新生血管性眼病如黄斑变性、血管样纹、葡萄膜炎和黄斑水肿的治疗的制作方法

专利名称：新生血管性眼病如黄斑变性、血管样纹、葡萄膜炎和黄斑水肿的治疗的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法。该方法包括给 予嘧P定书t生物、苯并二氮杂革基书t生物，和包含其的药物组合物。
背景技术：
新血管形成，还称作血管生成，是形成新血管的过程。新血管形成 发生在正常发育期间，并且还在组织损伤后的伤口愈合中起重要作用。 然而，新血管形成还被牵扯作为许多病理状态，包括例如癌、类风湿性
关节炎、动脉粥样硬化、牛皮癣和眼病的重要病因。
与血管渗漏和/或新血管形成有关的眼病是发达国家中大多数的眼
发病和视觉缺失的原因(Campochiaro (2004) Expert Opin. Biol. Ther. 4:1395-402)。这种疾病的一个例子是糖尿病性视网膜病，其是罹患糖尿 病个体中常见的并发症，并且是新-视觉缺失病例的第五位主要原因。促
进糖尿病性视网膜病发展的最重要的先决条件是高血糖和血氧不足，其 导致血管渗透性增加、内皮细胞增殖和病理学新血管形成 (Chorostowska-Wynimko 等 J. Physiol. Pharmacol. (2005) 56 Suppl 4:65-70)。这些血管异常引起在斑(macula)中发生液体渗漏，其可导致渐 进性视力丧失。
其中新血管形成起作用的另 一个眼病是年龄相关性黄斑变性 (AMD),其是老年人中视力严重丧失的主要原因。AMD中的视力丧失 是由于脉络膜新血管形成(CNV)。新血管形成起源于脉络膜血管并生长 通过布鲁赫膜，通常在多个部位进行，进入视网膜色素上皮下间隔和/ 或视网膜(例如，参见Campochiaro等(1999) Mol. Vis. 5:34)。从这些新 血管的渗漏和流血导致视力丧失。
与眼新血管形成有关的眼病是视力丧失和视觉缺失的主要原因。因
此，仍然需要治疗新生血管性眼病的新方法。 发明概述
本发明涉及治疗新生血管性眼病的新方法。该方法包括给予嘧啶衍
生物、苯并二氮杂革基衍生物、和包含其的药物组合物的步骤。
在一个方面，本发明提供治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法,
包括对哺乳动物给用式(I)的化合物
<formula>formula see original document page 6</formula>(I)
或其盐或溶剂合物。
在另 一方面，本发明提供治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法，
包括对哺乳动物给用式(II)的化合物
或其盐或溶剂合物。
在另 一方面，本发明包括治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法 包括对哺乳动物给用式(II0的化合物
<formula>formula see original document page 6</formula>
(III)
或其盐或溶剂合物, 、式(n)化合物、式(ni)化合物、或其盐或 溶剂合物用于制备可用于治疗新生血管性眼病的药物的用途。
本发明还提供了式(i)化合物、式(n)化合物、式(in)化合物或其盐或 溶剂合物在治疗新生血管性眼病中的用途。


图i表示实施例i所述的vegf受体抑制剂在关于脉络膜新血管形 成(cnv)的小鼠的退行模型中的作用。在该退行模型中，使用激光灼烧
视网膜后极以诱发小鼠cnv。在激光致损伤后7天，对小鼠开始实施治 疗，在该治疗中，对小鼠给用单独的媒介物或在所示剂量下的5-[[4-[(2,3-二曱基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基]氨基]-2-甲基苯磺酰胺。在该 治疗开始后7天，测定cnv病灶的大小。结果在图l中用图表概括表 示。关于其它信息参见实施例一节。
图2表示用实施例1所述的vegf受体抑制剂、实施例3中所述的 玻连蛋白受体拮抗剂、或其组合进行预处理，在cnv预防模型中对小 鼠的损伤诱导的cnv的作用。结果在图1中用图表概括表示。关于其 它信息参见实施例一节。
发明详述
本发明提供了治疗哺乳动物的新生血管性眼病的新方法。该方法包 括对哺乳动物给予嘧啶衍生物、苯并二氮杂罩基衍生物、和包含其的药 物组合物的步骤。根据一个方面，待给用的化合物是帕左潘尼 (pazopamb ) ((5-((4-[(2,3-二曱基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]嘧啶-2-基) 氨基)-2-甲基苯磺酰胺)或其盐或溶剂合物。根据另一个方面，待给用的 化合物是(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-l-丙基氧基]-2-(2,2,2-三氟乙 基)-2,3,4,5-四氢-lH-2-苯并氮杂革-4-乙酸或其盐或溶剂合物。本发明人 还阐述了在对视网膜激光致损伤后用帕左潘尼处理显示了 ，与未经处理 的小鼠相比，所得脉络膜新生血管性病灶的尺寸缩小。另外，本发明人 表明了在对^L网膜激光致损伤之前用帕左潘尼、(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-l-丙基氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2，3，4，5-四氢-lH-2-苯并氮杂 革-4-乙酸或这些化合物的组合处理，所得的脉络膜新生血管性病灶的尺 寸缩小。因此，本发明人表明了帕左潘尼、(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨
基)-l-丙基氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢-lH-2-苯并氮杂革-4-乙 酸、及其衍生物、盐和溶剂合物可用作治疗眼中与新血管形成有关的疾 病的治疗剂。
在一个方面，本发明提供治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法， 包括对哺乳动物给用式(I)的化合物
(I)
或其盐或溶剂合物。
在具体实施方案中，本发明提供治疗哺乳动物的新生血管性眼病的
方法，包括对哺乳动物给用式(r)的化合物<formula>formula see original document page 8</formula>。
在另一个实施方案中，本发明包括治疗哺乳动物的新生血管性眼病 的方法，包括对哺乳动物给用式(r')的化合物<formula>formula see original document page 8</formula>
HCI H20 (r)
在另 一方面，本发明提供治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法,
包括对哺乳动物给用式(n)的化合物:
H。C一
,叉f T/、、。
或其盐或溶剂合物。
本发明还包括组合治疗。因此，在一些实施方案中，治疗方法包括
对哺乳动物给用式(m)的化合物
(III)
或其盐或溶剂合物并组合给用式(I)化合物、式(II)化合物、或其盐或溶剂 合物。
在另一方面，本发明包括治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法， 包括对哺乳动物给用式(m)的化合物
(III)
或其盐或溶剂合物。 在另一方面，本发明包括式(i)化合物、式(n)化合物、式(in)化合物、 或其盐或溶剂合物用于制备可用于治疗新生血管性眼病的药物的用途。
本发明还提供了式(i)化合物、式(n)化合物、式(ni)化合物、或其盐 或溶剂合物在治疗新生血管性眼病中的用途。
在本发明的一些实施方案中，新生血管性眼病是脉络膜新生血管性 疾病或视网膜新生血管性疾病。在具体的实施方案中，新生血管性眼病 选自渗出性年龄相关性黄斑变性、血管样紋、葡萄膜炎和黄斑水肿。
本文使用的术语"新生血管性眼病，，是指其中在眼中以致病方式生 成新血管的疾病。可#>据本发明方法治疗的新生血管性眼病包括以血管 渗漏为特征的那些疾病。新生血管性眼病可导致视力的部分或完全丧 失。在本发明方法中待治疗的新生血管性疾病可发生在眼睛的任何部 位，包括，例如角膜、虹膜、视网膜、玻璃体和脉络膜。
本文使用的术语"脉络膜新生血管性疾病，，是指以新血管侵入通过 布鲁赫膜(脉络膜的最内层)为特征的疾病。
本文使用的术语"视网膜新生血管性疾病"是指与新血管生长有关 的疾病，该新血管生长起源于视网膜静脉并且沿着视网膜的玻璃体表面 延伸。
可根据本发明方法治疗的眼血管病的非限制性例子包括渗出性年 龄相关性黄斑变性(AMD)、血管样紋、病理性近视、眼组织胞浆菌病综 合征、布鲁赫膜破裂、黄斑水肺(包括糖尿病性黄斑水肺)、肉状瘤病和 葡萄膜炎。可通过本发明公开方法治疗的其它疾病的例子包括萎缩性
AMD、圓锥角膜、舍格伦综合征、近视、眼瘤、角膜移植排斥、角膜损 伤、新生血管性青光眼、角膜溃疡、角膜划痕、增殖性玻璃体视网膜病 变、早产儿视网膜病变、视网膜变性、慢性青光眼、视网膜脱离、和镰 状细胞视网膜病变。
本发明提供治疗新生血管性眼病的方法。本文使用的"治疗，，是指 与疾病相关的一种或多种症状可-皮有利地改变所采用的任何方式。因 此，该术语包括治愈、预防或改善疾病的症状或副作用，或降低疾病进 展速率。
根据本发明的方法，可通过对要治疗的受试者给用有效量的 一种或 多种治疗剂来治疗眼血管病。本文使用的术语"有效量"是指治疗剂的 足够治疗、预防和/或改善疾病的一种或多种症状的量。
本文使用的术语"溶剂合物"是指由溶质(在本发明中，是指式(I)、 (11)、 (III)的化合物或其盐)与溶剂形成的化学计量不同的复合物。本发明 中使用的溶剂不干扰溶质的生物活性。适当的溶剂的例子包括但不限于 水、甲醇、乙醇和乙酸。优选地，使用的溶剂是可药用溶剂。适当的可 药用溶剂的例子包括但不限于水、乙醇和乙酸。在具体实施方案中，使 用的溶剂是水。
在一个实施方案中，预防或治疗本文公开的新生血管性眼病的方法
包括给用式(I)的化合物
(I)
或其盐或溶剂合物。
在某些实施方案中，式(I)化合物的盐是盐酸盐。在具体实施方案中，
式(i)化合物的盐是由式(r)表示的 一盐酸盐。式(i)化合物的 一盐酸盐的化
学名称是5-[[4-[(2,3-二曱基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基]氨基]-2-
曱基苯磺酰胺一盐酸盐
"')。
在另 一个实施方案中，式(I)化合物的盐是式(I)化合物的一盐酸盐一 水合物溶剂合物。式(I)化合物的 一盐酸盐 一水合物溶剂合物的化学名称 是5-((4-[(2,3-二曱基-2H-吲唑-6-基)曱基氨基]-2-嘧啶基)氨基)-2-甲基苯 磺酰胺一盐酸盐一水合物，如下式(I")所示<formula>formula see original document page 12</formula>
(r)。
