专利名称：一种含银杏提取物的制剂在抗阿司匹林抵抗药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，具体地说，本发明涉及一种银杏叶制剂在制备治疗阿司匹林抵抗药物中的应用。
背景技术：
阿司匹林(Aspirin)又称阿司匹林或乙酰水杨酸，应用于临床已有80多年的历史，是一种古老的解热、镇痛药。近年来随着前列腺素研究的深入，对阿司匹林又有了新的认识临床上除了传统上用于解热、镇痛、抗炎外，还用于抗血小板聚集等。临床试验表明阿司匹林是心脑血管疾病高危患者一级预防有效的抗血小板药物，对心肌梗死和缺血性血管事件的二级预防也有效。
但是目前在临床上使用治疗剂量的阿司匹林，仍然有部分心脑血管疾病患者发生了冠脉血栓和中风，加大治疗剂量，不仅未能达到治疗及预防目的，而且不良反应增加，这种现象称为“阿司匹林抵抗”(Aspirin Resistance，AR)。
经过长期随访，原因如下第一血小板被其它途径激活，不能被阿司匹林阻断[Valles J，Santos MT，Aznar J，et al.Erythrocyte Promotion of platelet reactivity decreases the effectivenessof aspirin as an antithrombotic therapeutic modalitythe effect of low-dose aspirin is less thanoptimal in patients with vascular disease due to prothrombotic effects of erythrocytes on plateletreactivity.Circulation，1998；97350-355]；第二有些患者需要比常规剂量更大的剂量才能得到最佳抗栓效果，没有证据表明阿司匹林抗栓作用与剂量相关[Patrono C.Prevention ofmyocardial infarction and stroke by aspirindifferent mechanisms？Different dosage？Thromb.Res.，1998；92S7-S12]；第三某些患者尽管应用常规剂量阿司匹林也能生成TXA2[Tayllor DW，Low-dose and high-dose acetylsalicylic acid for patients undergoing carotid endarterectomyarandomized controlled trail；ASA and Carotid Endarterectomy(ACE)Trial Collaborators.Lancet，1999；3532179-2184]。
研究表明，AR的发生与下列机制有关。
红细胞提高血小板反应性血小板-红细胞相互作用影响血小板反应性，通过血小板释放反应、类花生酸类物质合成和血小板募集导致阿司匹林抵抗。红细胞引起TXA2合成增加，5-HT、β-TG和ADP释放，表明红细胞调节血小板花生酸类物质的生成[Valles J，et al.Erythrocyte metabolically enhancescollagen-induced platelet responsiveness via increased thromboxane production，adenosinediphosphate release，and recruitment.Blood，1991；78154-162]。
花生四烯酸(PGF2)代谢花生四烯酸经脂质过氧化产生一系列有生物活性的PGF2见复合物。F2-isoprostanes是血管疾病重要的新的预测因子。不稳定心绞痛、稳定性心绞痛、变异性心绞痛患者和健康人，服用阿司匹林100mg/d测量8-iso-PGF2(质脂过氧化作用的标志物)和11脱氢-TXA2(TXA2生物合成的标志物)的研究表明，不稳定心绞痛患者8-iso-PGF2尿排泄量明显高于稳定心绞痛患者和对照组；TXA2的排泄量明显高于稳定性心绞痛患者。不稳定心绞痛患者氧化剂应激增加，8-iso-PGF2增多，血小板对其他激动剂的反应增强。
吸烟刺激吸烟是心血管疾病主要的危险因素。资料表明阿司匹林能抑制血小板聚集率降低引起的血小板聚集[Davis JW，et al.Cigarette smoking-induced enhancement of platelet functionlack ifprevention by aspirin in men with coronary artery disease.J Lab Clin Med，1982；126637-639]。吸烟后血小板聚集率降低。不吸烟者和吸烟成瘾者吸烟前服用阿司匹林能防止血小板聚集率下降。
