专利名称：一种莲子心生物碱提取物其制备方法及其在制备心脑血管疾病药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种莲子心生物碱提取物、其制备方法及其在制备心脑血管疾病药物中的应用，属于中药现代化领域。
背景技术：
心血管疾病是人类最为常见的一类疾病。据世界卫生组织报告，心血管疾病是当今世界人口的第一大死因。据估计，现在全球至少有7～8亿人以上患有一种或多种心血管疾病。在我国，心脑血管疾病发生率及死亡率居各病之首，并呈逐年上升趋势。开发出疗效确切、安全经济的治疗药物，是全世界科学工作者的研究方向。天然药物以其安全、环保、副作用小而倍受青睐。
中药莲子心系睡莲科莲属植物(Nelumbo Nucifer Gaertn)成熟种子中的干燥幼叶及胚根，具有“清心安神，交通心肾，涩精止血”之功效，归心、肺、肾三经并收载于中国药典。
在二十世纪六十年代，国内外报道莲子心中含有莲心碱(liensinine)、异莲心碱(isoliensinine)、甲基莲心碱(neferine)、荷叶碱(nuciferine)、前荷叶碱(pronuciferine)、莲心季铵碱(lotusine)、甲基紫堇杷灵(methylcorypalline)、去甲基乌药碱(demehtylcoclaurine)。八十年代我国学者郭毛娣等对大陆产莲子心中酚性生物碱进行了研究，分离得到了莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱(郭毛娣，等，中草药，1984，15(7)291))。药理实验结果说明，莲子心生物碱具有降压作用、抗心率失常作用、抗心肌缺血、抑制平滑肌收缩、抗Ca++、扩张血管、抗羟自由基、抑制血小板聚集和血栓形成等作用。这充分表明，莲子心生物碱具有相当强的生物活性。
但是，莲子心中生物碱含量相对较低，这成为阻碍其开发应用的主要障碍。目前，对于莲子心中生物碱的富集方法主要采用溶剂萃取法获得脂溶性总碱，再用层析法(制备高效液相法、制备性薄层或柱层析法)获得有效部位或单体。工艺复杂、成本昂贵、收得率低，不适宜大规模工业生产应用。公开号为CN 1117735C的中国专利公开了从莲子心中提取纯化异莲心碱和莲心碱的制备方法，但该专利提供的方法仍采用有机溶剂萃取法，工艺中需使用氯仿、乙醚、苯等有机溶剂，大量有机溶剂的使用会产生环保的压力，而且也不适合于大规模工业化的应用。本发明的目的在于解决现有技术中存在的问题，提供一种安全、环保、经济、高收得率，适合于大规模工业化生产的技术方案。
发明内容
本发明的目的在于提供一种莲子心生物碱提取物及其制备方法。
本发明的另一个目的在于提供这种莲子心生物碱提取物在制备心脑血管疾病中的应用。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种莲子心生物碱提取物的制备方法，包括以下步骤1)提取以莲子心为原料，用水、低级醇或含水低级醇提取；2)过滤提取后蒸去低级醇，过滤；3)除杂滤液经非极性大孔树脂吸附并用水或含水低级醇淋洗除去杂质；4)洗脱用含水低级醇洗脱非极性大孔树脂柱；5)吸附将洗脱液通过大孔强酸聚苯乙烯系阳离子交换树脂；6)再洗脱用含水低级醇洗脱吸附于阳离子交换树脂上的莲子心生物碱；7)干燥洗脱液减压浓缩至干，经干燥粉碎得莲子心生物碱提取物。
所述提取用含水低级醇为乙醇或甲醇；浓度为X，60％≤X≤95％，优选70％≤X≤80％。提取液浓度小于60％会使提取液中水溶性杂质含量增高，增大后续处理步骤的难度；当提取液浓度大于95％，会使得提取液中莲子心生物碱含量降低。实验表明，当提取液浓度在70％～80％时，生物碱的提取效率最高并可有效降低杂质的溶出。