本发明还包括预防或治疗本文公开的新生血管性眼病的方法，包括 给用式(n)的化合物
<formula>formula see original document page 12</formula>或其盐或溶剂合物。该化合物的化学名称是#-(2,3-二甲基-2!1-11引唑-6-基)-N气曱基-N、(4-[(曱基磺酰基)曱基]苯基)-2,4-嘧啶二胺。
式(I)或式(II)化合物的游离碱、盐和溶剂合物可根据例如以下的过程 制备于2001年12月19日提交的国际专利申请PCT/US01/49367并于 2002年8月1日公开的WO 02/059110中所述过程，和于2003年6月 17日提交的国际专利申请PCT/US03/19211并于2003年12月24日公开 的WO 03/106416中所述过程，或本文所述方法。式(III)化合物及其衍生 物可根据美国专利6,825,188或本文中所述的方法制备。
通常，本发明的盐是可药用盐。包括在术语"可药用盐"范围内的 盐是指本发明化合物的无毒盐。本发明化合物的盐可包括得自本发明化 合物中取代基上的氮的酸加成盐。示例性的盐包括以下的盐乙酸盐、 苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氬盐、硫酸氲盐、酒石酸氲盐、硼酸盐、溴 化物、乙二胺四乙酸钩、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、克拉维酸盐、
柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二石黄酸盐、依4乇酸盐、乙石黄 酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰胺苯胂酸
盐、己基间苯二酚盐、哈胺、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘曱酸盐、碘化 物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸、马来酸盐、 苦杏仁酸盐、曱磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、曱基硫酸盐、马来
酸一钾、粘酸盐(mucate)、萘石黄酸盐、硝酸盐、N-甲基葡糖胺、草酸盐、 双羟萘酸盐(恩波酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半 乳糖醛酸盐、钾、水杨酸盐、钠、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、 丹宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、曱苯磺酸盐、三乙基碘化物(triethiodide)、 三甲基铵和戊酸盐。其它的非可药用的盐可用于制备本发明的化合物， 并且它们构成了本发明的另 一方面。
本发明方法中使用的化合物可单独;故给用，或它们可在药物组合物 中被给用。因此，本发明另外提供了药物组合物在本发明治疗方法中的 用途。药物组合物包括式(I)、 (n)、 (III)的化合物及其盐或溶剂合物，以 及一种或多种可药用的载体、稀释剂或赋形剂。载体、稀释剂或赋形剂 必须与制剂中的其它组分是相容的，并且对其接受者是无害的。
药物制剂可以以单位剂量形式存在，该单位剂量形式每单位剂量含 有预定量的活性成分。该单位可含有例如1 iug-lg,如5|ng-500|Lig、 10|ug-250|Lig、 0.5mg國700mg、 2mg-350mg、或5mg画100 mg的式(I)、 (11)、
(ni)的化合物、或其盐或溶剂合物，根据治疗的疾病，给药途径，患者 的年龄、体重和病况而定，或者，药物制剂可以以每单位剂量含有预定 量的活性成分的单位剂量形式存在。在某些实施方案中，单位剂量制剂 是含有日剂量或亚剂量的(如上文所述的)或其适当的分数的活性成分的 那些单位剂量制剂。另外，这些药物制剂可通过药学领域公知方法的任 一种制备而成。
式(i)、 (n)、 (in)的化合物、或其盐或溶剂合物可通过任何适当的途 径给用。适当的给药途径包括经口、直肠、经鼻、局部(包括经颊、舌 下和眼)、阴道、和非肠道(包括皮下、肌内、静脉内、皮内、眼外、目艮 内(包括例如玻璃体内、视网膜下、巩膜下、脉络膜内、和结膜下)、鞘 内和硬膜外))。可理解的是，优选的给药途径可根据例如接受者的病况 而定。
本发明的方法还可与其它的治疗新生血管性眼病的方法组合使用。 在一些实施方案中，本发明的方法包括组合治疗，其中式(i)、 (n)、 (in) 的化合物或其盐或溶剂合物与一种或多种另外的用于治疗新生血管性
疾病的治疗剂组合给用。可用于组合治疗中的另外的治疗剂的非限制性
例子包括哌加他尼(pegaptanib)、兰尼单抗(ranibizumab)、 PKC412、奈帕 芬胺、和整联蛋白受体拮抗剂(包括玻连蛋白受体激动剂)。例如参见 Takahashi等(2003) Invest. Ophthalmol. Vis. Sci 44: 409-15, Campochiaro 等(2004) Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 45:922-31, van Wijngaarden等 (2005) JAMA 293:1509-13,授权给Callahan等人的美国专利No. 6,825,188,和授权给Manley等人的美国专利6,881,736;每篇文献作为 参考并入本文用于关于这些化合物的教导的目的。在具体实施方案中，
合物组合给用。
当采用组合治疗时，治疗剂可以一起给用或分开给用。对于组合治 疗中的多于一种的治疗剂可采用相同的给药方式；或者，组合治疗中的 不同治疗剂可通过不同方式给用。当治疗剂分开给用时，它们可以同时
地或以任何顺序(在时间上间隔较近或较远)顺序地给用。式(i)、 (n)、 (III)的化合物和/或其它的 一 种或多种药学活性剂和给用的相对时间可 以为了实现所需的组合疗效而进4亍选择。
适合于口服给药的药物制剂的存在形式可为离散单元，如胶嚢或片
剂；粉末剂或颗粒剂；在水性液体或非水性液体中的溶液剂或悬浮剂； 可食用的泡沫剂或起泡体(whips);或水包油型液体乳剂或油包水型 液体乳剂。
例如，对于片剂或胶嚢形式的口服给药，活性药物组分可与无毒的 口服用可药用惰性载体如乙醇、甘油、水等组合。可通过将化合物粉碎 到适当的粒度并与以类似方式进行粉碎的药物载体如可食用碳水化物 诸如例如淀粉或甘露醇混合制备粉剂。还可存在调味剂、防腐剂、分散 剂和着色剂。
可如上所述制备粉末混合物并装填已成型的明胶外壳制备胶嚢。在 装填操作之前，可将助流剂和润滑剂如胶体氧化硅、滑石、硬脂酸镁、 硬脂酸钙、或固体聚乙二醇添加到粉末混合物中。还可添加崩解剂或增 溶剂如琼脂、碳酸4丐或碳酸钠以改善当胶嚢被摄入时的药物的利用度。
另外，当希望或必要时，还可在混合物中引入适当的粘合剂、润滑 剂、崩解剂、和着色剂。适当的粘合剂包括淀粉，明胶，天然糖类如葡 萄糖或P-乳糖，玉米甜味剂，天然和合成的树胶如阿拉伯胶、黄蓍胶或
藻酸钠，羧曱基纤维素，聚乙二醇，蜡等。这些剂型中使用的润滑剂包 括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯曱酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解 剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。可通过
制备粉末混合物、造粒或破块(slugging)、添加润滑剂和崩解剂并压片来
配制片剂。通过将适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质以及任 选的粘合剂如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯基吡咯烷酮、溶解
延迟剂如石蜡、再吸收(resorption )促进剂如季盐和/或吸收剂如膨润 土、高岭土或磷酸氪钓混合制备粉末混合物。粉末混合物可通过用粘合 剂如糖浆、淀粉糊、acadia mucilage或纤维素材料或高分子材料的溶液 润湿并冲压过筛进行造粒。作为造粒的另一选择方法，粉末混合物可以 穿过压片机，使得成形不完全的小块(slug)被破碎形成颗粒。颗粒可被润 滑以防止粘着于压片机机头，通过添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物 油进行润滑。然后将经润滑的混合物压成片剂。本发明的化合物还可与 自由流动的惰性载体混合并直接压缩成片剂，而无需经历造粒或破块步 骤。可提供透明或不透明的保护性包衣，其包括虫胶密封包衣、糖或高 分子材料的包衣，和蜡的抛光包衣。可向这些包衣中添加染料以区分不 同的单位剂量。
口服液体如溶液剂、糖浆剂和酏剂可制备在剂量单位形式中，使得 其提供的量含有预定量的化合物。可通过将化合物溶解在适当调味的水 溶液中制备糖浆剂，而通过使用无毒的醇媒介物可制备酏剂。可通过将 化合物分散在无毒的媒介物中配制悬浮剂。还可添加增溶剂和乳化剂如 乙氧基化异十八烷醇和聚氧乙烯山梨醇醚、防腐剂、调味添加剂如薄荷 油或天然甜味料或糖精或其他的人工甜味料等。
适当时，可将用于口服给药的剂量单位制剂用微嚢密封。该制剂还 可被制备为延长或持续释放，例如通过将颗粒材料包覆或包埋在聚合 物、蜡等中实现。
用于本发明的药剂还可以脂质体递送系统的形式给药，例如小单层 脂质体、大单层脂质体和多层脂质体形式。脂质体可以从各种磷脂如胆 固醇、十八胺或磷脂酰胆碱形成。
用于本发明的药剂还可使用单克隆抗体作为结合了化合物分子的 单独的载体被递送。化合物还可与作为可针对耙标的药物载体的可溶性 聚合物结合。这些聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚鞋基
丙基曱基丙烯酰胺-苯盼、聚羟基乙基天冬酰胺苯酚、或被棕榈酰基取代 的聚氧化乙烯聚赖氨酸。另外，本发明的化合物可与一类用于实现药物 控制释放的可生物降解型聚合物结合，所述聚合物为例如聚乳酸、
polepsilon己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氬吡喃、聚 氰基丙烯酸酯、和水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。
适合于透皮给药的药物制剂可作为离散贴片形式存在，该形式将保 持与接受者的表皮密切接触达延长时间段。例如，活性成分可如在 Pharmaceutical Research, 3(6), 318(1986)中概述的通过离子电渗从贴片 中被释放。
适合于局部给药的药物制剂可被配制成膏剂、霜剂、悬浮剂、洗剂、 粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。
为了治疗眼睛或其它外部组织，例如口和皮肤，可将制剂作为局部 膏剂或霜剂的形式施用。当配制成膏剂时，活性成分可与石蜡或水可混 溶的软膏基质使用。或者，可将活性成分与水包油型霜剂基质或油包水 型基质配制成霜剂。
