专利名称：脑蛋白水解物注射液生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明是属于生化药品的生产工艺现有技术新鲜猪脑去除表面的粘膜及血渍等，匀浆，加5倍体积的丙酮沉淀，沉淀分离后再加等量乙醚洗涤浸泡1小时，再过滤、真空干燥制成脑粉；脑粉用水溶解后，依次用胃蛋白酶、胰酶双酶水解，水解液离心取上清液，加热沸腾并迅速冷却，然后经板框过滤、超滤及减压浓缩得水解液；水解液分批上Sephadex G-25凝胶层析柱层析，将活性峰收集液经减压浓缩、0.45um微孔过滤制成精品液；根据所需药液量，按国家药品监督管理局2000年12月28日颁布的药品标准(编号WS1-XG-25-2000)计算氨基酸用量，添加相应氨基酸配制成浓配液，然后稀配装针成成品药液，经蒸汽灭菌成无菌制剂。
(1)、使用大量的有机化学溶剂众所周知，丙酮和乙醚的沸点极低，易燃易爆，是有毒的有机化学物质，乙醚还被用作麻醉剂，使用大量的丙酮和乙醚先将脑蛋白沉淀出来制成脑粉，此步骤非常危险，必须在防爆车间内生产，操作麻烦，污染环境，损害人体健康。
(2)、设备投资大，生产效率低，生产周期长用层析方法提纯有效成份，每一过程需要30小时，生产周期长。
使用减压浓缩和离心的步骤，生产效率低，不利于对药品品质的控制。
本发明目的是提供一种不使用有机化学溶剂，新工艺使用物理方法取代化学试剂沉淀法来提取脑蛋白的脑蛋白水解物注射液生产工艺。
本发明的脑蛋白水解物注射液生产工艺是新鲜猪脑去除表面的粘膜及血渍等，加2倍体积的水匀浆，用双层纱布过滤，滤液先用胃蛋白酶水解，用盐酸调PH到1.5-1.6，水浴温度40-45℃，时间为6-8小时，再用氢氧化钠调PH到7.6-7.7，加胰酶(胰酶先溶解于0.02N的氯化钙溶液中于4℃下活化30分钟)水解，40-45℃水浴水解4-6小时，得到水解液，加盐酸调PH值2.5-3.0，-20～-10℃下静置10-30小时；在室温条件下，用双层纱布过滤，再加入1/2体积的水，加氢氧化钠调PH值到中性，用孔径为0.5-1.0um的微孔滤膜过滤澄清，取澄清液，依次用截流分子量为7万和1万的超滤膜超滤，得到的超滤液再用截流分子量为1000的超滤膜进行浓缩，得到的浓缩液加热到100℃沸腾15分钟，然后迅速冷却到25℃以下，再依次经过0.5-1um孔径的微孔滤膜和截流分子量为7万和1万的超滤膜，得到的超滤液再经121℃蒸气灭菌30分钟得到的除菌溶液称为脑蛋白水解的混和多肽、氨基酸溶液精制品；根据所需药液量，按国家药品监督管理局2000年12月28日颁布的药品标准(编号WS1-XG-25-2000)计算需要添加的氨基酸用量，与上述溶液配制成浓配液，然后稀配装针成成品药液，经121℃蒸汽灭菌30分钟成无菌制剂。
本发明技术优点现有工艺用化学试剂沉淀法先将脑蛋白沉淀出来制成脑粉，化学沉淀法所用的丙酮和乙醚非常危险，必须在防爆车间内进行生产，操作麻烦，污染环境，同时对操作工人的安全保护要求很高。本工艺舍弃了化学沉淀步骤，直接水解再用澄清方式去除水不溶物，能达到现有工艺的分离效果。本工艺具有安全、高效、无污染、方便操作的特点。
现有工艺用层析方法提纯有效成份，生产周期长，要提高产量就要多买设备，设备投资大，生产效率低。本工艺用酸解法、微滤和超滤法、热变法提纯药液，优点是生产时间大大缩短、产量提高、生产环境要求降低、操作简便。同时，减少生产环节就意味着减少了药品可能受污染的机会，缩短生产时间的就意味着减低了药品在生产中变质的概率。
