专利名称：一种肾石通制剂的质量检测控制方法
技术领域：
制药技术背景技术 “肾石通冲剂”为临床治疗肾结石、输尿管结石、膀胱结石、尿道结石的常用中成药，但其制剂质量标准中无含量测定，制剂质量可控性差，采用高效液相法可以更好的控制制剂质量，以确保临床用药的安全性、有效性、可控性。
发明内容
“肾石通”处方来源于《中华人民共和国卫生部标准》中药成方制剂第02册WS3-B-0304-90所载品种“肾石通冲剂”，其制剂常用的剂型有冲剂(颗粒、泡腾颗粒)、硬(软)胶囊剂、(微)丸剂、片剂(还包括咀嚼片、口含片、泡腾片、分散片)等，处方中金钱草、萹蓄含主要成分为槲皮素，因此须对制剂中槲皮素的含量进行测定。以“肾石通丸”为样品，建立高效液相色谱法(中国药典2000年一部附录VI D)测定“肾石通”制剂中槲皮素含量。
“肾石通冲剂”处方金钱草100g 王不留行(炒)100g萹蓄60g延胡索(醋制)30g鸡内金(烫)40g 丹参40g木香20g瞿麦50g 牛膝30g海金砂40g槲皮素 照高效液相色谱法(中国药典2000年一部附录VI D)测定。
金钱草为方中主药，含有槲皮素化合物，另方中萹蓄亦有槲皮素化合物，因此需对制剂中槲皮素含量进行测定，以控制制剂质量。
槲皮素对照品(供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供，批号081-9304。
1.游离槲皮素含量测定色谱条件日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，Diamonsil C18(250×4.6mm)。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以甲醇-0.2％磷酸溶液(55∶45)为流动相，检测波长370nm，理论板数以槲皮素峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品5mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含槲皮素0.02mg)。
供试品溶液的制备取本品适量，研细，取细粉约3g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇溶液40ml，置85℃水浴上回流1小时，冷却至室温，转入50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸2ml于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，过微孔滤膜(0.45um)，取滤液作为供试品溶液。
阴性样品溶液制备取缺金钱草、萹蓄样品，研细，同法制成阴性样品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
在以上色谱条件下，取对照品溶液和供试品溶液进样，记录色谱图，结果见表1。
表1游离槲皮素含量测定
由表1可得，三批制剂中游离槲皮素含量甚少。
2.结合槲皮素含量测定(1)色谱条件日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，Diamonsil C18(250×4.6mm)。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以甲醇-0.2％磷酸溶液(55∶45)为流动相，检测波长370nm，理论板数以槲皮素峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品5mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含槲皮素0.05mg)。
供试品溶液的制备取本品适量，研细，取细粉约3g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇溶液30ml和盐酸1ml，置85℃水浴上回流1小时，冷却至室温，转入50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸2ml于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，过微孔滤膜(0.45um)，取滤液作为供试品溶液。
阴性样品溶液制备取缺金钱草、萹蓄样品，研细，同法制成阴性样品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
在以上条件下，取对照品溶液、供试品溶液、甲醇溶剂、辅料和阴性样品溶液进样，记录色谱图，从色谱图可得，槲皮素和样品中的其它组分可以完全分离，且甲醇溶剂无干扰，阴性样品溶液干扰较少(＜5％)。
(2)色谱系统适用性试验柱效按槲皮素峰计算，色谱系统的理论板数为5000。
分离度测得槲皮素与其前相邻色谱峰的分离度为1.86，槲皮素与相邻的色谱峰可以完全分离(
图15-12)。
拖尾因子测得槲皮素的拖尾因子为1.02，峰形对称。
(3)供试品溶液制备①提取溶剂选择供试品溶液制备取样品(030401)，研细，取细粉约3g(5份)，精密称定，置100ml锥形瓶中，加分别精密加入甲醇、70％甲醇、50％甲醇、30％甲醇、水溶液30ml和盐酸各1ml，置85℃水浴上回流1小时，冷却至室温，转入50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸2ml于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，过微孔滤膜(0.45um)，取滤液作为供试品溶液。
对照品溶液制备取槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml约含0.02mg的溶液。
