专利名称：一种中药提取物及其制备工艺和在制药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药制药领域，特别是涉及一种中药提取物及其制备工艺和在制药中的应用。
背景技术：
目前治疗和预防肝炎的药物较多，但不少中成药疗效不确定，化学药的毒副作用又较多，因此很难有较好的选择。金银花和菊花制备的粗制剂虽有报道，但其制备工艺简单、纯度较低、服用量大，副作用多，疗效不够稳定，且作用多表现在抗菌、消炎及治疗心血管疾病方面，在肝炎防治方面的作用鲜有报导。
发明内容
本发明的目的是提供一种从金银花和菊花中提取的纯度较高的中药提取物。
本发明的另一个目的是提供该提取物的制备工艺。
本发明还有一个目的是提供该提取物在制备抗肝炎药中的应用。
本发明的技术方案主要依据祖国医学的原理，根据肝炎急性期多为邪毒，慢性期多为气滞血瘀或气阴两虚，特别是慢性肝炎以湿热与疫毒蕴结贯穿始终的特点，对于肝炎急性发作的治疗，宜清不宜补，宜疏不宜收；而在肝炎慢性期，则宜柔不宜刚。另苏廷琬《药义明辨》“金银花，味甘微寒。凡肝家血虚有热以为病者，或脏腑、经脉，或肉里，皆可用以撤其壅热，散其聚毒，不但为诸疮要药而已。”“(菊花)盖由其秉金精而兼水化，金水相涵为益阴之上品，不独平肝，而且能益肝之不足也。”赵其光《本草求原》“(菊花)能涵肺肾之阴以平肝火而生肝血。”张山雷《本草正义》“凡花皆主宣扬疏泄，独菊花则摄纳下降，能平肝火熄内风，抑木气之横逆。”张秉成《本草便读》“甘菊之用，可一言敝之，曰疏风而已。然虽系疏风之品，而性甘寒，与羌、麻等辛燥者不同，故补肝肾药中可相需而用也。”故本方发挥中医整体治疗的优势，选用金银花以清热解毒、舒肝利胆，选用菊花以化浊开闭、养血柔肝，并采用现代制剂工艺提取有效成分，抑制感染病毒，增强免疫功能，修复病理损伤，减小毒副作用，为肝炎的治疗或预防增加一个新选择。
本发明的目的可以通过下列措施来实现一种中药提取物，所用重量百分比的原料药为金银花1-99％、菊花1-99％，可通过下列步骤制备a.按原料药配比取金银花和菊花加8-12倍50-90％乙醇，回流提取2-4次，每次0.5-2小时，过滤，合并滤液，浓缩至60℃时相对密度为1.02-1.20，5000-20000rpm离心，得上清液；b.将上清液用大孔吸附树脂进行纯化处理，上柱过程中以黄酮类显色剂检测流出液，确定树脂吸附是否饱和，静置，先用2-4倍树脂床体积的水洗脱，再用2-4倍树脂床体积的梯度乙醇依次进行洗脱，流速均为每小时2-4倍树脂床体积，收集浓度为20％以上乙醇的洗脱部分，回收乙醇，浓缩即得提取物。
本发明的目的还可以通过下列措施来实现所述的中药提取物，制备时所用大孔树脂为非极性或弱极性大孔树脂。
所述的中药提取物，制备时所用的大孔树脂型号可以是D101、HPD100、HPD450、AB-8。
所述的中药提取物可添加辅料制成任何一种药剂学上允许的剂型。
所述的中药提取物，其剂型可以是丸剂、片剂、散剂、栓剂、膜剂、颗粒剂、胶囊剂、微囊剂、滴丸剂、气雾剂、膏剂、酒剂、口服液剂、注射剂。
一种中药提取物的制备工艺，所用重量百分比的原料药为金银花1-99％、菊花1-99％，包含下列步骤a.按原料药配比取金银花和菊花加8-12倍50-90％乙醇，回流提取2-4次，每次0.5-2小时，过滤，合并滤液，浓缩至60℃时相对密度为1.02-1.20，5000-20000rpm离心，得上清液；b.将上清液用大孔吸附树脂进行纯化处理，上柱过程中以黄酮类显色剂检测流出液，确定树脂吸附是否饱和，静置，先用2-4倍树脂床体积的水洗脱，再用2-4倍树脂床体积的梯度乙醇依次进行洗脱，流速均为每小时2-4倍树脂床体积，收集浓度为20％以上乙醇的洗脱部分，回收乙醇，浓缩即得。
所述的制备工艺中所用大孔树脂为非极性或弱极性大孔树脂。
所述的制备工艺中所用的大孔树脂型号可以是D101、HPD100、HPD450、AB-8。
一种中药提取物在制备治疗或预防肝炎的药物中的应用。
