专利名称：抗衰老组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及能够抑制(preventing)或推迟(retarding)衰老的组合物。
背景技术：
到目前为止，抗衰老作用被认为有两个方面。一个是对于表观衰老，即皮肤衰老的作用，具体地其包括改善皱纹和雀斑。该作用可能包括保持皮肤弹性和湿度等的作用。主要地，外用的制品例如化妆品要求了这些作用，并且一些产品确实被证明在人类中有效。另一个是对于除去皮肤衰老之外的身体衰老(bodily aging)的作用。对于在抑制身体衰老方面有效的产品中，可能提及了抗氧化活性类的添加剂。但是，当进行仔细地研究后发现，这些添加剂所提供的抗衰老作用是仅仅由体外得到的效果推知的，而不是由其在体内得到的效果说明的。在这些添加剂所显示的体外效果中，例如，有脂质超氧化的抑制效果、对于高半胱氨酸形成的抑制效果等，其中所述高半胱氨酸在体内的含量可能随着衰老而增加。但是，在体外实验中的这些作用与体内效果之间的正性关系还没有被证实。对于上述用于抗皮肤衰老的化妆品等而言，之所以氧化应激对皮肤衰老方面的影响很大，在某种程度上是由于紫外线将引起皮肤退化的这一事实。但是现在认为，对于生体其本身的衰老被仅仅认为成与抗氧化活性是类似的，这是不够的。虽然在Japanese KohyoPublication 2002-513746中已经公开了包含泛醌(氧化型辅酶Q)的皮肤衰老抑制剂，但是该文献没有关于还原辅酶Q的描述或暗示。而且，由衰老导致的记忆疾病的治疗方法在本领域中也是已知的，其中该方法包括给予卡尼汀(Carnitine)，任选与辅酶Q和/或肌酸联用(Japanese Kohyo Publication2003-513039)。但是，在该方法中卡尼汀是必要成分。该公开根本没有提及还原型辅酶Q10或抗衰老；另外，其也没有包含任何关于抗精神疾病效果的具体报导。
氧化型辅酶Q10在销售中被作为抗衰老的添加剂。然而，在事实上，其效果并没有被阐述，而是仅仅由辅酶Q10的抗氧化效果推知的。而且，还原型辅酶Q10由于其易于被氧化而至今没有在商业中应用；在本领域中，如同氧化型辅酶Q10一样，并不知晓还原型辅酶Q10实际的抗氧化效果。
发明详述本发明的一个目的在于，提供能够抑制(推迟)衰老的物质或组合物。
本发明者们为解决上述问题，进行了深入的研究，其结果在本发明中首次发现还原型辅酶Q10具有显著的衰老抑制(推迟)效果。
因此，本发明涉及抗衰老组合物，其包含用下述式(1)(式中，n表示1～12的整数)表示的还原型辅酶Q作为活性成分 辅酶Q是在从细菌到哺乳动物的生物体中广泛分布的必要成分，并且已知其在生物体的细胞中作为线粒体的电子转运系统的成分。辅酶Q在线粒体的电子转运系统中通过重复氧化还原循环而起到电子载体的功能。另外，抑制还原型辅酶Q显示抗氧化剂的活性。在人体中，辅酶Q的侧链具有10重复结构的辅酶Q10是主要成分。如上所述，还原型辅酶Q10在体外中显示抗氧化剂活性，但是氧化型辅酶Q10没有显示抗氧化剂活性。然而，据信氧化型辅酶Q10通过体内的还原酶而被转化为还原型。
作为辅酶Q10的重要特征，可以提及其高的安全性。据报道，在大鼠的毒性测验中，即使按照每天1,200mg/kg/天给药52周也没有毒性作用(K.D.Williams et al.，J.Agric.Food Chem.47，3756-3763，1999)。如果把1,200mg/kg/天的计量转化为人用计量(体重50kg)时，对映于60g/天。由于在欧洲和美国将辅酶Q10作为健康食品的通常计量为100～300mg/天，可以证明辅酶Q10是高度安全的添加材料。
辅酶Q包含由下式(1)表示的还原型辅酶Q和由下式(2)表示的氧化型辅酶Q
在式(1)中，n表示1～12的整数， 在式(2)中，n表示1～12的整数。
