专利名称：一种基于近红外光谱技术布渣叶中黄酮类成分含量的测定方法
技术领域：
本发明涉及中药的质量控制方法；具体涉及一种布渣叶中黄酮类成分含量的测定方法，基于近红外光谱技术的布渣叶中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷4种黄酮类成分的快速测定方法，属于中药质量检测技术领域。
背景技术：
布渣叶为椴树科植物破布叶Microcos paniculata L.的干燥叶，产于广东、广西、海南、云南等地，印度、印度尼西亚亦有分布；在我国，尤以两广地区资源丰富，其中广东的阳西、湛江为主产地，均以野生为主。本品味微酸，性凉，无毒，具有清热利湿、健胃消滞的功效，用于治疗感冒发热、黄疸、食欲不振、消化不良、脘腹胀痛、泄泻、疮疡、蜈蚣咬伤等。布渣叶主要含有黄酮、生物碱、有机酸、挥发油、鞣质、酚类等成分。其中的黄酮类成分具有多方面的生物活性，如抗脂质过氧化、抗衰老、清除自由基、降低血脂及血胆固醇、抗菌消炎、抗病毒、增强免疫功能等。近红外光谱分析技术(near infrared spectroscopy,NIRS)具有分析速度快、对样品无损害、无化学污染等显著优点，近年来广泛应用于农业、烟草、石油化工、医药等各个领域。本发明利用近红外光谱技术结合偏最小二乘法(ParticalLeast Square，PLS)，对布渣叶中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷4种黄酮类成分进行含量测定，旨在建立一种布渣叶4种黄酮类成分的快速测定方法，该方法满足制药过程中布洛叶药材快速质量控制的要求。
发明内容
本发明的目的在于提供布渣叶中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷4种黄酮类成分的快速测定方法，所述快速测定方法是基于近红外光谱技术。本发明为实现上述目的所提供的技术方案是:一种布渣叶中黄酮类成分含量的测定方法，其特征在于该方法是采用近红外光谱技术进行测定。其具体包括以下步骤:步骤一:表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷含量的测定用HPLC法测定建模用布渣叶样品中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷的含量;步骤二:近红外光谱的采集采集建模用布渣叶样品的近红外光谱；步骤三:模型的建立根据建模用布渣叶样品的近红外光谱，其及HPLC测得的表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷含量，选取代表性的样品组成校正集，应用偏最小二乘法建立校正模型，布渣叶NIR光谱以9点平滑并进行纵坐标归一化处理，表儿茶素、异牡荆苷和水仙苷的建模波段为7800 9999CHT1，牡荆苷的建模波段为7100 7800CHT1，得布渣叶模型；
步骤四:样品的快速测定采集待测布渣叶样品的近红外光谱数据，将其导入模型中，进行快速测定，即得布渣叶样品中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷的含量。前述步骤一中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷含量的测定，可以采用现有技术已知的表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷的HPLC的含量测定方法。优选的采用“同时测定布渣叶中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷4种黄酮类成分的HPLC含量测定法”，具体的测定方法如下:(I)色谱条件色谱柱:ShiseidoCapcell pak MG C18 (4.6 X 250mm, 5 U m)柱；流动相:以甲醇为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长:280nm ;流速:1.0mL/min ;柱温:25°C ；梯度洗脱条件为:O 35分钟，流动相A21 35%，流动相B79 65% ；35 60分钟，流动相A35 48%，流动相B65 52% ； 60 62分钟，流动相A48 80%，流动相B52 20% ；(2 )对照品溶液的制备取表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每mL含表儿茶素58.32 u g、牡荆苷23.24 u g、异牡荆苷38.32 u g和水仙苷57.76 u g的混合溶液，即得；( 3 )供试品溶液的制备取布渣叶药材粉末(过三号筛)约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz) I小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(4)测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 U L，注入液相色谱仪进行测定，得表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷的含量。本发明的优点在于方法简单、准确，灵敏度高，精密度、稳定性好，近红外预测模型一旦建立，就可以快速准确地对未知含量的布渣叶样品进行快速测定，可用于制药过程中布渣叶药材快速质量控制。
图1，本发明实施例中49份布渣叶样品表儿茶素含量分布图。图2，本发明实施例中49份布渣叶样品牡荆苷含量分布图。图3，本发明实施例中49份布渣叶样品异牡荆苷含量分布图。图4，本发明实施例中49份布渣叶样品水仙荆苷含量分布图。图5，本发明实施例中49份布渣叶样品的NIR光谱叠加图。图6，本发明实施例中49份布渣叶样品的表儿茶素含量预测值与实测值之间的相关图。图7，本发明实施例中49份布渣叶样品的牡荆苷含量预测值与实测值之间的相关图。
图8，本发明实施例中49份布渣叶样品的异牡荆苷含量预测值与实测值之间的相关图。图9，本发明实施例中49份布渣叶样品的水仙苷含量预测值与实测值之间的相关图。
