专利名称：一种治疗心脑血管疾病的针剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种以山楂叶提取物为主要成分，治疗心脑血管疾病的针剂及其制备方法。
背景技术：
山楂叶中含有丰富的黄酮类化合物，主要成分有牡荆素鼠李糖甙、牡荆素葡萄糖甙、金丝桃甙等，具有广泛的药理活性，主要为增加冠脉流量，抗心肌缺氧、心率失常，舒张血管，解除局部淤血状态。临床上主要用于气结血淤、胸闷憋气、心脑血管疾病、冠状动脉供血不足等症。
目前上市的以山楂叶提取物为功效成分治疗心脑血管疾病的药物制剂有益心酮片、心安胶囊、复心片等，口服制剂疗效发挥比较慢，而心脑血管疾病属于临床急症，发病快，需要急救药物，针剂是最好的剂型。由于山楂叶提取物制成水针剂在工艺上有一定的难度，所以一直没有相关的产品问世。我们经过研究解决了一系列的难题，最终研制成功。药效实验证明山楂叶提取物针剂具有活血化瘀，理气舒络，宣通心脉的功能，能增加冠脉流量、扩张冠脉血管，对治疗心脑血管疾病有显著的疗效。实验结果表明针剂中PH范围在6.0-7.5为最佳PH值范围，与PH7.5以上相比较，不但制剂颜色较浅，活性成分更稳定。
检索有关山楂叶已经公开的专利比如02116789.3一种大孔吸附树脂提取山楂叶总黄酮的方法、98107298.4一种山楂叶总黄酮的提取方法、91111834.9有山楂叶提取总黄酮的方法、03102024.0一种用于治疗心血管疾病的山楂叶注射剂以及03120841.X一种由山楂叶提取物为主要功效成分制成的制剂，其浸提溶媒都采用稀乙醇，由于不同溶媒提取的提取物在水溶液中的溶解度不同，我们用本发明的工艺与申请号为03120841.X“一种由山楂叶提取物为主要功效成分制成的制剂”中的制备工艺作了比较，比较了不同工艺得到的山楂叶提取物在水中的溶解度和水溶液的色泽(浓度为10mg/ml)(对中药注射剂来说，这两项指标是评断制剂质量高低的主要指标之一)。
比较结果如下
用本发明的方法得到的提取物具有以下优点溶解度提高了40倍，色泽浅稳定性好，符合注射剂原料的要求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种稳定性好、质量高、疗效显著的注射用山楂叶提取物针制剂及其制备方法，应用该方法制得的山楂叶提取物针制剂对大鼠急性心肌缺血保护及治疗心肌梗塞的作用均优于现有的山楂叶制剂。本发明涉及一种具有对心脑血管疾病有显著疗效的山楂叶提取物针剂及其制备方法。其中有效成分山楂叶提取物的组分组成为牡荆素鼠李糖甙的含量为20-53％，牡荆素葡萄糖甙含量为8-25％，金丝桃甙的含量为0.01-2％，总原花青素含量为3-20％。其中针剂包括水针剂、粉针剂、冻干粉针剂、输液剂及脂肪乳剂。
制备山楂叶提取物水针剂，将山楂叶提取物，溶于适量注射用水中，加入计量的注射用水溶性辅料，加0.1-0.5％的活性炭除去热源，调节PH至6.0-7.5，经微孔滤膜过滤后，补充注射用水至规定量，灌装于安瓿瓶中或输液瓶中，熔封/轧盖，经检验合格后，包装即得。每安瓿山楂叶提取物含量为3.0-50.0mg/ml；输液剂中山楂叶提取物含量为0.5-10.0mg/ml，规格为50ml、100ml、150ml和200ml。
制备山楂叶提取物粉针剂，将山楂叶提取物溶于适量注射用水中，加入计量的药用辅料，加0.1-0.5％的活性炭除去热源，调节PH为6.0-7.5经微孔滤膜过滤后，真空或喷雾干燥，无菌分装于西林瓶中，每瓶含山楂叶提取物10-200mg，轧盖，经检验合格后，包装即得。
制备山楂叶提取物冻干粉针剂，将山楂叶提取物溶于适量注射用水中，加入计量的药用辅料，加0.1-0.5％的活性炭除去热源，调节PH为6.0-7.5，经微孔滤膜过滤后，分装于安瓿中，每安瓿含山楂叶提取物10-200mg，经冷冻干燥后熔封，检验合格后，包装即得。
制备山楂叶提取物输液剂，将上述山楂叶提取物溶于适量的注射用水中，加入计量的药用辅料，调节PH至6.0-7.5，经微孔滤膜过滤后，补充注射用水至规定量，灌装于100ml输液瓶中，每安瓿含山楂叶提取物10-100mg熔封/轧盖，经检验合格后，包装即得。