适合于对眼局部给药的药物制剂包括滴眼剂，其中将活性成分溶解 在或悬浮在适当的载体特别是含水溶剂中。要给用到眼的制剂将具有眼 科学相容性的pH值和同渗质量摩尔浓度。 一种或多种的眼科学可接受 的pH调节剂和/或緩沖剂可被包含在本发明的组合物中，其包括酸类， 如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱类如氩氧化钠、磷酸钠、 硼酸钠、枸橼酸钠、乙酸钠、和乳酸钠；和緩冲剂如柠檬酸盐/葡萄糖、 碳酸氬钠和氯化铵。这些酸类、碱类和緩沖剂可以保持组合物的pH值 在眼科学可接受范围内的量被包含。 一种或多种的眼科学可接受的盐可 以足够使组合物的同渗质量摩尔浓度落在眼科学可接受范围内的量被 包含在组合物中。这些盐包括那些含钠、钾或铵阳离子和盐酸根、柠檬 酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氬根、硫酸根、硫代硫酸根 或亚硫酸氬根阴离子的盐。
适合于在口中用于局部给药的药物制剂包括菱形片、软锭剂和漱口剂。
其中载体是固体的适合于经鼻给药的药物制剂包括粒度在例如20 到500微米范围内的粗粉剂，其通过鼻吸方式被给用，即，从靠近鼻子 处保存粉末的容器中通过急速吸入而穿过鼻部通道给药。其中载体是液
体的作为鼻喷雾剂或滴鼻剂给用的适当的制剂包括活性成分的含水溶 液或油溶液o
适合于通过吸入给用的药物制剂包括细粒的粉或雾，所述粉或雾通 过各种型式的计量式剂量给药的喷雾器、雾化吸入器或吹入器产生。
适合于非肠道给药的药物制剂包括水性和非水性的无菌注射液，其 可含抗氧化剂、緩冲剂、抑菌剂和使制剂与预定接受者的血液等渗的溶
质；以及水性的和非水性的无菌悬浮液，其可含助悬剂和增稠剂。制剂 可存在于单位剂量或多剂量的容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，并且
可在冷冻干燥(冻千)条件下储存，仅仅需要在即将使用前添加无菌液体 载体例如注射用水。可从无菌的粉剂、颗粒剂和片剂制备临时的注射溶 液和悬浮液。
在本发明的一些实施方案中，通过眼内注射或其它用于经眼递送的 装置使药物制剂适合于眼内给药。可在本发明方法中使用的经眼装置的 例子包括眼周装置或晶状体内装置，隐形眼镜片和脂质体。例如参见美 国专利3,416,530; 3,828,777; 4,014,335; 4,300,557; 4,327,725; 4,853,224; 4,946,450; 4,997,652; 5,147,647; 5,164,188; 5,178,635; 5,300,1 14; 5,322,691; 5,403,901; 5,443,505; 5,466,466; 5,476,511; 5,516,522; 5,632,984; 5,679,666; 5,710,165; 5,725,493; 5,743,274; 5,766,242; 5，766,619; 5,770,592; 5,773,019; 5,824,072; 5,824,073; 5,830,173; 5,836,935; 5，869,079, 5,902,598; 5,904,144; 5,916，584; 6,001 ,386; 6,074,661; 6,110,485; 6,126,687; 6,146,366; 6，251 ，090; 6,299,895; 6,331,313; 6,416,777; 6,649,184; 6,719,750; 6,660,960;和美国专利公 开No. 2003/0064088, 2004/0247645和2005/0113806;每篇文献以它们 关于眼用装置的教导为目的作为参考被并入本文。
眼递送装置可设计用于控制释放一种或多种治疗剂，具有不同的规 定的释放速率和维持剂量动力学和渗透性。通过对聚合物基质进行设计 (包括不同的选择和性能)以获得控制释放，选择生物可降解/生物易蚀 型聚合物(例如聚乙烯-乙酸乙烯酯(EVA)、超水解PVA)、羟烷基纤维素 (HPC)、甲基纤维素(MC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚己内酯、聚乙 醇酸、聚乳酸、聚酐，和选择聚合物分子量、聚合物结晶度、共聚物的 比、加工条件、表面抛光、几何学、赋形剂添加和聚合物涂层等，将增 强药物扩散、侵蚀、溶解和渗透。
用于使用眼用装置递送药物的制剂可合并一种或多种活性剂和适 合于指定的给药途径的助剂。例如，活性剂可与任何可药用的赋形剂、 乳糖、蔗糖、淀粉粉末、链烷酸纤维素酯、硬脂酸、滑石、硬脂酸镁、 氧化镁、磷酸和硫酸的钠和钙盐、阿拉伯胶、明胶、藻酸钠、聚乙烯吡 咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，被制成用于常规给药的片剂或胶嚢。或者， 可将化合物溶于聚乙二醇、丙二醇、羧甲基纤维素胶体溶液、乙醇、玉 米油、花生油、棉子油、芝麻油、黄蓍胶、和/或各种緩冲液。化合物还 可与生物可降解型聚合物和生物不可降解型聚合物两种、和可具有延时 性质的载体或稀释剂组分混合。生物可降解型组分的示例性例子可包括 白蛋白、明胶、淀粉、纤维素、右旋糖酐、多糖、聚(D,L-丙交酯)、
D,L-丙交酯-乙交酯共聚物、聚乙交酯、聚羟基丁酸酯、聚碳酸烷基酯、 和聚原酸酯及其混合物。生物不可降解型聚合物的示例性例子可包括 EVA共聚物、硅橡胶和聚丙烯酸曱酯，及其混合物。
用于经眼递送的药物组合物还包含原地可胶凝的含水组合物。这种 组合物包括当接触眼或泪液时有效促进胶凝的浓度的胶凝剂。适当的胶 凝剂包括但不限于热固性聚合物。本文中使用的术语"原地可胶凝的" 不仅包括当接触眼睛或泪液时形成凝胶的低粘性液体，而且包括粘性更 大的液体，如当施用于眼时具有实质上增加的粘性或凝胶硬挺性的半流 体和触变性凝胶。例如参见Ludwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3;57: 1595-639，以其关于在眼睛药物递送中使用的聚合物例子的教导为目的 将其作为参考并入本文。
本领域技术人员可理解的是，除了上面特别指出的成分之外，制剂 还包括本领域中其它的与所讨论的制剂类型有关的常规试剂。例如，适 于口服给用的制剂可包括调味剂。
根据本发明的方法，对哺乳动物给用具体的式(I)、 (n)或(ni)的化合 物。通常，本发明给用的药剂之一的量将根据许多因素而定，所述因素 包括，例如，哺乳动物的年龄和体重，需要治疗的明确的病况，病况的 严重性，制剂性质和给药途径。最终，该量将由主治医师或兽医自行判 断。
一般地，式(i)、 (n)、 (m)的化合物、或其盐或溶剂合物的给药量为， 每天o.i到ioo毫克/千克的接受者(哺乳动物)体重，通常为每天i到10 毫克/千克体重。在具体实施方案中，化合物局部给药(例如对眼给药)，
并且化合物的给药总量可为lpg到10 mg,例如5|ug到500|ug,或
10ng～250ng实施例
如文中使用的，在这些过程、路线和实施例中使用的符号和约定与 在同时4戈牙牛学文献，例长口， the Journal of the American Chemical Society 或the Journal of Biological Chemistry中使用的那些一致。通常使用标准 的一字母或三字母缩写指明氨基酸残基，除非另作说明，这些氨基酸被 假定为是L-构型。除非另作说明，所有的起始原料得自商业供应商并且 未经纯化而使用。具体地说，以下的缩写可用于实施例和整个说明书中
g(克)；mg(毫克)；
l(升)；mL(毫升)；
inl(微升)；psi(磅/平方英寸)；
M(摩尔)；mM(毫摩尔)；
N(标准的)Kg(千克)
i. v.(静脉内)；Hz(赫兹)；
MHz(兆赫)；mol(摩尔数)；
mmol(毫摩尔)；RT(室温)；
min(分钟)；h(小时数)；
mp(熔点)；TLC(薄层色谱法)；
Tr(保留时间)；RP(反相)；
DCM(二氯甲烷)；DCE(二氯乙烷)；
DMF(N,N-二曱基甲酰胺)；HOAc(乙酸)；
TMSE(2-(三曱基曱硅烷基)乙基)；TMS(三甲基甲硅烷基)；
TIPS(三异丙基甲硅烷基)；TBS(叔丁基二曱基甲硅烷基);
HPLC(高压液相色谱)；
THF(四氢吹喃)；DMSO(二曱基亚砜)；
EtOAc(乙酸乙酯)；DME( 1,2-二曱氧基乙烷)；
EDTA乙二胺四乙酸
FBS胎牛血清IMDM Iscove改性Dulbecco培养基
PBS 磷酸盐緩冲盐水
RPMI Roswell Park Memorial Institute
RIPA緩冲剂 *
RT 室温
*150mMNaCl， 50 mM Tris-HCl， pH7.5, 0.25。/。(w/v)-脱氧胆酸盐， l%NP-40, 5mM原钒酸钠，2 mM氟化钠，和蛋白酶抑制剂鸡尾酒。
除非另有陈述，所有的温度用。C(摄氏度)表示。除非另作说明，所 有的反应在室温下在惰性气氛下进行。
以下施例描述了在式(I)和(II)化合物的合成中特别有用的中间体 的合成。
中间体实施例1
2,3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑的制备 <formula>formula see original document page 20</formula>
方法1:
在室温向搅拌的18.5 g(O.ll mol)的3-曱基-6-硝基-lH-吲唑在350 ml
丙酮中的溶液中添加20 g(0.14 mol)的四氟硼酸三曱基氧4翁。溶液在氩气 下搅拌3小时后，减压除去溶剂。向得到的固体中添加饱和的NaHC〇3 水溶液(600 mL)和4:1的氯仿-异丙醇的混合物(200 ml),混合物经搅拌并 使各层分离。水相用另外的氯仿:异丙醇(4 x 200 mL)洗涤，合并的有机 相经干燥(Na2S04)。过滤并除去溶剂，得到黄褐色固体。固体用乙醚(200 mL)洗涤，得到2,3-二曱基-6-硝基-2H-吲唑，为黄色固体(15.85 g, 73 %)。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) S 8.51 (s, 1H), 7.94 (d' J =9.1 Hz, 1H), 7.73 (d, J= 8.9 Hz， 1H)， 4.14 (s, 3H)' 2.67 (s, 3H). MS (ES+, m/z) 192 (M+H)
方法2:在2分钟内将原曱酸三曱酯(11 mmol, 1.17g)添加到已被冷却到-30。C的三氟化硼乙醚络合物(12.5 mmol, 1.77 g)在二氯甲烷(2.0 mL) 中的溶液中。混合物回温到0。C， 15分钟，然后^L冷却到-7(TC。然后将 硝基吲唑(IO mmol, 1.77 g)在二氯己烷(30 mL)中成淤浆，然后立刻被添 加到经冷却的混合物中。混合物在-70。C搅拌15分钟，在室温搅拌17 小时。17小时后，混合物变成红色并呈非均相。反应混合物用饱和碳酸 氩钠溶液(20 mL)猝灭，并分离有机层。水层用二氯甲烷(30 mL)提取。 二氯甲烷层经合并，用水(30mL)提取。二氯甲烷层经减压蒸馏，直到剩 余-10mL。添加丙醇(10mL),减压除去剩余的二氯甲烷，得到黄色淤 浆。通过过滤分离产物，得到2,3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑(650/。， 7mmo1, 1.25 g),为浅黄色粉末。
