专利名称：一种腺苷类药物的药效学实验方法
技术领域：
本发明涉及药效学研究，特别提供了一种用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法。
背景技术：
临床实践中发现，心肌梗死的发作通常为冠状动脉或冠状动脉分支血管的堵塞，它通常造成心脏供血区的心肌组织变性和坏死。因此，在心肌缺血和心肌梗死的病理机制和治疗研究中，构建一种动物模型是非常必要的，该动物模型应该可以模拟临床上心肌梗死的病理学特征-冠状动脉断流，以造成断流的冠状动脉所供应的心肌组织缺血坏死。目前采用的这种动物模型的方法通常为使用药物所至血管收缩法，但是这种方法所造成的心肌缺血和心肌梗死模型非常不稳定，模型失败的几率很大。
发明内容
本明发明的目的在于一种用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，该方法对心肌保护作用类药物的药效判定直观、稳定而且可靠。
本发明提供了一种用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，其特征在于——采用冠状动脉结扎和解开结扎方法分别构建动物的心肌梗死和再灌注模型；——用NBT或者TTC对再灌注模型心肌进行染色，通过梗死心肌占全心或心室重的百分比判定药物的有效性。
本发明用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法中，所述动物的心肌梗死和再灌注模型的构建为——对动物麻醉后施行开胸手术，直视下剥离冠状动脉，用套管结扎冠状动脉左前降支造成冠状动脉血流中断，构建急性心肌梗死模型；——在缺血40～100分钟后，恒速给药；——在缺血60～150分钟后，解开结扎线，造成血管再通，构建再灌注模型。
为了保持动物的良好的试验状态，本发明用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法中，对动物麻醉后，应先做气管插管，连接呼吸机，进行人工呼吸。可以取呼吸频率20～45次/分，呼吸时间分配为0.70:0.30～0.40:0.60，潮气量为100～150ml/min。
达到最大的模型效果，本发明用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法中，应在左冠状动脉前降支近脉前降支近1/3～2/3范围处结扎。最好在缺血60分钟后，给药；在缺血120分钟后，解开结扎线。
本发明用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法中，给药途径可以为股静脉。
本发明用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法中，当选用狗作实验动物时，麻醉采用先肌肉注射氯胺酮5ml，再静脉注射3％戊巴比妥5ml/kg；当选用兔作实验动物时，麻醉采用直接腹腔注射20％乌拉坦5ml/kg。
本发明用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法中，还可以通过将实验动物的颈总动脉连接电磁流量计，股动脉连接压力换能器，用以获得心输出量(CO)、动脉血压(AP)及平均动脉压(MAP)等辅助信息。
本发明用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，由于采用冠状动脉结扎方法造成心肌梗死和再灌注模型，可以做到冠状动脉完全可靠的梗死和解开结扎后的血管再通——即再灌注，这种梗死模型和再灌注损伤模型几乎与临床上疾病状态完全一致；同时，通过梗死心肌占全心或心室重的百分比判定药物的有效性。因此，对心肌保护作用类药物的药效判定直观、稳定而且可靠。
具体实施例方式将麻醉后的实验动物背部固定，做颈正中切口，剥离颈总动脉，套入电磁流量计探头，并将此二探头连于电磁流量计上，测量心输出量(CO)。
切开气管，做气管插管，连接呼吸机，人工呼吸。
胸部除毛，消毒后沿胸骨中线切开皮肤和肌肉，在胸骨左缘第4-5肋间开胸，于迷走神经2cm处打开心包，纵行切开心包膜，壁层做悬床将其缝合与胸壁上，使心脏充分暴露。在左心耳处剥离左冠状动脉，将左冠状动脉前降支处穿线备结扎，在穿线处LAD表面置一长约3-4cm硅胶管，打结，造成冠状动脉血流中断建立急性心肌梗死模型，结扎40～100分钟后小时给药，60～150分钟后放松结扎线及硅胶管以使冠状动脉再通形成再灌注。
分离股动静脉，其中股动脉插管，连接压力换能器记录动脉血压(AP)及平均动脉压(MAP)，股静脉经静脉插管给药。
实验结束后，迅速将心肌取下，剔除血管和脂肪等非心肌组织，在用生理盐水冲去血污后，用吸水纸吸去去水分，称全心重，沿冠状沟切除心房，留下心室称重。再顺房室沟从心尖到基部平行将心室切成5片～10片(1cm/片)，用生理盐水冲洗干净，吸干水分待用。
心肌切片放在1％TTC溶液中，置37℃孵箱中5～20分钟，并不时摇晃或搅拌染色使之与心肌充分接触。染色后，立即用生理盐水冲洗去多余染料，剪去各心肌切片被染色的非梗死区心肌，把未染色的梗死心肌称重，除以全心重或心室重即可求得梗死心肌占全心或心室重的百分比。
