专利名称：一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法，特别涉及一种用于治疗妇科阴道炎症的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。
背景技术：
中药外治法有直达病灶，奏效迅速的优点，可弥补内治之不足；同时有治法种类多，适应症广，廉便效验，易于推广，使用安全，毒副作用小等特点，故深受广大医务工作者和患者欢迎。常用的外用剂型有酊剂、涂剂、膜剂、洗剂等。在治疗妇科阴道炎症时常用液体洗剂，而液体洗剂在使用中出现不少弊端如携带不方便；易出现漏液；产品质量不稳定，出现染菌或因一瓶多次使用而出现第二次污染或产生沉淀；由于液体洗剂不是小包装、分剂量，使用时剂量不易掌握，使洗液浓度不一而影响疗效。
发明内容
本发明的一个目的在于公开一种具有清热解毒作用、用于治疗妇科阴道炎症的中药组合物；本发明的另一个目的在于公开上述中药组合物制成固体速溶型泡腾剂的制备方法；本发明目的还在于公开上述中药组合物的质量控制方法。
本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)硼砂 1000-1400重量份 玄明粉 200-400重量份白矾 1300-1700重量份 冰片 10-20重量份薄荷脑 10-20重量份本发明药物组合物的原料药组成优选配比为(按重量份)硼砂 1200重量份 玄明粉300重量份白矾 1500重量份 冰片 15重量份薄荷脑 15重量份本发明药物组合物的原料药组成优选配比为(按重量份)硼砂 1100重量份 玄明粉275重量份白矾 1375重量份 冰片 14重量份薄荷脑 14重量份本发明药物组合物的原料药组成优选配比为(按重量份)硼砂 1300重量份 玄明粉 325重量份白矾 1625重量份 冰片 16重量份薄荷脑 16重量份本发明上述药物组合物还可以加入下列敷料制成泡腾剂枸橼酸 450-630重量份碳酸氢钠200-400重量份聚乙二醇600075-105重量份本发明所述药物组合物所加入敷料优选配比为(按重量份)枸橼酸 540重量份碳酸氢钠300重量份聚乙二醇600090重量份本药物组合物的制备方法以上五味，取硼砂、玄明粉、白矾混匀，从45℃-95℃渐升温，每隔0.5-1小时升温5℃，连续烘5-8小时，再与枸橼酸500-600重量份混合，粉碎，加入乙醇制粒；另取冰片、薄荷脑与80-100重量份聚乙二醇6000制成的固体分散体，加入碳酸氢钠200-400重量份，混合，粉碎，与上述颗粒混匀，压片，即得。
本中药组合物清热解毒、泻火消肿、除湿止痒、避秽除臭。用于湿热所致的阴部瘙痒、灼热疼痛、带下量多、色黄气臭或伴心烦口苦、尿黄热痛、腰腹胀痛、舌红苔黄腻、脉弦数或滑数等症。亦可用于霉菌性、滴虫性阴道炎见上述症状者。
本组合物制剂的质量控制方法含有如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种，本发明质量控制方法中的鉴别及含量测定方法为鉴别方法选自如下方法中的一种或几种a、取本发明组合物制成的泡腾片(坤舒泡腾片)一片，加水9ml，振摇，滤过，分取滤液3ml，点于姜黄试纸上使润湿，即显橙红色，放置干燥，颜色变深，再置氨气中熏，变为绿黑色。
b、取鉴别a项下的滤液。加氯化钡试液1-2滴，即生成白色沉淀，分取沉淀物，加盐酸2ml，沉淀部分不溶解。
c、取坤舒泡腾片一片，研细，置具塞试管中，加醋酸乙酯30ml，超声提取25-35分钟，静置，上清液滤过，滤液作为供试品溶液。另取冰片、薄荷脑对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含0.20mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIE)试验，柱长3m×0.3mm，以聚乙二醇(PEG)-20M为固定液，涂布浓度为10％，柱温为140℃。分别取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入气相色谱仪，在记录的色谱图中，供试品色谱峰应与对照品色谱峰保留时间相同。
含量测定方法为取坤舒泡腾片3片，研细，精密称取1g，置20ml铂金坩锅中炽灼至完全炭化，放冷至室温，加硫酸1ml使湿润，低温加热至硫酸蒸汽除尽后，在700-800℃炽灼使完全炭化，放冷至室温后，加0.1mol/L的稀盐酸100ml将残渣转移至250ml烧杯中，置水浴中使溶解，放冷后，转移至200ml容量瓶中，并用水稀释至刻度，精密量取本品50ml置烧杯中，加0.01-0.04mol/L四苯硼钠滴定液(0.02mol/L)30ml，再加冰醋酸0.5ml与蒸馏水12.5ml，置50-55℃水浴中保温25-35分钟，冷却，再在冰浴中放置25-35分钟，用102-108℃恒重的垂熔玻璃坩锅滤过，沉淀用澄清的四苯硼钾饱和溶液20ml分4次洗涤，再用少量冷水洗涤，在102-108℃干燥至恒重，精密称定，所得沉淀重量与5.3相乘。即得供试量中含有KA1(SO4)2.12H2O的重量。本品每g含白矾按十二水硫酸铝钾(KA1(SO4)2.12H2O)计，应为425mg-575mg。
所述质量控制方法中可以按常规方法先去除其赋形剂。