儿茶酚胺水平增加血小板聚集增加体外血小板对肾上腺素的敏感性表明儿茶酚胺引起的血小板活化和急性冠脉综合征之间存在联系[Larsson PT et al，Norepinephrine-induced human platelet activation in vivo is only partlycounteracted by aspirin.Circulation，1994；891951-1957]。40个急性心肌梗死患者随机分为华法林组和阿司匹林组。踏车试验前后取血，比较两组的基线特征，运动时间和最大心率。在基线时华法林组比阿司匹林组血小板聚集率明显降低，说明阿司匹林有抗血小板聚集的作用。运动时两组的血小板聚集率均降低，表明血小板聚集能力增加。其原因可能是去甲肾上腺素水平增加导致血小板活化。
血小板对胶原的敏感性增加胶原是生理性的重要的血小板聚集的激动剂。两个试验研究阿司匹林应答和胶原之间的关系。一个试验(n＝8健康男性)服用阿司匹林324mg/kg前，服药2小时后测量出血时间，区分阿司匹林应答者和无应答者。8个人中7个参与了第二个试验，给予胶原0.15-4μg/ml确定阿司匹林应答者和无应答者血小板对胶原的敏感性。第一个试验8个患者中，5个阿司匹林应答者，3个无应答者。阿司匹林应答者和无应答者服药前出血时间无差别[(408±121)和(330±30)秒，P＞0.05]，服药后有明显差别[(720±225)和(330±52)秒]。第二个试验7个患者中，4个阿司匹林应答者，3个无应答者。阿司匹林应答者和无应答者服药前出血时间无差别[(405±52)和(357±31)秒，P＞0.05]，服药后有明显差别[(623±189)和(345±54)秒][Kawasaki T，el at.Incresed platelet sensitivity to cllagen in individuals resistant to low aspirin.Stroke，2000；31591-595]。
环氧化酶-2(COX-2)(p900)Cox是前列腺素合成的限速酶。Cox-1在大多数细胞和组织中表达。Cox-2的mRNA和蛋白质正常情况下在大多数组织中不能检测到。最近Webr等[Weber AA，et al.Cyclooxygenase-2 in human platelet as a possible factor in aspirin resistance.Lancet，1993；353900]报道Cox-2的蛋白质和mRNA在健康人的循环血小板中表达，这可能是阿司匹林抵抗的一个原因。
药物相互作用阿司匹林和其他非甾体类消炎药(NSAIDS)的相互作用能够削弱阿司匹林对血小板的作用。阿司匹林对丝氨酸残基的乙酰化作用，需要首先与赖氨酸-120结合，赖氨酸-120是所有NSAIDS共同作用的位点。NSAIDS对赖氨酸-120的亲和力较强，从而阻止了阿司匹林对血小板Cox-1的抑制作用。
以上阐述了阿司匹林抵抗的可能机制。明确血小板活化机制和可逆的危险因素，有助于减少阿司匹林抵抗的发生，改善患者的预后。
阿司匹林抵抗是指服用阿司匹林后不能有效阻止血栓素A2的合成，即阿司匹林失去了对心脑血管系统的保护作用，这种现象被称之为阿司匹林抵抗。对大多数患者来说，阿司匹林能使心血管危险降低25％，但是阿司匹林抵抗的患者应用阿司匹林治疗心血管疾病，不能预防心血管事件的发生，反而会增加心梗和卒中的发生率，这些发现限制阿司匹林的使用。因此，这些心血管疾病在本发明当中称之为阿司匹林抵抗性心血管疾病，特别是指使用阿司匹林治疗无效的冠心病、心绞痛。本发明将对阿司匹林抵抗性心血管疾病具有治疗作用的药物称之为抗阿司匹林抵抗的药物，这种治疗作用称之为抗阿司匹林抵抗作用。
目前，对于治疗阿司匹林抵抗的报道还不是很多。Yusuf S等[Effects of pretreatment withclopidogrel and aspirin followed by long-term therapy in patients undergoing percutaneouscoronary interventionthe PCI-CURE study.Lancet，2001]报道了在阿司匹林治疗的基础上加用氯毗格雷能减少急性冠脉综合征患者包括经皮冠状动脉介入治疗的患者早期和长期的严重心血管事件的发生率。
