专利名称：山楂核提取物及其在制备治疗呼吸道感染的药物和空气消毒剂中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种山楂核提取物及其制备方法，以及所述山楂核提取物和/或其药物组合物在制备治疗呼吸道感染的药物和制备空气消毒剂上的用途。
背景技术：
山楂核提取物是山楂果核经干馏得到的黑色粘稠液体，具有抑菌效果，可以用于杀菌消炎和消毒净化空气。但是山楂果核经干馏得到的黑色粘稠液体中含油脂、胶状物和水，作为药用或食品原料，尚需浓缩精制。
现有技术中公开了很多山楂核提取物的制备方法，主要有CN1001566A中公开了一种以山楂核为原料，在90-450℃的温度范围内干馏，获得干馏液，并经过液体精馏等技术得到液体烟熏香剂和医用舒痛精药物的方法。
CN1041281A中公开了一种以山楂核为原料提取医用舒痛精的方法，先将干燥洁净的山楂核在90～450℃温度范围内干馏，获得的干馏液再经精馏，除去低沸点物、高沸点物以及液体烟熏香剂等物质，收集精馏釜底中沸点为210～220℃黑色粘性油状液体，得到其所说的医用舒痛精。
CN1102206A中公开了一种从山楂核中提取食用烟熏香料的方法，采用山楂核干馏，取其100-150℃恒温下的烟熏蒸汽冷凝过程，其特征在于冷凝后的油状物经过滤，然后将其滤液输入罐中，在常温、常压条件下，采用物质比重分离法，使滤液分为上、下两层，上层液经虹吸分离，即可得到该产品。
CN1182538A中公开了一种从山楂核提取消毒杀菌剂的方法，其特征在于它由下列步骤组成a)将收购的山楂核经清洗沥水后装入干馏容器内，加热至90-110℃进行干馏，蒸汽冷凝收集液体；b)当无液体流出后提高加热温度至200-300℃，保温3-4小时，继续干馏，蒸汽冷凝收集液体，直至无液体流出，停止加热，降温弃渣；c)将(a)、(b)两项液体混合沉淀40-60小时，分离上层枣红色水状物，即为半成品，与底层黑色有光泽的油状粘稠体分离；d)再将(C)项半成品加入蒸馏罐中加热蒸馏，至少六段以上的精馏，精馏温度为90-98℃，蒸汽冷凝成液体尾弃，收集黄色无油水性溶液即为成品液；e)成品液加活性炭进行脱色，其配比为成品液与活性炭比为30∶1-2；f)产品检验，包装入库。
CN1275346A中公开了山楂核直接提取山楂核汁液技术，采用炉内直接加热山楂核使其产生汽烟，将汽烟导入胆管然后冷凝，产出山楂核汁液，再经沉淀分离，静置比重分离，得到产品。具体步骤为洗净山楂核，去掉杂质；自然凉干；入炉前用水浸泡；沥水后即入炉；两段加温，提取干馏液。两段加温干馏液混合沉淀；分离水状物；静置比重分离；虹吸分离。
CN1299861A中公开了一种山楂核馏油提取液及其制作方法，其以山楂核馏油的粗制品与水的混合物作为原液，原液浓度为50-70％，在105-130℃的温度区间进行常压蒸馏，即得出所需馏出液。
上述公开了山楂核提取物的各种制备方法，较本发明而言步骤复杂并且重现性较差，申请人通过反复的实验优化了工艺参数，得到了一种新的制备山楂核提取物的方法。所得的山楂核提取物是微黄色或无色的水性溶液，含有枸橼酸15-20％、对羟基苯甲酸2-4％、氯原酸2-4％、熊果酸1-3％。
发明内容
本发明的目的在于提供一种山楂核提取物。
本发明涉及制备山楂核提取物的方法，其特征在于它由下列步骤组成(1)将山楂核经清洗沥水后装入干馏容器内，渐进式加热90-115℃进行干馏，蒸汽冷凝收集液体；(2)当无液体流出后，提高加热温度至250-350℃，保温3-5小时后，继续干馏，蒸汽冷凝收集液体，直至无液体流出后停止加热，降温出渣弃去；(3)将(1)、(2)两项液体混合沉淀50-80小时，分离上层枣红色水状物，即为半成品；(4)再将(3)项半成品加入蒸馏罐中加热蒸馏，至少五段以上的精馏，精馏温度为90-110℃，同样为渐进式升温蒸馏，蒸汽冷凝成液体，收集微黄色无油水性溶液即为成品液；(5)成品液加活性炭脱色得到无色或微黄色的产品，成品液与活性炭比为40∶10。
所得的山楂核提取物是微黄色或无色的水性溶液，含有枸橼酸15-20％、对羟基苯甲酸2-4％、氯原酸2-4％、熊果酸1-3％。
