专利名称：一种治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明公开了一种中药制剂及其制备方法和用途，尤其涉及一种治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法和用途。
背景技术：
世界卫生组织(WHO)指出威胁人类健康的头号杀手是心脑血管疾病。具有发病率高、死亡率高、致残率高的流行病学特点。每年全世界死于心脑血管疾病的约1670万人，占总死亡人数的29.2％。随着社会人口的老龄化，心脑血管疾病的发病率逐年增加。目前我国已有高血压患者1.6亿人，血脂异常的约1.6亿人，体重超重的约2.4亿人，肥胖症患者约7000万人。我国脑卒中的发病率较高，是西方国家的4倍。我国每年因心脑血管疾病死亡的人数为260万人，占总死亡人数的416。不久前的一项调查发现，我国不但高血压、冠心病、脑中风的发病率逐年升高，而且发病年龄也在提前，呈现年轻化趋势，40岁以下的人群发病率占206。
心脑血管疾病的基本病因是动脉粥样硬化，而引起心脑血管疾病的最直接的原因是高血脂症。平时我们所说的“三高”，就是指高血脂、高血压、高血糖。当血脂(主要指胆固醇和甘油三酯)超过正常值限时，就称为高脂血症，它是富裕生活带来的恶疾，它对人体的损害是在不知不觉中进行的，并且是全身性的。可怕的是由此引起的一系列心、脑、肾的损害。它的发展步骤是这样的高脂血症→血管硬化→血压增高→心脑供血不足→心脑血管意外(即中风或冠心病)。冠心病、脑中风、高血压、老年痴呆、糖尿病等老年性疾病都可能合并高脂血症。因此预防及治疗心脑血管疾病最重要的是降低血脂，预防动脉粥样硬化，这样才能降低心脑血管疾病发病率和死亡率，才能延长人类寿命。
黄芪为补气益血之要药；具有益卫固表、利水清肿，托毒生肌、补中益气等功效，民间常用于治疗自汗、盗汗、血痹、浮肿、痛疽不溃或溃久不敛、内份带虚、脾虚泄泻及一切气衰血虚之症，黄芪总皂苷为黄芪主要活性成份之一，对其在心脑血管疾病方面作用的研究体现在以下几个方面1、具有显著抗实验性血栓形成的作用，并能抑制血小板聚集，提高PGI2和NO水平，降抵TXA2/PGI2的比例，作用机制与提高PGI2和NO水平有关；2、能降低老年大鼠全血比粘度和血浆比粘度，缩短红细胞电泳时间，降低红细胞压积；3、能显著抗血栓形成，并能抑制血小板聚集，降低GMP-140含量，降低TXA2/PGI2的比值；4、能显著性的减少大鼠大脑动脉栓塞的量，增加缺血组织抗氧化的水平。
方中水蛭，我国中医文献中对其的药用论述颇多，如《本草纲目》谓“咸走，苦胜血。水蛭之咸苦，以除蓄血，乃肝经血分药，故能通肝经聚血。”《本草汇言》有“水蛭，逐恶血、瘀血之药也。”，《本草经百种录》“水蛭喜食人之血，而性又迟缓善入，迟缓则生血不伤，善入则坚积易破，借其力以攻积久之滞，自有利而无害也。”药理方面，水蛭具有抗凝，抗纤溶，抑制血小板聚集，降低全血比黏度作用。现代医学证明，水蛭中含有多肽素、肝素、抗血栓素，主要成分是蛋白质，从中分离出水蛭素，具有较强的抗凝血酶作用。水蛭素还能抑制ADP诱导的血小板聚集，降低血液黏滞度，调节6-keto-PGF10和TXB2平衡，具有明显的掏血栓形成的作用。另外，水蛭可降低食饵性高脂血症家兔的血清总胆固醇和甘油三酯，降低实验性高脂血症小白鼠的血清胆固醇的含量，且与安妥明作用相似。此外，还具有改善心功能状态的作用，对心肌摄取RD的作用观察，证明水蛭有一定程度增加心肌营养性血流量的作用，对组织缺血、缺氧有保护作用，但易伤正气，若与黄芪配伍，则有相制相辅之妙，共奏补气逐瘀、活血通经之功。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种以黄芪总皂苷和水蛭素为原料药制成的中药制剂。
本发明的目的之二是提供用以制备本发明所称制剂的制备方法。
本发明的目的之三是提供本发明所称制剂在治疗心脑血管疾病方面的用途。
经大量试验论证，处方中各原料药在下列重量配比范围内有较好的疗效黄芪总皂苷320-957；水蛭素66-198。
优先重量配比为黄芪总皂苷478-798；水蛭素99-165。