中药理血药，特别是活血化瘀类药物是历代医家所常用的药物，本类药物具有活血调经、破血消癥、化瘀止痛、消肿生肌的功效，现代药理学证实，理血药具有扩展冠状动脉、增加冠脉流量，降低心肌耗氧，降低外周血管阻力，抑制血小板聚集，改善微循环，抑制血栓形成，增强纤维蛋白溶解活性，抗凝血系统，改善微循环，降压，缓解平滑肌痉挛等作用。
经过长期的临床研究发现，中医认为冠心病的病因病理多由于“阴阳失调、气机逆乱导致心血瘀滞、心脉痹阻、不通则痛”。根据上述原则，有人选取了银杏叶为原料制成制剂，该制剂具有活血化瘀之功效，适用于动脉硬化及高血压病所致的冠状动脉供血不全、心绞痛、心肌梗塞、脑栓塞、脑血管痉挛等症。由于其疗效确切，不良反应少，是临床治疗冠心病、胸闷、心绞痛的常用中成药。目前对该制剂的研究主要集中在动脉硬化及高血压病所致的冠状动脉供血不全、心绞痛、心肌梗塞、脑栓塞、脑血管痉挛等方面，有关该制剂治疗阿司匹林抵抗作用尚未见报道。为了减轻心脑血管患者使用阿司匹林药物治疗心脑血管疾病时会产生阿司匹林抵抗的现象，目前一些科研工作者正在寻找能够替代或减轻阿司匹林抵抗现象的药物，本发明正是在此基础上对目前现在一些药物进行试验，以求发现其药物新用途，以解决目前阿司匹林用药易产生阿司匹林抵抗现象。
发明内容
本发明的目的在于提供一种银杏叶制剂在制备抗阿司匹林抵抗的药物中的应用。
所述的中药组合物由包括下列的原料药制成银杏叶；优选的所述的中药组合物由包括下列的原料药制成银杏叶提取物。
所述的中药组合物的有效成分的制备可以采用以下方法水提法、水提醇沉法、萃取法、浸渍法、渗漉法、回流提取法、连续回流提取法、大孔树脂吸附法制备。例如，可将这些原料药研成粉末混合均匀制成散剂冲服；也可以将这些药物一起水煎，然后浓缩水煎液，制成口服液；但是为了使该药物各原料药更好地发挥药效，优选对原料采用如下工艺提取，但是这不能限制本发明的保护范围。
取银杏叶提取物原料药与适量辅料混合均匀，按照常规片剂制备方法制成片剂，每片含银杏叶精提物40mg(其中银杏总黄酮甙9.6mg)。
所述的中药组合物可以制成片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、软膏剂、硬膏剂、喷雾剂、滴丸剂、注射液、粉针剂、滴丸剂。
以上组成在生产时可按照相应的比例增大或减少，如大规模生产可以以公斤或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或减小。
为了更好地理解本发明的实质，下面通过临床观察本药物组合物在抗“阿司匹林抵抗”的试验结果，说明其在制药领域中的新用途。
本发明采用目前常用的对阿司匹林抵抗的研究方法，应用免疫酶标法测定患者提供尿样本，用来分析11-脱氢血栓素B2(TXB2)水平的变化，判断患者在服用本发明药物后是否具有降低阿司匹林抵抗的作用，本发明通过临床研究观察，证明了本发明药物在制备抗阿司匹林抵抗的药物中的应用，本发明药物具有抗阿司匹林抵抗的作用，为了更好地理解本发明，下面用本发明药物的临床试验结果说明其在制药领域中的新用途。
实验例1 本发明药物(按照实施1方法制备)减少阿司匹林抵抗作用实验本研究采用回顾性方法正常值参照澳大利亚关于阿司匹林抵抗研究结果一般资料本组90例病人选自门诊病人，并且是经实验测定具有阿司匹林抵抗倾向的心血管疾病患者。其中男性65人，女性25人。年龄70岁～85岁，平均年龄77岁。服阿司匹林者30人；服用本发明药物30人；合用者30人(全部病人至采样之日，至少已连续服药半年以上)。
材料与方法所采尿样为第一次晨尿中段，取后立即投入液氮中，后保存于-86℃低温冰箱中备用。应用免疫酶标法检测11-脱氢TXB2，试剂盒采用Cayman Chemical公司产品，全部实验在天士力研究院生物所完成，病人分组状况对实验室人员及后期数据统计人员实行双盲。
结果如表1所示。
表1.各组病人尿值11-脱氢TXB2(ng/mmol)X±SD
结论本发明药物合用阿司匹林组与阿司匹林单独使用组组间尿中TXB2排泄量之间有明显统计学差异，p＜0.05；本发明药物组与阿司匹林组组间尿中TXB2排泄量之间无明显统计学差异，p＞0.05；本发明药物组与本发明药物合用阿司匹林组组间尿中TXB2排泄量之间无明显统计学差异，p＞0.05。
该实验结果证明，本发明药物合用阿司匹林组可使尿中的TXB2排泄量减少，即在体内可阻断血栓素A2(TXA2)的形成，减少血小板的黏附和凝血，从而抑制血小板聚集，减少动脉硬化、心肌梗塞的发生，结果说明本发明药物具有抗阿司匹林抵抗作用，对阿司匹林无效的心血管病患者，本发明药物依然有改善生命指标的作用。该药物是否通过其它作用机制减少阿司匹林抵抗，尚需进一步研究。
