专利名称：一种由黄芩苷、灵芝和丹参制成的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种由黄芩苷、灵芝或其提取物和丹参或其提取物制成的用于治疗肝炎的药物组合物，及其制备方法，属于医药技术领域。
2、背景技术肝炎是一种严重危害人类健康和生命的常见病、多发病，在我国发病率极高，据有关专家初步估算，我国每年大约有肝炎病人3000万，一亿多名乙肝病毒携带者。目前国内对肝炎的诊断手段较先进，但治疗尚无特效药物，因此开发治疗肝炎的药品，仍是迫切需要解决的问题。
黄芩苷是从中药材黄芩(Scutellariabaicalensis georgi)中提取的一种黄酮类化合物，已收载入国家药品监督管理局国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第10册239页(国家药典委员会编)，其中规定按干燥品计算，含黄芩苷(C21H18O11)不得少于90.0％(供注射用)；不得少于83.0％(供口服用)。黄芩苷原料目前国内有多个厂家生产上市。黄芩苷具有广泛的药理作用，主要药理作用有(1)抗菌作用。黄芩苷是黄芩中主要的抗菌活性成份，抗菌谱广，可抑制多种细菌的繁殖与生长。(2)抗炎作用。有对抗组织胺，抑制炎症水肿，降低毛细血管通透性的作用，能抑制炎症反应的红、肿、热、痛。(3)利尿作用。可提高实验动物的尿生成速度。(4)降压作用。可引起多种实验动物的血压下降。(5)保肝作用。本品对乙型肝炎表面抗原、e抗原、核心抗原有较显著的保护作用，对乙型肝炎病毒DNA复制也有抑制作用；用药后能显著降低谷丙转氨酶，对肝脏有较好的保护作用。本品降谷丙转氨酶作用较好，用药期间可见乙肝表面抗原阳性度下降，但不巩固。
灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Ley-ss.ex Fr.)Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子实体。性甘，平，归心、肺、肝、肾经。具有补气安神，止咳平喘之功效，主要用于眩晕不眠，心悸气短，虚劳咳嗽。灵芝是家喻户晓的中药，俗称“仙草”。始载于《神农本草经》，被认为能“益心气”“安精魂”“补肝益气”“坚筋骨”，列为上品。《本草纲目》认为灵芝有“滋补强壮”“延年益寿”“利关节”“治耳聋”等功效。灵芝能够扶正固本，增强免疫功能，提高机体免疫力，在整体上双向调节人体机能平衡，调节机体内部活力，调节人体新陈代谢机能，提高自身免疫力，促进内脏或器官机能正常化。灵芝的主要有效成分为灵芝多糖，灵芝多糖有显著的增强免疫的作用。
丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bage.的干燥根及根茎。味苦，性微寒，归心、肝经，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的功效。丹参在治疗慢性乙型肝炎方面的作用机理主要包括(1)凉血解毒抗菌消炎，减轻或消除肝实质炎症，同时帮助肝脏恢复解毒功能；(2)改善肝内血液循环，纠正肝脏的微循环障碍，活血化瘀使肝脾回缩；(3)调整机体免疫功能，消除免疫复合物对肝脏的损害；(4)促进肝细胞再生，抗肝纤维化；(5)恢复肝功能。丹参水溶性成分主要是以丹参素为基本结构的酚酸类化合物，丹参总酚酸化合物具有很强的抗氧化作用，可以清除超氧阴离子和羟自由基，抑制脂质过氧化反应，进而减轻肝损伤。
目前，利用黄芩苷、灵芝和丹参的相互作用，配伍组方，制备用于治疗急慢性肝炎的药物，尚未见报道。
3、发明内容为了满足临床需要，更好地治疗肝炎，提高人民健康水平，本发明提供了一种新的药物组合物及其制备方法。
本发明的药物组合物主要由黄芩苷、灵芝和丹参制成，三者的重量配比为黄芩苷50～1250份、灵芝500～24000份、丹参1000～90000份；优选为黄芩苷125～50份、灵芝8000～32000份、丹参5000～45000份；黄芩苷250份、灵芝6000份、丹参15000份。
本发明的药物组合物中的灵芝和丹参可以用适宜的溶剂和方法制备得到提取物，总提取物再与黄芩苷和药学上可接受的辅料混合制成任一制剂，总提取物中所含的主要有效成分为灵芝多糖和丹参总酚酸。总提取物含量最好不低于30％。
灵芝可以用适宜的溶剂经过提取加工得到灵芝多糖，提取溶剂优选为水或乙醇，灵芝的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。如可通过水提醇沉的方法制备得到灵芝多糖，还可以通过根据文献方法制备。
本发明组合物中以多糖为主要有效成分的灵芝的制备工艺如下取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水3倍量润湿过夜，次日煎煮三次，第一次3小时加水12倍量，第二次2小时加水10倍量，第三次1小时加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06，放冷，加乙醇使含醇量为65％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加乙醇使含醇量为80％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得。