1H刚R(300 MHz,
DMSO-de) S 8.51 (s, 1 H), 7.94 (d, J= 9.1 Hz' 1H), 7.73 (d， J= 8.9 Hz， 1H)' 4.14 (s, 3H)' 2.67 (s, 3H). MS (ES+， m/z) 192 (M+H)
方法3:
在25 ml的圆底烧瓶中在搅拌下将3-甲基-6-硝基吲唑(7.27 mmol， 1.28 g)溶于DMSO(4.0 mL)，并用浓石克酸(7.27 mmol, 0.73 g)处理，得到 浓稠淤浆。该淤浆用硫酸二甲酯(21.1 mmol, 2.66g)处理。混合物在氮气 下在5(TC加热72小时。72小时后得到浓稠的黄色淤浆。将该淤浆冷却 并慢慢地用饱和石友酸氢钠溶液(IO mL)处理。混合物用二氯曱烷(2 x 20 mL)提取。二氯曱烷层经合并，用水(20mL)反提取。二氯甲烷层用丙醇 (10mL)处理，减压蒸馏除去二氯甲烷。过滤分离固体，黄色固体用庚烷 (5mL)洗涤并进行风干，得到2,3-二曱基-6-硝基-2H-吲唑产物(70y。， 0.97 g)，为浅黄色固体。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 8 8.51 (s， 1H), 7.94 (d' J = 9.1 Hz, 1H)， 7.73 (d, J-8.9 Hz' 1H), 4.14 (s, 3H), 2.67 (s' 3H). MS (ES+, m/z)192(M+H) 。
方法4:
在250 mL的3颈圆底烧瓶中添加3-曱基-6-硝基-lH-p引唑辟iJ臾盐(5.0 g, 18.2 mmol)和二氯甲烷(25 mL)。混合物在25。C搅拌并用DMS0(5 mL)
处理。通过注射器添加硫酸二曱酯(6.7g, 5.0 mL, 53.0 mmol),将反应在 70。C浴中加热回流。7小时后HPLC分析显示起始原料为9%。此时4亭止 加热并开始处理。在室温下向反应混合物添加々包和碳酸氢钠溶液(35 mL)。使各层分离，水层用二氯曱烷(25mL)提取。二氯曱烷层经合并， 用水(2x25mL)洗涤。二氯甲烷层减压蒸馏直到除去一半体积。添加丙 醇(25mL),并继续减压蒸馏，直到除去所有的二氯甲烷。得到黄色淤浆， 其在25。C搅拌1小时。过滤分离产物，得到的黄色固体用庚烷(IO mL) 洗涤。得到2,3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑(70。/o，2.43g),为黄色固体。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) S 8.51 (s, 1H), 7.94 (d, J - 9.1 Hz, 1H), 7.73 (d， J-8.9 Hz, 1H), 4.14 (s, 3H), 2.67 (s， 3H). MS(ES+, m/z)192(M+H) 。
中间体实施例2
2,3-二曱基-6-氨基-2H-吲唑的制备
方法l:
在0。C,在5分钟内，向搅拌的2,3-二曱基-6-硝基-2H-吲唑(1.13 g) 在2-甲氧基乙基醚(12 ml)的溶液中滴加4.48 g的氯化锡(II)在8.9 ml的 浓盐酸的溶液。添加完毕后，除去水浴，将溶液搅拌另外的30分钟。 向反应中添加约40 ml的乙醚，得到沉淀物。得到的沉淀物通过过滤一皮 分离，用乙醚洗涤，得到黄色固体(l.l g，95 %),为2,3-二甲基-2H-吲唑 -6-胺的盐酸盐。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) S 7.77 (d, J - 8.9 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H)' 7.88 (m, 1H), 4.04 (s, 3H), 2,61 (s, 3H). MS (ES+， m/z) 162 (M+H) 。
方法2:
对2 L的3颈圆底烧弁瓦配备氮气入口和出口和枳4戒搅拌。启动中等 流速的氮气流，并向反应器中添加10 %的Pd/C(50o/o水，润湿，6.0 g)。
开动搅拌，向反应器添加曱醇(750mL)和中间体实施例1的产物(50g)。 将曱酸铵(82.54 g)溶于水(120mL)。以保持反应温度在25。C到30。C范围 内的添加速率将曱酸铵的水溶液添加到反应溶液中。反应在25。C继续进 行。6小时后，根据HPLC分析判断反应完成。过滤混合物，催化剂用 甲醇(50mL)洗涤。曱醇层经合并，减压除去溶剂。将残余物溶于水(200 mL),并用二氯甲烷(3 x250 mL)提取。二氯曱烷层经合并，减压除去溶 剂以除去大约一半的溶剂。添加庚烷(400 mL),并继续真空蒸馏直到剩 余约300 mL的反应产物淤浆。过滤分离产物，并在50。C真空干燥4小 时，得到2,3-二甲基-6-氨基-2H-吲唑，为游离碱(40.76 g, 96.7%)。

NMR (300 MHz, DMSO-d6) 8 7.31 (d' J = 8.9 Hz' 1H), 6,45 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 6.38 (s， 1H), 4.95 (s， br, 2H), 3.85 (s, 3H), 2.44 (s, 3H) MS (ES+, m/z) 162 (M+H)
中间体实施例3
N-(2-氯嘧啶-4-基)-2,3-二甲基-2H-吲唑-6-胺的制备
在室温下，向4觉拌的中间体实施例2的产物(2.97 g, .015 mol)和 NaHCO3(5.05 g, .06 mol)在THF(15 mL)和乙醇(60 mL)中的溶液中添加 2,4-二氯嘧啶(6.70 g, .045 mol)。反应在85。C搅拌4小时后，将悬浮液冷 却到室温，过滤，并用乙酸乙酯充分洗涤。滤液经减压浓缩，得到的固 体与乙酸乙酯一起研磨，得到N-(2-氯嘧啶-4-基)-2,3-二甲基-2H-吲唑-6-胺(89 %, 3.84 g)。
1H), 6.42 (d, J= 8.8 Hz， 1H), 6.37 (s, 1H)， 5.18 (brs， 1H), 3.84 (s' 3H), 2.43 (s, 3H). MS (ES+, m/z) 274 (M+H)
方法1:
H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 7.28 (d' J= 9.0 Hz,
方法2:
向配备有气动机械搅拌器、温度计和氮气入口/出口的1L的3颈烧 瓶中添加中间体实施例2的产物(32.89 g, 0.204 mol, 1.0当量)在425 mL(13体积)的EtOH/THF(4/l)中的溶液，碳酸氢钠(51.42 g, 0.612 mol, 3,0 当量)，然后添加2,4-二氯嘧啶(45.59 g, 0.306 mol, 1.5当量)。将烧瓶内 容物加热到75 °C并在74-76 °C保持6-7小时。通过HPLC监控反应进程(中 间体实施例2的产物<2%)。在30分钟内将反应内容物冷却到20-25°C, 并在20-25。C保持30分钟。然后在30分钟内将反应内容物进一步冷却 到10-12°C,并在该温度保持另外IO分钟。过滤内容物，滤饼用EtOAc(2 x 100 mL, 3.0体积)、和去离子水(514 mL, 15.6体积)洗涤。然后将滤饼 在真空干燥箱中在35。C干燥过夜，得到所需产物44.75 g，为白色固体 (80.1%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 57.28 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6,42 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.37 (s, 1H)， 5.18 (brs, 1H), 3.84 (s， 3H), 2.43 (s, 3H). MS (ES十,m/z) 274 (M十H) 。
方法3:
向2 L的夹套反应器中添加IMS(IOOO mL)、中间体实施例2的产物 (100 g, 0.620 mol, 1当量)、碳酸氬钠(107g, 1.27 mol, 2.05当量)和2,4-二氯嘧啶(IOI g, 0.682 mol, 1.1当量)。搅拌溶液，并在85。C的夹套温度 下加热回流8小时。然后将得到的淤浆冷却到5CTC,添加水(500 mL), 以保持温度在40到5(TC之间。然后在内部温度为50。C下搅拌反应1小 时，然后冷却到20°C。过滤收集固体产物，用水(750 mLx2)洗涤，然 后用(450 mLxl)洗涤。在6CTC真空干燥过夜后，得到135 g(80M)的 N-(2-氯嘧啶-4-基)-2,3-二甲基-2H-吲唑-6-胺。
中间体实施例4
N-(2-氯嘧啶-4-基)-N,2,3-三甲基-2H-吲唑-6-胺的制备<formula>formula see original document page 25</formula>方法1:
在室温下向搅拌的中间体实施例3的产物(7.37 g)在DMF(50 ml)中 的溶液中添加Cs2C03(7.44 g, 2当量)和碘甲烷(1.84 ml, 1.1当量)。混合 物在室温撹拌过夜。然后将反应混合物倾入到水-水浴中，过滤收集沉淀 物，并用水洗涤。沉淀物经风干，得到N-(2-氯嘧啶-4-基)-N,2,3-三曱基 -2H-卩引唑-6-胺，为灰白色固体(6.43 g, 83%)。
1H NMR (400
MHz, DMSO-d6) S 7.94 (d, J - 6.0 Hz, 1 H)， 7.80 (d, J = 7.0 Hz， 1 H)， 7.50 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 6.24 (d, J- 6.2 Hz, 1H)， 4.06 (s, 3H)' 3.42 (s, 3H), 2.62 (s， 3H). MS (ES+, m/z) 288 (M+H)
方法2:
在搅拌下，向配备有气动机械搅拌器、温度计、加料漏斗和氮气入 口/出口的3L的3颈烧弁瓦中添加DMF(272 mL, 5体积)和中间体实施例3 的产物(54.4g, 0.20mol, 1.0当量)。另外对反应混合物添加碳酸铯(194.5 g, 0.60 mol, 3.0当量)并同时保持反应温度在20-25。C之间。反应混合物 在20-25。C搅拌IO分钟。在10分钟内添加碘甲烷(45.1 g, 0.32 mol, 1.6 当量)并同时4呆持温度在20-30。C之间。反应混合物在20-30。C搅拌(通 常，反应在1-2小时内完成)。在-30分钟内添加去离子水(925 mL, 17 体积)，并同时保持温度在25-4(TC 。反应混合物在20-25。C搅拌40分钟。 过滤分离产物，然后滤饼用H20/DMF(6 : 1 , 252 mL， 4.6体积)洗涤。湿 滤饼在40-45。C真空干燥，分离出N-(2-氯嘧啶-4-基)-N,2,3-三甲基-2H-巧l唑-6-胺(51.7g, 90.4%),为黄色固体。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) S 7,94 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.80 (d， J = 7.0 Hz, 1 H)， 7.50 (d， J = 1.0 Hz， 1H), 6.88 (m, 1 H)' 6.24 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.42 (s, 3H)' 2.62 (s， 3H). MS (ES+, m/z) 288 (M+H) 。方法3:
向2L夹套反应器中添加DMF(383 mL)、碳酸二曱酯(192 mL)、中 间体实施例3的产物(115 g, 0.420 mol, 1当量)和碳酸钾(174 g, 1.26 mol, 3当量)。悬浮液在135。C的夹套温度下搅拌并加热回流6小时。然后将 得到的淤浆冷却到60°C,慢慢地添加水(1150 mL)，并保持反应温度为 50-65°C。然后将反应冷却到20°C,并在内部温度2(TC下搅拌2小时， 然后冷却到10。C,并过夜，然后过滤。固体用水(230 mLX2)在室温下 洗涤，用IMS:水(1:1)的混合物(230mLXl)漂洗，在60。C真空干燥过 夜后，得到101 g(83。/。)的N-(2-氯嘧啶-4-基)-N,2,3-三曱基-2H-吲唑-6-胺。
中间体实施例5
5-氨基-2-曱基苯磺酰胺的制备
方法1:
在0°C ，在15分钟内，向搅拌的2-曱基-5-硝基苯磺酰胺(4.6 g, 0.021 mol)在2-曱氧基乙基醚(43 mL)中的溶液中滴加16.1 g的氯化锡(II)在32 mL浓盐酸中的溶液。添加完毕后，除去水浴，溶液搅拌另外30分钟。 向反应添加约130 mL的乙醚。将混合提取物剧烈搅拌1小时。混合物 用NaOH和NaHC03的溶液碱化，用乙酸乙酯提取(x 3)。合并的乙酸乙 酯层用无水MgS04干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。粗产物与甲醇一起 研磨，得到2.4g的纯的5-氨基-2-曱基苯磺酰胺，为浅褐色固体。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) S 7.11-7.10 (m, 3H)， 6.95(d， J-8.1 Hz, 1H), 6.60 (dd, J-8,1 &2.4 Hz， 1H),5.24 (s, 2H),
2.36(s,3H). MS(ES+, m/z) 187 (M+H) 。
中间体实施例6
4-[(甲基磺酰基)曱基]苯胺的制备 方法1:
将4-硝基千基溴(40 g, 0.185 mol)和曱基亚磺酸钠(19.5 g, 1当量)在 乙醇(460 mL, 0.4M)中混合。混合物搅拌并被加热到8(TC回流。在3 小时后，将反应混合物冷却到室温，并过滤收集灰白色固体。该固体用 EtOH洗涤两次，并风干，得到37 g的甲基.4-硝基节基砜。
1H NMR (300 MHz， DMSO-d6) 5 8.27 (d， J - 8.6 Hz， 2H), 7.69 (d, J= 8.6 Hz， 2H)， 4.71 (s, 2H), 2.96 (s, 3H). MS (ES+, m/z) 216 (M+H) 。
将甲基.4-硝基节基砜(9.5 g， 0.044 mol)和10% Pd/C(0.95 g, 0.1 w/w) 在乙酸乙酯(220 mL， ~ 0.2M)中混合。将混合物置于含40 psi氬气的Parr 振荡器中。~3小时后，将反应混合物倾入到50%的MeOH/EtOAc(400 mL)中并剧烈搅拌30分钟。通过硅藻土垫和硅胶过滤混合物。除去滤垫 上的黑色物质，并置于80%的MeOH/EtOAc(200 mL)中，并剧烈搅拌30 分钟。再次使混合物过滤通过硅藻土垫和硅胶。重复该过程两次。合并 所有滤液。蒸发并干燥。与乙酸乙酯一起研磨，得到纯4-[(曱基磺酰基) 甲基]苯胺。
NMR (300隐，DMSO-de) 8 7.03 (d' J= 8.4 Hz, 2H), 6.54 (d, J= 8.6 Hz, 2H)， 5.20 (s, 2H), 4.20 (s， 2H)' 2.79 (s, 3H). MS(ES十，m/z〉186(M+H) 。
方法2:
向配备有磁力搅拌棒和回流冷凝器的圆底烧瓶(l.O L)中添加4-硝基 千基溴(40 g, 0.185 mol, 1.0 eq.)、甲基亚磺酸钠(21.7 g, 0.213 mol, 1.15 eq.)和乙醇(400 mL, 200标准强度，10 vol.)。搅拌并加热混合物到80 "C回流2小时。通过快速HPLC监控反应进程(当HPLC显示4-硝基千基 溴<0.5%时认为反应完成)。将混合物冷却到室温。过滤并用乙醇(40mL) 洗涤滤饼。湿滤饼(15g,46.2mmol)用于下一步的氢化，无需另外干燥。
向500 mL的氲化烧瓶中添加上述的湿滤饼曱基4-硝基千基砜(15 g:
46.2mmol, 4妄制得时的样子4吏用)、10%Pd/C(0.1 g, 1 。/ow/w)和乙醇(120 mL,200标准强度)和水(40mL)。用氢气替换反应器中的气体(3次)。 在室温下在H2(65psi)下振摇反应器30分钟，在50。C振摇2小时。通过 HPLC监控反应进程(当HPLC显示曱基 4-硝基千基砜< 0.2 %时认为 反应完成)。将混合物加热到80°C。将热溶液过滤通过硅藻土垫(2.0g), 并用EtOH(lO mL)漂洗该硅藻土垫。将滤液转移到结晶用圆底烧瓶(500 mL)中。将淤浆在60。C真空(house vacuum )蒸馏，直到剩余60mL的 体积。在1小时内将淤浆冷却到0°C。通过真空过滤分离晶体，并用乙 醇(10mL)洗涤容器和晶体。在50。C真空(house vacuum )干燥产物至恒 重，得到灰白色固体(7.3 g)，两步收率为85%，通过HPLC测量的产物 纯度为99%。
中间体实施例7
4-[(异丙基磺酰基)甲基]苯基胺的制备<formula>formula see original document page 28</formula>向1-(溴甲基)-4-硝基苯(3.0 g, 17.4 mmol)在乙醇(50 mL)中的溶液中 添加2-硫代丙酸钠(2.7g, 17.4mmo1)。 12小时后，减压除去溶剂，剩余 的残余物用EtOAc稀释，并经过滤，除去残留的盐。溶剂用MgS04千 燥并减压除去，产物直接使用，无需另外纯化。然后将硫化物用 CH2C12(50 mL)稀释，分份添加间氯过氧苯甲酸(~ 70%)(6.6 g, 38.4 mmol)。通过TLC判断反应完成，减压除去溶剂。残留的残余物用EtOAc 稀释并用1 MNaOH(2 x 100mL)洗涤。溶剂用MgS04干燥并减压除去， 产物直接使用，无需另外纯化。然后残余物用甘醇二甲醚(8.0mL)稀释， 并滴加SnCl2(13.8 g, 69 mmol)在盐酸(8.0 mL)中的溶液。溶液搅拌2小 时，通过TLC判断还原完成。将反应混合物用Et20稀释，得到产物沉 淀，为盐酸盐形式。收集固体，用Et2O(2xl00 mL)洗涤，得到纯的苯 胺(~2.4 g, 65%)。
1H
NMR (300 MHz, d6DMSO+NaHC03) S 7.37 (d, J= 8.4 Hz， 2H), 7.21 (d， J= 8.4 Hz， 2H), 4.41 (s, 2H), 3.18-3.09 (m, 1H), 1.21 (d, J=6.9Hz, 6H)
中间体实施例8
4-[2-(曱基磺酰基)乙基]苯胺的制备
向1-(溴甲基)-1硝基苯(3.0 g, 13.0 mmol)在乙醇(70 mL)中的溶液中 添加硫代甲醇钠(l.O g, 14.0 mmol)。 12小时后，减压除去溶剂，剩余的 残余物用EtOAc稀释，并经过滤，除去残留的盐。溶剂用MgS04干燥 并减压除去，产物直接使用，无需另外纯化。然后将硫化物用CH2C12(100 mL)稀释，分份添加间氯过氧苯曱酸(~ 70%)(8.2 g, 48.8 mmol)。通过TLC 判断反应完成，减压除去溶剂。残留的残余物用EtOAc稀释并用1 M NaOH(2 x 100 mL)洗涤。溶剂用MgS04干燥并减压除去，产物直接使用， 无需另外纯化。然后将残余物添加到在Parr振荡器容器中的炭载钯(IO mol %)在EtOAc(50 mL)中的淤浆中。然后将反应置于40 atm的氢气下。 溶液振摇2小时，通过TLC判断还原完成。将反应混合物过滤通过硅藻 土垫，用EtOAc洗涤，减压除去溶剂，得到粗固体。混合物在热EtOAc 中重结晶，得到纯的苯胺( 1.8g, 69%)。
NMR (300 MHz, d6DMSO+NaHC03) & 6.93 (d, J - 8,2 Hz, 2H)， 6.87 (d, J - 8.2 Hz， 2H), 5.09 (bs, 2H), 3.31-3.26 (m， 2H), 2.92 (s, 3H)， 2.84-2.79 (m， 2H) 。
中间体实施例9
4-[l-(甲基磺酰基)乙基]苯胺的制备
<formula>formula see original document page 29</formula>
向4-硝基苯曱醇(carbono1)(3.0 g, 17.9 mmol)和三乙胺(3.5 mL, 21.0 mmol)在CH2Cl2(100mL)的溶液中滴加甲磺酰氯(1.7 mL, 21.0 mmol)。 1 小时后通过TLC判断反应完成，用饱和NaHC03水溶液猝灭反应。反应 混合物用EtOAc稀释，分离有机层，用MgS04干燥，并减压除去溶剂。 将得到的残余物溶于乙醇(100 mL),并分份添加硫代甲醇钠(1.5 g, 21.0 mmol)。 12小时后，减压除去溶剂，剩余的残余物用乙酸乙酯稀释并过 滤，以除去剩余的盐。溶剂用MgS04干燥并减压除去，产物直接使用， 无需另外纯化。然后将硫化物用CH2Cl2(100mL)稀释，并分份添加间氯 过氧苯曱酸( 70。/。)(10.8g, 62mmo1)。通过TLC判断反应完成，减压除 去溶剂。剩余的残余物用EtOAc稀释，用1 MNaOH(2x 100mL)洗涤。 溶剂用MgS04干燥并减压除去，产物直接使用，无需另外纯化。然后将 残余物添加到在Parr振荡器容器中的炭载把(10 mol %)在EtOAc(50 mL) 中的淤浆中。然后将反应置于40atm的氢气下。溶液振摇2小时，通过 TLC判断还原完成。将反应混合物过滤通过硅藻土垫，用EtOAc洗涤， 减压除去溶剂，得到粗固体。混合物在热EtOAc中重结晶得到纯的苯胺 (~2.0g， 57%)。