所述非极性大孔树脂是以苯乙烯为骨架材料的非极性树脂。例如D101、H103、H107、D3520、D4006、D4020等。
所述除杂用的含水低级醇为乙醇或甲醇；浓度为X，0＜X≤20％.实验证明，在该洗脱浓度下，杂质能够得到去除而使莲子心生物碱得到富集。
所述洗脱用含水低级醇为乙醇或甲醇；浓度为X，40％≤X≤70％，优选50％≤X≤55％。实验表明，在该洗脱浓度下，得到产品中的莲子心生物碱含量较高。
所述吸附用树脂为大孔强酸聚苯乙烯系阳离子交换树脂。例如D72、D61、D001cc、D001ss，优选为G-6104所述再洗脱用含水低级醇为乙醇或甲醇；浓度为X，50％≤X≤95％，优选90％≤X≤95％。
提取方法包括煎煮、回流、浸渍、渗漉等，最好为浸渍、渗漉。提取液蒸去低级醇后可直接用非极性大孔树脂吸附，为了保护树脂柱，最好过滤。
莲子心生物碱提取物的干燥方法为真空干燥、冷冻干燥、喷雾干燥等，最好为真空干燥或冷冻干燥。
一种莲子心生物碱提取物，该提取物采用上述方法制备得到。
一种莲子心生物碱提取物的应用，将所述的莲子心生物碱提取物用于制备治疗心脑血管疾病的药剂。
一种莲子心生物碱提取物制剂，该制剂所述的莲子心生物碱提取物为主要活性成分，加入药剂学可接受的辅料，制成药剂学可接受的剂型。所述辅料选自淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠中的任意一种或几种。所述的药剂学可接受的剂型为口服剂或注射剂，为片剂、丸剂、胶囊、滴丸、水针、粉针、或输液。
利用本发明得到的莲子心生物碱提取物制备所需药物的各种剂型时，可以按照药剂学领域的常规生产方法制备。如将该提取物与一种或多种载体混合，然后制成相应的剂型。
本发明得到的生物碱提取物有很好的降压、抗心率失常作用，可用于多种心脑血管疾病的治疗。
本发明的优点是本发明所提供的莲子心生物碱提取物，其制备工艺简单、含量高(生物碱含量可达90％以上(以莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱计))。运用两种树脂对莲子心生物碱进行富集，安全、易于操作、不需高温高压和特殊设备、成本低廉。
以下通过具体实施例详细说明本发明技术方案，并不以此限定本发明的实施范围。
具体实施例方式
实施例15公斤莲子心药材，装入回流提取罐，以30L60％乙醇回流提取3小时，过滤，残渣再用25L60％乙醇回流提取2小时，过滤，合并两次提取液，浓缩蒸去乙醇，过滤，将滤液吸附于D101树脂，用水洗去杂质，再用40％乙醇洗脱，将洗脱液吸附于D72树脂，再以50％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加压干燥，得莲子心生物碱45g，生物碱含量可达90％(以莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱计)。
实施例25公斤莲子心药材，以70％乙醇浸泡3小时，装入渗漉筒，以70％乙醇渗漉，收集40L渗漉液，浓缩蒸去乙醇，过滤，将滤液吸附于H103树脂，用5％乙醇洗去杂质，再用50％乙醇洗脱，将洗脱液吸附于D61树脂，再以60％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，喷雾干燥，得莲子心生物碱41g，生物碱含量可达90％(以莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱计)。