作为获得氧化型辅酶Q和还原型辅酶Q的方法，没有特别的限定。可以采用例如，通过合成、发酵、从天然物质中提取等以往已知的方法得到辅酶Q，然后通过色谱法从馏出液中浓缩氧化型辅酶Q或还原型辅酶Q。想要得到氧化型辅酶Q时，可以通过已知的方法得到。想要得到还原型辅酶Q时，可以视需要向上述氧化型辅酶Q中添加硼氢化钠、连二亚硫酸钠(低亚硫酸钠)等通常的还原剂，通过常规方法还原上述氧化型辅酶Q，制成还原型辅酶Q之后，通过色谱法进行浓缩。另外，通过使现有的高纯度氧化型辅酶Q与上述还原剂反应的方法也可以得到还原型辅酶Q(上述方法，例如，Carpino，L.A.et al，1989，J.Org.Chem.54，3303-3310)。
本发明的抗衰老组合物是包含还原型辅酶Q作为活性成分的组合物。
只要本发明的抗衰老组合物包含还原型辅酶Q作为活性成分，对于辅酶Q没有特别的限制，其可以仅仅由还原型组成或者由与氧化型一起的混合物组成。
可以在本发明中使用的辅酶Q如上述式(1)和(2)表示，可以使用侧链的重复单元(式中为n)为1～12的辅酶Q。其中，特别优选侧链重复单元为10的辅酶Q(n在上述式(1)和(2)中为10)，即辅酶Q10。
当辅酶Q是还原型和氧化型的混合物时，还原型辅酶Q的含量相对于辅酶Q全体的含量，优选不低于40重量％，更优选不低于50重量％。通常，上限优选为不高于99.5重量％，但是也可以不高于95重量％。
在本发明的抗衰老组合物中，相对于全部组合物，还原型辅酶Q的含量优选为0.001～99重量％，更优选为0.01～99重量％，更加优选为0.1～50重量％。
本发明的抗衰老组合物除了包含辅酶Q以外可以包含从医疗或食品卫生学中可接受的各种添加剂。当将其用于测定(measure)各种疾病时，可以联合使用用于治疗所述疾病的药剂。
作为上述添加剂没有特别的限定，可以举出，例如赋形剂/稀释剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂、包衣剂、着色剂、抗凝剂、吸收促进剂、助溶剂、稳定剂、保健食品原料、营养补充食品原料(补充原料)等。
作为上述赋形剂/稀释剂，没有特别的限制，可以举出，例如，糖、乳糖、葡萄糖、玉米淀粉、甘露糖醇、结晶纤维素、磷酸钙、硫酸钙等。
作为上述崩解剂，没有特别的限制，可以举出，例如，淀粉、琼脂、柠檬酸钙、碳酸钙、碳酸氢钠、糊精、结晶纤维素、羧甲基纤维素、西黄蓍胶等。
作为上述润滑剂，没有特别的限定，可以举出，例如，滑石、硬脂酸镁、聚乙二醇、二氧化硅、氢化植物油等。
作为上述粘合剂，没有特别的限定，可以举出，例如，乙基纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、西黄蓍胶、紫胶、明胶、阿拉伯树胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、山梨糖醇等。
作为上述包衣剂，没有特别的限定，可以举出，阿拉伯树胶、Opadry、夏枯草(prunella spike)、蓖麻蜡、羧基乙烯基聚合物、羧甲纤维素、水合二氧化硅、硅酸镁、醋酸乙烯树脂、硬脂酸、鲸蜡醇、羟丙基甲基纤维素等。
作为上述着色剂，没有特别的限定，可以使用例如可以添加在医药制品或食品中的物质。
作为上述抗凝剂，没有特别的限制，可以举出，例如，硬脂酸、滑石、轻质硅酸酐、水合二氧化硅等。
作为上述吸收促进剂，没有特别的限制，可以举出，例如，高级醇类、高级脂肪酸类、甘油脂肪酸酯等表面活性剂等。
作为上述助溶剂，没有特别的限制，可以举出，例如，富马酸、琥珀酸、苹果酸等有机酸等。
作为上述稳定剂，没有特别的限制，可以举出，例如，安息香酸、安息香酸钠、对羟基安息香酸乙酯等。
作为上述保健食品原料，没有特别的限制，可以举出，中药(例如胃苓汤(irei-to，用于治疗胃疾病的生药提取物等)、温经汤(unkei-to，用于温暖身体的生药提取物等)、温清饮(unsei-to，用于促进血液循环的生药提取物等)、黄耆建中汤(ogi-kenchu-to，黄芪(Astragalus membranaceus)的提取物等)、黄连解毒汤(oren-gedoku-to，用于降低发热、炎症的生药提取物等)、黄连汤(oren-to，黄连(Coptis