通过本工艺制备的灵芝多糖中多糖的含量不低于50％，得率为0.5～3％。
除采用上述工艺外，灵芝还可通过以下工艺制备，但不仅限于下述工艺工艺一取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水煎煮三次，第一次3小时加水12倍量，第二、三次2小时加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.03～1.08，放冷，加乙醇使含醇量为65％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加乙醇使含醇量为80％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的灵芝多糖中多糖的含量不低于30％，得率为5～8％。
工艺二取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水3倍量润湿过夜，次日煎煮二次，第一次3小时加水12倍量，第二次2小时加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06，放冷，加乙醇使含醇量为70％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加乙醇使含醇量为85％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的灵芝多糖中灵芝多糖的含量不低于40％，得率为3～6％。
丹参可以用适宜的溶剂经过提取加工得到丹参总酚酸，提取溶剂优选水或乙醇，丹参的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。如可通过水提醇沉的方法制备得到丹参总酚酸，还可以通过根据文献方法制备。
本发明药物组合物中以丹参总酚酸为主要有效成分的丹参的优选制备工艺如下取丹参，粉碎成粗粒，加水煎煮三次，第一次2小时，加水12倍量，第二、三次各1.5小时，加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.17～1.20(80℃)。加乙醇沉淀二次，第一次使含醇量为75％，第二次使含醇量为85％，各静置24h，回收乙醇至相对密度为1.17～1.20(80℃测)，喷雾干燥，即得。
通过本工艺制备的丹参总酚酸得率为1～3％，丹参总酚酸的含量不低于50％，丹酚酸B的含量不低于1.5％。
丹参还可通过下述工艺制备，但不仅限于下述工艺工艺一取丹参，加水煎煮两次，各2小时，第一次加水12倍量，第二次加水10倍量，合并煎液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.17～1.20(80℃)，加乙醇沉淀使含醇量达75％，静置24h，回收乙醇至相对密度为1.23～1.28(80℃)，真空干燥(50℃)，即得。通过本工艺制备的丹参总酚酸得率2～4％，丹参总酚酸的含量不低于40％，丹酚酸B的含量不低于0.8％。
工艺二取丹参，加85％乙醇回流2小时，滤过，滤液减压回收乙醇至稠膏；药渣加水(10倍量)煎煮1小时，滤过，滤液与上述稠膏合并，减压浓缩至适量，50℃真空干燥，粉碎，过筛，即得。通过本工艺制备的丹参总酚酸得率为3～5％，丹参总酚酸的含量不低于30％，丹酚酸B的含量不低于0.3％。
上述药物组合物，还可以用灵芝多糖代替灵芝、丹参总酚酸代替丹参投料制得，按照提取物相对于药材的得率计算，其重量份数为黄芩苷50～1250份、灵芝多糖7.5～360份、丹参总酚酸30～1800份；优选为黄芩苷125～500份、灵芝多糖15～180份、丹参总酚酸100～900份；最佳为黄芩苷250份、灵芝多糖30～150份、丹参总酚酸150～450份。
上述药物组合物中，灵芝多糖的含量优选为不低于30％，最好不低于50％；丹参总酚酸的含量优选为不低于30％，最好不低于50％，其中丹酚酸B的含量优选为不低于0.3％，最好不低于1.5％。灵芝多糖和丹参总酚酸可以通过上述工艺制得。
以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为单位，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比的比例不变。
以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。
本发明药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份范围内都具有较好疗效。