由于制备的泡腾片为固体剂型，分剂量准确，携带方便，质量稳定，溶解迅速，不会出现第二次污染。同时，本制剂在开水中迅速溶解后，为无色芳香的透明液体，不会污染毛巾、衣裤、浴具，克服了不少中药洗液颜色深，用后污染毛巾、衣裤、浴具，致使不少患者不愿使用。本药物在使用过程中通过热气的熏洗，使患部毛细血管扩张，药物成分直达病所，迅速发挥疗效。
本发明药物组合物片剂(坤舒泡腾片)分别进行了抗菌试验，霉菌性阴道炎的治疗试验，抗炎试验，止痒试验、抑杀阴道滴虫试验及乳酸杆菌的体外抑制试验。结果表明坤舒泡腾片体外呈现出较强的抑菌活力，对所试152株临床分离革兰氏阳性和阴性致病菌的最低抑制浓度范围在0.78-6.25mg/ml，其半数抑菌浓度为1.56-6.25mg/ml，90％抑菌浓度亦为1.56-6.25mg/ml；对白色念株菌、淋球菌的最低抑菌浓度MIC值分别为0.78-1.56mg/ml及0.39-1.56mg/ml，MIC50、MIC90均为1.56mg/ml，表现出良好的抑菌活力。当接种菌量增加对本品抑菌活力的影响不十分明显。在偏酸性、偏碱性环境中的抑菌活力均显著地强于中性环境中的抑菌活力(约8-12倍)。对大鼠霉菌性阴道炎有较好的治疗作用，坤舒泡腾片能显著抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀，大剂量对增生性炎症有一定抑制作用。对磷酸组织胺所致豚鼠的痒感有良好止痒作用，能明显提高磷酸组织胺对豚鼠的致痒阈值剂量。对人体阴道滴虫的最低抑制浓度为6.25mg/ml，与甲硝唑2.5μg/ml的抑虫作用相当，而生理盐水管滴虫生长良好，证明坤舒泡腾片对人有道滴虫有良好的抑杀作用，其最低抑虫浓度MIC为6.25mg/ml，MIC50为0.78mg/ml，MIC90的抑虫及浓度为3.13mg/ml。对嗜乳酸杆菌的最低抑制浓度为31.3mg/ml，比对阴疲乏滴虫及其他致病菌的最低抑制浓度都高，比阴道滴虫的MIC高约5倍，比白色念株菌的MIC高出40-20倍，比淋球菌的MIC高出80-20倍。提示该制剂在治疗霉菌性、淋菌性阴道炎、阴道滴虫时对阴道内乳酸杆菌的影响不明显。
下述实验例用于进一步说明本发明。
实验例1冰片、薄荷脑与PEG6000制成固体分散体的配方研究将冰片、薄荷脑分别研细后按1∶1比例混合作为1份；将PEG6000作为另1份，然后在冰片、薄荷脑二药中加入不同量的PEG6000，观察其外型、硬度、熔融温度。结果见表1
表1 药物与不同比例PEG6000制成的固体分散物物理外观配比 观察项目药物PEG6000外观硬度熔融温度(℃)1∶0.5 不成形，表面有油状物渗出软，严重发粘391∶1.0 不成形，表面有油状物渗出软，严重发粘421∶1.5 不易成形软，发粘461∶2.0 基本成形软，不发粘 491∶2.5 易成形 有一定硬度，不发粘 541∶3.0 易成形 硬度适宜，不发粘581∶3.5 易成形 硬度适宜，不发粘581∶4.0 易成形 硬度适宜，不发粘58从上表结果可见，药物与PEG6000以1∶3比例制成的固体分散物较适宜。
实验例2冰片、薄荷脑在PEG6000等载体中的分散状态观测为观察冰片、薄荷脑二药在PEG6000中的分散情况，将冰片、薄荷脑固体分散体包埋于将凝未凝石腊块中，用组织切片机切片，加盖玻片用显微镜观察，在100×10显微镜下观察，断层切片中无结晶存在，说明冰片、薄荷脑二药在PEG6000中，以小于0.1μm的胶体或分子状态存在。
实验例3冰片、薄荷脑固体分散物的质量控制的研究为保证最终产品的质量稳定，进行了多批次的实验，以期得到控制固体分散物的质量，结果见表2表2 固体分散物的性状，显微观察，熔融温度(℃)，及所含薄荷脑含量*观察结果表编号性状 观察熔融温度(℃) 含量(mg/g)1 乳白色固体，气芳香无结晶物出现57116.32 乳白色固体，气芳香无结晶物出现58112.73 乳白色固体，气芳香无结晶物出现56123.94 乳白色固体，气芳香无结晶物出现55118.95 乳白色固体，气芳香无结晶物出现58109.3*薄荷脑含量测定方法按《中国药典》2000版一部(附录VIE气相色谱法)及有关文献资料进行测定。
通过以上实验结果，并考虑到大生产的实际情况，特制定固体分散物的质量控制标准如下本固体分散物为乳白色固体物，气味芳香；熔融温度为562℃；每g本中间体中含薄荷脑为93.0-139.4mg实验例4硼砂、玄明粉、白矾的干燥实验硼砂、玄明粉、白矾三味药材均为矿物药材，其中硼砂、白矾含有较多的结晶水，易风化；且含有的结晶水易导致碳酸氢钠与枸橼酸反应。为了提高制剂的稳定性，对这三味药材进行干燥。为使受热均匀，从45℃渐升温，每0.5小时升温5℃，共烘6小时。实验结果见表3表3 硼砂、玄明粉、白矾的最佳干燥实验编硼砂、玄明粉、白最高温度烘烤时间含水量状况号矾混合物的量(g) (℃)(小时) (％)1 100 70 6 16.2表面发粘呈块状难粉碎2 100 80 6 15.8表面发粘呈块状难粉碎3 100 90 6 14.6表面稍发粘易粉碎4 100 95 6 13.9颗粒松脆呈块状易粉碎5 100 100 6 13.5颗粒松脆呈块状易粉碎从上表可以看出在95℃和100℃均能得到颗粒松脆，易粉碎的混合物，但为了节约能源，降低成本，选择在45℃～95℃的条件下渐升温烘6小时来干燥硼砂、玄明粉、白矾的混合物，得到含水量在13.9％左右的混合物。
