专利名称：：Pcv-2疫苗的制作方法PCV-2疫苗本发明涉及一种抗猪圆环病毒(PCV-2)的疫苗，以及制备这种疫苗的方法，用于保护仔猪免受PCV感染。PCV-2被认为与在幼猪中观察到的断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)有关。这种疾病于1991年在加拿大首次遇到。临床征象和病理于1997年公布(Clark等Proc.Am.Assoc.Swine.Pract，1997:499-501,Harding等，Proc.Am.Assoc.Swine.Pract,1997:503.)，而且包括进行性衰竭，呼吸困难，呼吸急促和偶尔地黄疽以及机能性黄疽。Nayar等，Can.Vet.J.Volume38，1997年6月在猪中检测到临床症状为PMWS的猪圆环病毒，并作出结论PCV可能与PMWS有关，然后已知的PCV公认为是PK-15细胞的天然栖居者。后来的Later出版物(Hamel等，J.Virol.，72(6)，5262-5267，1998;Meehan等，J.gen.Virol.,79，2171-2179，1998)证实了这些发现，而且提i义(Meehan等，上文)新的病原性PCV为PCV-2，而原始的PK-15细胞培养分离物(Tischer等，Nature295，64—66，1982)，应该称为PCV-1,PCV-1和PCV-2是较小的(17nm)二十面体的无包膜病毒，其含有环状单链DNA基因组。PCV-2基因组的长度为大约1768bp。来源于世界上不同区域的PCV-2分离物似乎彼此密切相关，而且显示95到99%的核普酸序列同一性(Fenaux等，J.Clin.Micorbiol.，38(7)，2494-2503，2000)。PCV的ORF-2编码病毒的假定衣壳蛋白。PCV2的ORF2编码一种233个氨基酸的蛋白。所有PCV-2分离物的ORF2都共有91-100%的核苷酸序列同一性和90-100%的推断的氨基酸序列同一性。PCV-1与PCV-2的ORF2基因之间只存在65到67%的核苷酸同一性和63到68%的氨基酸序列同一性(Fenaux等，上文)。PDNS(猪皮炎和肾病综合征)是猪农场主的另一个主要问题，其似乎与PMWS差不多同时存在。PDNS的特征是红/褐色环状皮肤损害，伴有出血，通常在耳朵，侧腹，小腿和大腿处。Chae.C(2005)Vet.J.169326-336提供了PCV-2相关综合征和疾病的综述。需要一种能保护小猪对抗PCV-2相关疾病如PMWS和PDNS的疫苗。然而，至今为止还没有市场上可买到的对抗PCV-2相关疾病的疫苗。传统地，人们将想到基于灭活的全PCV-2病毒的用于猪的常规疫苗。但是，在PCV-2的情况下，事情因PCV—2在细胞培养物中没有复制到高滴度的事实而变得复杂。作为选择，疫苗可以基于来源于PCV-2的重组抗原。PCV-2蛋白已经在各种表达系统中表达。例如，Liu等(ProteinExpressionandPurification,21，115-120(2001)在大肠杆菌中表达了与MBPHis标签连接的由PCV-2的0RF-2编码的完整蛋白的融合蛋白。Kim等(J.Vet.Sci，3(1)，19-23，2002)在杆状病毒表达系统中表达了PCV-2的0RFl和2。Blanchard等(Vaccine,21，4565-4575，2003)也在昆虫细胞中在基于杆状病毒的系统中表达了ORF1和0RF2。对已经产生了PCV-2蛋白的昆虫细胞进行裂解，并配制成疫苗，用于接种无特异病原体(SPF)的仔猪。