chinensis)的提取物等)、葛根汤(kakkon-to，葛根(Puerariaeradix)的提取物等)、加味归脾汤(kami-kihi-to，用于治疗贫血、失眠和神经官能症的生药提取物等)、加味逍遥散(kami-shoyo-san，用于治疗月经和更年期病症的生药提取物等)、甘麦大枣汤(kam-baku-taiso-to，用于治疗夜叫、抽搐的生药提取物等)、桔梗汤(kikyo-to，桔梗(platycodon grandiflorum)的提取物)、归脾汤(kihi-to，治疗贫血、失眠的生药提取物等)、九味槟榔汤(kumi-binro-to，九种生药例如livistona chinesis var.subglobosa的提取物)、荆芥连翘汤(keigai-rengyo-to，用于治疗慢性鼻窦炎、痤疮的生药提取物等)、桂皮加芍药大黄汤(keishi-ka-shakuyaku-daio-to，用于治疗胃病症的生药提取物等)、桂皮加芍药汤(keishi-ka-shakuyaku-to，桂皮(cinnamomi cortex)、芍药(chinesepeony)的提取物等)、桂皮加龙骨牡蛎汤(kaishi-ka-ryukotsu-borei-to，桂皮(cinnamoni cortex)、牡蛎(ostrea gigas)的提取物等)、桂枝汤(keishi-to，桂皮(cinnamoni cortex)的提取物等)、桂枝人参汤(keishi-ninjin-to，桂皮(cinnamonicortex)、人参(gensing)的提取物等)、桂枝茯苓丸(keishi-bukuryo-gan，桂皮(cinnamoni cortex)、茯苓(poria cocos)的提取物等)、启脾汤(keihi-to，用于治疗消化疾病如腹泻的生药提取物等)、香苏散(koso-san，莎草(cyperus rotundus)的提取物等)、五虎汤(goko-to，用于治疗咳嗽、哮喘的生药提取物等)、五积散(goshaku-san，用于治疗血液和水环境的生药提取物等)、牛车肾气丸(gosha-jinki-gan，用于提高身体机能的生药提取物等)、五淋散(gorin-san，用于治疗排尿、排尿疼痛的生药提取物等)、柴陷汤(saikan-to，柴胡(bupleurumchinense)的提取物等)、柴胡加龙骨牡蛎汤(saiko-ka-ryukotsu-borei-to，柴胡(bupleurum chinense)、牡蛎(ostrea gigas)的提取物等)、柴胡桂皮干姜汤(saiko-keishi-kankyo-to，柴胡(bupleurum chinense)、桂皮(cinnamomi cortex)、姜(zingiber officinale)的提取物等)、柴胡桂枝汤(saiko-keishi-to，柴胡(bupleurum chinense)、桂皮(cinnamomi cortex)的提取物等)、柴胡清肝汤(saiko-seikan-to，柴胡(bupleurum chinense)、黄芩(scutellaria baicalensis georgi)的提取物等)、柴朴汤(saiboku-to，柴胡(bupleurum chinense)、黄芩(scutellariabaicalensis georgi)、半夏(pinellia termate)的提取物等)、柴苓汤(sairei-to，用于减少炎症、改善水循环的生药提取物等)、酸枣仁汤(sansonin-to，枣(zizyphusjujube)的提取物等)、滋阴降火汤(jiin-koka-to，用于降火咳嗽的生药提取物)、四逆散(shigyaku-san，柴胡(bupleurum chinense)的生药提取物等)、四君子汤(shikunshi-to，用于提高胃功能的生药提取物等)、四物汤(shimotsu-to，四种生药例如当归(angelica sinensis)的提取物等)、灸甘草汤(shakanzo-to，缓解心悸和呼吸急促的生药提取物等)、芍药甘草汤(shakuyaku-kanzo-to，芍药(paeonia lactiflora)和甘草(glycyrrhiza