专利名称：枯(纳豆)激酶的生产方法以及枯(纳豆)激酶溶栓药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及生化药品制备技术领域，具体涉及利用大豆发酵食品中的一种微生物—枯草芽孢杆菌的生理生化特性，分离生产提取具有强烈溶栓作用的枯(纳豆)激酶地生产方法以及枯(纳豆)激酶溶栓药物。
枯(纳豆)激酶是近年科学界寻求治疗和预防心脑血管疾病的主要产品之一，但由于目前所生产产品酶活低，不稳定，质量得不到保证，产业化生产的风险性大。例如在专利申请号为ZL00107589.6，名称为“纳豆激酶的生产方法及其用途”的申请中，它所公开的依其生产方法得到的最终产品得率低，液体发酵最高酶活为9.1u/ml，固体发酵为22.9u/g，由于产物不能直接应用，在制作药品的过程中所得产物还必须经过复杂的提纯方法后才能应用，产业化生产成本相当高，因此目前国内市场无枯激酶药品。
本发明的目的之一是提供一种得率高，酶活高，成本低，可进行产业化生产的枯(纳豆)激酶的生产方法；目的之二是提供以枯(纳豆)激酶为主原料制作的枯(纳豆)激酶溶栓药物。
为达到上述目的，本发明的技术解决方案如下一种枯(纳豆)激酶的生产方法，其特殊之处在于依次包括下述两个步骤一、发酵；二、将经发酵步骤后得到的干燥物粉碎；所述第一步中的发酵是固体发酵，该发酵过程依次有如下工序，①用特制浸泡液浸泡优质黄豆，所述的特制浸泡液的配方为牛肉浸膏5～10g，蛋白胨4～12g，酵母浸出汁3～8g，NaCl5～10g，葡萄糖15～20g，自来水1000ml，PH值为6.8～7，浸泡到黄豆吸足水份，豆无硬心，表面无皱纹为止；②装瓶灭菌接种采用常规灭菌方法，等瓶温自然冷却至40℃以下，在无菌条件下接种，接种所用的菌种是枯草芽孢杆菌；③培育采用常规培养条件；④干燥采用常规方法。
上述第③道发酵工序中采用高低温培养方法，先在37℃下培养22～32小时后马上转入3～10℃条件下保温，12～24小时获得发酵物。
上述第④道干燥工序中采用的是将发酵物进行低温真空冷冻干燥，发酵物水分小于15％时干燥结束。
上述第二步中的粉碎是采用细胞破壁技术。
上述生产方法培养的枯(纳豆)激酶制备的枯(纳豆)激酶溶栓药物，其特殊之处在于制备片剂、冲剂、硬胶囊、软胶囊或口服液时，在所得产物中直接添加可溶性淀粉、葡萄糖、麦芽糊精(等)配料调整至每克内有200～680的酶活单位。
上述生产方法培养的枯(纳豆)激酶制备的枯(纳豆)激酶溶栓药物每克内有200～380的酶活单位，具有预防心血管疾病的作用。
上述生产方法培养的枯(纳豆)激酶制备的枯(纳豆)激酶溶栓药物每克内有300～680的酶活单位，具有治疗心血管疾病的作用。
上述生产方法培养的枯(纳豆)激酶制备的冻干粉每克内含大于800的酶活单位，制备的针剂纯度达95％以上。
下面将通过实施例对本发明方案作详细叙述
第一部分枯(纳豆)激酶的生产方法1、使用特制浸泡液的实施例及其与使用常规浸泡液的产物酶活比较实验条件300ml三角瓶加入特制浸泡液浸泡过的大豆10g，调PH7，121℃灭菌15min，接入枯草芽孢杆菌斜面菌种，在37℃条件下培养24小时，常规干燥、常规粉碎后测定酶活。
2、高低温培养条件实施例及其与常规培养条件下的产物酶活比较
实验条件500ml三角瓶内加入经特制浸泡液浸泡过的大豆30g，调PH7，在121℃条件下灭菌30min接入枯草芽孢杆菌种子菌种培养，再经常规干燥、常规粉碎后测定酶活。
3、干燥与粉碎工序实施例，使用原料为经特制浸泡液浸泡，经高低温培养制得的发酵豆。
由上述实施例可以看出，使用特制浸泡液、采用高低温培养条件、采用低温真空冷冻干燥及细胞破壁技术均对提高产物酶活有重要作用。
第二部分用于治疗心血管疾病的枯(纳豆)激酶溶栓药物