实验例5、硼砂、玄明粉、白矾混合物的溶解实验硼砂、玄明粉、白矾均能溶于水，但白矾与硼砂混合后即出现氢氧化铝沉淀。为消除该沉淀，使坤舒泡腾片遇水能完全溶解成透明液体，故采取加适量枸橼酸以阻止沉淀的产生，并可调节溶液的pH值，使其与妇女阴道的微生态环境的pH值接近或吻合，这样既有利于阴道内有益细菌的生长，使微生态环境的pH值不致因使用坤舒泡腾片而改变，又达到了由于药液pH值与阴道内环境pH值相近而减小对阴道粘膜的刺激性。为了使加入的枸橼酸量达到阻止氢氧化铝沉淀的生成，并使溶液的pH值达到3.0～5.0，进行了枸橼酸加入量的试验。其结果见表4
表4 枸橼酸加入硼、玄、矾混合物的最佳比例试验硼、玄、矾混合枸椽酸加入量编号 二者比例溶解状态溶液PH值物的量(g) (g)1 100 6 10∶0.6 乳白色悬浊液6.62 100 8 10∶0.8 乳白色悬浊液5.93 100 10 10∶1 淡乳白色4.24 100 12 10∶1.2 透明液体3.85 100 14 10∶1.4 透明液体3.56 100 16 10∶1.6 透明液体2.8从上表可见，硼、玄、矾混合物与枸橼酸最佳比例为10∶1.2～1.6，考虑到制成泡腾片时，尚需加入碱性的NaHCO3，暂定采用10∶1.4的比例加入枸橼酸。
实验例6、碳酸氢钠用量确定试验在坤舒泡腾片中，选用了枸橼酸加碳酸氢钠作为起泡剂，同时坤舒泡腾片作为阴道用药，其PH值应与人体阴道内环境(PH＝3～5)相一致，为了确定碳酸氢钠的用量，做了以下试验。取枸橼酸和碳酸氢钠按一定的比例混合，溶解后，测定PH值，结果如表5表5 用枸橼酸调节碳酸氢钠的PH值实验序号枸椽酸(g)碳酸氢钠(g)水(ml)二者比例PH值1 1.0 1.0100 1∶15.952 1.0 1.5100 1∶1.5 6.223 1.0 2.0100 1∶2.0 6.574 1.0 2.5100 1∶2.5 6.735 1.0 3.0100 1∶3.0 6.98从试验结果可知，当枸橼酸与碳酸氢钠用量比为1∶3.0时，其混合物溶解后溶液的pH值近似于7，当和其他药物混合时，对整个药物溶解后的溶液的pH值影响较小。为了使泡腾片能在5分钟内迅速崩解，还需要控制碳酸氢钠的量。
按处方比例取硼砂、玄明粉、白矾共100g，按上述方法干燥后加入枸橼酸14g混合、粉碎；加适量90％的乙醇用40目筛制粒、整粒得混合物I；另取枸橼酸、碳酸氢钠的按1∶3比例混合的枸碳混合物共40g备用，二者按不同比例混合后压片，每片用70℃-80℃的100ml的热水溶解，以崩解时间为指标，确定碳酸氢钠的用量，结果见表6表6 碳酸氢钠的用量实验序号混合物I的量(g)枸椽酸、碳酸氢钠混合物的量(g)崩解时间(min)1 16.2 1.2 82 16.2 2.0 63 16.2 2.7 44 16.2 3.2 3从以上结果可以看出，为保证泡腾片在5分钟内迅速崩解应取混合物I16.2g与枸碳混合物2.7g混合，其中混合物I为硼砂8.0g、玄明粉2.0g、白矾10.0g、枸橼酸2.8g干燥混合而成的，枸碳混合物为枸橼酸0.7g、碳酸氢钠2.0g，即硼砂∶玄明粉∶白矾∶枸橼酸∶碳酸氢钠＝4.0∶1.0∶5.0∶1.7∶1.0实验例7本组合物片剂的体外抗菌作用试验方法a、最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)的测定，采用琼脂二倍稀释法测定受试药物对试验菌珠的最低抑菌浓度(MIC)。即于已溶化的琼脂培养基中，定量加入受试药物，然后分别吸取20ml含药琼脂培养基倾倒无菌平皿内，使各平皿内含药物的终浓度为100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0.78、0.39、0.2、0.1mg/kl。待冷疑后，用多点接种仪于各含药平皿表面定量接种细菌，菌液终浓度为104CFU/ml。放入孵箱内孵育后，读取结果。未见细菌生长的平皿内所含药物最低浓度为该菌的最低抑制浓度(MIC)值。根据各株细菌的MIC值，计算每种细菌累积抑制50％和90％所试菌株的MIC值(即MIC50、MIC90)。
先用肉汤二倍稀释法测定MIC值后，再分别吸取未见细菌生长管培养液0.1ml于无药琼脂平皿表面，用玻棒推匀，37℃再培养18-20小时，仍无细菌生长管的药物最低浓度即为MBC。
b、接种菌量和pH值对坤舒泡腾片浓度MIC值的影响按上述方法测定坤舒泡腾片在不同细菌接种量(103、105、107CFU/ml)和不同pH值环境中(pH值5.0、pH值7.0、pH值9.0)MIC值的变化。
试验结果坤舒泡腾片对所试152株临床分离致病菌的体外抗菌作用(MIC50、MIC90)见表7
表7 坤舒泡腾片对152株临床分离致病菌的MIC50、MIC90MIC范围 MIC50MIC90细菌(株数) 药物(mg/ml) (mg/ml)(mg/ml)金黄色葡萄球菌(20) 坤舒泡腾片0.78～6.25 3.12 6.25洗必泰＜0.20～0.200.20 0.20表面葡萄球菌(20) 坤舒泡腾片0.78～6.25 3.12 6.25洗必泰＜0.20～0.200.20 0.20大肠杆菌(14) 坤舒泡腾片0.78～6.25 3.12 6.25洗必泰＜0.20～0.200.20 0.20绿脓杆菌(14) 坤舒泡腾片1.56～6.25 3.12 6.25洗必泰＜0.20～0.780.39 0.78克雷伯氏肺炎杆菌(14) 坤舒泡腾片6.25～12.5 6.25 6.25洗必泰＜0.20～0.390.20 0.39变形杆菌(14) 坤舒泡腾片0.78～3.12 3.12 3.12(摩根变形杆菌4株)(普通变形杆菌5株)(奇异变形杆菌5株)洗必泰＜0.20～1.560.39 1.56产气杆菌(15) 坤舒泡腾片0.78～6.25 3.12 6.25洗必泰＜0.20～0.20＜0.20 0.20阴沟杆菌(17) 坤舒泡腾片0.78～3.12 3.12 3.12洗必泰＜0.20～0.390.20 0.39白色念珠菌(13) 坤舒泡腾片0.78～1.56 1.56 1.56洗必泰＜0.20～0.780.39 0.39淋球菌(5) 坤舒泡腾片0.39～1.56 1.56 1.56洗必泰＜0.20～0.780.78 0.78