本发明的优点本发明克服了中药传统工艺的不足，利用大孔树脂纯化、除杂，制备的提取物有效物质纯度较高，提取物中有效部位总黄酮的含量可达到55％以上，同时本发明还具有抗肝炎的作用，且疗效高，质量稳定，服用量少，副作用小。
本发明的药效学实验实验中的本发明均按实施例1制备。
实验1、本发明对四氯化碳(CCl4)引起家兔实验性肝损伤的影响家兔分为6组，即正常对照组，CCl4模型对照组(给予CCl40.1ml/kg)，CCl4+联苯双酯(60mg/kg)组，CCl4+本发明低、中、高剂量(分别按1、10、20g生药/kg给药)组。除正常对照组外，其余各组均腹腔注射CCl4。正常对照组和模型对照组均灌胃给予等容积的生理盐水，其余各组动物均灌胃给药，每日一次，共连续给药5次，最后一次给药后1小时处死动物，取血测定SGPT值，并立即解剖，取肝脏进行组织化学及病理检查。
结果表明1、本发明大中剂量能明显降低SGPT水平(见表1)；2、病理检查示本发明大中剂量组肝组织中LDH含量较模型对照组有明显增加，肝小叶中央带LDH含量有所增加，肝糖原分布均匀，肝小叶中央带及周围带糖原比模型对照组有所增加；3、本发明大中剂量对肝细胞浆疏松、脂肪样变、嗜酸性变及坏死均有明显保护作用。
实验2、本发明对D-氨基半乳糖(D-Gal)所致大鼠急性肝损伤的影响大鼠分为6组，即正常对照组，D-Gal模型对照组(给予D-Gal 800mg/kg)，D-Gal+联苯双酯组(100mg/kg)，D-Gal+本发明低、中、高剂量(分别按1、2.5、5g生药/kg给药)组。各组动物于12小时内连续灌胃给药三次(正常对照组和模型对照组给予等容积的生理盐水)，于第一次给药的同时除正常对照组外，其余各组均腹腔注射D-Gal，最后一次给药后12小时，动物断头取血，测量SGPT，并立即取肝脏进行大体和镜下病理检查。SGPT测定值结果见表1。
结果表明本发明三个剂量均可降低SGPT水平，与联苯双酯作用相似，并对大鼠肝损伤的形态学改变有明显的保护作用。
实验3、本发明对小鼠硫代乙酰胺(TAA)中毒的保护作用小鼠分为6组，即正常对照组，TAA模型对照组(给予TAA50ml/kg)，TAA+联苯双酯(200mg/kg)组，TAA+本发明低、中、高剂量(分别按1、10、20g生药/kg给药)组。各组动物每日上午8时灌胃给药一次(正常对照组和模型对照组给予等容积的生理盐水)，于第二次给药后下午2时除正常对照组外，其余各组均腹腔注射TAA，禁食，第三日给药后1小时断头取血，测SGPT，取肝脏作病理学检查。SGPT测定值结果见表1。
结果表明1、本发明大中剂量均有抑制SGPT水平上升的作用；2、病理学检查示本发明三个剂量组肝细胞浊肿、胞浆疏松、嗜酸性变等均较模型对照组为轻，且随剂量的增加而保肝作用加强。
表1 本发明灌胃给药对SGPT的影响(n＝10，x±SD)
注与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，▲P＞0.05。
实验4、本发明对大鼠实验性肝硬化的影响大鼠分为6组，即正常对照组，CCl4模型对照组，CCl4+联苯双酯(50mg/kg)组，CCl4+本发明低、中、高剂量(分别按1、5、10g生药/kg给药)组。动物每日灌胃给药一次(正常对照组和模型对照组均灌胃给予等容积的生理盐水)，共六周，每隔三日除正常对照组外，其余各组动物均皮下注射CCl40.3ml/100g(40％豆油溶液)，首次剂量0.5ml/100g。于末次给药24小时后，断头处死动物，取肝组织测羟脯氨酸含量，以香草醛比色法测肝总脂含量，并做肝组织病理切片，染色后显微镜观察。结果见表2。
表2本发明对大鼠肝脏羟脯氨酸及肝总脂含量的影响 (n＝10，x±SD)
注与模型对照组比较，*P＜0.05，▲P＞0.05。
结果表明本发明大中剂量及联苯双酯均能显著降低肝脏羟脯氨酸含量，并均能使肝总脂含量显著减少；病理检查示联苯双酯及本发明大中剂量组肝组织纤维增生明显减轻，未见重度纤维化产生。
