专利名称：木犀草素及其衍生物在抑制肠蠕动药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域；具体地说是木犀草素及其衍生物在抑制肠蠕动药物中的应用。
背景技术：
小儿腹泻是临床中常见病、多发病之一，尤以三岁以内婴幼儿为多见，年龄越小，发病率越高，一年四和季均可发生，但以夏秋季节较为多见，如不及时给予治疗，病变较成人为速，可导致营养不良，发育障碍，甚至脱水或酸中毒，造成严重后果。小儿腹泻病是一组多病因，多因素引起的疾病，感染是主要原因，其病原有细菌，病毒，真菌等，需要抗感染治疗，但是抗菌药物尤其是广谱抗生素的长期应用会导致肠道菌群紊乱，使腹泻加重或久治不愈。
藏药湿生扁蕾[文献1.中国科学院西北高原生物研究所.青海经济植物志.西宁青海人民出版社，1979.]在治疗小儿腹泻及小儿秋季腹泻(病毒性腹泻)方面，疗效高达90％以上，临床治愈率比综合疗法(即各种抗菌素及其它辅助药物综合治疗)提高近三倍，治疗天数比综合疗法缩短一倍多，用药量少，无毒副作用。
发明内容
本发明的目的是提供木犀草素及其衍生物在抑制肠蠕动药物中的应用，这类化合物可作为先导化合物，设计开发出高效药物，并且通过研究木犀草素及其衍生物的生物活性，为新药开发提供一定的理论依据。
为了寻找其中新的有效成分，开发治疗小儿腹泻的高效药物和抑制肠蠕动的保健品，我们采用现代分离技术，化学合成方法及活性跟踪，得到了木犀草素及其衍生物具有抑制肠蠕动的活性；为实现上述目的，本发明通过应用现代分离技术及活性跟踪方法从治疗小儿腹泻的传统藏药--湿生扁蕾中分离得到了木犀草素，用化学合成得到了其衍生物，并进行了活性测试；利用现代分离，化学合成及活性跟踪的方法，发现了木犀草素及其衍生物具有抑制肠蠕动的作用；并进行了单体的分离纯化。
木犀草素及其衍生物的结构式如下
其中R1，R2，R3，R4可以是氢、羟基、烷氧基或酰基。
所述R1较好为OH、H、O(CH3)n(n＝1，2，3)、CONH2或OCOCH3；R2较好为OH、H、O(CH3)n(n＝1，2，3)、CONH2或OCOCH3；R3较好为OH或H；R4较好为OH。
所述抑制肠蠕动是指木犀草素及其衍生物具有抑制肠蠕动的活性，能拮抗乙酰胆碱、氯化钡、组织胺所致离体肠管的痉挛性收缩，能拮抗新斯的明所致的肠蠕动亢进；所述治疗腹泻或作为抑制肠蠕动的药物可以为片剂、膏剂、粉剂、水剂或颗粒剂等各种剂型的药物本发明具有如下优点1.应用范围广。木犀草素类化合物可开发成为治疗腹泻的新药物或抑制肠蠕动的保健食品，调节肠胃功能。
2.可做为先导性的药物基础。因其植物来源藏药湿生扁蕾[1]在治疗小儿病毒性腹泻疗效高达90％以上，临床治愈率比各种抗菌素及其它辅助药物综合治疗提高近三倍，治疗天数比综合疗法缩短一倍多，用药量少，无毒副作用，所以从湿生扁蕾中提取出来的有效成分木犀草素可做为先导化合物，来设计开发出新型高效药物。
3.药性可靠，效果显著。应用现代分离技术从藏药湿生扁蕾中分离得到了木犀草素，并利用化学合成的方法合成了其衍生物，取木犀草素及其衍生物与阿拉伯胶粉研磨，加蒸馏水配成悬浊液，在离体肠管实验中，可观察到木犀草素及其衍生物对肠蠕动有明显的抑制作用，对乙酰胆碱，氯化钡，组织胺所致离体肠管的痉挛性收缩有抑制作用；小肠推进实验中，可观察到木犀草素对肠蠕动有抑制作用，对新斯的明所致的肠蠕动亢进也有抑制作用。木犀草素及衍生物植物来源丰富，且未见有肝脏，肾脏或心脏的毒性报道，所选用的药筛模型是参照抑制肠蠕动药理作用的实验方法[文献2.陈奇.中药药理研究方法学，北京人民出版社，1993]建立的，保证了研究的可靠性。
具体实施例方式
实施例1木犀草素的提取分离流程为湿生扁蕾的干燥全草→乙醇浸泡过夜→回流提取→浸膏→氯仿，乙酸乙酯，正丁醇分别提取→不同部位的浸膏；乙酸乙酯部份→硅胶柱层析→乙醇重结晶→木犀草素。
具体过程为湿生扁蕾的干燥全草粉碎后用80％的乙醇浸泡过夜，回流提取3次，合并提取液，减压蒸去乙醇，得浸膏。浸膏分散于水中，分别用氯仿，乙酸乙酯，正丁醇萃取3次。
乙酸乙酯萃取液合并减压蒸馏得浸膏，浸膏用硅胶拌匀，经硅胶柱层析，用氯仿-甲醇(100∶0～100∶5)洗脱，氯仿-甲醇100∶2洗脱时，收集液有黄色固体析出，用乙醇多次洗涤，得到其纯的单体，结构用核磁确认。
实施例2木犀草素部分衍生物的合成合成路线为
1)中间体a的合成以间三苯酚(1，3-二羟基苯酚)，乙腈为原料，经过Hoesch反应得到a；2)目标化合物的合成化合物a与苯甲醛的不同取代物用95％的乙醇混合摇匀后，慢慢加入5％～10％的NaoH溶液，剧烈摇动片刻，室温放置3天，在用稀Hcl酸化，放置2天，有固体析出，抽滤，粗产物用乙醇重结晶，即得化合物2～9。
实施例3木犀草素(化合物1)3mg与阿拉伯胶粉研磨，加蒸馏水1ml配成待试液。取不同剂量(0.05ml，0.1ml，0.2ml)的待试液分别用蒸馏水稀释到1ml，依次加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，通过生物信号系统可观察到三个剂量的木犀草素对离体肠管的自发收缩均有抑制作用，且其高剂量抑制作用显著(P＜0.01)。