uralensis)的提取物)、十全大补汤(juzen-taiho-to，恢复生命力和能量的生药提取物)、十味败毒汤(jumi-haidoku-to，用于皮炎的十种生药的提取物等)、小建中汤(sho-kenchu-to，用于改善胃功能的生药提取物等)、小柴胡汤(sho-saiko-to，用于保护肝的生药提取物等)、小青龙汤(sho-seiryu-to，用于治疗过敏性鼻炎、哮喘的生药提取物等)、消风散(shofu-san，用于治疗湿疹的生药提取物)、辛夷清肺汤(shin’i-seihai-to，辛夷(magnolia kobus)的提取物等)、神秘汤(shimpi-to，ephedrasinica的提取物等)、真武汤(shimbu-to，用于温暖身体以改善身体机能的生药提取物等)、清上防风汤(seijo-bofu-to，用于治疗痤疮的生药提取物)、清暑益气汤(seisho-ekki-to，用于治疗夏季疲劳的生药提取物等)、清心莲子饮(seishin-renshi-in，用于治疗排尿病症的生药提取物等)、清肺汤(seihai-to，magnolia praecocissima的提取物等)、疏经活血汤(sokei-kakketsu-to，用于减少神经疼痛、背痛的生药提取物等)、大黄甘草汤(daio-kanzo-to，大黄(rheumtanguticum)和甘草(glycyrrhiza uralensis)的提取物)、大黄牡丹皮汤(daio-botampi-to，大黄(rheum tanguticum)、牡丹(paeonia suffruticosa)的提取物等)、大建中汤(dai-kenchu-to，用于减少胃痛的生药提取物等)、大柴胡汤(dai-saiko-to，柴胡(bupleurum chinense)、黄芩(scutellaria baicalensis georgi)的提取物等)、大柴胡汤去大黄(dai-saiko-to-kyo-daio，柴胡(bupleurumChinense)、黄芩(scutellaria baicalensis georgi)、半夏(pinellia ternate)的提取物等)、大承气汤(dai-joki-to，用于治疗便秘的生药提取物等)、大防风汤(dai-bofu-to，ledebouriella seseloides的提取物等)、治大扑一方(ji-daboku-ippo，用于治疗瘀伤的生药提取物)、调胃承气汤(shoi-joki-to，用于使肠通畅的生药提取物等)、钓藤散(choto-san，uncaria rhynchophylla的提取物等)、肠痈汤(choyo-to，用于减少腹下区疼痛的生药提取物)、猪苓汤(chorei-to，猪苓(polyporus umbellatus)的提取物等)、猪苓汤合四物汤(chorei-to-go-shimutsu-to，猪苓(polyporus umbellatus)的提取物等)、通导散(tsu-so-san，用于治疗月经不调、月经痛的生药提取物等)、桃核承气汤(tokaku-joki-to，用于治疗便秘、月经不调的生药提取物等)、当归饮子(toki-inshi，用于治疗湿疹、干皮掻痒的生药提取物等)、当归建中汤(toki-kenchu-to，当归(angelica sinensis)、桂皮(cinnamomi cortex)、芍药(paeonialactiflora)的提取物等)、当归芍药散(toki-shakuyaku-san，当归(angelicasinensis)、芍药(paeonia lactiflora)的提取物等)、当归汤(toki-to，当归(angelicasinensis)的提取物等)、二陈汤(nichin-to，用于减少恶心、呕吐的生药提取物等)、女神散(nyoshin-san，用于治疗flash、头晕的生药提取物等)、人参汤(ninjin-to，人参(gensing)的提取物等)、人参营养汤(ninjin-yoei-to，人参(gensing)、黄芪(astragalus membranaceus)的生药提取物等)、排浓散及汤(haino-san-kyu-to，用于治疗皮肤肿瘤的生药提取物等)、麦门冬汤(bakumondo-to，麦冬(ophiopogon japonicus)的提取物等)、八味地黄丸(hachimi-jio-gan，八种生药例如地黄(rehmannia