实验5、本发明对小鼠肝脏排泄磺溴酞钠(BSP)功能的影响小鼠分为5组，即正常对照组，联苯双酯(200mg/kg)组，本发明低、中、高剂量(分别按1、10、20g生药/kg给药)组。灌胃给药，每日一次，共三次，正常对照组灌胃给予等容积的生理盐水，末次给药1小时后，动物尾静脉注射BSP 100mg/kg，15分钟后断头取血，测血清BSP滞留量。结果见表3。
表3本发明对小鼠肝脏排泄BSP功能的影响 (n＝10，x±SD)
注与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，▲P＞0.05。
结果表明本发明三个剂量均有促进肝脏排泄的作用，BSP滞留值均较正常对照组低，尤以大剂量作用明显。
实验6、本发明对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响动物分为5组，即正常对照组，联苯双酯(200mg/kg)组，本发明低、中、高剂量(分别按1、10、20 g生药/kg给药)组。动物灌胃给药，每日一次，共5次，正常对照组灌胃给予等容积的生理盐水，末次给药1小时后，动物尾静脉注入碳素墨水，2、10分钟后分别从眼底取血20μl，处理后测量OD值。按下列公式计算碳粒廓清指数K值，结果见表4。
K=lgOD2OD10t10-t2=18lgOD2OD10]]>(K＝廓清指数；OD2、OD102及10分钟时的OD值)表4本发明对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响 (n＝10，x±SD)
注与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
结果表明本发明三个剂量组碳粒廓清指数均有明显提高，此作用较联苯双酯强，提示本发明对小鼠免疫功能有显著促进作用。
具体实施例方式
以下通过实施例对本发明作进一步的介绍。
实施例1取金银花500g、菊花500g，加10L 70％乙醇，沸水浴回流提取3次，每次1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至60℃时相对密度为1.10，10000rpm离心，得上清液；将上清液通过D101大孔树脂柱，以黄酮类显色剂检测流出液，确定树脂吸附是否饱和，静置，先以3倍树脂床体积的水洗脱后再用3倍树脂床体积的30％、70％乙醇依次洗脱，流速均为每小时2倍树脂床体积，收集70％乙醇的洗脱部分，回收乙醇，减压浓缩，干燥，得提取物(510nm处测定结果示提取物中总黄酮含量为65％)。
实施例2取金银花100g、菊花900g，加12L 60％乙醇，沸水浴回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至60℃时相对密度为1.15，5000rpm离心，得上清液；将上清液通过HPD450大孔树脂柱，以黄酮类显色剂检测流出液，确定树脂吸附是否饱和，静置，先以2倍树脂床体积的水洗脱后再用4倍树脂床体积的20％、60％乙醇依次洗脱，流速均为每小时2倍树脂床体积，收集60％乙醇的洗脱部分，回收乙醇，减压浓缩，干燥，打成细粉(510nm处测定结果示提取物中总黄酮含量为55％)，加入羧甲基淀粉钠适量，混匀，常规方法制粒，干燥，整粒，分装、包装即成颗粒剂。
实施例3取金银花900g、菊花100g，加8L 50％乙醇，80℃水浴回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至60℃时相对密度为1.20，20000rpm离心，得上清液；将上清液通过HPD100大孔树脂柱，以黄酮类显色剂检测流出液，确定树脂吸附是否饱和，静置，先以3倍树脂床体积的水洗脱后再用2倍树脂床体积的25％、75％乙醇依次洗脱，流速均为每小时3倍树脂床体积，收集75％乙醇的洗脱部分，回收乙醇，减压浓缩，干燥，打成细粉(510nm处测定结果示提取物中总黄酮含量为60％)，加入羧甲基淀粉钠适量，混匀，常规方法压片、包装即成片剂。
