配制的不同浓度样品按0.4ml/20g体重，分别对各组动物灌胃。2.4.3于第二次灌胃后6小时，颈椎脱臼处死动物，取股骨骨髓加小牛血清混匀，常规涂片、固定Giemsa染色制片。2.4.4镜检观察，每鼠计数1000个嗜多染红细胞的微核数，计算微核发生率，并进行统计分析。2.5结果表 动物骨髓嗜多染红细胞微核发生率剂量性别动物数受检细胞数微核细胞微核率统计学(mg/kg)(只)(个) 数(个) (‰) 检验*10000雄性 5 5000 81.6 ＞0.0510000雌性 5 5000 71.4 ＞0.055000 雄性 5 5000 71.4 ＞0.055000 雌性 5 5000 71.4 ＞0.052500 雄性 5 5000 81.6 ＞0.052500 雌性5500081.6＞0.05阴性对照 雄性5500081.6(蒸馏水20000mg/kg) 雌性5500071.4阳性对照 雄性55000122 24.4 ＜0.01(蒸馏水40mg/kg) 雌性55000124 24.8 ＜0.01*与阴性对照组相比(经卡方检验)2.6结论经统计学分析，样品骨髓嗜多染红细胞微核试验结果为阴性。3.精于畸形试验3.1样品性状深黄色粉末，部分溶于水。3.2样品的处理及配制取样品10000mg、5000mg、2500mg分别加蒸馏水至20ml，各成浓度为500mg/ml、250mg/ml、125mg/ml的混悬液，供试。3.3实验动物3.3.1来源上海医科大学实验动物部，(合格证号02-22-1)。3.3.2种属与品系昆明种小鼠3.3.3性别雄性3.3.4体重25-35克3.4实验方法3.4.1将动物随机分为5组，每组5只，分别作为样品三个剂量组及蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组。3.4.2动物称重后，将配制的不同浓度样品按0.4ml/20g体重，分别对各组动物灌胃。每日一次，连续5天。3.4.3于首次给样后第35天，颈椎脱臼处死动物，取二侧副睾放入生理盐水中，剪碎，四层过滤，取滤液涂片，固定，2％伊红染色制片。3.4.4镜检观察，每鼠计数1000个精子的畸形数，计算精子畸形发生率，并进行统计分析。3.5结果表 动物精子畸形发生率剂量动物数 受检精子数 畸变精子 畸变率统计学(mg/kg)(只) (个) 数(个) (‰) 检验*10000 5 5000 7114.2 ＞0.0550005 5000 7014.0 ＞0.0525005 5000 6913.8 ＞0.05阴性对照 5 5000 7414.8(蒸馏水20000mg/kg)阳性对照 5 5000 320 64.0 ＜0.01(蒸馏水40mg/kg)*与阴性对照组相比(经卡方检验)3.6结论
经统计学分析，样品精子畸形试验结果为阴性。4.Ames试验4.1样品性状深黄色粉末。
溶剂无菌蒸馏水4.2样品处理及配制将样品以无菌蒸馏水调制成各浓度，供试。4.3测试剂量0.1mg/皿、0.5mg/皿、1mg/皿、2.5mg/皿、5mg/皿。4.3.1测试菌株TA97、TA98、TA100、TA102。由美国加利福尼亚大学生物化学系提供，生物学性状符合菌株要求。测试用菌液浓度1-2×109/ml。4.3.2代谢活化多氯联苯诱导SD大鼠肝S9组分，蛋白质含量33mg/ml。
代谢活化用含8％(v/v)的S9组分的S9混合液。4.3.3溶剂对照无菌蒸馏水4.3.4阳性对照-S9TA97阿的平(500μg/皿)、TA98对硝基喹啉(200μg/皿)TA100、TA102 MMS。
+S9TA97、TA98、TA100 2-氨基芴(20μg/皿)，TA102 1.8-二羟基葸醌(501μg/皿)。4.4.测试方法按GB15193-94预培养平板掺入法受试物，菌液和0.5mlS9混合液或PBS于100×15mm无菌试管30℃培养30min，加入2ml顶琼脂，倾倒平板。4.5测试结果
4.6结论样品Ames试验结果为阴性。5.30天喂养试验，5.1剂量设计，样品的人体推荐剂量为每日1.2g/60kg。本实验设低、中、高三个剂量，即1.5、3、6g/kg，相当于人体推荐剂量的75倍，150倍，300倍，另设空白对照组。5.2样品的处理及配制