iH
NMR (300 MHz, d6DMSO+NaHC03) 5 7.06 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 6.53 (d， J - 8.5 Hz， 2H)' 5.21 (s， 2H), 4.23 (q， Hz, 1H>, 2.70 (s， 3H), 1.21 (d， J- 7.1 Hz, 3H)
中间体实施例10
4-[l-甲基-l-(曱基磺酰基)乙基]苯胺的制备
向搅拌的井又丁醇盐(5.76g, 0.051 mol)在THF中的溶液中添加曱 基.4-硝基千基砜(5 g, 0.023 mol),然后添加硤曱烷(2.89 ml, 0.046 mol), 混合物在室温搅拌1小时。添加另外的叔丁醇盐(2.9 g)和碘曱烷(0.5 ml)。 混合物在室温搅拌另外1小时。混合物用EtOAc稀释，并用6NHC1酸 化。混合物用乙酸乙酯提取(x3),合并的乙酸乙酯层用无水MgS〇4干
燥，过滤和浓缩。固体与乙醇一起研磨，得到纯的l-[l-曱基-l-(甲基磺
酰基)乙基]-4-硝基苯。
在0。C,在15分钟内，向搅拌的1-[1-曱基-1-(甲基磺酰基)乙基]-4-硝基苯(3.32 g, 0.014 mol)在2-甲氧基乙基醚(70 mL)中的溶液中滴加 10.35 g的氯化锡(II)在20.5 mL的浓盐酸中的溶液。添加完毕后，除去 水浴，溶液搅拌另外30分钟。向反应中添加约70 mL的乙醚，混合物 剧烈搅拌1小时。形成沉淀物并过滤收集该沉淀物。将固体溶于CH2C12, 并用1 N NaOH洗涤。混合物用CH2Cl2提取(x 3)。合并的012。12层用 无水MgS04干燥，过滤和蒸发，得到4-[l-甲基-l-(甲基磺酰基)乙基]苯 胺，为灰白色固体。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) S 7.21 (d, J- 8.6 Hz, 2H), 6.55 (d, J- 8.6 Hz, 2H)， 5.23 (s' 2H)， 2.58 (s, 3H), 1.64 (s， 6H) 。
实施例1:帕左潘尼(5-((4-[(2,3-二曱基-2H-吲唑-6-基)(曱基)氨基] 嘧啶-2-基}氨基)-2-曱基苯磺酰胺)及其盐和溶剂合物的制备
实施例la
5-({4-[(2,3-二曱基-2H-吲唑-6-基)(曱基)氨基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲 基苯;黄酰胺的制备
方法h
向中间体实施例4(200 mg, 0.695 mmol)和5-氨基-2-甲基苯磺酰胺 (129.4 mg, 0.695 mmol)在异丙醇(6 ml)中的溶液中滴加4滴的浓盐酸。混 合物加热回流过夜。将混合物冷却到室温，并用乙醚(6 ml)稀释。过滤 收集沉淀物，用乙醚洗涤。分离得到5-((4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(曱 基)氨基]-嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺的盐酸盐，为灰白色固体。1H NMR (400 MHz， d6DMSO+NaHC03) 5 9.50 (br s， 1H)， 8.55 (br s, 1H), 7.81 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 7.75 (d， J= 8.7 Hz, 1H), 7.69 (m， 1H)， 7.43 (s， 1H), 7.23 (s, 2H), 7.15 (d, v/-8.4 Hz, 1H)， 6.86 (m' 1H), 5.74 (d, J-6.1 Hz， 1H), 4.04 (s, 3H), 3.48 (s， 3H)， 2.61 (s， 3H), 2.48 (s， 3H). MS (ES十,m/z) 438 (M+H) 。
方法2:
在搅拌下，向配备有磁力搅拌棒、温度计、回流冷凝器和氮气入口 /出口的250 mL的3颈烧瓶中添加乙醇(60 mL, 10体积)、中间体实施例 4的产物(6.00 g, 20.85 mmol, 1.0当量)和5國氨基國2國甲基苯磺酰胺(4.00 g, 21.48 mmol, 1.03当量)。将反应混合物加热到70°C 。在68-72。C搅拌反 应混合物3小时后，在约2分钟内添加在二氧杂环己烷中的4M HCl(0.11 mL, 0.44 mmol, 0.02当量)。反应混合物在68-72。C搅拌，直到通过HPLC 分析显示起始的中间体实施例4的产物的剩余面积<1.5%(通常，反应在 >8小时后完成)。在约30分钟内将反应混合物冷却到20°C,并在20-22 。C搅拌40分钟。然后过滤分离产物，滤饼用乙醇(20 mL, 3.3体积)洗涤。 湿滤饼在45-50。C真空干燥。分离得到5-((4-[(2,3-二曱基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]-嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺的一盐酸盐(9.52 g, 96.4%),为白色固体。
1H NMR (400 MHz, d6DMSO+NaHC03) 8 9.50 (brs, 1H)' 8.55 (brs, 1H)， 7.81 (d, J- 6.2 Hz， 1H)' 7.75 (d, Hz, 1H), 7.69 (m, 1H), 7.43 (s，
1H), 7.23 (s, 2H), 7.15 (d， J- 8,4 Hz， 1H), 6.86 (m' 1H), 5.74 (d， J- 6,1 Hz' 1H), 4.04 (s, 3H), 3.48 (s, 3H)， 2.61 (s, 3H), 2.48 (s, 3H). MS (ES+, m/z) 438 (M+H)
方法3:
在室温下向搅拌的中间体实施例4的产物(l.l g, 3.8 mmol)在14 mL 的MeOH中的悬浮液中添加5-氨基-2-曱基苯磺酰胺(0.78 g, 4.2 mmol, 1.1当量)。反应混合物加热回流3小时，然后一次性添加在1,4-二氧杂 环己烷中的4MHCl(19|uL, 0.076mmo1)。 4小时后,将悬浮液冷却到室 温，并过滤。得到的固体用10mL的MeOH洗涤，并真空干燥，得到1.3 g(72。/。)的5-({4-[(2,3-二曱基-211-吲唑-6-基)曱基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺一盐酸盐，为白色固体。
1HNMR(DMSO-d6， 400 MHz) S 10.95 (s' 1H), 8.36 (s, 1H)' 7.86 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.64-7.59 (m, 2H), 7.40 (m, 3H>， 6.93 (dd， J - 8.8, 2.0 Hz, 1 H>, 5.92 (s, 1H), 4.08 (s, 3H), 3.57 (s， 3H), 2.65 (s, 3H), 2.56 (s, 3H) 。
方法4:
在室温下向搅拌的中间体实施例4的产物(l.l g, 3.7mmol)在10 mL 的THF中的悬浮液中添加5-氨基-2-曱基苯磺酰胺(0.70 g, 3.8 mmol, 1.0 当量)。反应混合物加热回流3小时，然后一次性添加在1,4-二氧杂环己 烷中的4MHCl(18)uL，0.072mmo1)。 5小时后，将悬浮液冷却到室温并 过滤。将得到的固体用16 mL的THF洗涤，并风干，得到1.6 g(92%) 的5-((4-[(2,3-二曱基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基)氨基)-2-甲基苯 磺酰胺一盐酸盐，为浅黄色固体。
方法5:在室温下向搅拌的中间体实施例4的产物(l.O g, 3.6 mmol) 在10 mL的CH3CN中的悬浮液中添加5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(0.70 g, 3.8 mmol, 1.0当量)。反应混合物加热回流3小时，然后一次性添加在 1,4-二氧杂环己烷中的4MHCl(18iuL, 0.076 mmol)。 20小时后，将悬浮 液冷却到室温，并过滤。得到的固体用10mL的CH3CN洗涤，并风干， 得到1.3 g(73。/。)的5-((4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基) 氨基)-2-曱基苯磺酰胺一盐酸盐，为灰白色固体。
方法6:
向2 L的夹套反应器中添加MeOH(1005 mL)、中间体实施例4的产 物(84 g， 0.292 mol, 1当量)和5-氨基-2-曱基苯磺酰胺(60 g, 0.320 mol, 11 当量)。溶液搅拌并加热到5(TC,添加在二氧杂环己烷中的4MHC1(1.46 mL, 2 mol%)。然后在85°C夹套温度下搅拌溶液并加热回流10小时。然 后将得到的淤浆冷却到20-25。C并过滤。过滤的固体在室温下用乙腈(293 mLX2)洗涤。在6(TC真空干燥过夜后，得到116 g(81 %)的5-({4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基)氨基)-2-曱基苯磺酰胺一盐酸 盐。
实施例lb
5-((4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)曱基氨基]-2-嘧啶基)氨基)-2-曱基
苯磺酰胺一盐酸盐一水合物的制备
HCI , H20 (I")
向圆底烧瓶中添加2.6 g的实施例la方法1的任何形式的一盐酸盐。 然后添加39mL的异丙醇(15体积)。将混合物在油浴中加热到75°C，然 后添加14 mL的0.05N的HCl水溶液(5.4体积)。将透明溶液冷却到65 。C,然后用实施例1方法1的一盐酸盐一水合物作为晶种(0.05-0.1 wt%) 诱导结晶。将混浊的溶液在65。C搅拌60分钟，然后以-0.25-0.5。C/分钟 的速率冷却到0。C。得到的白色固体经过滤，在室温下真空干燥至恒重， 得到88%收率的5-((4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基) 氨基)-2-曱基苯磺酰胺一盐酸盐 一水合物。
实施例lc
无水5-({4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)曱基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-曱基苯磺酰胺一盐酸盐的制备