最佳重量配比为黄芪总皂苷638；水蛭素132。
按药剂学方法，本发明制剂可以是各种临床药物剂型，可以是片剂，丸剂，胶囊剂，软胶囊剂，颗粒剂，混悬剂，滴丸剂，缓、控释剂，口服液体制剂，注射剂，气雾剂，栓剂，皮下给药剂当中的任何一种。
本发明制剂的制备方法如下(1)取一定量的黄芪，粉碎成粗粉，用35％-95％乙醇回流提取1-3次，每次1-3小时，第一次用4-12倍量乙醇，第二次用3-9倍量乙醇，回收乙醇，合并提取液，浓缩，干燥，得黄芪总皂苷，备用；(2)取一定量水蛭，粉碎，然后加入5-15倍体积的65％-90％的预冷丙酮(-18℃)，2-6℃下搅拌5-15分钟，再加入氧化钠和三氯乙酸(使其浓度分别为0.2-0.5mol·L-1和0.1-0.4mol·L-1，pH2.5-3.5)，搅拌15-45分钟，然后离心(3000rpm×10min)，弃上清液，沉淀中加入其体积1/3的80％冷丙酮，抽提1-3次，每次3000×5min离心，收集上清液，合并几次抽提液加入1-3倍体积的冷丙酮(-18℃)，静置1-3小时，再离心(5000rpm×15min)弃上清液，收集沉淀，干燥得水蛭素粗品，再用阴离子交换层析，并收集各峰并检测每个峰的活性，将收集的活性峰冷冻干燥，再通过凝胶过滤层析方法进一步的纯化水蛭素粗品，测定各段洗脱液的活性后，将活性峰进行浓缩，用Sephadex G25柱脱盐，将得到的蛋白溶液进行冷冻干燥，低温保存，即得水蛭素，备用；(3)取(1)所得黄芪总皂苷和(2)所得水蛭素，分别粉碎成细粉后混匀，再通过加入适当辅料，按常规工艺即可制得本发明所称制剂。
本发明制剂中所用的辅料为常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂等。
本发明的组方简单，药源丰富，且疗效确切，毒副作用小，适合产业化大量生产，具有广阔的市场前景。
本发明制剂可用于治疗各类心脑血管疾病，例如冠心病、心绞痛、脑出血、脑血栓、脑栓塞等。这些药理作用，可以通过以下的药效学实验证明实验一本发明处方对急性脑梗塞的保护作用对线栓法引起大鼠局灶性脑缺血后再灌注损伤的治疗作用首先，建立线栓法引起大鼠局灶性脑缺血模型，在缺血后4h进行再灌注，可引起大鼠产生明显的行为障碍和局灶性脑梗塞。然后，在该模型上观察本发明处方对局灶性脑缺血后再灌注引起的脑损伤的影响，并同生理盐水阴性组及尼莫地平组进行比较，结果发现本发明处方对该模型引起的局灶性脑缺血具有明显的治疗作用，能显著减少再灌注后的啮梗塞面积，组织病理学检查结果也表明，神经细胞病变程度也明显减轻。本发明处方也能改善中风大鼠血液粘、聚、凝状态，抑制血小板聚集，增加SOD的表达，抗氧自由基损伤。提示本方可改善中风大鼠血液流变学指标，从病理证实本方有明显抗脑缺血和保护脑细胞的作用。
表1本发明处方对MCAO致大鼠脑梗塞组织重量的影响(给药3d，x±s，n＝10)
表2脑缺血后脑组织病理检查
注“-”未见病变；“±”偶见局灶性病变；+轻度病变，病变范围余约1/4视野；++中度病变范围约1/3视野。
表3本发明处方对栓塞型缺血性中风大鼠血液流变学的影响(x±sd，m＝10)
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
表4本发明处方对栓塞型缺血性中风大鼠血小板聚集率的影响(x±sd)
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，表5本发明处方对线栓法致缺血性中风大鼠脑匀浆中MDA、SOD的影响(x±sd，n＝8)
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。与假手术组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
实验二本发明处方抑制体内血栓形成实验方法取健康SD大鼠70只，随机分成5组，每组14只。模型组(等量蒸馏水)，阳性药组(阿斯匹林25mg/kg·d)，本发明处方大、中、小三个剂量组(240mg/kg·d、120mg/kg·d、60mg/kg·d)。