本发明提供了一种用于具有良好的保肝作用的药物，可用于各种急慢性肝炎。
本发明的药物组合物可以加一种或多种药学上可接受的载体，以口服、鼻吸入或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、软胶囊、分散片、口服液、颗粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油悬浮剂等，如水针、冻干粉针、无菌粉针、输液等。本组合物的优选的剂型是注射剂或口服制剂。
本发明的药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
本发明的药物组合物在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯-80等增溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本发明的组合物具有以下优点(1)本发明提供了一种新的用于治疗肝炎的药物组合物，满足了临床需要。
(2)首次通过药效学实验研究证明本发明的药物组合物对醋氨酚、四氯化碳所致的小鼠急性肝损伤有显著的保护作用，可以显著抑制鸭乙肝病毒的繁殖，可显著对抗四氯化碳所致的大鼠肝纤维化。三药具有协同增效作用，疗效显著，产生了意想不到的效果。
(3)对本发明的药物组合物各配比进行了药效学研究，得出了本发明组合物的最优配比。
(5)本发明中的原料药除黄芩苷外，灵芝、丹参可以以药材或提取物直接投料，制备工艺简单，可以使不同批次药品间质量差异小，药品质量更均匀稳定。
(5)通过特殊安全性试验和稳定性实验证实，本发明的药物组合物注射剂安全稳定。
(6)黄芩苷具有良好的抗肝炎作用，灵芝和丹参作辅助药可显著提高抗肝炎活性，合并用药疗效确切，具有广泛的应用前景。
以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果。黄芩苷、灵芝和丹参的组合物以下简称HLD组合物。实验例中所用灵芝多糖取自实施例1，丹参总酚酸取自实施例2。
实验例1 HLD组合物合并用药药效研究供试品0.9％生理盐水，自制；黄芩苷注射液，自制，2ml∶250mg；灵芝注射液，自制，2ml，含灵芝多糖97.2mg(相当于灵芝6g)；丹参注射液，自制，5ml，含丹参总酚酸300.0mg(相当于丹参15g)；HLD组合物注射液(黄芩苷+灵芝+丹参)不同配比，自制，制备方法参照实施例3。
实验动物ICR小鼠，体重18～25g，雌雄各半。
实验方法取小鼠140只，随机分成14组，每组10只，组别见下表。空白对照组和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg鼠重，每日1次，连续10d；给药组尾静脉注射给药，每日1次，剂量见下表，连续10d。空白对照组在最后一次尾静脉注射6h后腹腔注射生理盐水。模型组和给药组在最后一次尾静脉注射6h后腹腔注射醋氨酚300mg/kg鼠重，各组在腹腔注射生理盐水及醋氨酚16h后断头，取血液、肝脏，进行生化指标血清ALT(谷丙转氨酶)和肝组织LPO(过氧化脂质)的测试，结果见表1。
表1HLD组合物对醋氨酚损伤小鼠肝组织ALT和LPO的影响
与空白对照组比较，◇◇P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01与黄芩苷组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与灵芝组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与丹参组比较，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01。
结论与空白对照组相比，模型组ALT和LPO的活性显著升高，差异极显著(P＜0.01)，说明造模可靠。与模型组相比，黄芩苷组、灵芝组、丹参组和HLD组合物各配比组ALT和LPO的活性明显降低(P＜0.05，P＜0.01)，说明各药均对醋氨酚所致小鼠肝损伤有保护作用。其中HLD组合物各配比组疗效更好(P＜0.01)，均优于单用黄芩苷、灵芝和丹参，说明黄芩苷、灵芝和丹参三药合用，有协同增效作用。HLD组合物各配比组中，均以黄芩苷+灵芝+丹参(250mg+6g+15g)组疗效最为显著。
实验例2 HLD组合物对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用供试品0.9％生理盐水，自制；黄芩苷注射液，自制，2ml∶ 250mg；HLD组合物注射液(黄芩苷+灵芝+丹参250mg+6g+15g)，自制，制备方法参照实施例3。
实验动物ICR小鼠，体重22～26g，雌雄各半。