仔猪在第一次加强方案中接受一种蛋白，该方案中DM接种后进行亚单位疫苗接种，或者在另一组小猪中，仔猪在两次注射中接受0RF1或者0RF2蛋白。不过，所有的实验都用SPF猪进行，SPF猪是无病原体的，因此没有任何母系来源的对抗PCV一2抗体。可以从4周龄直到大约15周龄观察到由PCV一2引起的PMWS和PDNS。似乎直到断奶仔猪是相当安全的，免受PCV-2相关疾病的危害，只有在断奶以后，仔猪才有获得临床症状的机会。因此，为了保护疫苗接种的仔猪，仔猪理想的是将必须在先地防止断奶，因为PCV-2相关疾病什么时候出现是不可预见的。为了用两次加强免疫的疫苗接种方案达到这个目的，仔猪需要在第一周龄已经获得它们的初始疫苗接种，这样它们可以在大约断奶的时侯接受加强疫苗接种，并刚好在断奶以后获得完全的保护以对抗PCV-2感染。仔猪可能具有母系来源的对抗PCV一2的抗体(MDA)。(实施例中提供了仔猪中MDA滴度的分布，仔猪用于本发明的疫苗的实验。)但是众所周知母系来源抗体的存在将干扰疫苗接种。仔猪可能具有不同滴度的MDA。很高的被动MDA滴度可以保护仔猪对抗PCV-2感染(Merial:"PCV-2Diseases:Fromresearchbacktothefieldstrain"，18thIPVS，HamburgGermany,June2004，page99-101)。然而当仔猪已经到达相关的龄期(也即，断奶后)时，具有较低的MDA滴度的仔猪不会防止PCV-2感染。对于那些仔猪，其似乎是在田野中遇到的大多数，MDA滴度可能太低以致于不能提供保护以免受PCV-2感染，而该滴度仍然高足以干扰疫苗接种，例如，用常规灭活的PCV-2疫苗接种。尤其因为灭活疫苗可能包含较少的抗原，由于该病毒在细胞培养物中不能繁殖到高滴度(或者复杂的和耗费时间的浓缩步骤应该引入到疫苗生产中)这一事实。尤其对于这组仔猪，已经发现本发明的疫苗提供了对抗PCV-2感染的充分保护。利用本发明，提供了可用于保护仔猪的方法中的疫苗，甚至是对抗PCV—2，对抗PCV—2感染，并因此对抗PCV—2相关疾病，最值得注意的是PMWS和PDNS的MDA阳性的仔猪。本发明提供了一种抗PCV-2的疫苗，其包含至少20微克猪圆环病毒2型(PCV-2)的ORF-2蛋白/剂量。已经发现，包含每剂量至少20微克(jag)PCV-2的ORF-2蛋白的疫苗能引起对抗PCV-2感染(并因此对抗PCV-2相关疾病如PMWS和PDNS)的保护性免疫应答，甚至面对MDA时。疫苗优选包含每剂量至少50jag,最优选每剂量80jag。甚至可以制备本发明的抗原质量高达每剂量275yg的疫苗，而且这种疫苗在注射部位仍然不引起局部反应。当然，可以将甚至更多微克的抗原置于本发明疫苗的疫苗剂量中，但是如果用该疫苗获得的保护没有随着较高的剂量而改善，那么抗原载荷的增加只导致疫苗比必需的更昂贵。另外，增加的抗原剂量最终可导致注射部位不可接受的局部反应，其应该避免。本申请的实验部分提供了测定抗原质量的方法。本发明的疫苗可包含重组ORF-2蛋白，其中所述重组蛋白优选通过由杆状病毒表达栽体在昆虫细胞中表达的方式产生，所述杆状病毒表达载体包含在适合的启动子调控下的PCV-20RF-2基因序列。尽管本领域已知的其它适合的表达系统也可用于制备本发明的疫苗的方法中，但是已经发现使用巴库洛表达系统导致产生高产量的病毒抗原，而且该抗原显示良好的抗原性。使用巴库洛表达系统因此消除了对复杂而且耗费时间的步骤的需要，当抗原不能以高浓度产生时，例如在病毒感染细胞培养物中，其可使抗原浓缩到适合的水平。