制备山楂叶提取物脂肪乳剂，将上述山楂叶提取物溶于适量的稀甘油中，加入计量的注射用大豆油和注射用卵磷脂，于高压均质机中反复乳化既得。
本发明的山楂叶提取物的制备方法如下制备方法一取山楂叶，加水温浸提取三次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，加乙醇至含醇量达60-85％，冷藏12-24小时，吸取上清液，下层滤过，滤液与上清液合并，减压回收乙醇，加水稀释后上聚酰胺树脂柱，用蒸馏水洗脱，至有盐酸-镁粉反应时开始接收，并同时改用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，至盐酸-镁粉反应阴性，回收乙醇。减压浓缩至无醇味，加水稀释至相对密度为1.10～1.12(60℃)时，放冷，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇等倍量萃取三次，合并，回收正丁醇至干，即得本发明的提取物。
制备方法二将方法一中通过聚酰胺树脂柱分离所得的乙醇洗脱液减压浓缩至无醇味，加水稀释至相对密度为1.05～1.08(60℃)时，通过大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗至α-萘酚浓硫酸反应为阴性，改用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，至盐酸-镁粉反应阴性，减压浓缩至干既得本发明的提取物。
具体实施例方式
1.制备山楂叶提取物(方法一)取山楂叶200g，加12倍量水温浸(60℃)提取三次，每次2.0小时，滤过，合并滤液，减压浓缩水，浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，加乙醇至含醇量达75％，冷藏24小时，吸取上清液，下层滤过，滤液与上清液合并，加水至600ml，上聚酰胺树脂柱，用蒸馏水洗脱，至有盐酸-镁粉反应时开始接收，并同时改用40％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，至盐酸-镁粉反应阴性，回收乙醇。减压浓缩至相对密度为1.10～1.12(60℃)时，放冷，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇等倍量萃取三次，合并，回收正丁醇至干，即得本发明的提取物3.5g。
2.制备山楂叶提取物(方法二)取山楂叶200g，加12倍量水温浸(60℃)提取三次，每次2.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，加乙醇至含醇量达70％，冷藏24小时，吸取上清液，下层滤过，滤液与上清液合并，加水至800ml，上聚酰胺树脂柱，用蒸馏水洗脱，至有盐酸-镁粉反应时开始接收，并同时改用40％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，至盐酸-镁粉反应阴性，减压浓缩至相对密度为1.10～1.12(60℃)时，放冷，加水稀释至相对密度为1.05～1.08(60℃)时，通过大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗至无α-萘酚浓硫酸反应为阴性，改用40％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，至盐酸-镁粉反应阴性，乙醇洗脱液减压浓缩至干既得本发明的提取物。
3.制备山楂叶提取物水针剂。
将上述山楂叶提取物2kg，溶于100L注射用水中，配成20mg/ml，调节PH至6.0-7.5，加入亚硫酸钠10g。经微孔滤膜过滤后，补充注射用水至规定量，灌装于5ml安瓿瓶中，熔封/轧盖，经检验合格后，包装即得。