实验方法取小鼠60只，随机分为6组，分别为空白对照组、模型组、黄芩苷组、HLD组合物注射液低、中、高剂量组，每组10只。空白对照组和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg鼠重，每日1次，连续7d；给药组尾静脉注射给药，每日1次，剂量见下表，连续7d。空白对照组在最后一次尾静脉注射2h后腹腔注射花生油10ml/kg，其余各组动物均腹腔注射0.12％CCl4花生油溶液10ml/kg。16h后断头处死动物，取血清测试ALT、AST的值。断头取血后，立即剖腹取出肝脏、脾脏，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精确称重肝脏、脾脏的重量，计算肝指数和脾指数。结果见表2。
表2HLD组合物对CCl4所致急性肝损伤小鼠肝、脾指数和血清ALT、AST含量的影响
与空白对照组比较◇P＜0.05，◇◇P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与黄芩苷组比较，#P＜0.05，##P＜0.01结论CCl4模型组小鼠肝指数、脾指数较正常对照组小鼠数值显著增高(P＜0.05)，CCl4模型组小鼠血清ALT、AST值较正常对照组小鼠数值极显著增高(P＜0.01)，说明小鼠注射CCl4花生油溶液后肝脏损伤，造模成功，模型稳定可靠。与模型组相比，HLD组合物中、高剂量组小鼠肝指数、脾指数显著降低(P＜0.05)，肝、脾肿大减轻，HLD组合物各剂量组血清ALT、AST值明显降低(P＜0.05或P＜0.01)，说明本发明组合物对CCl4所致急性肝损伤有保护作用。HLD组合物各剂量组疗效均优于单用黄芩苷，说明黄芩苷、灵芝和丹参三药合用，有协同增效作用，其中中、高剂量组疗效更好(P＜0.05或P＜0.01)。
实验例3 HLD组合物抗鸭乙肝病毒作用供试品0.9％生理盐水，自制；注射用阿昔洛韦，石药集团中诺药业(石家庄)有限公司；黄芩苷注射液，自制，2ml∶ 250mg；HLD组合物注射液(黄芩苷+灵芝+丹参250mg+6g+15g)，自制，制备方法参照实施例3。
实验动物市售1日龄北京鸭；DHBV(鸭乙型肝炎病毒)阳性血清，复旦大学医学院微生物学教研室。
实验方法动物模型北京鸭经足静脉注射0.2mlDHBV阳性血清，7d后取血，分离血清，-20℃保存待检。
药物治疗筛选出感染成功的阳性鸭36只，随机分为6组，每组6只，分别为空白对照组、黄芩苷组、阳性对照组、HLD组合物注射液低、中、高剂量组，每组6只。空白对照组每日灌胃生理盐水20ml/kg，每日2次，连续14d；给药组灌胃给药，每日2次，剂量见下表，连续14d。阳性药物作为治疗对照组，以阿昔洛韦(ACV)按100mg/kg灌胃，2次/d，给药2周。分别用于药前(1d)、用药第7天(T7)，用药第14天(T14)和停药后第7天(P7)。自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-20℃保存待检。采用DHBV-DNADotBlot法，以杂交斑点吸光度值(A)作为标本DHBV-DNA水平值。结果见表3。
表3HLD组合物对DHBV-DNA的抑制作用
注与空白对照组比较◇P＜0.05，◇◇P＜0.01；与给药前相比@P＜0.05，@@P＜0.01。
结论阳性对照(阿昔洛韦)组在给药后第7天和第14天，与给药前及与空白对照组比较，差异有极显著性(P＜0.01)，但停药后又显著升高，与给药前比较差异无显著性(P＞0.05)。不同剂量HLD组合物均对DHBV有抑制作用，且停药后无反跳，其中中、高剂量组抑制作用更为明显。HLD组合物各给药组疗效均优于单用黄芩苷，说明黄芩苷、灵芝和丹参三药合用，有协同增效作用。
实验例4 HLD组合物抗大鼠肝纤维化作用供试品0.9％生理盐水，自制；黄芩苷注射液，自制，2ml∶250mg；HLD组合物注射液(黄芩苷+灵芝+丹参250mg+6g+15g)，自制，制备方法参照实施例3。
实验动物Wistar大鼠，体重180～230g，雄性。
实验方法取健康大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每日1次，共10周，作为对照组。肝纤维化模型组应用40％CCl4花生油溶液按3ml/kg皮下注射，每周2次，共8周，诱导肝纤维化模型。取肝纤维化模型大鼠80只，随机分为8组，分别为模型组、黄芩苷组、HLD组合物注射液低、中、高剂量组，每组10只。除对照组外，其余各组继续以40％CCl4花生油溶液3ml/kg皮下注射，每日1次。黄芩苷组、HLD组合物注射液低、中、高剂量组同时灌胃给药相应药物，剂量见下表。继续给药2周。10周后宰杀大鼠，无菌操作取血2ml，分离血清，-20℃保存，用放射免疫法检测肝纤维化指标透明质酸(HA)和层粘蛋白(LN)；用生化法检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)，采用全自动生化分析仪进行检测。结果见表4。