给药方式为灌胃给药，每日一次，共给药10天。末次给药前一天禁食。末次给药后1小时，大鼠以0.6％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，0.5ml/100g，仰卧位固定后腹部消毒，从腹中线打开腹腔，暴露并分离下腔静脉，在左肾静脉下方水平处结扎，并缝合腹腔。结扎2小时后，重新打开腹腔，在结扎下方2cm处用止血钳夹住下腔静脉，取出此段血管，迅速纵行剖开官腔，在滤纸上取出血栓，蘸干多余血迹，称量湿重。然后放入37℃烘箱充分干燥24小时。称量干重。获得的数据采用EXCEL软件进行F检验和T’检验。
实验结果本发明处方对结扎损伤管壁造成的下腔静脉血栓的重量和长度都有明显减少作用，相对来说，对血栓长度的影响不及重量的影响大。结果见表29。
表29本发明处方对大鼠下腔静脉血栓的影响(x±sd，n＝10)
与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
实验结论本发明处方对结扎损伤管壁造成的下腔静脉血栓形成有一定的抑制作用。
结扎大鼠下腔静脉，因缺血缺氧而活化中性粒细胞和血小板，同时激活凝血系统，而纤溶活性相对减弱。本发明处方能减轻下腔静脉血栓的干、湿重，表明本发明处方具有抑制静脉血栓形成的作用，可能通过提高纤溶活性而发挥抗静脉血栓作用的。阿斯匹林则有显著的抑制血小板聚集，抗血栓形成。
实验三本发明处方对局部脑缺血大鼠记忆障碍的影响脑卒中引起缺血性脑梗塞，神经元严重损伤，功能受损，这是引起临床上患者脑卒中后遗症的主要原因。我们观察了本发明处方对局部脑缺血大鼠记忆障碍的影响。结果表明本发明处方对记忆障碍有明显改善作用。
实验四本发明处方对大鼠局灶性脑缺血(恢复期)的影响本试验采用电凝法阻断大鼠脑中动脉，并结扎同侧颈总动脉，造成局灶性脑缺血模型，给药7天，观察本发明处方对脑中动脉阻断后恢复期的神经症状、脑梗塞范围及病理学检查等指标的影响。结果表明本发明处方可明显改善神经行为障碍，明显减小脑梗塞范围，神经细胞病变程度明显轻于模型组。
本实验的目的在于观察本发明处方对大鼠局灶性脑缺血(恢复期)的影响。
试验材料药物1.本发明处方，实验室制剂，试验时蒸馏水配成所需浓度。
2.尼莫地平20mg/片，天津市中央制药厂生产(批号960418)。试验时蒸馏水配成1mg/ml。
电凝器(Hyfrecator Plus 7-797)美国BMS公司出品。
动物SD种大鼠，50只，雄性，250-300g，中国医学科学院实验动物中心提供，合格证号<京动字>79209 R018号。
试验方法动物随机分为5组假手术组，模型组，本发明处方4g生药/kg剂量组，本发明处方1g生药/kg剂量组，阳性药尼莫地平组(10mg/kg)。
按Tamura氏方法，动物3.5％水合氯醛腹腔注射麻醉(35mg/100g体重)，沿颧弓方向切开皮肤，分离颞肌，暴露颧骨，用骨钳切断并除去颧骨，经颞下入路，打开2×4mm2颅窗，剥开软脑膜，暴露右侧大脑中动脉，电凝嗅束与大脑下静脉之间的一段大脑中动脉(电凝输出功率为4W)，此后，分离同侧颈总动脉并结扎，假手术组只开颅窗、不电凝大脑中动脉但结扎颈总动脉。手术后十二指肠给予所试药物(模型组、假手术组给予等量生理盐水)，伤口缝合后回笼饲养，每日给药一次，连续给药七日。试验及饲养室温保持在25.0±1.0℃。
术后第一、三、七天，采用单盲法按下列标准观测各组动物神经症状，进行行为综合评分。评分标准同急性期评分标准，结果按等级序值法进行统计学处理。
末次评分后，动物断头取脑，手术显微镜下确认中动脉已阻断后置冰生理盐水中，去除嗅球，小脑及脑干，冠状切4刀，共切5个脑片，置10％福尔马林中。第二脑片经石蜡包埋、脱水、染色，显微镜下经测微尺计算梗塞灶面积并进行统计学处理，光镜下观察脑组织神经细胞病变及恢复情况。
试验结果一.对大鼠神经症状的影响假手术组未见行为异常，模型组手术后1～3天均见明显的行为障碍，第7天有所恢复，与假手术组比较均有显著性差异(P＜0.01)；本发明处方240mg/Kg剂量组术后1天即可见行为障碍有明显改善，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)，并持续至3～7天；120mg/Kg组术后1～3天行为障碍可见改善趋势，7天有明显改善(P＜0.05)；阳性药尼莫地平组术后1天可见改善趋势，3～7天可见明显改善(P＜0.01)。