本发明药物是通过以下实施例制备而成，本发明的制剂形式和相关辅料的添加方式与比例与常规制剂方法相同，在此不再列举，以下具体实施例是对本发明的解释，并不能限制本发明。
具体实施例方式
实施例1取1000g银杏叶粉碎，用5倍量丙酮∶水(70∶30)混合液加热提取2次，每次2小时，温度为50～60℃，合并提取液，滤过，减压浓缩成银杏叶提取物；取银杏叶提取物25g，淀粉25g，混合均匀，按照片剂常规制备方法制成500片，每片含银杏叶精提物40mg(其中银杏总黄酮甙9.6mg)。
实施例2取按实施例1方法得到的银杏叶提取物25g，淀粉35g，混合均匀，按照片剂常规制备方法制成500片，每片含银杏叶精提物40mg(其中银杏总黄酮甙9.6mg)。
实施例3取银杏叶提取物25g，淀粉45g，混合均匀，按照片剂常规制备方法制成500片，每片含银杏叶精提物40mg(其中银杏总黄酮甙9.6mg)。
实施例4
取银杏叶提取物25g，淀粉50g，混合均匀，按照片剂常规制备方法制成500片，每片含银杏叶精提物40mg(其中银杏总黄酮甙9.6mg)。
实施例5取1000g银杏叶粉碎，用5倍量丙酮∶水(70∶30)混合液加热提取2次，每次2小时，温度为50～60℃，合并提取液，滤过，减压浓缩成银杏叶提取物；将上述银杏叶提取物100g与300聚乙二醇6000混合；将聚乙二醇6000加热至85℃，化料20min后，移入滴丸机的滴灌保持在85℃。药液滴至7～8℃的液体石蜡中，取出滴丸，除去液体石蜡，选丸，即得。
实施例6取1000g银杏叶粉碎，加5倍量65％乙醇回流提取2次，每次2小时，温度为60℃，合并提取液，滤过，减压浓缩回收乙醇得银杏叶提取物；取上述银杏叶提取物100g与300g聚乙二醇4000混合；将黄芪提取物和聚乙二醇4000加热至86℃，化料25min后，移入滴丸机的滴灌保持在89℃。药液滴至7～8℃的液体石蜡中，取出滴丸，除去液体石蜡，选丸，即得。
实施例7取1000g银杏叶，加5倍量的水，煎煮2次，每次2小时，温度为50～60℃，合并提取液，浓缩，过大孔吸附树脂(AB-8)精制，用80％乙醇洗脱，洗脱液浓缩回收乙醇，得银杏叶提取物；取上述银杏叶提取物100g与300g聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶0.01)混合；取上述银杏叶提取物和聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶0.01)加热至88℃，化料30min后，移入滴丸机的滴灌保持在86℃。药液滴至7～8℃的液体石蜡中，取出滴丸，除去液体石蜡，选丸，即得。
实施例8取1000g银杏叶，加5倍量65％乙醇，加热回流提取2次，每次1小时，温度60℃，合并提取液，浓缩，过大孔吸附树脂(D101)精制，用85％乙醇洗脱，洗脱液浓缩回收乙醇，得银杏叶提取物；取上述银杏叶提取物100g和300g聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶20)混合；取上述银杏叶提取物和聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶20)加热至90℃，化料40min后，移入滴丸机的滴灌保持在88℃。药液滴至7～8℃的液体石蜡中，取出滴丸，除去液体石蜡，选丸，即得。
实施例9取粉碎银杏叶1000g，采用采用CO2超临界萃取法，得银杏叶提取物，工艺条件为温度为45℃，萃取压力为25Mpa，流量0.8ml/min，时间2小时。其中银杏总黄酮≥24％，萜内酯≥6％；上述银杏叶提取物100g与300g聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶40)混合；取上述混合物加热至90℃，化料35min后，移入滴丸机的滴灌保持在88℃。药液滴至7～8℃的液体石蜡中，取出滴丸，除去液体石蜡，选丸，即得。
实施例10取银杏叶粗提物为原料，采用高速逆流色谱法(HSCCC)制备银杏叶提取物，采用氯仿甲醇水(4∶3∶2)的溶剂系统，待两相溶剂充分混合后，临用前将其分开，在室温下，下相作流动相，上相作固定相，以2.0ml/min的流速，由首端向尾端洗脱，主机正转，转速为800r/min，固定相保留值为78％，进样2.0ml，定时收集馏分，即得；取上述银杏叶提取物100g和甜味剂0.5g以及300g聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶80)混合；取上述银杏叶提取物、白术提取物和聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶80)加热至88℃，化料100min后，移入滴丸机的滴灌保持在85℃。药液滴至7～8℃的液体石蜡中，取出滴丸，除去液体石蜡，选丸，即得。
