专利名称：布渣叶中黄酮类成分含量的快速测定方法
技术领域：
本发明涉及中药的质量控制方法，具体涉及布渣叶中黄酮类成分含量的快速测定方法，可同时测定布渣叶中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷4种黄酮类成分的含量的快速测定，属于中药质量检测技术领域。
背景技术：
布渣叶为椴树科植物破布叶Microcos paniculata L.的干燥叶，产于广东、广西、海南、云南等地，印度、印度尼西亚亦有分布；在我国，尤以两广地区资源丰富，其中广东的阳西、湛江为主产地，均以野生为主。本品味微酸，性凉，无毒，具有清热利湿、健胃消滞的功效，用于治疗感冒发热、黄疸、食欲不振、消化不良、脘腹胀痛、泄泻、疮疡、蜈蚣咬伤等。布渣叶主要含有黄酮、生物碱、有机酸、挥发油、鞣质、酚类等成分。其中的黄酮类成分具有多方面的生物活性，如抗脂质过氧化、抗衰老、清除自由基、降低血脂及血胆固醇、抗菌消炎、抗病毒、增强免疫功能等。现有技术中采用HPLC法仅公开对布渣叶中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷4种黄酮类成分分别进行含量测定，已知的HPLC的含量快速测定方法均是对其中一种或两种黄酮进行测定，未公开记载同时对四种黄酮类成份进行测定的HPLC的含量快速测定方法，因此其过程较长、用时较多、效率不高。因此，目前亟需建立一种可同时测定布渣叶4种黄酮类成分的快速快速测定方法，该方法满足制药过程中布渣叶药材快速质量控制的要求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可同时测定布渣叶4种黄酮类成分的快速快速测定方法。本发明为实现上述目的所提供的技术方案是:一种布渣叶中黄酮类成分含量的快速测定方法，其特征在于，其采用HPLC法，该方法为一次性同时测定布渣叶中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷4种黄酮类成分的含量。其具体包括以下步骤:(I)色谱条件色谱柱:ShiseidoCapcell pak MG C18 (4.6 X 250mm, 5 μ m)柱；流动相:以甲醇为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长:280nm ;流速:1.0mL/min ;柱温:25°C ；梯度洗脱条件为:O 35分钟，流动相A21 35%，流动相B79 65% ；35 60分钟，流动相A35 48%，流动相B65 52% ；60 62分钟，流动相A48 80%，流动相B52 20% ；(2)对照品溶液的制备
取表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每HlL含表儿茶素60 μ g、牡荆苷25 μ g、异牡荆苷40 μ g和水仙苷60 μ g的混合溶液，即得；(3)供试品溶液的制备取布渣叶药材粉末(过三号筛)约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz) I小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(4)测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪进行测定，得表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷的含量。本发明的快速测定方法简单、快速、准确，灵敏度高、精密度、稳定性好，可一次性同时测定未知含量的布渣叶样品中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷含量，可用于制药过程中布渣叶药材快速质量控制。
图1，本发明实施例中布渣叶HPLC谱图，Α.供试品；B.混合对照品；I表儿茶素；2牡荆苷；3异牡荆苷；4水仙苷。
具体实施例方式本发明提供的采用HPLC法，同时测定布渣叶4种黄酮类成分的快速测定方法的步骤为:I仪器与试药Agilentl200高效液相色谱仪，Mettler XS205DU型电子分析天平(瑞士)。布渣叶样品分别采收自广东省各市县及在各大医药公司购买，共收集10份，所有样品经广东省中医研究所刘法锦教授鉴定为:锻树科植物破布叶Microcos paniculataL.的干燥叶，为《中国药典》2010年版收载的品种。表儿茶素(批号:878-200102)、牡荆苷(批号:111687-200602)购于中国药品生物制品检定所；异牡荆苷(批号:Y-127_110705)、水仙苷(批号:S-063-110926)购于成都瑞芬思生物科技有限公司；甲醇为色谱纯，液相用水为屈臣氏蒸馏水，其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:ShiseidoCapcell pak MG C18 (4.6X 250mm, 5 μ m)柱；流动相:以甲醇为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长:280nm ;流速:1.0mL/min ;柱温:25°Co梯度洗脱条件为:O 35分钟，流动相A21 35%，流动相B79 65% ；35 60分钟，流动相A35 48%，流动相B65 52% ；60 62分钟，流动相A48 80%，流动相B52 20% ；2.2对照品溶液的制备取表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每mL含表儿茶素145.80 μ g、牡荆苷58.10 μ g、异牡荆苷95.80 μ g和水仙苷144.40 μ g的混合溶液，作为储备液。2.3供试品溶液的制备取布渣叶药材粉末(过三号筛)约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz) I小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.4测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪进行测定。