glutinosa)的提取物等)、半夏厚朴汤(hange-koboku-to，半夏(pinellia ternate)、厚朴(magnolia officinalis)的提取物等)、半夏泻心汤(hange-shashin-to，半夏(pinellia ternate)的提取物等)、白虎加人参汤(bukuryo-ka-ninjin-to，gypsum的提取物等)、茯苓饮(bukuryo-in，茯苓(poria cocos)的提取物等)、茯苓饮合半夏厚朴汤(bukuryo-in-go-hange-koboku-to，用于治疗怀孕呕吐的生药提取物等)、平胃散(heii-san，用于治疗heavy stomach的生药提取物等)、防己黄耆汤(boi-ogi-to，防己(aristolochia fangchi)、黄芪(Astragalus membranaceus)的提取物等)、防风通圣散(bofu-tsusho-san，ledebouriella seseloides的提取物等)、补中益气汤(hochu-ekki-to，用于改善胃功能以使其强壮的生药提取物等)、麻黄汤(mao-to，麻黄(ephedra sinica)的提取物等)、麻黄附子细辛汤(mao-bushi-saishin-to，麻黄(ephedra sinica)、乌头(aconitum carmichaeri)的提取物等)、麻杏甘石汤(ma-kyo-kan-seki-to，麻黄(ephedra sinica)、prumusarmeniaca的提取物等)、麻子仁丸(mahsinin-gan，cannabis sativad提取物等)、木防已汤(moku-boi-to，木防已(cocculus trilobus)的提取物等)、抑肝散(yoku-kan-san，用于降低神经兴奋的生药提取物等)、抑肝散加陈皮半夏(yoku-kan-san-ka-chimpi-hange，用于降低神经兴奋的生药提取物等)、六君子汤(rikkunshi-to，用于治疗heavy stomach的生药提取物等)、立效散(rikko-san，用于缓解牙痛的生药提取物等)、龙胆泻肝汤(ryutan-shakan-to，龙胆(gentianascabra)的提取物等)、苓甘姜味辛夏仁汤(ryo-kan-kyo-mi-shin-ge-nin-to，用于控制咳嗽和清嗓的生药提取物等)、六味丸(rokumi-gan，用于改善身体机能的六种生药的提取物等)等)、茶叶(例如，绿茶、混合有糙米的日本茶、粉状绿茶、中级绿茶(green tea of middle grade)、toasted tea、roasted tea、茉莉花茶、乌龙茶、茶(tea)、黑茶、花茶、青茶(blue tea)、白茶等)、药草(例如，意大利香芹(Italian parsley)、土木香(elecampane)、橄榄(olive)、牛至(oregano)、刺菜蓟(cardoon)、春黄菊(chamomile)、咖喱植物(curry plant)、樟脑草(catnip)、藏茴香(caraway)、圣诞蔷薇(christmas rose)、crimson clover、矢车菊(cornflower)、锦葵(common mallow)、salad burnet、神圣亚麻(santolina)、肉桂(cinnamon)、茉莉(jasmine)、斯特维亚菊(stevia)、鼠尾草(sage)、椴树(莱檬)(linden(lime))、老鹳草(scented geranium)、小连翘(St.