最常用的巴库洛表达载体是苜蓿银紋夜蛾(h^^/a/7力aca/2'尸077/ca)，其常与SF-9，SF-21或者Highfive昆虫细胞的昆虫细胞培养物一起使用。SF-9和SF-21是来自草地贪夜蛾(SpocTo/^era/Vi^/peiY/a)的卵巢细胞系，Highfive细胞来自于粉紋夜蛾(7V/c力o/7/i^/a//)的卵细胞。应该将PCV-ORF-2基因置于适合的启动子的调控下。杆状病毒表达系统中最常用的启动子是多角体蛋白基因的启动子和plO基因的启动子，意味着ORF-2PCV-2基因序列被插入到杆状病毒基因組的多角体基因座或plO基因座中的插入位点。也可以使用本领域已知的其它适合的启动子，同源的或者异源的。D.R.O'Reilly,L.K.Miller和V.A.Luckow(1992，W.H.Freeman&Co,NewYork)的"巴库洛表达栽体"中提供了对杆状病毒表达系统的所有方面的详细描述。此外，杆状病毒来源的表达载体和完全的表达系统可从许多不同的公司购买到。本发明的疫苗可进一步包含适合的佐剂。许多佐剂系统是本领域已知的，例如通常使用的水包油型佐剂系统。也可以使用任何适合的油，例如本领域已知的用于佐剂中的矿物油。油相还可包含不同油类，矿物或者非矿物的油类的适当混合物。适当的佐剂也可以包含维生素E，任选地与一种或多种油类混合。水包油型含佐剂的疫苗的水相将包含抗原物质。适当的制剂通常将包含大约25—60%的油相(40一75%的水相)。适当制剂的实例可包含30%的水相和70%的油相或者各50%。本发明的疫苗可通过本领域已知的任何适合的途径给药，如肌内、经皮或者皮下，其中肌内给药是优选的。本发明进一步提供了一种制备欲用于保护幼小仔猪对抗PCV-2感染的疫苗的方法，该仔猪是PCV-2MDA阳性的，其中所述的疫苗含有至少20jag/剂量的猪圆环病毒2型(PCV-2)的0RF-2蛋白。本发明的疫苗(通过某种方法制备的)可用于保护幼小仔猪对抗PCV-2感染的方法中。本发明的疫苗甚至可以用于保护幼小仔猪的方法中，该仔猪是对抗PCV-2，对抗PCV-2感染的母系来源的抗体(MDA)阳性的。已经发现本发明的疫苗可以保护仔猪，甚至当仔猪具有比较高的对抗PCV-2的MDA滴度时。在跨越欧洲的各个农场的田野中遇到的幼小仔猪中MDA滴度的分布列于表1中，而由本发明的疫苗提供的保护列于表2中。已经表明本发明的疫苗甚至可以为仔猪提供充分的对抗PCV-2感染的保护，该仔猪具有落入如实施例所限定的"第2簇"中的MDA滴度(表2)。落入该簇中的仔猪的MDA滴度为8到121og2，其是较高的MDA滴度。本发明的疫苗因此甚至可用于保护幼小仔猪的方法中，该仔猪对抗PCV-2的MDA滴度高达101og2，或甚至121og2(如用实施例中所示方法测量的)。从表1可以看出，在整个欧洲的各个农场收集的大约55%的仔猪属于此第2簇(当然属于第1簇的仔猪，其具有较低的MDA滴度而且其占群体的32%，也可被本发明的疫苗保护)。因此可以得出结论，本发明的疫苗可为野外遇到的绝大多数仔猪提供保护，包括具有高MDA滴度的那些仔猪。为了提供充分的保护，疫苗优选以2次加强免疫的疫苗接种方式给药，其中在第一到第四周龄给仔猪打第一针(初始疫苗接种)，优选在断奶之前，例如在第一周龄。可以在大约3周以后打第二针(加强疫苗接种)。这样仔猪在刚断奶以后就已经获得了完全的对抗PCV-2感染的保护，断奶是仔猪最易受到PCV-2感染，因而最易患PMWS和PDNS的时候。