实施例4化合物2取2mg与阿拉伯胶粉研磨，加蒸馏水1ml配成待试液。取不同剂量的(0.1ml，0.2ml，0.4ml)待试液分别用蒸馏水稀释到1ml，依次加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，通过生物信号系统可观察到三个剂量的化合物2对离体肠管的自发收缩均有抑制作用，且其高剂量抑制作用显著(P＜0.01)。
实施例5化合物3取5mg与阿拉伯胶粉研磨，加蒸馏水1ml配成待试液。取不同剂量的(0.06ml，0.12ml，0.24ml)待试液分别用蒸馏水稀释到1ml，依次加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，通过生物信号系统可观察到三个剂量的化合物3对离体肠管的自发收缩均有抑制作用，且其高剂量抑制作用显著(P＜0.01)。
实施例6化合物5取5mg与阿拉伯胶粉研磨，加蒸馏水配成待试液。取不同剂量的(0.1ml，0.2ml，0.4ml)待试液分别用蒸馏水稀释到1ml，依次加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，通过生物信号系统可观察到三个剂量的化合物5对离体肠管的自发收缩均有抑制作用，且其高剂量抑制作用显著(P＜0.01)。
实施例7化合物8取3mg与阿拉伯胶粉研磨，加蒸馏水配成待试液。取不同剂量的(0.05ml，0.1ml，0.2ml)待试液分别用蒸馏水稀释到1ml，依次加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，通过生物信号系统可观察到三个剂量的化合物8对离体肠管的自发收缩均有抑制作用，且其高剂量抑制作用显著(P＜0.01)。
实施例8化合物9取3mg与阿拉伯胶粉研磨，加蒸馏水配成待试液。取不同剂量的(0.1ml，0.2ml，0.4ml)待试液分别用蒸馏水稀释到1ml，依次加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，通过生物信号系统可观察到不同剂量的化合物9对离体肠管的自发收缩均有抑制作用，且其高剂量抑制作用显著(P＜0.01)。
实施例9取适量的乙酰胆碱加蒸馏水配成0.1mg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.05ml，0.1ml，0.2ml)的木犀草素的待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的木犀草素均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例10取适量的乙酰胆碱加蒸馏水配成0.1mg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.06ml，0.12ml，0.24ml)的化合物3的待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的化合物3均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例11取适量的乙酰胆碱加蒸馏水配成0.1mg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.1ml，0.2ml，0.4ml)的化合物5的待试液，通过生物信号系统观察到不同剂量的化合物5均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例12取适量的乙酰胆碱加蒸馏水配成0.1mg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.05ml，0.1ml，0.2ml)的化合物6(4mg/ml)的待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的化合物6均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例13取适量的乙酰胆碱加蒸馏水配成0.1mg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.05ml，0.1ml，0.2ml)的化合物8的待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的化合物8均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例14取适量的氯化钡加蒸馏水配成0.5mg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.05ml，0.1ml，0.2ml)的木犀草素的待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的木犀草素均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例15取适量的氯化钡加蒸馏水配成0.5mg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.1ml，0.2ml，0.4ml)的化合物2的待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