-John’s-wort)、肥皂草(soapwort)、黄精(Solomon’s seal)、百里香(thyme)、艾菊(tansy)、雪维菜(chervil)、细香葱(chive)、金莲花(nasturtium)、肉豆蔻(nutmeg)、罗勒(basil)、忍冬(honeysuckle)、海索草(hyssop)、亚麻(flax)、茴香(fennel)、毛地黄(foxglove)、黑蜀葵(black hollyhock)、法国金盏花(French marigold)、水苏(betony)、向日葵(heliotrope)、香柠檬(bergamot)、大麻叶泽兰(hemp agrimony)、芸香(rue)、盆栽金盏花(pot marigold)、琉璃苣(borage)、白夏至草(whitehorehound)、桃金娘(myrtle)、毛蕊花属植物(mullein)、马郁兰(marjoram)、薄荷(mint)、西洋蓍草(yarrow)、熏衣草(lavender)、篷子菜植物(lady’s bedstraw)、柠檬草(lemongrass)、柠檬马鞭草(lemon verbena)、柠檬脂(lemon balm)、玫瑰(rose)、迷迭香(rosemary)、芝麻菜(rocket)、野草莓(wild strawberry)、野三色紫罗兰(wild pansy)、勿忘我等)、pycnogenol、flavangenol、蜂胶(propolis)、银杏叶(gingko leaves)、蜂王浆(royal jelly)、卡尼汀(carnitine)、蘑菇(mushroon)、叶绿素汁(chlorophyll juice)以及它们的提取物等。
作为上述营养补充食品原材料，没有特别的限制，可以举出，氨基酸类、金属离子类、蛋白质类、糖类、脂肪酸类、酵母提取物、蔬菜提取物、鱼肉提取物、果实、果实提取物等。
本发明的抗衰老组合物可以包含其它的抗氧化剂等。
上述抗氧化剂包括但不限于，例如柠檬酸、柠檬酸衍生物、维生素C、维生素C衍生物、番茄红素、维生素A、类胡萝卜素、维生素B、维生素B衍生物、类黄酮类、多酚类、谷胱甘肽、硒、硫代硫酸钠、维生素E、维生素E衍生物、吡咯并喹啉醌衍生物、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽-S-转化酶、谷胱甘肽还原酶、过氧化氢酶、抗坏血酸过氧化物酶、以及这些的混合物等。
本发明抗衰老组合的制备方法包括将用式(1)表示的还原型辅酶Q与可接受添加剂混合。
因此，上述的抗衰老组合物可以通过例如添加、混合、喷射、包括结合(conjugating)等方式，将上述添加剂、抗氧化剂等，根据需要，置于经上述方法而得到的还原型辅酶Q中。而且，根据所期望的如下所述剂型，组合物还可以通过向还原型辅酶Q中添加药物和/或食品添加剂可接受的各种添加剂、溶剂、碱等而得到，并且使得到的混合物进行用于制备各种适当剂型的处理中，即制粒、包衣、微囊化、包埋、掺合、乳化、混悬等。
本发明抗衰老组合物的剂型可以为液体或固体。对于给药的方法，可以采用各种方法，例如经口给药、注射、经鼻给药、以滴眼液和栓剂形式的给药、或者食用含有辅酶Q的食品。通常地，从剂量等方面来看，经口给药被认为是最有效的方法。当经口给药困难时，可以没有任何问题地通过经口给药之外的任何其它途径给予本发明组合物。例如，在经口摄取营养困难的患者或上年纪的人中，推荐的给药方法包括但不限于，以栓剂、用于皮肤给药的外用制剂等的形式，进行给药。
在经口给药时，例如，本发明抗衰老组合的剂量，以辅酶Q计，每人每天优选为30～1200mg，更优选50～800mg，更加优选100～300mg。
本发明的抗衰老组合物可以抑制或推迟人类和/或动物的衰老(aging)。
这里使用的术语“衰老”是指，例如行为缓慢，例如减少的活动或减少的被动性(decreased passivity)、脊椎弯曲、脱发、角膜混浊、眼睛和/或耳的炎症边缘(inflammation periphery)等。
本发明抗衰老组合物的给药可以延迟这些与衰老相关症状的发作、或缓解这些症状。
在评价这些抗衰老效果时，例如可以使用加速衰老模型的小鼠作为体内评价模型。这些小鼠是在日本京都大学(Kyoto University，Japan)开发和饲养的，其较早地和明显地出现了衰老状态。这些小鼠显示了与人类十分相似的衰老状态，并且是用于在体内检测抗衰老效果的有用的模型动物。
根据本发明，在动物中抑制衰老的方法包括向目标动物给予上述的抗衰老组合物。
所述动物包括哺乳动物、鱼类、鸟类、爬行动物类、昆虫类等。优选的动物是哺乳动物，例如人类。
术语“给药”在其意义内包括局部地，肠内例如经口或直肠，或者胃肠外地给药。对于给药的途径，优选经口给药。