4.制备山楂叶提取物输液剂将上述山楂叶提取物2kg，溶于2000L注射用水中，配成1mg/ml，调节PH至6.0-7.5，加入亚硫酸钠10g，经微孔滤膜过滤后，补充注射用水至规定量，灌装于100ml输液瓶中，熔封/轧盖，经检验合格后，包装即得。
5.制备山楂叶提取物粉针剂将上述山楂叶提取物2kg溶于适量100L注射用水中，加入亚硫酸钠10g，调节PH为6.0-7.5，经微孔滤膜过滤后，喷雾干燥得山楂叶提取物无菌粉，无菌分装于西林瓶中，制成每瓶含山楂叶提取物无菌粉50mg、100mg两个规格，轧盖，经检验合格后，包装即得。
6.制备山楂叶提取物冻干粉针剂将上述山楂叶提取物2kg溶于适量100L注射用水中，加入甘露醇100g，调节PH为6.0-7.5，经微孔滤膜过滤后，无菌分装于西林瓶中，制成每瓶含山楂叶提取物无菌粉50mg、100mg两个规格，冷冻干燥后，轧盖，经检验合格后，包装即得。
7.制备山楂叶提取物脂肪乳剂将上述山楂叶提取物2kg溶于876kg稀甘油中(甘油含量为12％)，加入注射用大豆油100kg、注射用卵磷脂12kg于高压乳匀机中反复乳化既得。
本发明山楂叶提取物针剂的有关药效学实验实验一、山楂叶提取物对犬冠脉血流量的影响实验材料1.实验动物健康成年犬36只，雌雄兼用，体重17.50±1.77kg。
2.实验药物上述山楂叶提取物制成的粉针剂，50mg/支，0.9％氯化钠注射液。
实验共分4组(1)空白对照组，生理盐水1ml/kg；(2)山楂叶提取物10mg/kg剂量组；(3)山楂叶提取物15mg/kg剂量组；(4)山楂叶提取物20mg/kg剂量组。各给药组60min前n＝12，90min后n＝6。
实验药物用生理盐水配制成同体积(50ml)，电脑微量注射泵以5ml/min的速度经股静脉给入试药。
实验方法实验动物用戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉麻醉，气管插管，连接电动人工呼吸机。施左侧第四肋间开胸术，暴露心脏，剪开心包，做心包床，分离冠状动脉左旋支及主动脉根部，放置电磁流量计探头，测量冠脉血流量。手术完毕，待所观察指标稳定后，记录药前值，给入所试药物。并于药后即刻、药后10、30、60、90min进行记录并测定各给药组对犬冠脉血流量(ml/100g·min-1)的影响。将各项观测指标及推导参数进行统计学处理，以不同观察时间的实测值进行给药前后自身比较，其变化百分率进行组间比较，以t检验判断其显著性。
表1各给药组对犬冠脉血流量(ml/100g·min-1)的影响(X±SD)
实验结果显示，山楂叶提取物可明显增加冠脉流量，扩张冠脉血管，降低冠脉阻力，改善心肌的供血供氧，并能降低总外周阻力，对心血管系统起到调整和改善作用。
实验二、.山楂叶提取物对缺血再灌注所致心肌梗塞的影响实验材料
1.实验动物Wistar种大鼠32只，雄性，体重250～270g。
2.实验药物上述山楂叶提取物制成的粉针剂，50mg/支，0.9％氯化钠注射液。
实验方法动物随机分为4组模型组(生理盐水)，山楂叶提取物20、15、10mg/kg组。药物以生理盐水稀释至所需浓度，给药体积均为3ml/kg，给药途径为静脉。
动物以戊巴比妥钠腹腔麻醉(45mg/kg)，仰位固定，心电图机以标准II导联监测动物心电图；切开气管，插入气管插管，接呼吸机进行人工呼吸(32次/分，呼吸比值1∶3)；开胸，断3~5肋，打开心包膜，暴露心脏，于冠状动脉左前降支根部穿线(0号缝合线)，备结扎用；分离左股静脉，备给药用；穿线后稳定10min，将一塑料凹管与血管并列，结扎(无ST段及T波改变者淘汰)，给入受试药物；40min后，沿凹槽剪断结扎线，使前降支实现再灌注；缝合胸壁，恢复自主呼吸。
再灌注损伤2小时后，腹主动脉取血，测定血清LDH、CK、SOD、MDA含量；心脏结扎线以下横切5片，N-BT染色，采用多媒体彩色病理图文分析系统(MPIAS-500)以固定取象距离测量正常心肌及梗塞心肌面积，观察心肌梗塞程度；结果进行统计学处理(t检验)。
实验结果见表2表2.山楂叶提取物对心肌梗塞程度的影响
与模型组比较P＜0.05、P＜0.01.