在选定的色谱条件下，分别取对照品溶液和供试品溶液各10μl进样，记录色谱图，计算含量，结果见表2。
表2 提取溶剂选择
由表2可得，甲醇提取含量最高，故以甲醇为提取溶剂。
②回流(水解)时间考察
供试品溶液制备取样品(030401)，研细，取细粉约3g(5份)，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇30ml和盐酸1ml，置85℃水浴上，分别回流0.5、1.0、1.5、2.0、3.0小时，冷却至室温，转入50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸2ml于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，过微孔滤膜(0.45um)，取滤液作为供试品溶液。在选定的色谱条件下，取供试品溶液各10μl进样，记录色谱图，计算含量，结果见表3。
表3 提取时间考察
由表3可得，回流(水解)提取1小时后，含量不再变化，故回流(水解)提取时间确定为1小时。
③加酸量考察供试品溶液制备取样品(030401)，研细，取细粉约3g(4份)，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇30ml，分别加盐酸1.0、2.0、3.0、4.0ml，置85℃水浴上，分别回流1.0小时，冷却至室温，转入50ml量瓶中用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸2ml于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，过微孔滤膜(0.45um)，取滤液作为供试品溶液。在选定的色谱条件下，取供试品溶液各10μl进样，记录色谱图，计算含量，结果见表4。
表4 加酸量考察
由表4可得，加酸量1～4.0ml，槲皮素无明显差别，故加酸量确定为1ml。
(4)检测波长将阿魏酸对照品溶液于200～400nm范围内进行光谱扫描，在371nm处有最大吸收峰，参照《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》第13册“肝苏颗粒”(第87页)槲皮素含量测定检测波长370nm，故选370nm作为检测波长。
(5)精密度对照品溶液制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.02mg的溶液。
供试品溶液制备取本品适量，研细，取细粉约3g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇溶液30ml和盐酸1ml，置85℃水浴上回流1小时，冷却至室温，转入50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸2ml于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，过微孔滤膜(0.45um)，取滤液作为供试品溶液。
分别取对照品溶液和供试品溶液各10μl，连续进样5次，记录色谱图，测定峰面积，计算平均峰面积值和RSD，结果见表5。
表5 精密度考察
结果表明精密度良好。
(6)稳定性①日内稳定性对照品溶液制备同精密度项下供试品溶液制备同精密度项下在选定色谱条件下，分别于0小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时取对照品溶液和供试品溶液各10μl进样，记录色谱图，测定峰面积值，计算平均峰面积和RSD，结果见表6。
表6 日内稳定性考察
②日间稳定性在选定色谱条件下，分别于0天、1天、2天、3天、15天，取对照品溶液和供试品溶液各10μl进样，记录色谱图，测定峰面积值，计算平均峰面积和RSD，结果见表7。
表7 日间稳定性考察
结果表6、7可得，对照品溶液1天内稳定，供试品溶液在5天内稳定。
(7)重复性对照品溶液制备同精密度项下。
供试品溶液制备同精密度项下，共5份。
取对照品溶液和供试品溶液各10μl进样，测定峰面积值，用外标法计算含量，结果见表8。
表8 重复性测定结果
重复性RSD为1.37％，表明重复性良好。
(8)线性和范围对照品溶液制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇溶解并分别稀释制成每1ml含0.00194mg、0.0194mg、0.194mg的对照品溶液。
分别取对照品溶液0.00194mg/ml进样3μl，对照品溶液0.0194mg/ml进样1μl、3μl、6μl、9μl，对照品溶液0.0194mg/ml进3μl、6μl，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积(Y)对进样量(X，μg)回归，结果见表9。
表9 线性和范围测定结果
回归方程Y＝-59199.57+13917179.62X r＝0.9996以上结果表明，进样量在0.00582～1.1640ug范围内，峰面积与进样量呈良好线性关系。
(9)加样回收试验对照品溶液制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇溶解并分别稀释制成每1ml含0.02mg的对照品溶液。
供试品溶液制备精称取已知含量样品(030401)，分别准确加入对照品溶液(1号、2号、3号样品加槲皮素对照品0.2mg/ml×2ml，4号、5号、6号样品加槲皮素对照品0.2mg/ml×2.5ml，7号、8号、9号样品加槲皮素对照品0.2mg/ml×3ml)适量，置100ml锥形瓶中，加甲醇溶液30ml和盐酸1ml，置85℃水浴上回流1小时，冷却至室温，转入50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸2ml于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，过微孔滤膜(0.45um)，取滤液作为供试品溶液。