实施例35公斤莲子心药材，以30L80％乙醇浸渍20小时，过滤，残渣再用35L85％乙醇浸渍15小时，合并两次浸泡液，浓缩蒸去乙醇，过滤，将滤液吸附于H107树脂，用10％乙醇洗去杂质，再用55％乙醇洗脱，将洗脱液吸附于G-6104树脂，再以70％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，喷雾干燥，得莲子心生物碱39g，生物碱含量可达90％(以莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱计)。
实施例45公斤莲子心药材，装入回流提取罐，以40L90％乙醇回流提取2小时，过滤，残渣再用35L90％乙醇回流提取2小时，过滤，合并两次提取液，浓缩蒸去乙醇，过滤，将滤液吸附于D3520树脂，用15％乙醇洗去杂质，再用60％乙醇洗脱，将洗脱液吸附于D001CC树脂，再以90％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，冷冻干燥，得莲子心生物碱37g，生物碱含量可达90％(以莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱计)。
实施例55公斤莲子心药材，以95％乙醇浸泡3小时，装入渗漉筒，以95％乙醇渗漉，收集40L渗漉液，浓缩蒸去乙醇，过滤，将滤液吸附于D4020树脂，用20％乙醇洗去杂质，再用70％乙醇洗脱，将洗脱液吸附于G-6104树脂，再以95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，喷雾干燥，得莲子心生物碱35g，生物碱含量可达90％(以莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱计)。
实施例6取实施例1下莲子心生物碱25g，加淀粉20g，微晶纤维素10g，以40％乙醇制粒，压片，得片剂，共制成1000片。
实施例7取实施例1下莲子心生物碱3g，以1％HCL溶解，再用1％NaOH调节pH值至5，加1％活性炭去热原，过0.22um微孔滤膜，分装于300支10ml西林瓶中，冷冻干燥，得注射用粉针剂。
规格10mg/支用量1～2支/次，供静脉或肌注使用。
本发明质量稳定、剂量可控、无污染，便于操作、运输、储藏，适于大规模生产。
实施例8取体重180±20gWistar大鼠，分为两组，制作肾性及醋酸去氧皮质酮盐型高血压模型，待高血压形成后，测量血压，并给药观察。以3％戊巴比妥钠25mg/kgip作浅麻醉，在手术切口处放置1％盐酸利多卡因浸湿的棉球，颈动脉插管及测量血压，在肋缘下腹正中作2.5cm切口，找出胃及十二指肠，待血压稳定后，经十二指肠给药。
大鼠经十二指肠给莲子心生物碱提取物15mg/kg，给药后20至40分钟，平均血压下降值与给药前16.3±2.4kPa无明显差异。给药后60分钟，下降到11.9±4.4kPa，下降了28±18％。从给药后100分钟到180分钟，平均血压下降值稳定在35％左右，在相应时间内心率无明显变化。
结果表明莲子心生物碱提取物经消化道吸收能产生平稳的降压作用。
实施例9对氯仿诱发小鼠室颤模型的影响取体重27～32g小鼠，雌雄各半，按体重平均分成3组，每组10只，分别给予莲子心生物碱提取物样品、利多卡因及生理盐水。各组均按10mg/kg的剂量尾静脉注射给药。然后逐一将小鼠放入含有3～4ml氯仿棉球(以后每换一只小鼠加入1ml氯仿)倒置的600ml烧杯内至呼吸停止，立即取出，迅速剖开胸腔，肉眼观察心室颤动发生率，直至心脏停搏。实验数据分组进行率检验。
生理盐水组、利多卡因组、莲子心生物碱提取物组给药剂量均为10mg/kg，动物只数均为10。本实验经统计学精确概率法检验，生物碱提取物组与模型组比较P＜0.01，具有高度统计学意义。生物碱提取物样品组可以显著性的抑制氯仿所引起小鼠室颤的发生。见表1。