向1 L的夹套反应器中添加乙腈(563 mL)、水(188 mL)、实施例1 方法6的一盐酸盐(50 g, 0.105 mol),溶液经搅拌并加热到85。C的夹套温 度，得到透明溶液。然后将该溶液冷却到45。C并保持90分钟以诱导水 合物的结晶。在保持90分钟后，将溶液冷却到0。C,保持1小时，然后 通过过滤器-干燥器过滤。然后将过滤的固体用乙腈(200 mL x l)在0。C洗 涤。固体用氮气在25。C下在过滤器-干燥器中吹扫直到LOD低于25%。
向过滤器-干燥器中的固体添加乙腈(300 mL)，在60。C搅拌至少8小时， 或者直到通过DATR观察到转化完成，形成无水5-((4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)曱基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-曱基苯磺酰胺一盐酸盐，将过滤 器-干燥器中的内容物冷却到~30°C,并使用氮气压力推出滤液。滤饼用 氮气在 6(TC在真空下吹扫，直到LOD低于0.5。/。，将内容物冷却到20 。C,得到37.5 g(75。/o)的无水5-((4-[(2,3-二曱基-2H-吲唑-6-基)曱基氨 基]-2-嘧啶基}氨基)-2-曱基苯磺酰胺一盐酸盐。
N、2,3-二曱基-2H-吲唑-6-基)-N气甲基-NM4-[(曱基磺酰基)曱基]苯 基}嘧啶-2,4-二胺的制备<formula>formula see original document page 35</formula>
根据上述实施例1中所述的通用过程，使用中间体实施例4和适当 的苯胺制备实施例2。使用与中间体实施例5-10所述的类似过程制备适 当的苯胺。
1H NMR (300 MHz, d6DMSO+NaHC03) S 9.37 (bs， 1H), 7.88 (d, J- 6.1 Hz, 1H), 7,78 (m, 3H), 7.47 (s' 1H), 7.22 (d, J-8.5 Hz, 2H), 6.91 (dd, J - 1.5 Hz， 1H)， 5.84 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 4.37 (s, 2H), 4.09 (s, 3H), 3.51 (s, 3H), 2.88 (s, 3H), 2,65 (s, 3H). MS (ES十'm/z) 437 (M+H), 435 (M-H) 。
实施例3:
无水5-({4-[(2,3-二曱基-211-吲唑-6-基)曱基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-
甲基苯磺酰胺一盐酸盐的制备
制法1
(士)-8-羟基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氬-lH-2-苯并氮杂革-4-乙酸甲酯 的制备
a) 3-[N-(叔丁氧羰基)-N-曱基氨基]甲基-4-溴苯甲醚
在室温下，将40%的甲胺水溶液(49 mL, 563毫摩尔)迅速添加到4-溴_3-溴甲基苯甲醚(15.76 g, 56.29毫摩尔)在THF(280 mL)中的溶液中2.5 小时后，浓缩反应，残余物在Et2O(560 mL)和1.0NNaOH(100mL)之间 分配使各层分离，有机层经干燥(MgS04)和浓缩，得到黄色油状物 TLC(5%MeOH/CHCl3)Rf0.32。将油状物溶于CHC13(280 mL)中，添加二 碳酸二叔丁基酯(1.29 g, 56.29毫摩尔)反应在室温搅拌45分钟，然后浓 缩硅胶色谱分离(5。/oEtOAc/曱苯)，得到标题化合物(16.81 g, 90%),为浅 黄色油状物TLC(5% EtOAc/甲苯)Rf 0.43; 1 H NMR(400, CDClg)旋转异 构体的混合物；
7.42 (d， J-8.7 Hz, 1 H, 6.65-6.80 (m, 2 H)， 4.40-4.55 (m' 2 H), 3.77 (s, 3 H), 2.81-2.97 (m, 3 H)， 1.37-1.60 (m, 9 H); MS (ES) m/e 352/354 (M+Na)+
b) (±)-3-曱酯基-4-[2-[N-(叔丁氧羰基)-N-甲基氨基]曱基-4-甲氧基苯 基]丁酸曱酯
将3-[N-(叔丁氧羰基)-N-曱基氨基]甲基-4-溴苯曱醚(4.95 g, 15 mmol)、衣康酸二甲基酯(3.08 g, 19.5 mmol)、乙酸钇(168 mg, 0.75 mmol)、 三-邻曱苯基膦(457 mg, 1.5 mol)和二异丙基乙基胺(5.2 mL, 30 mmol)在 丙腈(75 mL)中的溶液加热回流45分钟，然后旋转蒸发浓缩。残余物用 Et2O(150 mL)稀释，混合物通过硅藻土 (celite )过滤以除去不溶性物 质.滤液经浓缩，残余物从二甲苯中再次浓缩.硅胶色谱分离(梯度20% EtOAc/己烷，然后是1:1的EtOAc/己烷)除去膦和基线物质；将所有其 它的Rf为0.40-0.70的物质收集在一起，并浓缩，得到混浊的黄色油状 物TLC(30% EtOAc/己烷)Rf 0.41(主要产物)。
将油状物溶于MeOH(75 mL),并小心地添加10% Pd/C。混合物在 氬气(50 psi)下振摇2.5小时，然后通过硅藻土 (celite )过滤以除去催 化剂。滤液经浓缩，残余物重新经历上述反应条件。经过另外2.5小时 后，混合物通过硅藻土 (celite )过滤以除去催化剂，滤液经浓缩，得 到浅黄色油状物。将其从CHCl3/己烷再浓缩，然后进行硅胶色谱分离(梯 度20Q/。EtOAc/己烷，然后是1:1的EtOAc/己烷)，得到标题化合物(4.53 g, 74%),为浅黄色油状物TLC(30o/oEtOAc/曱苯)Rf0.46;
NMR (400, CDCls)旋转异构体的混合物7.03 (d, J-8.2 1 H, 6,65-6.80 (m, 2 H), 4.邻(br s, 2 H), 3,77 (s, 3 H), 3.64 (s, 3 H), 3.63 (s， 3 H)， 2.62-3.12 (m, 7 H), 2,35-2.50 《m, 1 H, 1.47 (br s' 9 H); MS (ES) m/e 432 (M+Na) +
c) (±)_3-曱酯基-4-[2-(曱基氨基)曱基-4-曱氧基苯基]丁酸曱酯
在(TC,将TFA(55 mL)同时添加到(土)-3-曱酯基-4-[2-[N-(叔丁氧羰 基)-N-(曱基氨基]曱基-4-曱氧基苯基]丁酸曱酯(4.53 g, 11.06毫摩尔)在 无水CH2Cl2(55 mL)中的溶液中，反应回温到室温。l小时后，反应经浓 缩，残余物从曱苯(2x 100mL)再次浓缩，得到标题化合物(11.06毫摩尔， 定量)，为浅黄色油状物MS(ES)m/e310(M+H)+。
d) (±)-8-曱氧基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氬-111-2-苯并氮杂革-4-乙酸
曱酯
将(± )-3-曱酯基-4-[2-(曱基氨基)甲基-4-曱氧基苯基]丁酸甲酯 (11.06毫摩尔)和二异丙基乙基胺(5.8 mL, 33.18毫摩尔)在甲苯(110 mL) 中的溶液加热回流25小时，在室温搅拌4天，然后加热回流另外24小 时。浓缩和硅胶色谱分离(5% MeOH,在1:1的EtOAc/CHCl3中)，得到 标题化合物(2.88 g, 94%),为浅黄色固体TLC(5% MeOH,在1:1的 EtOAc/CHCl3中)Rf0.63;
1H N图(250, CDCI3) 8 7.02 (d, J=8.4 Hz, 1 H, 6,78 (dd, J=8.4, 2.7 Hz， 1 H), 6.63 (d, J-2.7 Hz, 1 H), 5.29 (d' J-16.3 Hz， 1 H), 3.50-3.9O (m, 2 H), 3.79 (s, 3 H)' 3.71 (s, 3 H)' 2.73-3.16 (m, 3 H)， 3.04 (s, 3 H〉, 2.41 (dd, J=16.7， 5.4 Hz， 1 H; MS (ES) m/e 300 (M+Na)+, 278 (M+H) +
^(±)_8-羟基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氲-lH-2-苯并氮杂革-4-乙酸甲
酯
在0。C,在氩气下，将无水氯化铝(1.35 g, 10.15毫摩尔)同时添加到 (± )-8-曱氧基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-lH-2-苯并氮杂革-4-乙酸甲酯 (562 mg,2.03毫摩尔)和乙硫醇(0.75 mL, 10.15亳摩尔)在无水CH2C12(20 mL)中的溶液中。混合物回温到室温并搅拌4.5小时，然后冷却到0。C。 添加水冷却的H2O(20mL),混合物轻快搅拌5分钟，然后用CHC13(3 x 20 mL)提取。合并的CHCl3层经干燥(MgS04)和浓缩，得到残余物。将 水层进行吸滤，以收集固体沉淀物。该沉淀物以及得自CHCl3层的残余 物在1:1的MeOH/CHCl3中混合，溶液经浓缩，得到灰白色固体，将其 与热MeOH—起研磨，将混合物冷却到室温。吸滤收集固体，并用冷的 MeOH和Et20顺序地洗涤。在4(TC在高真空下干燥，得到标题化合物 (467.9 mg, 88%)，为无色的固体TLC(5% MeOH/CHCl3)Rf 0.17;
1H NMR (250, DMSO-d6) 5 9.29(s， 1 H)， 6.89 (d, J-8.1 Hz, 1 H)， 6.50-6.70 (m, 2 H>， 5.16 (d, J-16.4 Hz, 1 H), 3.84 (d， J=16.4 Hz, 1 H), 3.60-3.85 (m, 1 H)， 3.56 (s， 3 H)' 2.30-3.00 (m, 4 H)， 2.86 (s， 3 H); MS (ES) m/e 286 (M+Na) +, 264 (M+H)+ 。
制法2
HPLC分离(士)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-lH-2-苯并氮杂革-4-乙酸
甲酯的对映体
a)(R)一(+)-8-羟基-3-氧代-2,3,4，5-四氢-lH-2-苯并氮杂革-4-乙酸曱酯 和(S)-(-)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-lH-2-苯并氮杂革-4-乙酸曱酯
通过手性HPLC使用以下条件将(±)-8-羟基_3-氧代-2,3,4,5-四氢 -111-2-苯并氮杂革-4-乙酸曱酯拆分成其对映体Diacel Chiralpak AS⑧柱 (21.2 x 250 mm), EtOH流动相，7 mL/min流速，在254 nm的UV才企测， 70 mg注射量；(R)國(+)-8-羟基陽3-氧代-2,3,4,5-四氢-lH隱2-苯并氮杂革-4國 乙酸曱酯的tR=21.5分钟；(S)-(-)-8-羟基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-lH-2-苯并 氮杂罩-4-乙酸甲酯的tR=39.1分钟。