实施例1以2公斤左右重量的6只兔作实验动物，直接腹腔注射20％乌拉坦5ml/kg进行麻醉；人工呼吸频率30次/分，呼吸时间分配(0.51∶0.49)，潮气量(125ml/min)；在左心耳处剥离左冠状动脉，分别将左冠状动脉前降支近1/3、1/2、2/3处穿线备结扎；结扎后1小时给药，药品为生理盐水，2小时后放松结扎线及硅胶管以使冠状动脉再通形成再灌注。获得染色心脏梗死区重量与心室重比分别为0.29+/-0.11克和5.36+/-1.99(％)实施例2以2公斤左右重量的6只兔作实验动物，直接腹腔注射20％乌拉坦5ml/kg进行麻醉；人工呼吸频率30次/分，呼吸时间分配(0.51∶0.49)，潮气量(125ml/min)；在左心耳处剥离左冠状动脉，分别将左冠状动脉前降支近2/1处穿线备结扎；结扎后分别40、50、60、70、80分钟给药，药品为腺苷196μg/kg/min，2小时后放松结扎线及硅胶管以使冠状动脉再通形成再灌注。获得染色心脏梗死区重量与心室重比分别为0.25+/-0.18克和4.45+/-3.24(％)实施例3以2公斤左右重量的6只兔作实验动物，直接腹腔注射20％乌拉坦5ml/kg进行麻醉；人工呼吸频率30次/分，呼吸时间分配(0.51∶0.49)，潮气量(125ml/min)；在左心耳处剥离左冠状动脉，分别将左冠状动脉前降支近2/1处穿线备结扎；结扎后分别1小时给药，药品为硝酸异山梨酯(3μg/kg/min)，分别在100、110、120、130、140分钟后放松结扎线及硅胶管以使冠状动脉再通形成再灌注。获得染色心脏梗死区重量与心室重比分别为0.11+/-0.11克和1.70+/-1.72(％)实施例4以狗作实验动物(比格犬和杂种犬体重范围在10～15公斤)5只，先A肉注射氯胺酮5ml，再静脉注射3％戊巴比妥5ml/kg进行麻醉；人工呼吸频率30次/分，呼吸时间分配(0.51∶0.49)，潮气量(125ml/min)；在左心耳处剥离左冠状动脉，将左冠状动脉前降支近1/2处穿线备结扎；结扎后1小时给药，药品为腺苷200μg mg·kg-1·min-1，2小时后放松结扎线及硅胶管以使冠状动脉再通形成再灌注。获得染色心脏梗死区重量与心室重比分别为0.48+/-1.00和0.01+/-0.02(％)动态心电图监测ECG-II，心外膜心电图的ST-T改变动脉血压及血压dp/dt监测狗-股动脉呼吸频率及CO2分压的监测血清心肌酶谱监测LDH，CK血清脂质过氧化产物监测SOD，MDA。
权利要求
1.一种用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，其特征在于——采用冠状动脉结扎和解开结扎方法分别构建动物的心肌梗死和再灌注模型；——用NBT或者TTC对再灌注模型心肌进行染色，通过梗死心肌占全心或心室重的百分比判定药物的有效性。
2.按照权利要求1所述用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，其特征在于所述动物的心肌梗死和再灌注模型的构建为——对动物麻醉后施行开胸手术，直视下剥离冠状动脉，用套管结扎冠状动脉左前降支造成冠状动脉血流中断，构建急性心肌梗死模型；——在缺血40～100分钟后，恒速给药；——在缺血60～150分钟后，解开结扎线，造成血管再通，构建再灌注模型。
3.按照权利要求2所述用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，其特征在于所述对动物麻醉后，先做气管插管，连接呼吸机，人工呼吸。
4.按照权利要求3所述用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，其特征在于在左冠状动脉前降支近1/3～2/3范围处结扎。
5.按照权利要求4所述用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，其特征在于在缺血40～100分钟后，给药；在缺血60～150分钟后，解开结扎线，开始再灌注。
6.按照权利要求5所述用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，其特征在于给药途径为股静脉。
7.按照权利要求6所述用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，其特征在于呼吸频率20～45次/分，呼吸时间分配为0.70∶0.30～0.40∶0.60，潮气量为100～150ml/min。
8.按照权利要求7所述用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，其特征在于当选用狗作实验动物时，麻醉采用先肌肉注射氯胺酮5ml～8ml，再静脉注射3％戊巴比妥4～8ml/kg；当选用兔作实验动物时，麻醉采用直接腹腔注射20％乌拉坦4～8ml/kg。
9.按照权利要求8所述用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，其特征在于将实验动物的颈总动脉连接电磁流量计，测量心输出量(CO)；将实验动物的股动脉连接压力换能器，记录动脉血压(AP)及平均动脉压(MAP)。
10.按照权利要求1所述用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，其特征在于所用药物为腺苷及含有腺苷成分的复方制剂。
全文摘要
一种用于心肌保护作用类药物的药效学实验方法，及在腺苷类药物中的应用，其特征在于采用冠状动脉结扎和解开结扎方法分别构建动物的心肌梗死和再灌注模型；用NBT或者TTC对再灌注模型心肌进行染色，通过梗死心肌占全心或心室重的百分比判定药物的有效性。本发明方法对心肌保护作用类药物的药效判定直观、稳定而且可靠。
文档编号A61K49/00GK101062420SQ20061004638
公开日2007年10月31日 申请日期2006年4月25日 优先权日2006年4月25日
发明者薛百忠, 王怀良, 高山红, 王宏英, 杜文斌, 薛雁, 徐梅, 沈文彧, 李淼, 刘宏大 申请人:沈阳守正生物技术有限公司