实验结果证实，山楂叶提取物20mg/kg、15mg/ml及10mg/kg组梗塞面积减小，梗塞区占心室及心脏百分比降低，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01)；20mg/kg组并能明显减轻梗塞区重量，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01)。
本发明针剂的最佳PH值范围筛选实验结果用加速稳定性实验方法考察比较两者的稳定性，条件温度40℃，相对湿度75％，时间三个月，每隔一个月抽样检测一次，最佳PH值范围为6.0-7.5，注射液颜色太深，不利于橙明度的检查。结果见下表
本发明中提取物含量的测定方法一、金丝桃甙(以高效液相色谱方法检测)1、色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以四氢呋喃-甲醇-乙腈-0.5％冰醋酸水溶液(19.4∶1∶1∶78.6)为流动相；检测波长为363nm，柱温为25℃，流速为1ml/min，理论板数按金丝桃甙峰计算不低于3000。
2、对照品溶液制备精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h的金丝桃甙对照品适量，加50％乙醇制成每1ml中含0.02mg的溶液，即得。
3、供试品溶液的制备取用本发明中的山楂叶提取物10mg，置50ml量瓶中，用50％稀乙醇溶解，过滤既得。
4、测定法分别吸取对照品和供试品各10μl，注入液相色谱仪即得。
二、牡荆素鼠李糖甙和牡荆素葡萄糖甙(以高效液相色谱方法检测)1、色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以四氢呋喃-异丙醇-0.5％冰醋酸水溶液(10∶2.0∶88)为流动相；检测波长为340nm，柱温为25℃，流速为1ml/min，理论板数按牡荆素鼠李糖甙计算不低于2000。
2、对照品溶液制备精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h的牡荆素鼠李糖甙和牡荆素葡萄糖甙对照品适量，加50％乙醇制成每1ml中含0.02mg的溶液，即得。
3、供试品溶液的制备取用本发明中的山楂叶提取物10mg，置50ml量瓶中，用50％稀乙醇溶解，过滤既得。
4、测定法分别吸取对照品和供试品各10μl，注入液相色谱仪即得。
三、花青素含量的测定(以紫外光吸收法检测)1、对照品的制备取花青素对照品配成100ug/ml的贮备液备用。
2、标准曲线的制备精密吸取花青素贮备液0，1，2，3，4，5，6ml分别置于10ml量瓶中，加水稀至刻度，摇匀，在紫外-可见分光光度计280nm处测定吸收度，绘制标准曲线。
3、供试品溶液的制备取用本发明中的山楂叶提取物10mg，置50ml量瓶中，用50％稀乙醇溶解，过滤既得。
4、测定法将供试品溶液在仪紫外-可见分光光度计中，280nm处测定光吸收，从标准曲线计算供试品溶液的花青素含量。