结论与空白对照组比较，模型组大鼠血清ALT、AST、HA、LN含量有显著性差异，说明模型稳定可靠。黄芩苷、HLD组合物治疗后肝纤维化大鼠血清ALT和AST均低于模型组，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)，提示黄芩苷、HLD组合物有降酶和保护肝功能的作用；黄芩苷、HLD组合物治疗后血清HA和LN水平均显著低于模型组，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)，提示黄芩苷、HLD组合物均可改善肝纤维化血清学指标，具有抗肝纤维化的作用。其中，HLD组合物组疗效优于黄芩苷组，提示黄芩苷、灵芝和丹参三药合用，有协同增效作用。
表4HLD组合物对CCl4所致肝纤维化大鼠的血清学指标的影响
与空白对照组比较◇◇◇P＜0.001；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与黄芩苷组比较，#P＜0.05。
实验例5 小鼠注射给药急性毒性实验(1)实验方法供试品HLD组合物注射液，剂型水针，规格10ml，来源于实施例3；受试动物小鼠，每组雌雄各5只，雄性体重25～28g，雌性体重21～24g。
给药途径静脉注射、腹腔注射。
观察项目死亡数、一般状态、体重、剖检、半数致死剂量。
(2)实验结果按照急性毒性实验要求进行预试，腹腔注射及静脉注射两给药途径皆无法测出药物的半数致死量，也未见明显的毒性反应，故进行一日内最大给药量实验。给药剂量尾静脉注射HLD组合物注射液0.2ml/10g，腹腔注射HLD组合物注射液0.2ml/10g，一日2次。
死亡数未出现死亡。
一般状态未见异常变化。
体重于给药前1天，给药日，给药后1、3、7、14天测量；未见异常变化。
剖检心、肝、肺、肾等组织未见异常变化。
(3)结论本实验中未出现死亡，推测HLD组合物注射液对雌雄小鼠静脉和腹腔注射给药的最大耐受量均为0.4ml/10g，相当于50kg体重人日最大用量20ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。
实验例6 HLD组合物注射液稳定性实验供试品HLD组合物注射液，剂型水针，规格10ml，来源于实施例3；考察项目性状、pH值、澄明度。
长期稳定性实验方法及结果将本品组合物注射液置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置6个月、12个月，各项指标均无明显变化，实验结果表明HLD组合物注射液长期放置基本稳定。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例3～12所用的灵芝多糖取自实施例1，丹参总酚酸取自实施例2。
实施例1 灵芝多糖的制备取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水3倍量润湿过夜，次日煎煮三次，第一次3小时加水12倍量，第二次2小时加水10倍量，第三次1小时加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06，放冷，加乙醇使含醇量为65％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加乙醇使含醇量为80％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得。
分别制备三批提取物，提取物得率和含量见下表5。
鉴别取本品50mg，加乙醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取灵芝对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
含量测定对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
标准曲线的制备分别静密吸取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置10ml具塞试管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液(静密称取蒽酮0.1g，加80％硫酸溶液100ml使溶解，摇匀)6ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放入水浴中冷却15分钟，以相应的溶剂为空白，在625nm下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备取本品20mg，置50ml量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得。
测定法精密吸取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线下测定方法，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液的葡萄糖的重量，计算，即得。