二.本发明处方对脑梗塞范围的影响表3.本发明处方对大鼠脑梗塞范围的影响
注与假手术组比较##P＜0.01 与模型组比较**P＜0.01由表3可见，手术后7天，模型组大鼠术侧局部缺血严重，显微镜下测得梗塞面积为660.0±365.5(格)；本发明处方4g生药/Kg剂量组梗塞面积为212.8±138.4(格)，与模型组比较显著减小(P＜0.01)；1g生药/Kg组脑梗塞面积有所减小，但无统计学意义；尼莫地平组梗塞面积占大脑切面总面积亦可见减小趋势。
三.病理学检查经光镜病理学检查发现模型组低倍镜下可见病变区大脑灰白质界限消失，病变区灰白色淡染，其周围可见深染。高倍镜下显示，淡染区为坏死组织，可见凹陷及裂隙，神经细胞大部分坏死，残留的神经细胞界限不清，有些胞核呈细窄三角形或呈无结构状态、核仁消失，周边深染区为小胶质细胞增生区，细胞变大，胞浆丰富，内含大量细小空泡，核被挤向一边。假手术组未见上述病理改变，神经细胞排列有序，未见水肿，核仁可见；本发明处方4g生药/Kg剂量组坏死淡染区不明显，有间质水肿、神经细胞肿胀，但核尚可见，胶质细胞增生较明显，但胞浆不很丰富，细小空泡明显减少；本发明处方1g生药/Kg剂量组及尼莫地平组部分坏死区可见嗜中性白细胞浸润，淡染区(坏死区)有所减小，坏死区内可见神经细胞间质内有不规则的小空泡，其周边部分神经细胞、胞浆有混浊，胞核可见，部分细胞核仁清楚。
本实验用电凝法阻断大鼠脑中动脉及结扎同侧颈总动脉，造成大鼠局灶性脑缺血模型，连续给药七天，观察了本发明处方对此模型恢复期的治疗作用。实验结果表明，造成大鼠局灶性脑缺血模型后，可见神经行为障碍，镜下明显可见脑梗塞灶(淡染区)，病理学检查可见淡染区内神经细胞坏死，胞核呈细窄三角形或无结构状态，核仁消失。给予本发明处方7天后，动物神经症状有明显改善，脑梗塞范围明显减小，病理学检查可见神经细胞坏死程度较模型组有所改善。提示该药对缺血性中风恢复期有治疗作用。
结论，经实验表明，本发明制剂对于各类心血管疾病都有很好的治疗效果。
具体实施例本发明是一种以黄芪总皂苷和水蛭素为原料药制成的用以治疗各类心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法和用途。
下面通过具体实施例的列举来进一步说明本发明的内容，但仅供参考，不限制本发明的范围。
具体实施例一取黄芪总皂苷638mg和水蛭素132mg，分别粉碎成细粉后混匀，加淀粉600g及水约335ml，混匀，制丸，干燥，包衣或不包农，即得丸。
具体实施例二取黄芪总皂苷638mg和水蛭素132mg，分别粉碎成细粉后混匀，加入B-环糊精120g，混匀，干燥，加入0.5g甜菊糖，制粒，干燥，包衣或不包衣，即得颗粒。
具体实施例三取黄芪总皂苷638mg和水蛭素132mg，分别粉碎成细粉后混匀，加淀粉50g，糊精30g，混合均匀，用85％的乙醇制粒，干燥、整粒后，加入颗粒总量3％的硬脂酸镁，压片，包衣或不包衣即得片。
具体实施例四取黄芪总皂苷638mg和水蛭素132mg，分别粉碎成细粉后混匀，装入空心胶囊，即得胶囊。
具体实施例五本发明制剂在治疗高血脂症上的临床应用资料与方法(1)病例选择患者96例，男性71例，女性25例，年龄40-68岁，平均54岁。96例患者中血清总胆固醇(TC)及甘油三脂(TC)两项结果增高者28例，单项胆固醇增高者24例，单项甘油三脂增高者44例，合并高血压患者44例，冠心病15例，随机分为治疗组及对照组，每组48例。
(2)药物组成与制备取黄芪总皂苷0.5g和水蛭素0.1g，粉碎成细粉后，以细粉装入胶囊内。
(3)治疗方法治疗前24小时停用任何降脂药物，治疗组给予本发明胶囊5粒，1日3次，对照组给予诺衡(Gem fibrozil)300mg，每日3次，1个月为一个疗程，1疗程后评定疗效。
(4)观察方法治疗前后各测1次TC、TC、HDL-C、凝血酶原时间，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)用Friedewald公式计算LDL-C＝TC-(HDL-C+1/5TG)。