本发明包含还原型辅酶Q的组合物在抑制或推迟衰老方面产生了优异的效果。
图1是表示在用还原型辅酶Q10喂养的加速衰老模型小鼠中衰老程度值(aging degree score)增加的图。纵坐标表示衰老程度值。数据是以平均值±标准差表示(n＝10)。按照学生t检验进行显著性差别的检验。标记“*”表示以5％程度的风险与对照组之间有显著性差异，“**”表示以1％程度的风险与对照组之间有显著性差异。横坐标表示以月计的小鼠的年龄。
图2是表示在用氧化型辅酶Q10喂养的加速衰老模型小鼠中衰老程度值增加的图。纵坐标表示衰老程度值。数据是以平均值±标准差表示(n＝10)。按照学生t检验进行显著性差别的检验。标记“*”表示以5％程度的风险与对照组之间有显著性差异，“**”表示以1％程度的风险与对照组之间有显著性差异。横坐标表示以月计的小鼠的年龄。
实施本发明的最佳方式下述实施例进一步详细地说明本发明。但是这些实施例并不是对本发明的限制。
通过下述HPLC分析测定纯度以及还原型辅酶Q10/(还原型辅酶Q10+氧化型辅酶Q10)的比(重量比)。
HPLC分析条件柱SYMMETRY C18(Waters Corporation的产品)，长250mm、内径4.6mm；移动相C2H5OH∶CH3OH＝4∶3(v/v)；检测波长210nm；流速1.0ml/分；还原型辅酶Q10的保留时间9.1分，氧化型辅酶Q10的保留时间13.3分。
制备实施例1还原型辅酶Q10的制备将100g的氧化型辅酶Q10(纯度99.4％)和60g的L-抗坏血酸加入到1000g的乙醇中，再使混合物于78℃在搅拌下发生还原反应。30小时后，将混合物冷却至50℃，在保持该温度的条件下，向其中添加330g的乙醇和70g的水。将该乙醇溶液(包含100g的还原型辅酶Q10)在搅拌下以10℃/小时的冷却速度冷却到2℃，得到白色浆液。将得到的浆液在减压下过滤，依次用冷的乙醇、冷的水和冷的乙醇(所用的冷的溶剂的温度为2℃)清洗湿的结晶，然后在减压下(20～40℃，1～30mmHg)进一步干燥湿的结晶，得到作为白色干燥结晶的97g的还原型辅酶Q10(包含约1％的氧化型辅酶Q10)。除去减压干燥之外的所有操作均在氮气氛中进行。
制备实施例2还原型辅酶Q10的制备在25℃，将100g的氧化型辅酶Q10溶解在1000g的庚烷中。在搅拌下，将溶液逐渐地添加到通过将100g的连二亚硫酸钠(纯度不低于75％)作为还原剂溶解在1000ml的水中而制备的水溶液中，使还原反应在25℃于pH4～6进行。2小时后，从反应混合物中除去水相，用1000g脱氧的氯化钠饱和水溶液清洗庚烷相6次。在减压下于50℃使该庚烷相进行溶剂替换，以制备7％(w/w)的还原型辅酶Q10乙醇溶液(该溶液包含100g的还原型辅酶Q10)。向该乙醇溶液中加入50g的水，在搅拌下以10℃/小时的冷却速度将该混合物冷却到2℃，以析出结晶。所有操作均在氮气氛中进行。将由此得到的浆液在减压下过滤，依次用冷的乙醇、冷的水和冷的乙醇(所用的冷的溶剂的温度为2℃)清洗湿的结晶。然后在减压下(20～40℃，1～30mmHg)进一步干燥湿的结晶，得到作为白色干燥结晶的97g的还原型辅酶Q10(包含约1％的氧化型辅酶Q10)。
实施例1在加速衰老模型小鼠中的抗衰老(衰老推迟)作用允许加速衰老模型小鼠(SAMP1，3周龄，雌性)自由地接触饲料(CE-2，CLEA Japan，Inc.的产品)，该饲料包含由制备实施例1得到的0.2％还原型辅酶Q10(包含约1％的氧化型辅酶Q10)，按照如下所述的衰老程度值，随着时间的推移确定每只小鼠的衰老程度。按照饲料的消耗量和体重而进行估计的还原型辅酶Q10的剂量，为约150～250mg/kg/天。仅仅向对照组给予饲料(CE-2，CLEA Japan，Inc.的产品)。