实施例4取金银花300g、菊花700g，加10L 80％乙醇，90℃水浴回流提取4次，每次0.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至60℃时相对密度为1.05，8000rpm离心，得上清液；将上清液通过AB-8大孔树脂柱，以黄酮类显色剂检测流出液，确定树脂吸附是否饱和，静置，先以4倍树脂床体积的水洗脱后再用4倍树脂床体积的35％、80％乙醇依次洗脱，流速均为每小时3倍树脂床体积，收集80％乙醇的洗脱部分，回收乙醇，减压浓缩至60℃时相对密度为1.10，得提取物(提取物经干燥后在510nm处测定示总黄酮含量为67％)，加入适量矫味剂，灭菌，分装即得口服液。
权利要求
1.一种中药提取物，所用重量百分比的原料药为金银花1-99％、菊花1-99％，其特征在于可通过下列步骤制备a.按原料药配比取金银花和菊花加8-12倍50-90％乙醇，回流提取2-4次，每次0.5-2小时，过滤，合并滤液，浓缩至60℃时相对密度为1.02-1.20，5000-20000rpm离心，得上清液；b.将上清液用大孔吸附树脂进行纯化处理，上柱过程中以黄酮类显色剂检测流出液，确定树脂吸附是否饱和，静置，先用2-4倍树脂床体积的水洗脱，再用2-4倍树脂床体积的梯度乙醇依次进行洗脱，流速均为每小时2-4倍树脂床体积，收集浓度为20％以上乙醇的洗脱部分，回收乙醇，浓缩即得提取物。
2.根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于制备时所用大孔树脂为非极性或弱极性大孔树脂。
3.根据权利要求2所述的中药提取物，其特征在于制备时所用的大孔树脂型号可以是D101、HPD100、HPD450、AB-8。
4.根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于可添加辅料制成任何一种药剂学上允许的剂型。
5.根据权利要求4所述的中药提取物，其特征在于其剂型可以是丸剂、片剂、散剂、栓剂、膜剂、颗粒剂、胶囊剂、微囊剂、滴丸剂、气雾剂、膏剂、酒剂、口服液剂、注射剂。
6.一种中药提取物的制备工艺，所用重量百分比的原料药为金银花1-99％、菊花1-99％，其特征在于包含下列步骤a.按原料药配比取金银花和菊花加8-12倍50-90％乙醇，回流提取2-4次，每次0.5-2小时，过滤，合并滤液，浓缩至60℃时相对密度为1.02-1.20，5000-20000rpm离心，得上清液；b.将上清液用大孔吸附树脂进行纯化处理，上柱过程中以黄酮类显色剂检测流出液，确定树脂吸附是否饱和，静置，先用2-4倍树脂床体积的水洗脱，再用2-4倍树脂床体积的梯度乙醇依次进行洗脱，流速均为每小时2-4倍树脂床体积，收集浓度为20％以上乙醇的洗脱部分，回收乙醇，浓缩即得。
7.根据权利要求6所述的制备工艺，其特征在于所用大孔树脂为非极性或弱极性大孔树脂。
8.根据权利要求7所述的制备工艺，其特征在于所用的大孔树脂型号可以是D101、HPD100、HPD450、AB-8。
9.一种中药提取物在制备治疗或预防肝炎的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种中药提取物及其制备工艺和在制药中的应用。该提取物由金银花和菊花经醇提、过滤、浓缩、离心后通过大孔树脂吸附、再用水和梯度乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部分，收醇，浓缩制备而成。用本发明提供的制备工艺制备的提取物有效物质纯度较高，提取物中有效部位总黄酮的含量可达到55％以上，同时本发明还具有抗肝炎的作用，且疗效高，质量稳定，服用量少，副作用小。
文档编号A61P1/00GK1546114SQ20031011263
公开日2004年11月17日 申请日期2003年12月15日 优先权日2003年12月15日
发明者王兴旺, 徐向阳, 杨俊 , 田丽娟, 张晓静, 万辉, 王伟, 孙晔, 陈钟, 陈希, 张蕙, 张庆晓, 张 杰, 张春来, 范廷校, 夏云, 倪洁, 谢俊, 蔡莹 申请人:金陵药业股份有限公司