表8 坤舒泡腾片对质检菌株的MIC和MBC质检菌株 MIC(mg/ml)/MBC(mg/ml)坤舒泡腾片 洗必泰大肠杆菌ATCC 25922 6.25/6.25 ＜0.2/0.39金葡萄菌ATCC 25923 6.25/12.5 ＜0.2/0.78金葡萄菌209P 3.12/6.25 ＜0.2/0.78绿脓杆菌ATCC 27853 6.25/25＜0.2/1.56坤舒泡腾片体外对泌尿道感染的常见致病菌具有较好的抑菌作用，对所试的金黄色葡萄球菌、表葡菌、大肠杆菌、绿脓杆菌以及产气杆菌的MIC50和MIC90均各为3.12mg/ml和6.25mg/ml；对变形杆菌和阴沟杆菌的MIC50和MIC90均为3.12mg/ml；本品对克雷伯氏肺炎杆菌的MIC50和MIC90均为6.25mg/ml。
坤舒泡腾片对白色念珠菌和淋球菌也呈现出较好的抑菌活力，其MIC50、MIC90均为1.56mg/ml和1.56mg/ml。
坤舒泡腾片体外抗菌活力较洗必泰低，后者对152株临床分离致病菌的MIC范围在＜0.2-1.56mg/ml。坤舒泡腾片的MBC浓度为其MIC浓度的2-4倍，表明在高浓度时呈杀菌作用。
细菌接种量改变(103、105、107FCU/ml)和pH改变(pH5.0、pH7.0、pH9.0)对坤舒泡腾片MIC值均有一定影响，其中接种菌量增加，MIC改变不显著，最多随之增加2-4倍。但本品在偏酸性(pH5.0)和偏碱性(pH9.0)环境中的抑菌活力明显强于中性环境(pH值7.0)，其抑菌活力的强弱依次为pH5.0＞pH9.0＞pH7.0(见表9)。
根据《中药新药研究指南》[4]对坤舒泡腾片进行了体外抑菌试验，结果表明该药体外呈现出较强的抑菌活力，对所试152株临床分离革兰氏阳性、阴性致病菌的最低抑制浓度范围在0.78-6.25mg/ml，对白色念珠菌的抑菌活力也较强，MIC值范围在0.78-1.56mg/ml；对淋球菌的MIC值为0.39-1.56mg/ml。接种菌量增加对本品抑菌活力的影响不十分明显。本品在偏酸性和偏碱性环境中的抑菌活力均显著地强于中性环境中的抑菌活力(约8-32倍)。
表9 接种菌量、PH值对坤舒泡腾片MIC值的影响细菌(株数)(菌号) 坤舒泡腾片MIC(mg/ml)接种菌量(CFU/ml) PH值1031051075.0 7.0 9.0金葡萄菌981901 1.561.563.120.103.120.39金葡萄菌981902 0.780.783.120.103.120.39金葡萄菌981903 0.780.781.560.103.120.39金葡萄菌981904 1.563.123.120.103.120.39表葡菌982001 1.561.563.120.103.120.39表葡菌982002 1.561.563.120.103.120.39表葡菌982003 1.561.563.120.103.120.39表葡菌982004 1.561.563.120.100.39＜0.05大肠杆菌981010.200.391.560.103.120.39大肠杆菌981020.200.390.780.203.120.10大肠杆菌981030.200.390.390.203.120.39大肠杆菌981041.561.563.120.203.120.39克氏肺炎杆菌981011.561.563.120.393.120.39克氏肺炎杆菌981021.561.563.120.396.250.39克氏肺炎杆菌981031.561.563.120.396.250.39克氏肺炎杆菌981041.561.563.120.396.250.39绿脓杆菌982011.563.123.120.103.120.78绿脓杆菌982020.201.563.120.103.120.39绿脓杆菌982031.561.563.120.103.120.78绿脓杆菌982041.561.563.120.103.120.39实验例8本组合物片剂对大鼠霉菌性阴道炎的治疗作用取体重160-220g♀大鼠60只，腹腔注射戊巴比妥钠35-42mg/kg麻醉大鼠后进行大鼠卵巢及子宫切除，术后21天作阴道涂片检查，无角化细胞或有核细胞者，间隔1天，口服己烯雌酚4mg/kg，共服2次，经阴道涂片检查证实为假动情期时再进行白色念珠菌感染，感染量为8×105/0.2ml/只，连续阴道感染3天，停止感染后4天，阴道涂片检查有大量炎性细胞形成为感染成功。将感染成功鼠按体重随机均分为6组，每组分别用2.5％、5％、10％坤舒泡腾片，5％、10％洁尔阴洗剂、10％赋形剂每天冲洗动物阴道，每天1次，连续7天，冲洗剂量为10ml/kg，按上述给药体积和浓度计算，坤舒泡腾片高、中、低剂量分别为1g/kg、0.5g/kg、0.25g/kg，洁尔液洗液高、低剂量分别为1ml/kg、0.5ml/kg，从冲洗第2天起至第7天，每天作阴道涂片检查，检查转阴情况，凡转阴者且不再回升即为治愈。