本发明涉及山楂核提取物和/或其药用组合物在制备治疗呼吸道感染的药物上的用途。
本发明还涉及山楂核提取物和/或其药用组合物在制备空气消毒剂上的用途。
所述山楂核提取物可以采用药剂学上的常规制备方法，制成任何一种药剂学上可接受的剂型，如喷雾剂、滴剂、洗液、浸膏、栓剂、硬胶囊、软胶囊、片剂、霜剂。针对山楂核提取物的理化性质决定其剂型，例如按照本发明制备的山楂核原液为油状物，一般可制为喷雾剂。各种制剂的制备参照上海科学技术出版社1997版的《中药制剂学》。
当然如果需要，该山楂核提取物还可以与其他中药、中药的提取物或其他有效成分组成组合物，再制成相应的剂型，用于治疗呼吸道感染或者用于空气消毒。
具体实施例方式
一、制备山楂核提取物实施例1将120kg山楂核，用水清洗后沥水，装入160立升的干馏罐中渐进式加热升温至105℃，进行干馏，产生的蒸汽经冷凝后收集液体，再提高温度310℃，保温5小时后并继续干馏得到液体，两次液体合并后静止沉淀80小时，分出上层枣红色水状物半成品8kg，将半成品精馏，其温度85-100℃，其蒸汽进行八段精馏冷凝收集黄色无油水性溶液体为成品4.2kg，加入活性炭140g，脱色后成产品，含有枸橼酸16％、对羟基苯甲酸2.6％、氯原酸3％、熊果酸1.5％。
实施例2将120kg山楂核，用水清洗后沥水，装入160立升的干馏罐中加热至115℃，进行干馏，产生的蒸汽经冷凝后收集液体，再提高温度345℃，保温3.5小时后，继续干馏得到液体，两次液体合并后静止沉淀50小时，分出上层枣红色水状物半成品5.6kg，将半成品精馏，其温度92-94℃，其蒸汽进行七段精馏冷凝收集黄色无油水性溶液体为成品4.2kg，加入活性炭260g，脱色后成产品，含有枸橼酸19％、对羟基苯甲酸3.2％、氯原酸3.9％、熊果酸2.6％。
二、采用用本发明实施例1的山楂核提取物进行了抗病毒试验和抗呼吸道感染的药效学试验，结果如下1.抗病毒试验1.1.体外抗病毒试验1.1.1.对Hep-2培养细胞的毒性试验通过毒性试验观察到，0.96mg/ml、1.85mg/ml二种稀释度的山楂核提取物药液对细胞生长无明显影响，故取这二种稀释度的药液作抗病毒试验用。
1.1.2.对病毒致细胞病变作用的影响受试病毒副流感-1、RSV、CoxB4、CoxB5、CoxB6、ADV3、ADV7、HSV-I、HSV-II。
表1山楂核提取物对病毒致细胞病变作用的影响
结果可见，山楂核提取物对所试9种病毒均有较强的抑制作用，在所试剂量(0.96mg/ml、1.85mg/ml)范围内，抑制强度与阳性对照药病毒唑相当，不仅对RSV等5种RNA病毒所致细胞病变有不同程度的抑制作用，而且对ADV3等DNA病毒所引起的细胞病变作用亦有明显的抑制效果，表明山楂核提取物的抗病毒作用较广。
1.2.体内对流感病毒的作用1.2.1.对小鼠流感病毒性肺炎的作用表2山楂核提取物对小鼠感染流感病毒所致肺病变的影响
以5、10g/kg/d灌胃小鼠，能显著减轻感染小鼠的肺指数，由于流感病毒感染引起肺部炎症，随着炎症的浸润、渗出，使肺重量增加，肺指数值升高。肺重量的大小反映了肺炎的严重程度，山楂核提取物能显著降低感染小鼠的肺指数，表明能减轻流感病毒所致肺炎的程度。
以上体内外试验表明，山楂核提取物有良好的抗病毒作用，为临床治疗上呼吸道病毒性感染提供了药理学基础。
2.体外抗菌试验2.1.试管稀释法以双黄连颗粒为阳性对照药，测试山楂核提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、表皮葡萄球菌、A群链球菌，肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌的抗菌作用。
山楂核提取物和双黄连颗粒60mg/ml对大肠埃希氏菌、产气肠杆菌、肺炎克雷伯菌三种革兰氏阴性菌无抗菌作用。该二种药物对表皮葡萄球菌的MIC相同，均为20mg/ml。山楂核提取物对金黄色葡萄球菌的MIC为30mg/ml，低于双黄连颗粒的60mg/ml。山楂核提取物在60mg/ml时抑制A群链球菌的生长，而双黄连在该浓度时对A群链球菌无抑制作用。提示山楂核提取物对金黄色葡萄球菌和A群链球菌的抗菌作用略强于双黄连颗粒。