实施例实施例1:(确定母系来源的)PCV-2特异性抗体滴度对抗PCV-2的抗体滴度可以用下面的方法进行确定在96孔组织培养平板中形成单层PK15细胞，在80%铺满时，细胞用PCV一2的场分离物进行感染，并在C02孵育箱中于37匸进一步孵育2天。此阶段以后，细胞在乙醇中固定，并于2-8C储存直到使用。当大约20%的细胞被感染时，将平板用于测试。为了确定给定血清的PCV-2特异性抗体的滴度，进行系列稀释，并在乙醇固定的细胞上孵育。37r孵育1小时以后，平板用自来水洗涤，通过与FITC标记的兔抗猪IgG—起孵育对结合的抗体进行检测。将给定血清的滴度表示为最高稀释度的倒数，其中仍然可以观察到PCV-2特异性抗体应答.表1提供了预先断奶的仔猪中对抗PCV-2的母系来源的抗体滴度的典型分布。从来自整个欧洲的各个国家的232头仔猪中收集血清。表1在一组232头幼小仔猪中母系来源的抗体滴度的分布<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表l中可以分为3簇第l簇；滴度小于8的仔猪，第2簇;滴度从8到12的仔猪和第3簇；滴度为13和更高的仔猪。在第3簇中，母系来源的抗体滴度较高，预期这些仔猪在临界的龄期将被保护(Merial:"PCV-2Diseases:Fromresearchbacktothefieldstrain",18thIPVS，HamburgGermany,June2004，page99-101)。然而在第l簇中，母系来源的抗体滴度较低，大部分的这些仔猪可以被容易地接种。但是，在笫2簇中，抗体滴度是这样的大小以致于常规的疫苗接种方法可能不能使这组的大多数免疫。因为超过半数的仔猪似乎属于这个簇，所以如果想从农场消除PMWS，则能保护这个簇的仔猪将是极其重要的。本领域公知在面对母系来源的抗体滴度时疫苗接种可以借助于佐剂和/或高抗原含量。哪种佐剂或抗原含量将能突破针对给定病原体的母系来源的抗体滴度是未知的。因此，在描述的实验中，我们设法限定保护第2簇中的仔猪对抗PCV-2感染所需的抗原的最小量。实施例2构建表达PCV-20RF-2的重组杆状病毒使用没有PCV的猪睾丸(ST)细胞，从待肥育猪的肺組织，其显示PMWS的临床和组织病理学的病征，分离PCV-2病毒。通过在没有PCV的PK15细胞上的5次传代繁殖病毒。从纯化自感染的PK15细胞上清液的PCV-2病毒制品分离DNA。使用包含BamHl限制性位点的引物(正向引物:CGGGATCCGTTTTCAGCTATGACGTAT，反向引物CGGGATCCTTTATCACTTCGTAATGGTT)，基于公开序列，进行PCR以扩增ORF-2基因。得到的扩增子包含完全的ORF-2基因加上侧翼BamHl限制性位点。在凝胶电泳后，切割和纯化扩增子。纯化的PCV-2ORF-2片段然后用BamHl消化，并连接到BamHl消化的pAcAS3上(Vlaket.al.(1990)Virology179312-320)。该质粒包含位于插入位点上游的plO启动子，其允许在plO启动子的调控下表达外源基因。TOP10F'细菌(Invitrogen，Carlsbad,USA)用连接混合物转化，并根据它们的序列选择含有正确的构建体的克隆。扩大阳性克隆，使用测序再次重新测试转移质粒DNA。转染之前，苜蓿银紋夜蛾核多角体病病毒(AcNPV,描述于Martenset.al.(1995)J.Virol.Methods5215-19)用Bsu36I消化。