以治愈率的高低评价药物的疗效。结果如表10表10 坤舒泡腾片对大鼠霉菌性阴道炎的治疗作用组别 剂量(g/kg)动物数(只) 转阴率第4天第7天赋型剂(KS)1.0 10 0％ 10％坤舒泡腾片0.25 10 10％ 50％坤舒泡腾片0.5 10 30％ 70％*坤舒泡腾片1.0 10 40％ 90％**洁尔阴0.5 10 20％ 70％*洁尔阴1.0 10 30％ 80％**与10％辅料组比较*P＜0.05，**P＜0.01从表10可见，连续给药4天后，坤舒泡腾片大、中、小剂量及洁尔阴洗剂各组动物的阴道感染率均有所下降，转阴率分别为40％、30％、10％、30％、20％，与对照组比较无显著性差异。当连续给药7天后，检测结果各组的转阴率均随时间增加有所提高，其各给药组的转阴率分别为90％、70％、50％及90％、70％，与对照组比较，坤舒泡腾片高、中剂量组有显著的抗大鼠霉菌性阴道炎的作用。
实验例9本组合物片剂的抗炎作用1、二甲苯致小鼠耳廓炎症实验取体重17-23g健康小鼠50只，按体重随机均分为5组，每组10只，均为♂鼠。第1组为10％赋形剂对照组，第2、3、4组为坤舒泡腾片高、中、低剂量组，第5组为氢化可的松组，前4组分别于小鼠左耳外涂10％赋形剂，2.5％、5.0％、10.0％坤舒洗泡腾片，第5组外涂0.5％氢化可的松。给药体积为10ml/kg，各组给药后30min，于给药部每只鼠滴20μl二甲苯致炎，致炎后0.5、2h，再给药2次，末次给药后4h，将各组小鼠脱臼致死，沿耳根部将两耳剪下，用直径为6.5mm打孔器分别在相同部位将耳片打下，精密扭力天平称重，计算肿胀度。
肿胀度为致炎耳廓片一未致炎耳廓片，以mg表示；结果见表11
表11 坤舒泡腾片对甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(X±SD)剂量 动物数 抑制率组别 左耳重(mg) 右耳重(mg)肿胀度(mg)(g/kg) (只)(％)赋型剂110 24.7±2.29 14.9±1.609.80±2.40*ΔΔ0氢化可的松25mg/kg 10 17.8±1.12 15.0±1.182.82±0.67**71.2坤舒泡腾片110 19.0±2.01 15.0±1.624.01±1.05**Δ59.1坤舒泡腾片0.5 10 20.5±1.26 14.9±1.175.65±1.43**ΔΔ42.3坤舒泡腾片0.25 10 23.2±1.90 15.7±1.437.53±1.65*ΔΔ23.2与正常对照组比*P＜0.01，**P＜0.001与阳性组比ΔP＜0.05 ΔΔP＜0.01从表11可见，外涂坤舒泡腾片对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有显著的抑制作用，其高、中、低剂量的抑制率分别为59.1％、42.3％、23.2％，有明显的量效关系，但抑制率不如氢化可的松。
2、对增生性琼脂肉芽肿的影响取体重为170-240gI级合格♂SD大鼠56只，按体重顺序随机均分为6组，分组后，于每只受试鼠背部中线用硫化钡脱毛剂[3]脱毛，脱毛面积为1.5×1.5cm2，脱毛后，在无菌条件下操作，脱毛后皮下注射2％琼脂液1.2ml，注射后24h，第1组每天于琼脂注射部的脱毛皮肤上外敷涂10％赋形剂液，第2组于注射部SC氢化可的松，第3、4、5、6组分别敷涂与10％洁尔阴、2.5％、5％、10％坤舒泡腾片，各组涂药体积相等，均为10ml/kg，按上述给药体积与浓度计算各给药组剂量如表所述。每天给药1次，连续给药14天，末次涂药后12h，称重，断头处死，剖取琼脂肉芽称重。以肉芽系数评价药物疗效 结果如表12。
坤舒泡腾片中、低剂量组对琼脂肉芽肿无显著影响，高剂量组对棉球肉芽肿的抑制率为15.22％，与对照组比，P＜0.05，有显著差异，表明大剂量对增生性炎症亦有一定的抑制作用，与氢化可的松比较作用较弱。
表12 坤舒泡腾片、洁尔阴、氢化可的松对琼脂肉芽肿的影响琼脂肉芽系数鼠数 剂量琼脂肉芽重 抑制率组别 体重(g) (g/100g×(只) (g/kg) (g)(％)100％.X±SD)模型组 101203.9±15.21.86±0.24 0.92±0.17 -洁尔阴洗剂 9 1ml/kg 203.4±11.01.68±0.22 0.83±0.11 9.8氢化可的松 9 25mg/kg 176.9±11.30.77±0.22 0.44±0.14**52.2**坤舒泡腾9 0.25 194.4±13.41.81±0.22 0.95±0.11 -3.3坤舒泡腾片 9 0.5 197.0±11.11.58±0.21 0.81±0.09 11.96坤舒泡腾101198.2±10.71.54±0.21*0.78±0.14*15.22*与正常对照组比*P＜0.05，**P＜0.01通过二甲苯致小鼠耳廓炎症及琼脂致大鼠增生性炎症等二项试验表明，坤舒泡腾片有一定的抗炎作用。