根据上述工艺，制得灵芝多糖三批样品，其得率和含量见下表。由结果可以看出，通过本工艺制备的黄芪提取物中灵芝多糖的提取物得率为0.5～3％，含量不低于50％。
表5灵芝多糖得率和含量测定结果
实施例2 丹参总酚酸的制备取丹参，粉碎成粗粒，加水煎煮三次，第一次2小时，加水12倍量，第二、三次各1.5小时，加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.17～1.20(80℃)。加乙醇沉淀二次，第一次使含醇量为75％，第二次使含醇量为85％，各静置24h，回收乙醇至相对密度为1.17～1.20(80℃测)，喷雾干燥，即得。
鉴别取本品0.2g，研细，加70％甲醇25ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加70％甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹酚酸B对照品，加70％甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。用薄层色谱法测定，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2∶3∶4∶0.5∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定总酚酸含量测定比色法对照品溶液的制备精密称取于105℃干燥至恒重的原儿茶醛对照品1mg，加水溶解，定容至100ml。供试品溶液的制备精密称取样品50mg，置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度精密量取0.1ml置25ml容量瓶中加乙醇5ml，加入0.3％十二烷基硫酸钠2ml，0.6％铁氰化钾一0.9％三氧化铁(临用前等量混合)1ml，如此暗处放置5min，加入0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，暗处放置20min后，置lena比色池中，720nm处测定。
丹酚酸B的含量测定高效液相色谱法色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)为流动相；检测波长为286nm。理论塔板数按丹参素峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加75％甲醇制成每1ml含0.14mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，加热回流1h，取出，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
根据上述工艺，制得丹参总酚酸三批样品，其含量和得率见下表6。由结果可以看出，通过本工艺制备的丹参总酚酸得率为1～3％，丹参总酚酸的含量不低于50％，丹酚酸B的含量不低于1.5％。
表6丹参总酚酸得率及丹参总酚酸和丹酚酸B的含量
实施例3 HLD组合物水针剂的制备处方黄芩苷 250.0g灵芝多糖97.2g(相当于灵芝6kg)丹参总酚酸 300.0g(相当于丹参15kg)聚山梨酯80 50g注射用水加至1000ml
共制备 1000支注中药总提取物中主要有效成分总含量为61.9％。
制备工艺1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将灵芝多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将丹参总酚酸和黄芩苷加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。
10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。
11)灯检，成品全检，包装入库。
实施例4 HLD组合物粉针剂的制备处方黄芩苷250.0g灵芝多糖 97.2g(相当于灵芝6kg)丹参总酚酸300.0g(相当于丹参15kg)聚山梨酯8020g甘露醇400g无菌注射用水 加至5000ml
共制备1000支注中药总提取物中主要有效成分总含量为61.9％。
制备工艺1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将灵芝多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将丹参总酚酸和黄芩苷加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。合并上述溶液，补加无菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.22um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时。