该病毒中的Bsu36I位点是plO基因座中的单一限制性位点。草地贪夜蛾(Sf9)细胞然后使用CellFectine(LifeTechnologies,Gaithersburg，USA)用转移质粒和Bsu361消化的AcNPV杆状病毒DNA转染。转染后第3天收获转染的上清液，并对Sf9细胞进行噬斑纯化。扩大噬斑，通过对分离的病毒DNA进行测序，来选择得到病毒的PCV-20RF-2基因，使用抗PCV-2兔和猪血清对Sf9细胞进行免疫荧光。制备重组杆状病毒BacPCV-2-0RF-2的种子，称为"Masterseed"。通过对分离DNA进行测序和对Sf9细胞进4亍免疫荧光，来测试Masterseed和Masterseed在Sf9细胞上的第5次传代的PCV-20RF-2基因的稳定插入。进行滴定以测定病毒制品中感染性病毒的量。对Sf9细胞进行滴定，并使用多克隆兔抗PCV-2免疫血清，通过观察杆状病毒特异性CPE和/或PCV-20RF-2特异性免疫荧光进行读数。证实产生了重组AcNPV杆状病毒BacPCV-2-0RF-2的噬斑纯化的Masterseed。通过测序和Masterseed以及来自Sf9细胞上的Masterseed的第5次传代的免疫荧光判断，该构建体在p10启动子的调控下在Sf9细胞上稳定表达PCV-0RF-2蛋白。实施例3PCV-2抗原的生产为了获得最大量的表达产物，进行中间试验以最佳化用于获得重组PCV-20RF—2蛋白的条件。所有的实验都使用28C悬浮培养的草地贪夜蛾21(Sf21)细胞进行。来自Masterseed的笫4次传代水平的BacPCV-2-0RF-2病毒被用于感染。为了最佳化生产，感染时的细胞密度是1.4x106细胞/ml，感染复数(M0I)是0.01，而且感染之后继续培养6天。得到的混合物称为表达产物收获物。在l年的期间内，在独立的实验中在最佳化条件下进行5次表达。由于抗原位于细胞中，所以对含有细胞和上清液的总收获物进行超声处理，到至少90%的细胞被破裂的程度。此后分批的超声波处理的收获物中活的重组病毒在连续搅拌下，于pH7.5用33mM二氮丙啶(BEI)在37*0下灭活72小时。灭活以后，通过添加1.6倍摩尔过量的疏代石克酸钠中和BEI。中和以后，通过600g低速离心10分钟来除去细胞碎片和多角体。得到的上清液称为灭活的病毒悬浮液。检验收获物的不育性以及完全灭活。通过在Sf9细胞上传代灭活的病毒悬浮液2周来检验完全灭活，并目测检查杆状病毒特异性CPE的缺乏。证实获得了8.5logl。TCID5。/ml的杆状病毒滴度，其用BEI处理以后完全灭活。实施例4PCV-2抗原量的测定低速离心之前和之后的灭活悬浮液样本，和亲本传递病毒的细胞培养物上清液样本，根据Laemmli(Lae隱li，U.K.(1970).Nature227680-685)的方法进行变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。使用4-12%梯度凝胶，其用考马斯亮蓝染色。当进行Western印迹时，把来自凝胶的蛋白质电泳传递到尼龙膜上，用溶于PBS的脱脂牛奶封闭，并与抗PCV-2分离物的稀释的多克隆猪血清反应。