除具有以上优点外，本工艺降低了生产成本，生产方式基本是密闭式生产，采用物理方法，无泄漏、无污染、符合GMP要求。
1、取新鲜猪脑100公斤，去除表面的粘膜及血渍等，边匀浆边加入200L的蒸馏水(以下简称为水)，用双层沙布过滤匀浆液；取2.16公斤胃蛋白酶加水溶解后加入滤液中，用0.5N的盐酸调PH到1.5，44℃水浴水解8小时，然后，用2N的氢氧化钠调PH为7.2，取1.25公斤胰酶用0.02N的氯化钙于4℃活化30分钟，加入后用2N的氢氧化钠继续调PH到7.6，44℃水浴水解6小时，得到水解液，用0.5N的盐酸调PH到3.0，-10℃下静置过夜；用双层纱布过滤一次，再加入150L的水使总体积为450L左右，用2N的氢氧化钠调PH到中性，用孔径为0.6um的微孔滤膜过滤，得到的澄清液再依次经过截流分子量7万和1万的超滤膜超滤，得到的超滤液(体积约450L)用截流分子量为1000的超滤膜超滤，弃去超滤液，保留浓缩液，到浓缩液剩下约100L时停止，将浓缩液加热到100℃沸腾15分钟，然后用冷水浴冷却到25℃，再用孔径为0.6um的微孔滤膜过滤，得到的澄清液再依次经过截流分子量7万和1万的超滤膜超滤，得到约100L超滤液，装入玻璃容器中，121℃下灭菌30分钟，得到除菌的脑蛋白水解的混和多肽、氨基酸溶液精制品，室温下保存；配制成品装针前，根据所需药液量，按国家药品监督管理局2000年12月28日颁布的药品标准(编号WS1-XG-25-2000)添加氨基酸配制成浓配液，然后稀配装针成成品，经121℃蒸汽灭菌30分钟成无菌制剂。
权利要求
1.脑蛋白水解物注射液生产工艺，其特征在于脑蛋白水解物注射液生产工艺是新鲜猪脑去除表面的粘膜及血渍等，加2倍体积的水匀浆，用双层纱布过滤，滤液先用胃蛋白酶水解，用盐酸调PH到1.5-1.6，水浴温度40-45℃，时间为6-8小时，再用氢氧化钠调PH到7.6-7.7，加胰酶(胰酶先溶解于0.02N的氯化钙溶液中于4℃下活化30分钟)水解，40-45℃水浴水解4-6小时，得到水解液，加盐酸调PH值2.5-3.0，-20～-10℃下静置10-30小时；在室温条件下，用双层纱布过滤，再加入1/2体积的水，加氢氧化钠调PH值到中性，用孔径为0.5-1.0um的微孔滤膜过滤澄清，取澄清液，依次用截流分子量为7万和1万的超滤膜超滤，得到的超滤液再用截流分子量为1000的超滤膜进行浓缩，得到的浓缩液加热到100℃沸腾15分钟，然后迅速冷却到25℃以下，再依次经过0.5-1um孔径的微孔滤膜和截流分子量为7万和1万的超滤膜，得到的超滤液再经121℃蒸气灭菌30分钟得到的除菌溶液称为脑蛋白水解的混和多肽、氨基酸溶液精制品。
全文摘要
本发明的脑蛋白水解物注射液生产工艺,其特征在于:脑蛋白水解物注射液生产工艺是:将新鲜猪脑加2倍体积的水匀浆,过滤,滤液先用胃蛋白酶水解,后用胰酶水解,调pH值,静置,在室温条件下,过滤,再加入水,调pH值到中性,用微孔滤膜过滤澄清,依次用不同截流分子量超滤膜超滤,得到浓缩液,加热,然后冷却,再依次经过超滤膜,得到脑蛋白水解的混和多肽、氨基酸溶液精制品。
文档编号A61K38/01GK1356141SQ0113052
公开日2002年7月3日 申请日期2001年11月24日 优先权日2001年11月24日
发明者张素, 戴毅, 赵守田 申请人:海南斯达制药有限公司