具体实施例方式一、近红外预测模型的建立I仪器与试药Nicolet6700傅立叶变换红外光谱仪(美国Thermo Nicolet公司)，配有积分球漫反射采样系统和Omnic信号采集软件，Agilentl200高效液相色谱仪，Mettler XS205DU型电子分析天平(瑞士)，数据处理软件为SAS JMP Statistical Discovery V9.0.2统计分析大师。布渣叶样品分别采收自广东省各市县及在各大医药公司购买，共收集49份，所有样品经广东省中医研究所刘法锦教授鉴定为:锻树科植物破布叶Microcos paniculataL.的干燥叶，为《中国药典》2010年版收载的品种。表儿茶素(批号:878-200102)、牡荆苷(批号:111687-200602)购于中国药品生物制品检定所；异牡荆苷(批号:Y-127_110705)、水仙苷(批号:S-063-110926)购于成都瑞芬思生物科技有限公司；甲醇为色谱纯，液相用水为屈臣氏蒸馏水，其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1HPLC测定布渣叶中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷的含量2.1.1色谱条件色谱柱:ShiseidoCapcell pak MG C18 (4.6X 250mm, 5 U m)柱；流动相:以甲醇为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长:280nm ;流速:1.0mL/min ;柱温:25°Co梯度洗脱条件为:0 35分钟，流动相A21 35%，流动相B79 65% ；35 60分钟，流动相A35 48%，流动相B65 52% ；60 62分钟，流动相A48 80%，流动相B52 20% ；2.1.2对照品溶液的制备取表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每mL含表儿茶素58.32 u g、牡荆苷23.24 u g、异牡荆苷38.32 u g和水仙苷57.76 u g的混合溶液，即得。2.1.3供试品溶液的制备取布渣叶药材粉末(过三号筛)约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz) I小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.1.4 测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 U L，注入液相色谱仪进行测定。实施例中49份布渣叶样品的表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷的含量分布图，见图1 4。
2.2近红外光谱的采集取布渣叶样品粉末(过60目筛)约5g，放入样品杯中，均匀铺平，振动数下使粉末密实。以空气为参比，按下述实验条件进行扫描，测样方式:积分球漫反射，分辨率为4CHT1，自动增益，光谱采集范围为10000 ^OOcnT1，扫描次数为32次，温度为20 25°C，相对湿度为10% 20%。每个样品取3份作平行实验，求取其平均光谱。实施例中49份布渣叶样品的近红外光谱叠加见图5。2.3模型的建立2.3.1校正集和验证集样品的选择从收集到的49个样品中，根据其表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷含量，选取39个有代表性的样品组成校正集，剩余10个样品为验证集样品，表I列出了校正集和验证集样品表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷含量范围。表1校正集与验证集样品表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷含量含量范围
权利要求
1.一种布渣叶中黄酮类成分含量的测定方法，所述方法基于近红外光谱技术进行测定，其特征在于其包括以下步骤: (1)表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷含量的测定 用HPLC法测定建模用布渣叶样品中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷的含量； (2)近红外光谱的采集 采集建模用布渣叶样品的近红外光谱； (3)模型的建立 根据建模用布渣叶样品的近红外光谱，及步骤(I)中HPLC法测得的表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷含量，选取代表性的样品组成校正集，应用偏最小二乘法建立校正模型，布渣叶NIR光谱以9点平滑并进行纵坐标归一化处理，表儿茶素、异牡荆苷和水仙苷的建模波段为7800 9999cm—1，牡荆苷的建模波段为7100 7800cm-1，得布渣叶模型； (4)样品的快速测定 采集待测布渣叶样品的近红外光谱数据，将其导入模型中，进行快速测定，即得布渣叶样品中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷的含量。
2.权利要求1所述的布渣叶中黄酮类成分含量的测定方法，其特征在于步骤(I)中的表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷含量的测定的具体方法为: (1)色谱条件 色谱柱:Shiseido Capcell pak MG C18,4.6 X 250mm、5 ii 111柱；流动相:以甲醇为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长:280nm ;流速:1.0mL/min ;柱温:25°C ； 梯度洗脱条件: 0 35分钟，流动相A21 35%，流动相B79 65% ； 35 60分钟，流动相A35 48%，流动相B65 52% ； 60 62分钟，流动相A48 80%，流动相B52 20% ； (2)对照品溶液的制备 取表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每mL含表儿茶素58.32 u g、牡荆苷23.24 u g、异牡荆苷38.32 u g和水仙苷57.76 u g的混合溶液，即得； (3)供试品溶液的制备 取布渣叶药材粉末过三号筛约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理I小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； (4)测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各IOu L，注入液相色谱仪进行测定，得表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷的含量。
全文摘要
本发明公开了一种布渣叶中黄酮类成分含量的测定方法，基于近红外光谱技术的测定布渣叶中表儿茶素、牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷4种黄酮类成分。该方法属于快速测定方法，方法简单、准确，灵敏度高，精密度、稳定性好，非常有利于在制药过程中布渣叶药材快速质量控制中的应用。
文档编号G01N21/35GK103175804SQ201310067169
公开日2013年6月26日 申请日期2013年3月4日 优先权日2013年3月4日
发明者孙冬梅, 罗文汇, 毕晓黎, 谭志灿, 胥爱丽, 李养学, 李素梅, 江洁怡 申请人:广东省中医研究所