实验例10本组合物片剂的止痒试验将豚鼠50只，按体重分性别随机分为5组，每组10只，每组♀♂各5只。实验前1日以硫化钡脱毛剂脱去右后足背毛，然后分别用10％的赋形剂液，10％、5％、2.5％的坤舒泡腾片液，10％洁尔阴液涂药1次，涂液体积相等，均为10ml/kg，试验当日用粗砂纸擦伤右后足背脱毛处，每隔10分钟局部涂药，共3次，对照组涂10％的赋形剂液3次，各组末次涂药后10分钟，擦洗掉受试药，于涂药部分别滴不同浓度的磷酸组织胺0.05ml/只，此后每隔3min依次滴0.01％、0.02％、0.03％、0.04％……递增浓度，浓度不同，但每次滴量均为0.05ml/只，直至出现豚鼠回头舔右后足，各组均以豚鼠回头舔足背为止，此时所给予的磷酸组织胺的总量为致痒阈量，各组以致痒阈量进行组间比较有无差异。结果见表13表13 坤舒泡腾片对磷酸组织胺致痒反应的影响致痒阈磷酸组织胺总量组别 剂量(g/kg)动物数(只)(μg.x±SD)对照组1 1033.0±13.17坤舒泡腾片1 10314.5±47.05**坤舒泡腾片0.5 10141.5±30.65**坤舒泡腾片0.25 1040.0±10.54洁尔阴洗剂1 10326.5±55.53**与对照组比**P＜0.001
由表13可见，坤舒泡腾片高、中、低三种剂量对豚鼠的致痒阈分别为314.5μg、141.5μg、40.0μg，与对照组33.0μg相比，分别提高8.5倍、3.3倍、0.21倍，经统计学处理前两种剂量的致痒阈较对照组均有显著提高P＜0.01，高剂量与阳性对照组的致痒阈相近，差异不显著(P＞0.05)。
上述试验表明本品与洁尔阴洗剂相似，有良好的止痒作用，且有一定的量效关系。
实验例11本组合物片剂对阴道滴虫体外抑虫作用取培养管30支，各加滴虫混悬液1ml及已经倍比稀释好的不同药物浓度的药液各0.5ml，每一浓度均制成双管，各支培养管中培养基量均为10ml。于37℃恒温48小时时镜下计数，以甲硝唑及无菌生理盐水分别作为阳性及阴性对照，找出各药物浓度组的滴虫抑制百分率，以不见滴虫的药物浓度为最低抑虫浓度。结果见表14表14 坤舒泡腾片对阴道滴虫的抑虫作用坤舒泡腾片稀释度(V/V) 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560浓度(mg/ml) 50 25 12.5 6.25 3.13 1.56 0.780.39抑制率(％)10010010010096.5 80.4 52.221.5甲硝唑浓度(μg/ml) 20 10 5 2.51.25 0.63 - -抑制率(％)10010010010095.5 70.2 - -生理盐水抑制率(％) 无抑制作用，滴虫生长良好由表14可见，生理盐水管滴虫生长良好。坤舒泡腾片对人体阴道滴虫的最低抑制浓度为6.25mg/ml(V/V为1/160)，与甲硝唑2.5μg/ml的抑虫作用相当。证明坤舒泡腾片对人体阴道滴虫有良好的抑虫作用，其最低抑虫浓度MIC为6.25mg/ml，MIC50为(1/1280)0.78mg/ml，MIC90的抑虫浓度为(1/320)3.13mg/ml。
实验例12本组合物片剂对乳酸杆菌体外抑制作用本试验采用琼脂平板稀释法，将不同浓度的坤舒泡腾片制成约25ml，依高低顺序分别加入琼脂中使其溶胀，制成稀释药物培养基系列，含药培养基为等量，均为25ml，每一药物浓度均制成双份。加入甲硝唑或生理盐水的培养基按相同方法制备。37℃过夜，检查每个培养皿内有无杂菌，检查结果应为阴性，即可接种嗜乳酸杆菌，每接种菌液5μl于各药物浓度培养基的表面，用L玻棒将菌液涂沫均匀，通适量氧气，在微氧环境下，25℃培养48小时，观察结果，找出药物的最低抑制浓度。详细结果见表15表15 坤舒泡腾片对乳酸杆菌MIC值的影响坤舒泡腾片 稀释度(V/V) 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 1∶128 1∶256浓度(mg/ml) 500 250 125 62.5 31.25 15.65 7.8 3.9抑制率(％)100 100 100 10010099.5 85.540.5生理盐水抑制率(％)0 0 0 0 0 0 0 0以上试验结果表明，坤舒洗剂对嗜乳酸杆菌的最低抑制浓度(MIC)约为31.25mg/ml，比对阴道滴虫及其他致病菌的最低抑制浓度都高，比阴道滴虫的MIC高约5倍，比白色念株菌的MIC高出40-20倍，比淋球菌的MIC高出80-20倍。提示该制剂在治疗霉菌性、淋菌性阴道炎、阴道滴虫时对人体正常乳酸杆菌的影响不明显。
实施例1硼砂 1200g玄明粉 300g 白矾1500g冰片 15g 薄荷脑 15g以上五味，取硼砂、玄明粉、白矾混匀，从45℃-95℃渐升温，每隔0.5小时升温5℃，连续烘6小时，再与枸橼酸540g混合，粉碎，加入适量的90％ 醇，制粒(40目筛)；另取冰片、薄荷脑与聚乙二醇6000 90g制成的固体分散体，加入碳酸氢钠300g，混合，粉碎，与上述颗粒混匀；喷入香精，压片，即得，制成1000片，每片3g。一次1片，一日1次，以热水100ml溶解后冲洗外阴或用冲洗器送至深部冲洗阴道。
实施例2硼砂 1100g 玄明粉275g白矾 1375g冰片 14g 薄荷脑14g以上五味，取硼砂、玄明粉、白矾混匀，从45℃-95℃渐升温，每隔0.5小时升温5℃，连续烘6小时，再与枸橼酸500g混合，粉碎，加入适量的90％乙醇，制粒(40目筛)；另取冰片、薄荷脑与聚乙二醇6000 80g制成的固体分散体，加入碳酸氢钠275g，混合，粉碎，与上述颗粒混匀；喷入香精，压片，即得，制成1000片，每片3g。一次1片，一日1次，以热水100ml溶解后冲洗外阴或用冲洗器送至深部冲洗阴道。