作为对得到的灭活病毒悬浮液的抗原量测定，把1微升(jlil)这种悬浮液以类似的方式跑胶，而牛血清白蛋白的系列稀释(Sigma,St.Louis，USA.cat.no.A-2153)在相同的凝胶上平行跑胶，作为参考，使用照相机捕获成像和使用GeneTools进行的计算机分析，通过比较BSA参考的密度与含有PCV_2的样本的密度，对灭活病毒悬浮液中的ORF一2基因产物进行定量(SynGene，Cambridge,UK.v.3.06.02),当低速离心之前和之后,通过在抗PrecisionPlusmarkers(Bio-Rad，Hercules,USA)的SDS-PAGE凝胶上进行电泳分离，来比较灭活的收获物时，该物质在离心之前产生了表观分子量(MW)为30和26.8kDa的2条几乎相等密度的重要条带，而离心以后该物质只包含下面的条带。当亲本转移病毒与重组病毒并排地跑胶时，亲本转移病毒只包含两条条带的上面的条带，这证明下面的条带是PCV的0RF-2，上面的条带是离心以后被除去的多角体蛋白。下面的26.8kDa条带的身份通过Western印迹被进一步证实，表明该条带，而不是30kDa的条带，与抗PCV—2病毒的多克隆猪血清反应。在5个独立的实验中确定PCV-2ORF-2的表达水平，存每种情况中，表达量高于测试的检测极限，具体地为每毫升灭活病毒悬浮液40到550微克(pg/ml)。实施例5PCV-2ORF-2的量对MDA阳性的幼小仔猪接受疫苗的影响配制不同的PCV-2ORF-2抗原含量的疫苗，用于接种具有各种水平的抗PCV-2的母系来源的抗体(MDA)的幼小仔猪。间隔3周提供两次疫苗接种。第一次疫苗接种以后5-6周，检测到抗该抗原的血清反应。从这些数据，计算面对MDA时，抗原含量对疫苗接受的影响。制备各种抗原稀释物，并与水包油的佐剂以1:1(v/v)混合，如本领域常见的。然后，在1到4周龄时，同窝仔被分成组，并用含有不同含量的PCV-2-ORF-2蛋白的疫苗进行肌内注射处理，或不进行接种。3周以后重复疫苗接种。产生以下组114头仔猪用1-14jagPCV-2ORF-2蛋白/剂量进行接种(组1)，85头仔猪用20和80pg/剂量进行接种(组2)。在第一次疫苗接种取血，并于其后5一6周时取血。制备血清，并通过免疫荧光法检测PCV-2抗体。为此，96孔组织培养板中的单层PK15细胞用PCV-2的区域分离物进行感染。培养2天以后，当大约20-30%的细胞被感染时，单层细胞固定于乙醇中，并2-8"C储存直到使用。为了确定滴度，测试血清的系列稀释物与细胞37"C孵育1小时，洗涤平板以后，通过用FITC-标记的兔抗猪IgG(Nordic,Tilburg，TheNetherlands)37X:孵育1小时来检测结合的抗体，滴度确定为最高稀释的倒数，其中仍然可以观察到PCV-2特异性荧光。对于所有的动物，测定第一次与第二次出血之间抗体滴度的下降。如果这个阶段抗体滴度没有下降或增强了，认为涉及的动物已经吸收了疫苗。而当PCV-2特异性抗体滴度降低时，认为疫苗接种没有成功，而且疫苗没有吸收。通过在疫苗接种时，使各种疫苗剂量的吸收与母系来源的抗体滴度相关，可以确定接种足够量的仔猪所需的最低抗原质量。该分析的结果列于表2中。表2.在各种MDA滴度和抗原浓缩物时疫苗吸收的百分比疫苗接种时组1:1-14)ag/剂量组2:20-80ng/剂量具有PCV-2特每类的仔猪每簇的疫苗每类的仔猪每簇的疫苗异性母系来数/疫苗吸收吸收百分数数/疫苗吸收吸收百分数源的抗体滴的仔猪数的仔猪数度(1og2)的仔猪的类别<43/390%1/1100%0/03/3615/135/572/23/3812/817%4/476%912/511/10106/013/101121/015/101226/07/41315/00%6/14%142/011/0150/04/0160/01/0>170/01/0总计114/3127%85/5160%保护的总数'114/4842%85/7386%*通过其中滴度小于13的已经吸收疫苗的仔猪数加上已经具有13或更高的滴度的仔猪数来提供保护的仔猪总数。