实施例11采用酶法制得银杏叶提取物；取上述银杏叶提取物100g，300g聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶99.9)混合；取上述银杏叶提取物和聚乙二醇聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶99.9)加热至90℃，化料40min后，移入滴丸机的滴灌保持在88℃。药液滴至7～8℃的液体石蜡中，取出滴丸，除去液体石蜡，选丸，即得。
实施例12(1)取100g银杏叶提取物与400g聚乙二醇6000混合；(2)银杏叶提取物制备方法，以及产品制造方法同实施例5。
实施例13取银杏叶提取物100g(总黄酮≥24％，萜内酯≥6％)，400g聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶20)混合；银杏叶提取物的制备方法以及产品的制造方法同实施例10。
实施例14取银杏叶提取物100g和400g聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶80)混合；银杏叶提取物的制备方法以及产品的制造方法同实施例9。
实施例14取银杏叶提取物100g与400g聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶99.9)混合；银杏叶提取物的制备方法以及产品的制造方法同实施例7。
实施例15取银杏叶提取物100g，与200g聚乙二醇6000混合；银杏叶提取物的制备方法以及产品的制造方法同实施例11。
实施例16取银杏叶提取物100g，丹参提取物8g和200g聚乙二醇4000混合；银杏叶提取物的制备方法以及产品的制造方法同实施例12。
实施例17取银杏叶提取物100g，其中银杏总黄酮≥24％，萜内酯≥6％，与200g聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶0.01)混合；银杏叶提取物的制备方法以及产品的制造方法同实施例13。
实施例18取银杏叶提取物100g与200g聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶40)混合；银杏叶提取物的制备方法以及产品的制造方法同实施例15。
实施例19取银杏叶提取物100g，与200g聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶80)混合；银杏叶提取物的制备方法以及产品的制造方法同实施例16。
实施例20取银杏叶提取物100g与200g聚乙二醇4000、6000混合物(比例为1∶99.9)混合；银杏叶提取物的制备方法以及产品的制造方法同实施例17。
实施例21取银杏叶提取物100g银杏总黄酮≥24％，萜内酯≥6％，150g淀粉混合；银杏叶提取物的制备方法同实施例11，产品制备按片剂常规制备方法制备。
权利要求
1.一种药物在制备抗阿司匹林低抗的药物中的应用，其中该药组合物由包括下列的原料药制成银杏叶提取物。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的组合物为片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、软膏剂、硬膏剂、喷雾剂、滴丸剂、注射液、粉针剂、滴丸剂。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于该药物组合物在制备治疗阿司匹林抵抗性心脑血管疾病的药物中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所说的阿司匹林抵抗性心脑血管疾病是指使用阿司匹林治疗无效的心脑血管疾病。
5.如权利要求4所述应用，其特征在于所说的阿司匹林抵抗性心脑血管疾病是指使用阿司匹林治疗无效的冠心病、心绞痛。
全文摘要
本发明提供了一种药物的新用途，该组合物是由银杏叶等组成，通过临床试验证明，该药物组合物具有改善阿司匹林抵抗的性质，可在阿司匹林抵抗性心血管疾病中应用，可以提高阿司匹林抵抗性心血管病患者的生命质量。
文档编号A61K9/00GK1872098SQ20051001358
公开日2006年12月6日 申请日期2005年6月1日 优先权日2005年6月1日
发明者李永强, 郑永锋 申请人:天津天士力制药股份有限公司