2.2.血清法以双黄连颗粒和先锋4号为阳性对照药，测试山楂核提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、A群链球菌，肺炎克雷伯菌的抗菌作用。
山楂核提取物兔血清、双黄连颗粒兔血清及正常对照兔血清在各浓度对大肠埃希氏菌及肺炎克雷伯菌均无抗菌作用。金黄色葡萄球菌和A群链球菌在含有正常兔血清的培养基内生长较不含血清的培养基对照管内为少，而山楂核提取物兔血清和双黄连颗粒兔血清使这2种细菌的生长在浓度较高的培养基内较正常血清生长更少或不生长，提示有一定抑制作用。先锋4号兔血清对受试的4种细菌都呈极显著的抑制作用。
3.免疫试验山楂核提取物大剂量组和中剂量组能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数(P＜0.05)。提示该药对小鼠非特异性免疫功能有一定增强作用。
4.抗炎试验表3山楂核提取物抗二甲苯所致耳肿胀的作用
(a)肿胀率＝(致炎耳重-未致炎耳重)/未致炎耳重
*P＜0.05**P＜0.01山楂核提取物大、中、小剂量组均有抗二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的作用，其中小剂量组的作用显著，与生理眼水组相比有非常显著差异(P＜0.01)，大、中剂量组与生理盐水组相比亦有显著差异(P＜0.05)。
5.止咳试验豚鼠机械刺激引咳法可待因组有显著的镇咳作用，作用快而持久。从咳嗽抑制百分率的数值上看，山楂核提取物各剂量组有止咳趋势，其中山楂核提取物小、大剂量组在用药后30min，山楂核提取物大剂量组在60min，其咳嗽抑制百分率与正常对照组相比有显著差异(P＜0.05)。
按中医肺经风热症辨证标准以及西医上呼吸道感染(感冒)的诊断标准，用山楂核提取物和荆银合剂对入组病人进行临床研究，每组30例，结果表明如下山楂核提取物治疗上呼吸道感染(肺经风热证)显效率66.67％，总有效率96.67％，荆银合剂显效率63.33％，总有效率96.67％，与双黄连颗粒比较，均无统计学差异。研究表明，山楂核提取物制剂治疗肺经风热证的上呼吸道感染疗效确切可靠，并有一定抗病毒作用。
三、采用用本发明实施例1的山楂核提取物进行空气消毒的试验，结果如下本发明的山楂核提取液的空气消毒剂可在有人或无人的环境中进行喷洒。最好是采用喷雾器进行喷洒。喷洒可采用原液，用量为0.5-2ml/m3。也可采用原液稀释2-3倍后进行喷洒。
下面结合实施例和试验例对本发明作进一步阐述，但这些实施例和试验例绝不是对本发明的任何限制。
空气消毒试验试验材料1.试验柜1M3气雾室，试验温度为26-30℃，相对湿度70％-85％。
2.气溶胶发生器全玻璃同心圆喷雾器，喷雾压力为2kg/cm2。
3.气溶胶采样器全玻璃液体冲击式采样器，采样流量为10升/分。
4.试验菌株金黄色葡萄球菌ATCC6538株，试验时柜内气溶胶浓度在1×108cfu/m3左右。白色念珠菌ATCC10231株，试验时柜内气溶胶浓度在1×107cfu/m3左右。
5.山楂核空气消毒剂，试验时用其原液。
试验方法1.中和剂试验采用稀释法。将3×104cfu/ml试验菌菌悬液分别加入气溶胶采样器内。在1m3气雾柜喷药数分钟后采样1分钟为喷药组，在1m3气雾柜内喷水数分钟后采样1分钟为对照组，用常规方法进行活菌计数，比较喷药组与对照组菌数有无差别，观察气雾柜内的消毒剂对采样器内的试验菌有无影响。
2.杀菌试验试验设消毒组和对照组。试验时向1m3气雾柜内喷菌、同时风机搅拌3分钟，静止1分钟后采样1分钟为消毒前空气含菌量，喷药(白色念珠菌喷药3.9ml；金黄色葡萄球菌喷药2.5ml)，在预定消毒时间采样1分钟。对照组将喷药改为喷水，其它同消毒组。用常规方法进行活菌计数。
上述试验用以下公式求出杀菌率(P)Pt=Vo′(1-Nt)-Vt′Vo′(1-Nt)×100%]]>Nt=Vo-VtVo×100%]]>Pt作用至t时间的杀菌率；Nt空气中细菌自0至t时的自然衰亡率；Vo和Vt分别为试验组消毒前和消毒后空气中的含菌量；Vo’和Vt’分别为对照组(相应于试验组消毒前和消毒后)空气中的含菌量。