的化合物2均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例16取适量的氯化钡加蒸馏水配成0.5mg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.1ml，0.2ml，0.4ml)的化合物5的待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的化合物5均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例17取适量的氯化钡加蒸馏水配成0.5mg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.1ml，0.2ml，0.4ml)的化合物9的待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的化合物9均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例18取适量的组织胺加蒸馏水配成12.5μg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.05ml，0.1ml，0.2ml)的木犀草素待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的木犀草素均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例19取适量的组织胺加蒸馏水配成12.5μg/m1溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.06ml，0.12ml，0.24ml)的化合物3的待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的化合物3均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例20取适量的组织胺加蒸馏水配成12.5μg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.2ml，04ml，0.8ml)的化合物4(5mg/ml)的待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的化合物4均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例21
取适量的组织胺加蒸馏水配成12.5μg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.1，0.2ml，0.4ml)的化合物7(3mg/ml)的待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的化合物7均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例22取适量的组织胺加蒸馏水配成12.5μg/ml溶液，加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，使离体肠管产生痉挛性收缩，分别给予不同剂量(0.1ml，0.2ml，0.4ml)的化合物9的待试液，通过生物信号系统观察到三个剂量的化合物9均能显著抑制离体肠管的痉挛性收缩(P＜0.01)。
实施例23在小肠推进实验中发现，给药组的小肠推进均比正常组的小。说明对肠蠕动有抑制作用，故对小肠推进有影响；如下表1所示。
表1木犀草素对小肠推进运动的影响
与正常对照组比较**P＜0.01，*P＜0.05实施例24由下表2可看出，木犀草素能对抗新斯的明所致的肠蠕动亢进。
表2木犀草素对新斯的明引起肠亢进的影响
与新斯的明比较，*P＜0.0权利要求
1.木犀草素及其衍生物在抑制肠蠕动药物中的应用，其特征在于木犀草素及其衍生物的结构式如下， 其中R1，R2，R3，R4可以是氢、羟基、烷氧基或酰基。
2.按照权利1所述的木犀草素及其衍生物在抑制肠蠕动药物中的应用，其特征在于所述R1为OH、H、OCOCH3、CONH2或O(CH3)n，n＝1，2或3；R2为OH、H、OCOCH3、CONH2或O(CH3)n，n＝1，2或3；R3为OH或H；R4为OH。
3.按照权利1所述的木犀草素及其衍生物在抑制肠蠕动药物中的应用，其特征在于所述抑制肠蠕动是指木犀草素及其衍生物具有抑制肠蠕动的活性，能拮抗乙酰胆碱、氯化钡、组织胺所致离体肠管的痉挛性收缩，能拮抗新斯的明所致的肠蠕动亢进。
4.按照权利1所述的木犀草素及其衍生物在抑制肠蠕动药物中的应用，其特征在于所述药物可以为片剂、膏剂、粉剂、水剂或颗粒剂。
全文摘要
本发明属于生物技术领域；具体地说是木犀草素及其衍生物在抑制肠蠕动药物中的应用，木犀草素及其衍生物的结构式如右式，其中R
文档编号A61P1/00GK1613445SQ200310105009
公开日2005年5月11日 申请日期2003年11月5日 优先权日2003年11月5日
发明者杜昱光, 王焕弟, 谭成玉, 陆海峰, 白雪芳 申请人:中国科学院大连化学物理研究所