根据本实验剂量设计要求，将样品按不同配比分别掺入饲料内拌匀，供试。5.3实验动物5.3.1来源上海医科大学实验动物部02-22-45.3.2种属大鼠5.3.3品系；Wistar5.3.4性别；雌性和雄性5.3.5体重58-65克5.4实验方法5.4.1将动物随机分为4组，每组20只，雌雄各半。分别作为样品三个剂量组及空白对照组，单笼喂养，自由饮食，连续喂养30天。5.4.2将样品含量不同的饲料按剂量设计分别给各组动物喂养。5.4.3实验开始及实验后每周一次动物称体重，记录饲料摄入量(剔除损耗10％)，计算食物利用率，绘制生长曲线。5.4.4连续喂养30天后，取鼠血进行血液学、生化学检查，处死，解剖取肝、肾、脾等称重。计算脏体比，并对主要脏器进行组织学检查。5.5结果5.5.1生长情况及食物利用率各实验组动物体重增长情况(X±SD)单位g0周 1周 2周 3周 4周对照 62±581±9102±11 128±17 147±28低剂量60±779±7101±12 128±19 149±30♂中剂量63±780±9103±12 131±18 148±29高剂量62±682±8103±14 129±21 149±33对照 61±671±891±12107±15 128±27低剂量62±772±989±13108±16 126±26♀中剂量60±671±892±14107±17 127±26高剂量62±671±992±13109±19 127±25各实验组动物食物利用率(X±SD)试验初 试验终增重 食物摄取量 食物利用体重(g) 体重(g) (g) 量(g) 率(g)对照62±5147±2885 42120低剂量 60±7149±3089 45919♂中剂量 63±7148±298541720高剂量 62±6149±338746219对照61±6128±276733220低剂量 62±7126±266429921♀中剂量 60±6127±266734419高剂量 62±6127±256532020由以上两表可见，样品各实验组大鼠生长情况基本良好。5.5.2血液学检查血常规测定结果(X±SD)组别 白细胞计数 红细胞计数 血色素 淋巴细胞中性粒细胞(109个/L) (1012个/L) Hb(g/L)(％)(％)对照 8.9±1.45.3±0.3148±12.6 75±5.0 25±5.0低剂量9.0±0.85.4±0.2147±9.3 74±4.9 26±4.9♂中剂量9.6±2.25.5±0.3150±10.5 73±5.2 27±5.2高剂量9.9±1.45.3±0.3149±6.2 73±3.0 27±3.0对照 8.8±1.05.3±0.3149±7.8 73±3.4 27±3.4低剂量8.9±2.05.3±0.3147±10.8 72±4.3 28±4.3♀中剂量9.4±2.85.5±0.4152±6.1 72±5.1 28±5.1高剂量9.1±1.15.5±0.3150±8.1 74±3.5 26±3.5以上结果可见，各实验组与对照组大鼠的血色素、红细胞、白细胞计数及其分类的检查结果均在正常范围内。5.5.3生化学检查·生化检测结果(X±SD)组别 葡萄糖 白蛋白 胆固醇 尿素氨 谷丙转氨酶(mmol/L) (g/dL) (mmol/L)(mmol/L)(IU/L)对照 5.0±0.53.8±0.71.9±2.06.1±0.535±3.4低剂量 5.1±0.23.8±0.22.0±0.26.1±0.333±2.4♂中剂量 5.0±0.23.8±0.21.8±0.26.3±0.335±6.5高剂量 5.0±0.33.8±0.21.9±0.16.0±0.336±4.6对照 5.0±0.23.8±0.22.0±0.26.4±0.532±3.9低剂量 4.8±0.33.7±0.21.9±0.26.1±0.332±5.2♀中剂量 4.9±0.23.8±0.21.9±0.26.2±0.833±4.1高剂量 4.8±0.23.8±0.22.0±0.26.0±0.332±11.7以上结果表明，各实验组与对照组大鼠的血清葡萄糖、白蛋白、胆固醇、尿素氮、谷丙转氨酶等生化检查结果均在正常范围内。5.5.4脏器重量结果各剂量组大鼠脏体比值组别 肝/体 肾/体 脾/体(％) (％) (％)对照 3.85±0.151.03±0.11 0.51±0.04低剂量3.88±0.181.06±0.10 0.50±0.04♂中剂量3.82±0.271.01±0.05 0.49±0.05高剂量3.88±0.171.01±0.05 0.49±0.05对照 3.90±0.171.03±0.05 0.50±0.04低剂量3.88±0.261.07±0.22 0.50±0.04♀中剂量3.88±0.271.02±0.05 0.49±0.04高剂量3.88±0.191.02±0.05 0.49＋0.05上表可见，各实验组大鼠主要脏体比与对照组相比，均无明显差异。5.5.5组织学检查结果由下表可见，各组动物大体检查均无异常，肝、肾等主要脏器的组织学检查，结果未发现与实验有关的病变。