每种试验重复五次。
结果A中和剂试验采用稀释法进行中和试验结果表明，喷药组和对照组菌量无明显差别，证明气雾柜的消毒剂对采样器内的试验菌无杀灭作用(见表4)。
表4中和剂试验
B杀菌试验对空气中金黄色葡萄球菌的杀灭作用在1m3气雾柜内喷消毒剂2.5ml对气雾柜中的金黄色葡萄球菌15、30和60分钟的杀灭率均为99.99％(见表5)。
表5对空气中金黄色葡萄球菌的杀灭效果
对空气中白色念珠菌的杀灭作用在1m3气雾柜内消毒剂3.9ml对气雾柜中白色念珠菌15、30和60分钟的杀灭率为99.91％、99.96％和100.00％(见表6)。
表6对空气中白色念珠菌的杀灭效果
C山楂核提取物的毒理学试验试验方法依据GB7919-87工业毒理学1、急性吸入毒性试验实验采用静式吸入法，样品以100000mg/m3的剂量对动物进行加热蒸发染毒，染毒时间2小时，观察一周，未见动物有急性中毒症状及死亡现象，LD50＞100000mg/m3，属实际无毒级。
2、急性皮肤刺激试验样品用原液作豚鼠皮肤刺激试验，未出现红斑和水肿，刺激指数均值为0，按皮肤刺激强度评价最高分值在0～0.4之间，属无刺激性。
3、粘膜刺激试验样品用原液作兔眼粘膜刺激试验，粘膜刺激的平均指数48小时后为0，属无刺激性。
4、人体致敏试验样品按GB7919-87进行人体致敏试验，共20名，其中男9名、女11名，年龄22～66，按其评价标准该样品对人体无致敏性。
应用例 山楂核提取物空气消毒剂现场试验报告依据卫生部消毒技术规范检测24件样品(酒楼包房空气)的细菌总数。
No.1-9消毒前，No.13-21消毒后No.10-12对照前No.22-24对照后。
方法与步骤消毒液浓度(剂量)每立方米空间用原液4毫升，作用时间25分钟试验环境温度(℃)20相对湿度(％)68采样方法选30m3包房四间，三间作消毒试验组，一间作对照组，包房喷药量每间为120毫升，对照组喷同剂量的清水。消毒前将营养琼脂平板放入房间对角线里、中、外三点，高度均在1.5米，暴露5分钟后立即关盖作为消毒前空气含菌量测定。然后用风雷II型超低量喷雾器力加入中草药空气消毒剂喷雾，待25分钟后，另放入营养琼脂平板进行消毒后采样(方法同前)。
检测方法用常规方法进行细菌总数计数。
检测结果见表7。
表7
本发明的中草药空气消毒剂消毒效果为平均杀灭率95％。
权利要求
1.一种山楂核提取物，其特征在于所述山楂核提取物是由山楂核经干馏提取的微黄色或无色的水性溶液，含有枸橼酸15-20％、对羟基苯甲酸2-4％、氯原酸2-4％、熊果酸1-3％。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该杀菌剂pH值2-2.6，比重0.998-1.00g/ml。
3.上述权利要求1-2任一项所述的山楂核提取物在制备治疗呼吸道感染的药物中的用途。
4.上述权利要求1-2任一项所述的山楂核提取物在制备空气消毒剂中的用途。
5.一种制备如权利要求1-2任一项所述的山楂核提取物的方法，其特征在于(1)将山楂核经清洗沥水后装入干馏容器内，渐进式加热90-115℃进行干馏，蒸汽冷凝收集液体；(2)当无液体流出后，提高加热温度至250-350℃，保温3-5小时后，继续干馏，蒸汽冷凝收集液体，直至无液体流出后停止加热，降温出渣弃去；(3)将(1)、(2)两项液体混合沉淀50-80小时，分离上层枣红色水状物，即为半成品；(4)再将(3)项半成品加入蒸馏罐中加热蒸馏，至少五段以上的精馏，精馏温度为90-110℃，同样为渐进式升温蒸馏，蒸汽冷凝成液体，收集微黄色无油水性溶液即为成品液；(5)成品液加活性炭脱色得到无色或微黄色的产品，成品液与活性炭比为40∶10。
全文摘要
本发明涉及一种山楂核提取物，其制备方法，以及所述山楂核提取物在制备治疗呼吸道感染的药物中的用途，还有其在制备空气消毒剂中的用途。
文档编号A61L9/01GK1969982SQ20061016193
公开日2007年5月30日 申请日期2006年12月8日 优先权日2006年12月8日
发明者李剑一 申请人:李剑一