备注本发明中牡荆素鼠李糖甙与牡荆素葡萄糖甙的化学名称牡荆素鼠李糖甙为5，7，4`-三羟基黄酮-8-C-β-D-葡萄糖基(1→2)-β-D-鼠李糖甙牡荆素葡萄糖甙为5，7，4`-三羟基黄酮-8-C-β-D-葡萄糖基(1→4)-β-D-葡萄糖甙
权利要求
1.一种对冠心病、心绞痛具有显著疗效的山楂叶提取物针剂，其特征在于该制剂的有效成分的重量百分比组成为牡荆素鼠李糖甙20-53％，牡荆素葡萄糖甙8-25％，金丝桃甙0.01-2％，总原花青素3-20％。
2.根据权利要求1所述的山楂叶提取物针剂，其特征在于山楂叶提取物的制备工艺包括热水浸提、聚酰胺柱层析分离两个步骤。
3.根据权利要求1所述的山楂叶提取物针剂，该针剂的剂型包括水针剂、粉针剂、冻干粉针剂、输液剂以及脂肪乳剂。
4.根据权利要求1所述的山楂叶提取物针剂，其中水针剂的制备方法为将山楂叶提取物，溶于适量注射用水中，加入注射用水溶性辅料，加0.1-0.5％的活性炭除去热源，调节PH至6.0-7.5，经微孔滤膜过滤后，补充注射用水至规定量，灌装于安瓿瓶中或输液瓶中，熔封/轧盖，经检验合格后，包装即得，针剂中山楂叶提取物的含量为3.0-50.0mg/ml，输液剂含山楂叶提取物0.5-10.0mg/ml，规格为50ml、100ml、150ml和200ml。
5.根据权利要求1所述的山楂叶提取物针剂，其中粉针剂的制备方法为将山楂叶提取物溶于适量注射用水中，加入适量的药用辅料，加0.1-0.5％的活性炭除去热源，调节PH为6.0-7.5，经微孔滤膜超滤后，真空或喷雾干燥，无菌分装于西林瓶中，每瓶含山楂叶提取物10-200mg，轧盖，包装即得；
6.根据权利要求1所述的山楂叶提取物针剂，其中冻干粉针剂的制备方法为将山楂叶提取物溶于适量注射用水中，加入适量的药用辅料，调节PH为6.0-7.5，经微孔滤膜过滤后，分装于安瓿中，每安瓿中山楂叶提取物含量为10-200mg，经冷冻干燥后熔封，包装即得。
7.根据权利要求1所述的山楂叶提取物脂肪乳剂，其中脂肪乳剂的制备方法为将山楂叶提取物溶于适量的稀甘油中，加入计量的注射用大豆油和注射用卵磷脂，于高压乳匀机中反复乳化经微孔滤膜超滤后，分装于安瓿中，每安瓿中山楂叶提取物含量为10-50mg既得。
8.根据权利要求4或5所述的山楂叶提取物针剂，其中的药用辅料是指抗氧化剂，包含以下辅料中的一种或两种亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、维生素C。
9.根据权利要求6所述的山楂叶提取物针剂，其中的药用辅料是指冻干粉支持剂，包含以下辅料中的一种或两种乳糖、甘露醇、肌醇、葡聚糖、甘氨酸。
全文摘要
本发明公开了一种对冠心病、心绞痛、脑缺血有显著疗效的山楂叶提取物针剂及其制备方法，剂型包括水针剂、粉针剂、冻干粉针剂、输液剂以及脂肪乳剂。实验证明，本发明的山楂叶提取物针剂可明显增加冠脉流量，扩张冠脉血管，明显改善心肌缺血和脑缺血的症状，较现有以山楂叶提取物为主要功效成分的片剂和硬胶囊剂相比，制成针剂疗效更为显著。
文档编号A61P9/00GK1669578SQ20041008396
公开日2005年9月21日 申请日期2004年10月15日 优先权日2004年10月15日
发明者梁玉英 申请人:梁玉英