1、制备片剂、冲剂、硬胶囊、软胶囊时，在固体发酵所得产物中直接添加可溶性淀粉、葡萄糖、麦芽糊精等配料调整至每克内有200～680的酶活单位。
用量到18克即有明显效果预防时，1日1次，每次3克；治疗时，1日2次，每次3克。
2、用常规方法制备的冻干粉。
用量到18克即有明显治疗效果，按病情由轻至重依次按实施例1～4确定具体的用量数，1日2次，每次3克，共6次，
3、用常规方法制备的针剂。
用量到18克即有明显治疗效果，按病情由轻至重依次按实施例1～4确定具体的用法。
与现有技术相比，本发明具有如下优点提供的枯(纳豆)激酶生产方法产物得率高，单位酶活高，产业化生产成本低；同时由于产物酶活高，酶产品性能稳定，可直接用产业化手段制备枯(纳豆)激酶溶栓药物，所制备的枯(纳豆)激酶溶栓药物在体内、体外实验中，其纤溶活性为蚓激酶等其它同类产品的四倍以上，价格也仅为其15％左右。
权利要求
1.一种枯(纳豆)激酶的生产方法，其特征在于依次包括下述两个步骤一、发酵；二、将经发酵步骤后得到的干燥物粉碎；所述第一步中的发酵是固体发酵，该发酵过程依次有如下工序，①用特制浸泡液浸泡优质黄豆，所述特制浸泡液的配方为牛肉浸膏5～10g，蛋白胨4～12g，酵母浸出汁3～8g，NaCl5～10g，葡萄糖15～20g，自来水1000ml，PH值为6.8～7，浸泡到黄豆吸足水份，豆无硬心，表面无皱纹为止；②装瓶灭菌接种采用常规灭菌方法，等瓶温自然冷却至40℃以下，在无菌条件下接种，接种所用的菌种是枯草芽孢杆菌；③培育采用常规培养条件；④干燥采用常规方法。
2.如权利要求1所述的枯(纳豆)激酶的生产方法，其特征在于所述第③道发酵工序中采用高低温培养方法，先在37℃下培养22～32小时后马上转入3～10℃条件下保温，12～24小时获得发酵物。
3.如权利要求1或2所述的枯(纳豆)激酶的生产方法，其特征在于所述第④道干燥工序中采用的是将发酵物进行低温真空冷冻干燥，发酵物水分小于15％时干燥结束。
4.如权利要求3所述的枯(纳豆)激酶的生产方法，其特征在于所述第二步中的粉碎是采用细胞破壁技术。
5.如权利要求1～4任意一项所述方法培养的枯(纳豆)激酶制备的枯(纳豆)激酶溶栓药物，其特征在于制备片剂、冲剂、硬胶囊、软胶囊或口服液时，在所得产物中直接添加配料调整至每克内有200～680的酶活单位。
6.如权利要求5的枯(纳豆)激酶溶栓药物，其特征在于所述配料是可溶性淀粉、葡萄糖、麦芽糊精。
7.如权利要求6的枯(纳豆)激酶溶栓药物，其特征在于每克内有200～380的酶活单位。
8.如权利要求6的枯(纳豆)激酶溶栓药物，其特征在于每克内有300～680的酶活单位。
9.如权利要求1～4任意一项所述方法培养的枯(纳豆)激酶溶栓药物，其特征在于制备的冻干粉每克内含大于800的酶活单位。
10.如权利要求1～4任意一项所述方法培养的枯(纳豆)激酶溶栓药物，其特征在于制备的针剂纯度达95％以上。
全文摘要
本发明涉及生化药品制备技术领域，具体涉及利用大豆发酵食品中的一种微生物一枯草芽孢杆菌的生理生化特性，分离生产提取具有强烈溶栓作用的枯(纳豆)激酶的生产方法以及枯(纳豆)激酶溶栓药物。目的之一是提供一种得率高，酶活高，成本低，可进行产业化生产的枯(纳豆)激酶的生产方法；目的之二是提供以枯(纳豆)激酶为主原料制作的枯(纳豆)激酶溶栓药物。生产方法中采用固体发酵法和细胞破壁技术，在发酵中又使用特制浸泡液、采用高低温培养条件、采用低温真空冷冻干燥技术来保证酶活，枯(纳豆)激酶溶栓药物是使用上述方法的产物直接制取片剂、冲剂、硬胶囊、软胶囊、口服液、冻干粉及针剂。
文档编号A61K38/48GK1408857SQ01131720
公开日2003年4月9日 申请日期2001年9月18日 优先权日2001年9月18日
发明者陈瑞真 申请人:陈瑞真