2.5线性关系考察精密量取混合对照品溶液0.5、l、2、4、6、8、10ml，分别置IOml量瓶中，加入70%甲醇溶解并稀释至刻度，得表儿茶素质量浓度为7.290、14.580,29.160,58.320,87.480、116.640、145.800μ g/ml,牡荆苷质量浓度为 2.905,5.810、11.620,23.240,34.860、46.480,58.100 μ g/ml，异牡荆苷质量浓度为 4.790,9.580、19.160,38.320,57.480、76.640,95.800 μ g/ml,水仙苷质量浓度为 7.220、14.440、28.880、57.760、86.640、115.520、144.400 μ g/ml的系列溶液。精密吸取上述系列溶液各10 μ I注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行测定。以峰面积积分值(Y)为纵坐标，进样量(X，μ g/ml)为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Y表儿茶素=6.1847X-9.3822 (r=0.9999, n=7) ；Ytt荆苷=14.671X-12.085 (r=0.9999, n=7) ;Y 异牡荆苷=19.632X—26.722 (r=0.9999, n=7) ;Y 水仙苷=8.1311Χ-13.749 (r=0.9999, n=7)。结果表明，牡荆苷和异牡荆苷的进样量分别在
7.290-145.8,2.905-58.10,4.790-95.80,7.220—144.4 μ g/ml 范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系。2.6精密度试验精密吸取同一混合对照品溶液(表儿茶素58.32 μ g、牡荆苷23.24 μ g、异牡荆苷38.32 μ g和水仙苷57.76 yg) 10 μ 1，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，记录色谱图。结果，表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷峰面积的RSD分别为0.96%、
1.22%、1.04%和0.80% (η均为6)，表明仪器精密度良好。2.7稳定性试验精密吸取同一供试品溶液(SlO) 1(^1，分别于0、1、2、4、8、12、2处进样测定，记录峰面积。结果，表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷峰面积的RSD分别为1.08%,0.87%、
0.56%和0.67% (η均为7)，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。2.8重复性试验精密称取同一批布渣叶样品(S9)适量，共6份，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算样品中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷的质量分数。结果，表儿茶素的平均质量分数为0.0929%，RSD=L 18% (n=6)；牡荆苷的平均质量分数为0.1224%, RSD=0.89%(n=6);异牡荆苷的平均质量分数为0.1604%,RSD=0.92% (n=6);水仙苷的平均质量分数为0.2189%，RSD=0.98% (n=6)，表明本方法重复性良好。 2.9加样回收率试验取同一批已知质量分数的布渣叶样品(S9)9份，每份约0.5g，精密称定，分别精密加入一定质量浓度的表儿荼素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷混合对照品的70%甲醇溶液
50ml，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算加样回
收率，结果分别见表I 4。表I表儿荼素加样回收率试验结果(n=9)
权利要求
1.一种布渣叶中黄酮类成分含量的快速测定方法，其特征在于，其采用HPLC法，该方法为一次性同时测定布渣叶中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷4种黄酮类成分的含量。
2.权利要求1所述的布渣叶中黄酮类成分含量的快速测定方法，其特征在于其包括以下步骤: (1)色谱条件 色谱柱:Shiseido Capcell pak MG C18,4.6 X 250mm、5 μ m柱;流动相:以甲醇为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长:280nm ;流速:1.0mL/min ;柱温:25°C ； 梯度洗脱条件: O 35分钟，流动相A21 35%，流动相B79 65% ； 35 60分钟，流动相A35 48%，流动相B65 52% ； 60 62分钟，流动相A48 80%，流动相B52 20% ； (2)对照品溶液的制备 取表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每mL含表儿茶素60 μ g、牡荆苷25 μ g、异牡荆苷40 μ g和水仙苷60 μ g的混合溶液，即得； (3)供试品溶液的制备 取布渣叶药材粉末过三号筛约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声功率200W频率40kHz，处理I小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； (4)测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪进行测定，得表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷的含量。
全文摘要
本发明公开了布渣叶中黄酮类成分含量的快速测定方法，用来测定布渣叶中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷含量，其特征在于，其采用HPLC法对含量进行快速测定，该方法能一次性同时测定布渣叶中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷4种黄酮类成分的含量。本发明提供的测定方法快速、简单、准确，灵敏度高，精密度、稳定性好，非常有利于在制药过程中布渣叶药材快速质量控制中的应用。
文档编号G01N30/02GK103149299SQ20131006872
公开日2013年6月12日 申请日期2013年3月4日 优先权日2013年3月4日
发明者孙冬梅, 罗文汇, 毕晓黎, 谭志灿, 胥爱丽, 李养学, 李素梅, 江洁怡 申请人:广东省中医研究所