实施例3硼砂 1300g 玄明粉 325g 白矾 1625g冰片 16g 薄荷脑 16g以上五味，取硼砂、玄明粉、白矾混匀，从45℃-95℃渐升温，每隔0.5小时升温5℃，连续烘6小时，再与枸橼酸580g混合，粉碎，加入适量的90％乙醇，制粒(40目筛)；另取冰片、薄荷脑与聚乙二醇6000 100g制成的固体分散体，加入碳酸氢钠325g，混合，粉碎，与上述颗粒混匀；喷入香精，压片，即得，制成1000片，每片3g。一次1片，一日1次，以热水100ml溶解后冲洗外阴或用冲洗器送至深部冲洗阴道。
实施例4本组合物片剂的鉴别方法a、取坤舒泡腾片一片，加水9ml，振摇，滤过，分取滤液3ml，点于姜黄试纸上使润湿，即显橙红色，放置干燥，颜色变深，再置氨气中熏，变为绿黑色。
b、取鉴别(1)项下的滤液。加氯化钡试液1-2滴，即生成白色沉淀，分取沉淀物，加盐酸2ml，沉淀部分不溶解。
实施例5本组合物片剂的鉴别方法取坤舒泡腾片一片，研细，置具塞试管中，加醋酸乙酯30ml，超声提取30分钟，静置，上清液滤过，滤液作为供试品溶液。另取冰片、薄荷脑对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含0.20mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIE)试验，柱长3m×0.3mm，以聚乙二醇(PEG)-20M为固定液，涂布浓度为10％，柱温为140℃。分别取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入气相色谱仪，在记录的色谱图中，供试品色谱峰应与对照品色谱峰保留时间相同。
实施例6本组合物片剂的含量测定方法取坤舒泡腾片3片，研细，精密称取1g，置20ml铂金坩锅中炽灼至完全炭化，放冷至室温，加硫酸1ml使湿润，低温加热至硫酸蒸汽除尽后，在700-800℃炽灼使完全炭化，放冷至室温后，加0.1mol/L的稀盐酸100ml将残渣转移至250ml烧杯中，置水浴中使溶解，放冷后，转移至200ml容量瓶中，并用水稀释至刻度，精密量取本品50ml置烧杯中，加四苯硼钠滴定液(0.02mol/L)30ml，再加冰醋酸0.5ml与蒸馏水12.5ml，置50-55℃水浴中保温30分钟，冷却，再在冰浴中放置30分钟，用105℃恒重的垂熔玻璃坩锅滤过，沉淀用澄清的四苯硼钾饱和溶液20ml分4次洗涤，再用少量冷水洗涤，在105℃干燥至恒重，精密称定，所得沉淀重量与5.3相乘。即得供试量中含有KA1(SO4)2.12H2O的重量。本品每g含白矾按十二水硫酸铝钾(KA1(SO4)2.12H2O)计，应为425mg-575mg。
实施例7冰片、薄荷脑固体分散物的制备工艺取冰片、薄荷脑各5g，研细。另取PEG6000 30g加热熔化，温度降至60℃～70℃时，在搅拌下加入冰片、薄荷脑，使其均匀溶化于PEG6000中，降至室温，得乳白色冰片、薄荷脑固体分散物。
权利要求
1.一种中药组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的硼 砂 1000-1400重量份玄明粉 200-400重量份白 矾 1300-1700重量份冰 片 10-20重量份薄荷脑 10-20重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的硼 砂 1200重量份 玄明粉300重量份 白 矾 1500重量份冰 片 15重量份薄荷脑15重量份。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的硼砂 1100重量份 玄明粉275重量份 白矾1375重量份冰片 14重量份薄荷脑14重量份。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的硼 砂 1300重量份 玄明粉 325重量份 白矾 1625重量份冰 片 16重量份薄荷脑 16重量份。
5.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物可以加入如下辅料枸橼酸 450-630重量份碳酸氢钠200-400重量份聚乙二醇600075-105重量份。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物可以加入如下辅料枸橼酸 540重量份碳酸氢钠300重量份聚乙二醇600090重量份。
7.如权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为取硼砂、玄明粉、白矾混匀，从45℃-95℃渐升温，每隔0.5-1小时升温5℃，连续烘5-8小时，再与枸橼酸500-600重量份混合，粉碎，加入乙醇制粒；另取冰片、薄荷脑与80-100重量份聚乙二醇6000制成的固体分散体，加入碳酸氢钠200-400重量份，混合，粉碎，与上述颗粒混匀，压片，即得。
8.如权利要求7所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为取硼砂、玄明粉、白矾混匀，从45℃-95℃渐升温，每隔0.5小时升温5℃，连续烘6小时，再与枸橼酸540重量份混合，粉碎，加入乙醇，制粒；另取冰片15重量份、薄荷脑15重量份与聚乙二醇6000 90重量份制成的固体分散体，加入碳酸氢钠300重量份，混合，粉碎，与上述颗粒混匀，压片，即得。