在这个表格中，"疫苗吸收"指仔猪的疫苗接种导致加强疫苗接种1周后PCV—2特异性抗体滴度，等于或高于第一次疫苗接种时的PCV-2特异性滴度。在所有的这些情况中，证实疫苗引发了抗PCV-2的活性血清应答，而且在这样的情况下，可以认为仔猪被保护以免受PCV-2感染。然而，在加强接种l周后滴度小于笫一次疫苗接种时的滴度的仔猪中，疫苗不能诱导免疫应答，并观察到母系来源的抗体的自然减少，其将及时使这些动物易受PCV-2感染。从该表格证实，当使用等于或小于14微克的疫苗剂量时，在第1簇中(MDA滴度<7)，90%的动物由于疫苗接种而血清转化，并因此可以认为被保护。但是，在第2簇(MDA滴度>7和<13)中，只有接种剂量小于或等于14微克的17%的动物血清转化并被保护。在该组中，17只动物的滴度为13或更大，并因此已经被它们天然获得的PCV-2特异性母系来源的抗体保护。因此，可以推断，在该总共114头仔猪的组中，只有48头(42%)被保护；在第1和第2簇中，17头已经具有高母系来源的抗体滴度的仔猪加上31头血清转化的仔猪被保护。在用每剂量20微克或更多接种的组中，显著更多的动物被保护；在第l簇中所有的动物和第2簇中76%的动物因为PCV—2血清转化，并因此被保护，添加这个到MDA滴度为13或更多的仔猪中，发现该组中88%的仔猪被保护。因为当大约80%或更多的动物被保护时，获得了畜群保护，可以推断针对PCV-2的疫苗的抗原质量必须包含至少20pg抗原或更多抗原，以能有效地保护畜群抗PCV-2感染的后果。权利要求1.一种对抗PCV-2的疫苗，其包含至少20微克/剂量的猪圆环病毒2型(PCV-2)的ORF-2蛋白。2.权利要求1的疫苗，其包含至少50微克/剂量的猪圆环病毒2型(PCV-2)的0RF-2蛋白。3.权利要求1或2的疫苗，其中0RF-2蛋白是重组蛋白。4.前述权利要求中任一项的疫苗，其中0RF-2蛋白通过从杆状病毒表达栽体表达的方式在昆虫细胞中产生，所述杆状病毒表达载体包含在适合的启动子调控下的PCV-20RF-2基因序列。5.权利要求4的疫苗，其中启动子是plO启动子。6.前述权利要求中任一项的疫苗，所述疫苗进一步包含适合的佐剂。7.权利要求6的疫苗，其中佐剂是水包油乳液。8.权利要求6或7的疫苗，其中佐剂包括维生素E。9.制备用于保护仔猪对抗PCV-2感染的疫苗的方法，该仔猪是PCV-2MDA阳性的，，其中所述疫苗含有至少20微克/剂量的猪圆环病毒2型(PCV-2)的ORF-2蛋白。全文摘要本发明涉及一种对抗猪圆环病毒2型(PCV-2)的疫苗以及制备这种疫苗的方法，用于保护仔猪免受PCV-2感染。已经发现包含至少20微克/剂量的猪圆环病毒2型(PCV-2)的ORF-2蛋白的疫苗能引起抗PCV-2(并因此对抗PMWS)的保护性免疫应答，甚至当它们具有相对较高的对抗PCV-2的MDA滴度时。本发明的疫苗可包含重组ORF-2蛋白，其中所述重组蛋白优选通过由杆状病毒表达载体在昆虫细胞中表达的方式产生，所述杆状病毒表达载体包含在适合的启动子调控下的PCV-2ORF-2基因序列。文档编号A61P31/20GK101277717SQ200680036868公开日2008年10月1日申请日期2006年9月8日优先权日2005年9月9日发明者F·罗林克,P·范翁塞尔申请人:英特威国际有限公司