表1.对氯仿诱发小鼠室颤模型的影响组别 剂量 动物数发生 室颤发生(mg/kg)(只) 数(只)率(％)模型 -- 1010100利多卡因 10 100 0**生物碱 10 104 40**样品**P＜0.01与模型组比较
权利要求
1.一种莲子心生物碱提取物的制备方法，包括以下步骤1)提取以莲子心为原料，用水、低级醇或含水低级醇提取；2)过滤提取后蒸去低级醇，过滤；3)除杂滤液经非极性大孔树脂吸附并用水或含水低级醇淋洗除去杂质；4)洗脱用含水低级醇洗脱非极性大孔树脂柱；5)吸附将洗脱液通过大孔强酸聚苯乙烯系阳离子交换树脂；6)再洗脱用含水低级醇洗脱吸附于阳离子交换树脂上的莲子心生物碱；7)干燥洗脱液减压浓缩至干，经干燥粉碎得莲子心生物碱提取物。
2.根据权利要求1所述的莲子心生物碱提取物的制备方法，其特征在于所述提取用含水低级醇为乙醇或甲醇；浓度为X，60％≤X≤95％。
3.根据权利要求2所述的莲子心生物碱提取物的制备方法，其特征在于所述提取用含水低级醇的浓度为X，70％≤X≤80％。
4.根据权利要求1所述的莲子心生物碱提取物的制备方法，其特征在于所述非极性大孔树脂为苯乙烯为骨架材料的非极性树脂。
5.根据权利要求1所述的莲子心生物碱提取物的制备方法，其特征在于所述除杂用的含水低级醇为乙醇或甲醇，浓度为X，0＜X≤20％。
6.根据权利要求1所述的莲子心生物碱提取物的制备方法，其特征在于所述洗脱用含水低级醇为乙醇或甲醇，浓度为X，40％≤X≤70％。
7.根据权利要求6所述的莲子心生物碱提取物的制备方法，其特征在于所述洗脱用含水低级醇浓度为X，50％≤X≤55％。
8.根据权利要求1所述的莲子心生物碱提取物的制备方法，其特征在于所述吸附用树脂为大孔强酸聚苯乙烯系阳离子交换树脂。
9.根据权利要求1所述的莲子心生物碱提取物的制备方法，其特征在于所述再洗脱用含水低级醇为乙醇或甲醇，浓度为X，50％≤X≤95％。
10.根据权利要求9所述的莲子心生物碱提取物的制备方法，其特征在于所述再洗脱用含水低级醇浓度为X，90％≤X≤95％。
11.一种莲子心生物碱提取物，其特征在于该提取物采用权利要求1至10中任何一项所述的方法制备得到。
12.一种莲子心生物碱提取物制剂，其特征在于该制剂以权利要求11所述的莲子心生物碱提取物为主要活性成分，加入药剂学可接受的辅料，制成药剂学可接受的剂型。
13.根据权利要求12所述的莲子心生物碱提取物制剂，其特征在于所述辅料选自淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠中的任意一种或几种。
14.根据权利要求12所述的莲子心生物碱提取物制剂，其特征在于所述的药剂学可接受的剂型为口服剂或注射剂，为片剂、丸剂、胶囊、滴丸、水针、粉针或输液。
15.权利要求11所述的莲子心生物碱提取物用于制备治疗心脑血管疾病的制剂的应用。
全文摘要
本发明公开了一种莲子心生物碱提取物的制备及其心脑血管疾病的治疗用途，该提取物可由下述方法制得以莲子心为原料，含水低级醇提取，将提取液先后通过非极性大孔树脂柱和大孔强酸聚苯乙烯系阳离子交换树脂，再用高浓度含水低级醇洗脱，将洗脱液浓缩至干，经干燥粉碎得莲子心生物碱。所得到的莲子心生物碱提取物可在治疗心脑血管疾病中应用，可制成口服剂和注射剂等。本发明所提供的莲子心生物碱提取物，其制备工艺简单、含量高(生物碱含量可达90％)、安全、易于操作、不需高温高压和特殊设备、成本低廉。
文档编号A61P9/00GK1670026SQ20041000877
公开日2005年9月21日 申请日期2004年3月18日 优先权日2004年3月18日
发明者李家政 申请人:天津中新药业集团股份有限公司