在选定色谱条件下，分别取对照品溶液和供试品溶液各10μl进样，测定峰面积值，按外标法计算含量，并计算加样回收率，测定结果见表10。
表10 回收率测定结果
加样平均回收率为97.25％，RSD为1.44％。
(10)样品测定仪器日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以甲醇-0.2％磷酸溶液(55∶45)为流动相，检测波长370nm，理论板数以槲皮素峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇溶解并分别稀释制成每1ml含0.02mg的对照品溶液。
供试品溶液的制备取本品适量，研细，取细粉约3g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇溶液30ml和盐酸1ml，置85℃水浴上回流1小时，冷却至室温，转入50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸2ml于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，过微孔滤膜(0.45um)，取滤液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
按以上方法测10批样品中槲皮素含量见表11。
表11 样品含量测定
由表11可得，10批样品“肾石通微丸”含量均高于0.36mg/g，故规定本品每袋含金钱草、萹蓄以槲皮素(C15O10H7)计，不得少于0.36mg。
具体实施例方式
1、“肾石通冲剂”中槲皮素含量测定槲皮素 照高效液相色谱法(中国药典2000年一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以甲醇-0.2％磷酸溶液(55∶45)为流动相，检测波长370nm，理论板数以槲皮素峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备取槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml约含0.02mg的溶液。
供试品溶液的制备取本品适量，研细，取细粉约3g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇溶液30ml和盐酸1ml，置85℃水浴上回流1小时，冷却至室温，转入50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，过微孔滤膜(0.45um)，取滤液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含金钱草、萹蓄以槲皮素(C15O10H7)计，不得少于0.36mg。
2、“肾石通微丸”中槲皮素含量测定槲皮素 照高效液相色谱法(中国药典2000年一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以甲醇-0.2％磷酸溶液(55∶45)为流动相，检测波长370nm，理论板数以槲皮素峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备取槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml约含0.02mg的溶液。
供试品溶液的制备取本品适量，研细，取细粉约3g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇溶液30ml和盐酸1ml，置85℃水浴上回流1小时，冷却至室温，转入50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸2ml于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，过微孔滤膜(0.45um)，取滤液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含金钱草、萹蓄以槲皮素(C15O10H7)计，不得少于0.36mg。
权利要求
1.在“肾石通”制剂[如冲剂(颗粒、泡腾颗粒)、硬(软)胶囊剂、(微)丸剂、片剂(还包括咀嚼片、口含片、泡腾片、分散片)等及其它制剂]的生产和销售中，用高效液相色谱法测定槲皮素含量，以控制“肾石通”制剂的质量。
2.权利要求1中“肾石通”制剂处方来源于《中华人民共和国卫生部标准》中药成方制剂第02册WS3-B-0304-90所载品种“肾石通冲剂”。
3.在“肾石通冲剂”的生产和销售中，用高效液相色谱法测定槲皮素含量，以控制“肾石通”制剂的质量。
4.在“肾石通微丸”的生产和销售中，用高效液相色谱法测定槲皮素含量，以控制“肾石通”制剂的质量。
全文摘要
本发明涉及一种测定" 肾石通”(《中华人民共和国卫生部标准》中药成方制剂第02册所载品种“肾石通冲剂”)制剂中金钱草、萹蓄含量的方法及其测定的标准，属于中药制剂领域。本发明测定方法及其测定的标准是通过采用高效液相色谱法测定" 肾石通”制剂中槲皮素含量实现；其中检测标准为每次所制剂含金钱草、萹蓄以槲皮素(C
文档编号A61P13/00GK1907340SQ20051002140
公开日2007年2月7日 申请日期2005年8月4日 优先权日2005年8月4日
发明者张文杰 申请人:四川旭华制药有限公司