9)冻干结束，压塞，轧盖。
10)成品全检，包装入库。
实施例5 HLD组合物氯化钠输液的制备处方黄芩苷250.0g灵芝多糖 97.2g(相当于灵芝6kg)丹参总酚酸300.0g(相当于丹参15kg)聚山梨酯8020g氯化钠900g注射用水 加至100000ml
共制备1000瓶注中药总提取物中主要有效成分总含量为61.9％。
制备工艺
1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将灵芝多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将丹参总酚酸和黄芩苷加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。将氯化钠用适量注射用水溶解完全，合并上述溶液，补加注射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
5)经0.45um的微孔滤膜精滤。
6)检查溶液的澄明度，半成品化验。
7)灌装于100ml的输液瓶中。
8)115℃热压灭菌30分钟。
9)灯检，成品全检，包装入库。
实施例6 HLD组合物葡萄糖输液的制备处方黄芩苷250.0g灵芝多糖 97.2g(相当于灵芝6kg)丹参总酚酸300.0g(相当于丹参15kg)聚山梨酯8020g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml
共制备1000瓶注中药总提取物中主要有效成分总含量为61.9％。
制备工艺1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将灵芝多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将丹参总酚酸和黄芩苷加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。合并上述溶液，补加注射用水至全量。将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例7 HLD组合物片剂的制备处方黄芩苷250.0g灵芝多糖 97.2g(相当于灵芝6kg)丹参总酚酸300.0g(相当于丹参15kg)淀粉 40g微晶纤维素40g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁 5.0g羧甲淀粉钠10.0g
共制备2000片注中药总提取物中主要有效成分总含量为61.9％。
制备工艺1)将灵芝多糖、黄芩苷和丹参总酚酸分别粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将黄芩苷、丹参总酚酸、灵芝多糖、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的片重压片。
10)成品全检，包装入库。
实施例8 HLD组合物胶囊剂的制备处方黄芩苷 250.0g灵芝多糖 97.2g(相当于灵芝6kg)丹参总酚酸 300.0g(相当于丹参15kg)淀粉 20.0g微晶纤维素 60.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁 5.0g
共制备2000粒注中药总提取物中主要有效成分总含量为61.9％。
制备工艺1)将灵芝多糖、黄芩苷和丹参总酚酸分别粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将黄芩苷、丹参总酚酸、灵芝多糖、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的装量装入胶囊。
10)成品全检，包装入库。
实施例9 HLD组合物颗粒剂的制备处方黄芩苷 250.0g灵芝多糖 97.2g(相当于灵芝6kg)丹参总酚酸 300.0g(相当于丹参15kg)糖粉 500.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备 1000包注中药总提取物中主要有效成分总含量为61.9％。
制备工艺1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将灵芝多糖、黄芩苷和丹参总酚酸分别粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将灵芝多糖、黄芩苷、丹参总酚酸与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材，4)过20目筛制颗粒。
5)颗粒在60℃的条件下烘干。
6)干颗粒过18目筛整粒。
7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。
8)包装，成品全检，包装入库。