肝组别样品高剂量组*对照组动物数(只) 20 20被膜改变(例)0 0坏死(例) 0 0肝 出血(例) 0 0空泡变(例) 0 1小 颗粒变性(例) 0 0肝细胞索断裂(例) 0 0叶 肝细胞肿胀(例) 2 5炎症细胞浸润(例) 1 4其它(例) 0 0汇 坏死(例) 0 0出血(例) 0 0管 胆管增生(例) 0 0炎症细胞浸润(例) 0 1区 其它(例) 0 0*大体检查未发现明显病变，因此仅选高剂量组作组织学检查肾组别 样品高剂量组*空白对照组动物数(只)20 20被膜改变(例) 00肾 坏死(例) 00皮 小管 肿胀(例) 12上皮 空泡变(水样细 变与脂肪变)(例) 00胞质 变 管型(例) 00性炎症细胞浸润(例) 14肾小球变性(例) 00间质内病变(炎症部 细胞浸润)(例)00其它(例) 00曲 坏死(例) 00髓 管上 肿胀(例) 00皮质 细 空泡变(例) 00胞变 管型(例) 00部 性炎症细胞浸润(例) 47间质炎症细胞浸润(例) 12肾盂部乳头改变(例) 00移形上皮细胞改变(例) 00*大体检查未发现明显病变，因此仅选高剂量组作组织学检查本发明的另一目的是提供了一种改善视觉功能的保健品的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)制备枸杞提取物将枸杞用8倍量的水室温浸泡2小时，再分二次各用6倍重量水室温浸泡1小时，将提取液超速离心、上清液进行100～300K超滤膜超滤截流，用5～10K分子量的超滤膜进行透析，得到分子量出于5～300K的提取物；(2)制备菊花提取物；菊花分别用10倍重量、8倍重量的水60℃各2小时、1小时热提两次，超速离心后上400大孔吸附柱进行吸附，然后用70％乙醇进行洗脱，回收乙醇，真空干燥得到菊花提取物；(3)制备成品按处方量，将菊花、枸杞提取物、牛磺酸、银杏叶提取物维生素C、葡萄糖酸锌、维生素B1和维生素B2进行复配，填充胶囊即得成品。
本发明的产品制备中间体采用了膜分离技术及工业色谱技术，提取效果好，制备方法简单，宜于规模化生产。
实例1、枸杞提取物 20克配方菊花提取物 20克银杏叶浸膏粉 8克牛磺酸 20克维生素C5克葡萄糖酸锌 8克β-胡萝卜素0.14克维生素B10.08克维生素B20.08克制备方法将公斤枸杞用8倍重量水室温度浸泡2小时，再分别用6倍重量水室温浸泡各1小时，将提取液超速离心，上清液进行300k超滤膜超滤截流，10k分子量的超滤膜进行透析，得到分子量出于10-300k的提取物20克。
将1公斤菊花分别用10倍重量、8倍重量的水60℃热提两次，各2小时、1小时。超速离心后上大孔吸附柱进行吸附，然后用70％乙醇进行洗脱，回收乙醇，真空干燥得到菊花提取物60克。
将菊花、枸杞提取物及牛碘酸、银杏叶提取物等复配、填充胶囊，即为昂立明视胶囊，每粒胶囊为300毫克。
实例2、配方枸杞提取物 15克葡萄糖酸锌5克菊花提取物 8克 β-胡萝卜素0.1克银杏叶浸膏粉 5克 维生素B10.1克牛磺酸 15克维生素B20.1克维生素C3克制备方法同实例1。实例3、配方枸杞提取物5克葡萄糖酸锌2克菊花提取物5克β-胡萝卜素 0.01克银杏叶浸膏粉 2克维生素B10.01克牛磺酸5克维生素B20.01克维生素C 1克制备方法同实例1。实例4、配方枸杞提取物10克葡萄糖酸锌4克菊花提取物6克 β-胡萝卜素 0.06克银杏叶浸膏粉 4克 维生素B10.04克牛磺酸10克维生素B20.05克维生素C 2克制备方法同实例1。
权利要求
1.一种改善视觉功能的保健品，其特征在于该保健品是由按重量计枸杞5～15份、菊花5～15份、银杏叶浸膏粉2～5份、牛磺酸5～15份、维生素C1～3份，葡萄糖酸锌2～5份、维生素B10.01～0.1份、维生素B20.01～0.1份和β-胡萝卜素0.01～0.1份的任意配比组成的。
2.一种如权利要求1所述的改善视觉功能的保健品的制备方法，该方法包括下列步骤(1)制备枸杞提取物将枸杞用8倍重量的水室温浸泡2小时，再分二次各用6倍重量水室温浸泡1小时，将提取液超速离心、上清液进行100～300K超滤膜超滤截流，用5～10K分子量的超滤膜进行透析，得到分子量出于5～300K的提取物；(2)制备菊花提取物；菊花分别用10倍重量、8倍重量的水60℃各2小时、1小时热提两次，超速离心后上400大孔吸附柱进行吸附，然后用70％乙醇进行洗脱，回收乙醇，真空干燥得到菊花提取物；(3)制备成品按处方量，将菊花、枸杞提取物、牛磺酸、银t杏叶提取物、维生素C、葡萄糖酸锌、维生素B1和维生素B2进行复配，填充胶囊即得成品。
全文摘要
本发明提供了一种含枸杞、菊花、银杏叶提取物与牛磺酸、β－胡萝卜素、维生素B
文档编号A61K31/191GK1334097SQ0011946
公开日2002年2月6日 申请日期2000年7月17日 优先权日2000年7月17日
发明者范小兵, 李慈娟, 韩超, 沙大年, 张迪 申请人:上海交大昂立股份有限公司