9.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中包括如下鉴别方法中的一种或几种a、取本发明组合物制成的泡腾片一片，加水9ml，振摇，滤过，分取滤液3ml，点于姜黄试纸上使润湿，即显橙红色，放置干燥，颜色变深，再置氨气中熏，变为绿黑色；b、取鉴别a项下的滤液；加氯化钡试液1-2滴，即生成白色沉淀，分取沉淀物，加盐酸2ml，沉淀部分不溶解；c、取取本发明组合物制成的泡腾片一片，研细，置具塞试管中，加醋酸乙酯30ml，超声提取25-35分钟，静置，上清液滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片、薄荷脑对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含0.20mg的溶液，作为对照品溶液；照气相色谱法试验，柱长3m×0.3mm，以聚乙二醇-20M为固定液，涂布浓度为10％，柱温为140℃，分别取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入气相色谱仪，在记录的色谱图中，供试品色谱峰应与对照品色谱峰保留时间相同。
10.如权利要求9所述的质量控制方法，其特征在于该方法中鉴别方法中的c方法为取本组合物一片，研细，置具塞试管中，加醋酸乙酯30ml，超声提取30分钟，静置，上清液滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片、薄荷脑对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含0.20mg的溶液，作为对照品溶液，照气相色谱法试验，柱长3m×0.3mm，以聚乙二醇-20M为固定液，涂布浓度为10％，柱温为140℃，分别取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入气相色谱仪，在记录的色谱图中，供试品色谱峰应与对照品色谱峰保留时间相同。
11.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中包括如下含量测定方法取本组合物3片，研细，精密称取1g，置20ml铂金坩锅中炽灼至完全炭化，放冷至室温，加硫酸1ml使湿润，低温加热至硫酸蒸汽除尽后，在700-800℃炽灼使完全炭化，放冷至室温后，加0.1mol/L的稀盐酸100ml将残渣转移至250ml烧杯中，置水浴中使溶解，放冷后，转移至200ml容量瓶中，并用水稀释至刻度，精密量取本品50ml置烧杯中，加0.01-0.04mol/L四苯硼钠滴定液30ml，再加冰醋酸0.5ml与蒸馏水12.5ml，置50-55℃水浴中保温25-35分钟，冷却，再在冰浴中放置25-35分钟，用102-108℃恒重的垂熔玻璃坩锅滤过，沉淀用澄清的四苯硼钾饱和溶液20ml分4次洗涤，再用少量冷水洗涤，在102-108℃干燥至恒重，精密称定，所得沉淀重量与5.3相乘，即得供试量中含有KAl(SO4)2.12H2O的重量，本品每g含白矾按十二水硫酸铝钾计，应为425mg-575mg。
12.如权利要求11所述的质量控制方法，其特征在于该方法中包括如下含量测定方法取本组合物3片，研细，精密称取1g，置20ml铂金坩锅中炽灼至完全炭化，放冷至室温，加硫酸1ml使湿润，低温加热至硫酸蒸汽除尽后，在700-800℃炽灼使完全炭化，放冷至室温后，加0.1mol/L的稀盐酸100ml将残渣转移至250ml烧杯中，置水浴中使溶解，放冷后，转移至200ml容量瓶中，并用水稀释至刻度，精密量取本品50ml置烧杯中，加0.02mol/L四苯硼钠滴定液30ml，再加冰醋酸0.5ml与蒸馏水12.5ml，置50-55℃水浴中保温30分钟，冷却，再在冰浴中放置30分钟，用105℃恒重的垂熔玻璃坩锅滤过，沉淀用澄清的四苯硼钾饱和溶液20ml分4次洗涤，再用少量冷水洗涤，在105℃干燥至恒重，精密称定，所得沉淀重量与5.3相乘，即得供试量中含有KAl(SO4)2.12H2O的重量，每g组合物含白矾按十二水硫酸铝钾计，应为425mg-575mg。
13.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备治疗妇科阴道炎症的药物中的应用。
14.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备具有抗菌作用、抗炎作用、止痒作用或抑制滴虫作用的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种中药组合物，同时涉及该组合物的制备方法和质量控制方法。该药物组合物含有硼砂、玄明粉、白矾、冰片、薄荷脑，用于湿热所致的阴部瘙痒、灼热疼痛、带下量多、色黄气臭等症。本发明制备方法为取硼砂、玄明粉、白矾混匀，连续烘烤制粒；另取冰片、薄荷脑与聚乙二醇6000制成的固体分散体，加入碳酸氢钠混合粉碎，与上述颗粒混匀，即得。用本发明的制备方法及质量控制方法实现的制剂疗效确切，质量可控。
文档编号A61P17/04GK1557333SQ20041000091
公开日2004年12月29日 申请日期2004年1月14日 优先权日2004年1月14日
发明者肖伟, 戴翔翎, 凌娅, 廖正根, 詹永成, 刘涛, 肖 伟 申请人:江苏康缘药业股份有限公司