使用的加速衰老模型小鼠是由日本京都大学开发和饲养的，其较早地和明显地出现了衰老状态。这些小鼠显示了与人类十分相似的衰老状态，并且是用于在体内检测抗衰老效果的有用的模型动物。采用的衰老程度值系统使用SAM研究委员会建立的评分系统。因此，按照下述11项对于每只小鼠给予0～4的分值1活性降低(研究行为(searching behavior))，2被动性降低(折磨逃逸行为(pinching escaping behavior))，3失去毛发光泽，4毛发不平整(roughening of hair)，5失去毛发，6皮肤溃疡，7眼周损伤(睑缘炎和眼周糜烂)，8角膜混浊，9角膜溃疡，10白内障，11增加的前部或后部脊椎弯曲。将约3个月大的年轻小鼠组中发现的情况作为标准并给予分值0(零)。因此，越高的分值表示更高程度的衰老。
其结果示于图1。正如在图1中所示，由于摄取还原型辅酶Q10，可以显著地防止衰老分值增加。
比较实施例1除了使用氧化型辅酶Q10代替还原型辅酶Q10之外，按照相同的方式进行实施例1的测试。按照饲料的消耗量和体重而进行估计的氧化型辅酶Q10的剂量，为约150～250mg/kg/天，其几乎与还原型辅酶Q10的剂量相同。其结果示于图2。由于摄取氧化型辅酶Q10，衰老程度值的增加被抑制到某一程度，但是与还原型辅酶Q10的抑制衰老效果相比较，氧化型辅酶Q10的效果差些。
制剂实施例1粉末将还原型辅酶Q10(包含约1％的氧化型辅酶Q10)溶解在丙醇中，并使其被吸附在微晶纤维素上，之后在减压下干燥。在氮气流中将其与玉米淀粉混合，得到粉末制剂。
还原型辅酶Q109.9重量份氧化型辅酶Q100.1重量份微晶纤维素 40重量份玉米淀粉 55重量份制剂实施例2胶囊使用下面指出的原料，按照制剂实施例1中相同的方式，制备粉末制剂。按照常规方法，将这些粉末添加到明胶胶囊中。在氮气流中进行填充胶囊的熔封和包装，并储存在冰箱中。
还原型辅酶Q1019.8重量份氧化型辅酶Q100.2重量份微晶纤维素 40重量份玉米淀粉 20重量份乳糖 65重量份硬脂酸镁 3重量份聚乙烯吡咯烷酮 2重量份制剂实施例3软胶囊将玉米油加热到50℃。向其中加入为了溶解而在同样温度中熔化的还原型辅酶Q10(包含约1％的氧化型辅酶Q10)。按照常规方法将该溶液包封在软胶囊中。
还原型辅酶Q1049.5重量份氧化型辅酶Q100.5重量份玉米油 350重量份制备实施例4片剂将还原型辅酶Q10(包含约1％的氧化型辅酶Q10)溶解在丙醇中，并使其被吸附在微晶纤维素上，之后在减压下干燥。在氮气流中将其与玉米淀粉、乳糖、羧甲基纤维素钙和硬脂酸镁混合，然后向得到的混合物中加入作为粘合剂的聚乙烯吡咯烷酮的水溶液，再按照常规方式将整个混合物进行制粒。向该颗粒产物中，加入并混合作为润滑剂的滑石粉，然后将得到的混合物制成片剂。在氮气流中包装片剂，并保存在冰箱中。
还原型辅酶Q1019.8重量份氧化型辅酶Q100.2重量份玉米淀粉 25重量份乳糖 15重量份羧甲基纤维素钙10重量份微晶纤维素40重量份聚乙烯吡咯烷酮5重量份硬脂酸镁 3重量份滑石粉10重量份工业实用性本发明的包含还原型辅酶Q的组合物对于抑制或推迟衰老产生了优异的效果。
权利要求
1.抗衰老组合物，其包含用下述式(1)表示的还原型辅酶Q作为活性成分 式中，n表示1～12的整数。
2.按照权利要求1所述的抗衰老组合物，其中所述的还原型辅酶Q是还原型辅酶Q10。
3.按照权利要求1所述的抗衰老组合物，其包含用下述式(2)表示的氧化型辅酶Q 式中，n表示1～12的整数。
4.按照权利要求3所述的抗衰老组合物，其中所述的氧化型辅酶Q是氧化型辅酶Q10。
5.按照权利要求1～4任一项所述的抗衰老组合物，其中，还原型辅酶Q的含量为0.001～99重量％。
6.预防动物衰老的方法，其包含向目标动物给予权利要求1～5任一项所述的抗衰老组合物。
7.制备抗衰老组合物的方法，其包含将由下式(1)表示的还原型辅酶Q与可接受的添加剂混合 式中，n表示1～12的整数。
全文摘要
本发明的目的在于提供组合物，其在推迟或预防人类和动物由于衰老而出现的能量减少、外观改变等的变化方面是有效的，并且即使长期摄取也是高度安全的。本发明涉及抗衰老组合物，其包含还原型辅酶Q作为活性成分。通过长期向较早发展了衰老症状的小鼠(加速衰老模型小鼠)给予包含还原型辅酶Q
文档编号A61K31/05GK1909895SQ20058000208
公开日2007年2月7日 申请日期2005年1月7日 优先权日2004年1月8日
发明者藤井健志, 川辺泰三, 久保博司, 樋口京一 申请人:株式会社钟化