实施例10 HLD组合物滴丸剂的制备处方黄芩苷250.0g灵芝多糖 97.2g(相当于灵芝6kg)丹参总酚酸300.0g(相当于丹参15kg)聚乙二醇6000 1000g注中药总提取物中主要有效成分总含量为61.9％。
制备工艺将灵芝多糖、黄芩苷和丹参总酚酸粉碎过100目筛后备用。将聚乙二醇6000在水浴中加热熔融，待全部熔融后加入灵芝多糖、黄芩苷和丹参总酚酸，搅拌溶解，60目筛过滤，保持60℃滴入冷至10℃以下的液体石蜡中制成丸。
实施例11 HLD组合物软胶囊剂的制备处方黄芩苷250.0g灵芝多糖 97.2g(相当于灵芝6kg)丹参总酚酸300.0g(相当于丹参15kg)大豆油300.0g大豆磷脂 40g蜂蜡 40g
共制备2000粒注中药总提取物中主要有效成分总含量为61.9％。
制备工艺将处方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蜡加热熔融，混匀，放冷，加入黄芩苷、丹参总酚酸、灵芝多糖研匀，压制成软胶囊即可。
实施例12 HLD组合物口服液体剂的制备处方黄芩苷250.0g灵芝多糖 97.2g(相当于灵芝6kg)丹参总酚酸300.0g(相当于丹参15kg)聚山梨酯8020g苯甲酸钠 15g甜菊甙20g纯化水加至10000ml
共制备1000支注中药总提取物中主要有效成分总含量为61.9％。
制备工艺1)将灵芝多糖加入配液量30％的水中加热搅拌溶解完全。将丹参总酚酸和黄芩苷加入少量水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。合并上述溶液，补加纯化水至全量。
2)将苯甲酸钠和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述两个溶液，补加水至全量。
4)过0.8um的微孔滤膜过滤。
5)半成品化验。
6)灌装。成品全检，包装入库。
权利要求
1.一种药物组合物，其特征在于该组合物主要由下列重量份的原料药制成黄芩苷50～1250份、灵芝500～24000份、丹参1000～90000份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于各原料药的重量份数为黄芩苷125～500份、灵芝8000～32000份、丹参5000～45000份。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于各原料药的重量份数为黄芩苷250份、灵芝6000份、丹参15000份。
4.如权利要求1-3所述的任一药物组合物的制备方法，其特征在于，其中的灵芝和丹参可以用适宜的溶剂和方法制备得到提取物，总提取物再与黄芩苷和药学上可接受的辅料混合制成任一制剂，总提取物中所含的主要有效成分为灵芝多糖和丹参总酚酸。
5.如权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，总提取物中的主要有效成分的总含量不低于30％。
6.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该组合物还可以由下列原料药制成黄芩苷、灵芝多糖和丹参总酚酸，其重量配比为黄芩苷50～1250份、灵芝多糖7.5～360份、丹参总酚酸30～1800份。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其原料药的重量配比为黄芩苷125～500份、灵芝多糖15～180份、丹参总酚酸100～900份。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其原料药的重量配比为黄芩苷250份、灵芝多糖30～150份、丹参总酚酸150～450份。
9.如权利要求6-8所述的任一药物组合物，其特征在于，所述的灵芝多糖的含量不低于30％；所述的丹参总酚酸的含量不低于30％，其中丹酚酸B的含量不低于0.3％。
10.如权利要求1-3、6-8所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物可以与药学上可接受的辅料混合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，公开了一种药物组合物及其制备方法，该药物组合物主要由黄芩苷、灵芝和丹参制成，其重量配比为黄芩苷50～1250份、灵芝500～24000份、丹参1000～90000份。该组合物还可以由黄芩苷、灵芝多糖和丹参总酚酸制成，其重量配比为黄芩苷50～1250份、灵芝多糖7.5～360份、丹参总酚酸30～1800份。该药物组合物可以制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。该药物组合物具有良好的保肝作用，可用于各种急慢性肝炎。
文档编号A61P31/14GK1977888SQ20051004541
公开日2007年6月13日 申请日期2005年12月5日 优先权日2005年12月5日
发明者黄振华 申请人:黄振华