结果(1)治疗组和对照组治疗前血脂水平差异未见统计学意义(PC＜0.05)，疗程结束后结果显示治疗组降TC和LDL-C优于对照组(P＜0.01)，降TC作用和升HDL-C均无明显差异(P＜0.05)，详见下表附表两组治疗前后实验室指标的变化(M±SD)
注两组治疗前后各项血脂对比P值＜0.01。
(2)治疗前后凝血酶原时间测定两组治疗前凝血酶原时间在范围内。服药后1个月，对照组凝血酶原时间无明显变化，治疗组凝血酶原时间延长为14-19s共41例，13s者27例，治疗过程中未见皮下出血等副作用。
权利要求
1.一种治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于所用原料药及其重量配比为黄芪总皂苷320-957；水蛭素66-198。
2.如权利要求1所述的一种治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于原料药的优先重量配比为黄芪总皂苷478-798；水蛭素99-165。
3.如权利要求1所述的一种治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于原料药的最佳重量配比为黄芪总皂苷638；水蛭素132。
4.如权利要求1所述的一种治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于所述的制剂为药剂学上的任何一种剂型。
5.如权利要求4所述的一种治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于所述的制剂可以是片剂，丸剂，胶囊剂，软胶囊剂，颗粒剂，混悬剂，滴丸剂，缓、控释剂，口服液体制剂，注射剂，气雾剂，栓剂，皮下给药剂当中的任何一种。
6.权利要求1、2或3所述的一种治疗心脑血管疾病的中药制剂，其制备方法的特征在于(1)取一定量的黄芪，粉碎成粗粉，用35％-95％乙醇回流提取1-3次，每次1-3小时，第一次用4-12倍量乙醇，第二次用3-9倍量乙醇，回收乙醇，合并提取液，浓缩，干燥，得黄芪总皂苷，备用；(2)取一定量水蛭，粉碎，然后加入5-15倍体积的65％-90％的预冷丙酮(-18℃)，2-6℃下搅拌5-15分钟，再加入氧化钠和三氯乙酸(使其浓度分别为0.2-0.5mol·L-1和0.1-0.4mol·L-1，pH2.5-3.5)，搅拌15-45分钟，然后离心(3000rpm×10min)，弃上清液，沉淀中加入其体积1/3的80％冷丙酮，抽提1-3次，每次3000×5min离心，收集上清液，合并几次抽提液加入1-3倍体积的冷丙酮(-18℃)，静置1-3小时，再离心(5000rpm×15min)弃上清液，收集沉淀，干燥得水蛭素粗品，再用阴离子交换层析，并收集各峰并检测每个峰的活性，将收集的活性峰冷冻干燥，再通过凝胶过滤层析方法进一步的纯化水蛭素粗品，测定各段洗脱液的活性后，将活性峰进行浓缩，用Sephadex G25柱脱盐，将得到的蛋白溶液进行冷冻干燥，低温保存，即得水蛭素，备用；(3)取(1)所得黄芪总皂苷和(2)所得水蛭素，分别粉碎成细粉后混匀，再通过加入适当辅料，按常规工艺即可制得本发明所称制剂。
7.权利要求1、2或3所述的一种治疗心脑血管疾病的中药制剂在治疗心脑血管疾病中的应用。
全文摘要
本发明是一种治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法和用途。它是由原料药黄芪总皂苷和水蛭素按一定的重量配比制成的中药制剂及其制备方法和用途。本发明制剂可用于治疗各类心脑血管疾病，例如冠心病、心绞痛、脑出血、脑血栓、脑栓塞等。本发明优点在于组方简单，药源丰富，且疗效确切，毒副作用小，适合产业化大量生产，具有广阔的市场前景。
文档编号A61K35/56GK1883541SQ200610031698
公开日2006年12月27日 申请日期2006年5月23日 优先权日2006年5月23日
发明者王衡新 申请人:王衡新