制法3
(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-l-丙基氧基]-2-(2,2,2誦三氟乙 基)-2,3,4,5-四氳-lH-2-苯并氮杂革-4-乙酸的制备
a) (S)-3-氧代-8-[3-(l-氧代吡啶-2-基氨基)-l-丙基氧基]-2-(2，2,2-三氟 乙基)-2,3,4,5-四氢-lH-2-苯并氮杂革-4-乙酸曱酯
在氩气下向搅拌的(S)-8-羟基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氢-lH-2-苯并 氮杂革_4-乙酸甲酯(19 g, 57.4 mmol)在无水THF(400 mL)和无水 DMF(200 mL)中的溶液中添加2-(3-羟基丙基氨基)口比啶N-氧化物(l 1.6 g, 69 mmol)和三苯基膦(18.0 g, 69 mmol)。所有固体完全溶解后(~ 30分 钟)，在冰浴中将反应冷却到0°C，并通过注射器添加偶氮二甲酸二异 丙基酯(14.3 mL , 69 mmol)。将反应慢慢地回温到室温并搅拌18小时。 浓缩和硅胶急骤色谱分离(8:2:1 CHCl3/EtOAc/EtOH),得到标题化合物 (20.83 g, 75%)，为固体泡沫。通过/人上述反应回收起始原料重复利用获 得另外的5.73 g的产物，得到总共26.56 g(96。/。)的标题化合物
MS (ES) m/e 482.2 (M+H) + ; 1 H NMR (400 MHz， DMSOd6) S 8.09 (dd, J-6.5, 1.3 Hz， 1H), 7.29 (t, 1H), 7.18 (t, 1H)' 7.02 (d, J=9.2 Hz， 1H), 6.84-6.79 (m， 3H), 6.59 (t， 1H), 5.32 (d, J-16,5 Hz' 1H)' 4.28-4.14 (m， 2H)， 4,16 (d, J-16.5 Hz, 1H), 4.02 (t, 2H), 3.84 (m, 1H)， 3.58 (s, 3H), 3.40 (dd, 2H), 3.01 (dd, 1H)， 2.73 (dd, 1H), 2.70 (dd， 1 H)， 2.52 (dd， 1 H), 2.02 (ddd, 2H) 。
b) (S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-l-丙基氧基]-2-(2,2,2-三氟乙 基)-2,3,4,5-四氢-111-2-苯并氮杂革-4-乙酸甲酯
向搅拌的(S)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-l-丙基氧 基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氲-lH-2-苯并氮杂革-4-乙酸甲酯(26.56 g, 55 mmol)在异丙醇(500 mL)中的溶液中添加10%的活性石友载4巴(8 g, 7.5 mmol,在氩气中在异丙醇中小心地被预润湿)和环己烯(55.7 mL, 550 mmol)。然后在9CTC的油浴中在氩气下将反应加热回流。6小时后，添 加额外量的10%的活性碳载钯(8 g, 7.5 mmol,在氩气中在异丙醇中小心 地被预润湿)和环己烯(55.7 mL, 550 mmol)。另夕卜18小时后，反应热过 滤通过珪藻土(celiteB、滤垫用1:1的MeOH/CHCl3(400 mL)洗涤。滤液 真空浓缩，残余物通过硅胶急骤色谱分离纯化(95:5CHCl3/MeOH)，得到 标题化合物(19.50g, 76%)，为白色粘稠泡沫TLC(硅胶，5%MeOH,在 CHC13中)Rf 0.52;
MS
(ES) m/e 466.3 (M+H)+ ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 7.94 (dd， 1H)， 7.34 (t, 1H)， 7.02 (d， J-9.2 Hz, 1H), 6,81 (m, 2H), 6.54 (t， 1H)' 6.46 (m, 2H)， 5.31 (d， J-16.5 Hz， 1H), 4.23-4.13 (m' 2H), 4.17 (d, J-16.5 Hz， 1H), 4.02 (t, 2H), 3,82 (m, 1H), 3.58 (s， 3H), 3.36 (m, 2H)， 3.01 (dd' 1H), 2.72 (dd， 1H), 2,68 (dd， 1H), 2.50 <dd, 1H), 1.96 (ddd, 2H)。
c)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-l-丙基氧基]-2-(2,2,2-三氟乙 基)-2,3,4,5-四氩-lH-2-苯并氮杂革-4-乙酸
向搅拌的(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-l-丙基氧基]-2-(2,2,2-三氟 乙基)-2,3,4,5國四氢画lH國2誦苯并氮杂革-4画乙酸甲酯(19.50 g, 42 mmol)在二 氧杂环己烷(150 mL)中的溶液中添加1 N的NaOH水溶液(75 mL, 75 mmol)。混浊的反应在室温搅拌2小时，然后将得到的均相溶液用1 N 的HC1水溶液(75 mL, 75 mmol)中和。溶液通过旋转蒸发浓缩到接近干 燥，以析出产物。倾析掉上清液，将残留的胶状固体再溶于甲醇中。然 后通过旋转蒸发再次浓缩透明溶液。残留固体与少量水一起研磨，过滤 并真空干燥，得到标题化合物(16.38 g, 86%),为白色粉末。 HPLC(Hamilton PRP-1 , 25% CH3CN/H20,含有0.1% TFA)
k'-3.1; [ab -112.3° (c, 1.0, MeOH); MS (ES) m/e 452.3 (M十H) +; . 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 7,95 (dd， 1H)， 7.34 (dt, 1H〉, 7.02 (d, J-9.2 Hz, 1H〉' 6.81 (m, 2H)' 6.58 (t, 1H), 6.47 (m, 2H), 5.30 (d, J-16.5 Hz， 1H)， 4.27-4.13 (m, 2H)' 4.15 (d， J-16.5 Hz， 1H), 4.02 (t, 1H)' 3.78 (m, 1H), 3.37 (m' 2H), 3.00 (dd, 1 H), 2.69 (dd, 1H), 2.65 (dd, 1H)， 2.41 (dd, 1H), 1.96 (ddd, 2 H). Anal. Calcd for C22H24F3N304: C, 58.53; H, 5.36; N, 9.31. Found: C, 58.37; H, 5.42; N, 9.20 。
生物数据实施例1和3中所述的化合物在脉络膜新血管形成(CNV) 小鼠模型中对CNV的作用。
以下实施例中的小鼠根据关于在眼和视力研究中动物的应用(the Use of Animals in Ophthalmic and Vision Research )的ARVO声明进行处理。
实施例4: CNV的退行模型
将小鼠麻醉并散瞳。对视网膜造成氪激光器光致凝结灼伤。在激光 致损伤后7天开始给用实施例1中的化合物。口服单独的媒介物或含有
式(I)的化合物(在图1中被称作VEGFR)的媒介物，剂量为4mg/kg、 20 mg/kg或100mg/kg,每天给用两次，共7天。处理7天后，对小鼠灌注 荧光素标记的右旋糖酐，检测脉络膜新血管形成区域。帕左潘尼以剂量 特异性方式减小CNV区域。参见图1。
实施例5: CNV的预防才莫型
在本实验中，根据实施例4所述方法将视网膜烧伤前一天开始对每 只小鼠给用实施例1的化合物(在图2中称作VEGF R)，实施例3的化合 物(在图2中称作玻连蛋白)或实施例1和3的化合物组合(在图2中 称作"两种的组合")。化合物每天口服给用两次，剂量是，实施例1 的化合物为100 mg/kg,实施例3的4乜合物为45 mg/kg。 4见网膜烧伤后 14天，如上所述才全测CNV区域，结果如图2所示。
尽管已经在本文中说明和详细描述了本发明的具体实施方案，但是 本发明不限于这些实施方案。上述的详细描述只是为了示例性地说明本 发明的目的而被提供，不认为对本发明构成任何限制。本领域技术人员 可显而易见地进行各种修改，并且不脱离本发明精神的所有^f'f改净皮包括 在权利要求的保护范围内。
权利要求
1.一种治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法，所述方法包括对所述哺乳动物给用式(I)的化合物或其盐或溶剂合物。
2.权利要求l的方法，其中所述化合物是式(r)的化合物:。
3.权利要求l的方法，其中所述化合物是式(I")的化合物:
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述方法另外包括对哺乳动 物给用式(m)的化合物或其盐或溶剂合物的步骤<formula>formula see original document page 3</formula>
5. —种治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法，所述方法包括对所述哺乳动物给用式(m)的化合物<formula>formula see original document page 3</formula>或其盐或溶剂合物。
6. 权利要求1-5中任一项的方法，其中所述新生血管性眼病是脉络 膜新生血管性疾病。
7. 权利要求1-5中任一项的方法，其中所述新生血管性眼病是视网 膜新生血管性疾病。
8. 权利要求1-5中任一项的方法，其中所述新生血管性眼病选自渗 出性年龄相关性黄斑变性、血管样紋、葡萄膜炎和黄斑水肿。
9. 权利要求6的方法，其中所述脉络膜新生血管性疾病是渗出性年 龄相关性黄斑变性。
10. 权利要求8的方法，其中所述新生血管性眼病是黄斑水肿。
11. 式(i)、 (m)的化合物或其盐或溶剂合物用于制备可用于治疗新生血管性眼病的药物的用途。
12. 权利要求11的用途，其中所述新生血管性眼病是脉络膜新生血 管性疾病。
13. 权利要求11的用途，其中所述新生血管性眼病是-见网膜新生血 管性疾病。
14. 权利要求11的用途，其中所述新生血管性眼病选自渗出性年龄 相关性黄斑变性、血管样紋、葡萄膜炎和黄斑水肿。
15. 权利要求14的用途，其中所述新生血管性眼病是渗出性年龄相关性黄斑变性。
16. 权利要求ll的用途，其中所述新生血管性眼病是黄斑水肿。
17. —种或多种式(I)、 (III)的化合物或其盐或溶剂合物在治疗新生 血管性眼病的方法中的用途。
18. 权利要求17的用途，其中所述新生血管性眼病是脉络膜新生血 管性疾病。
19. 权利要求17的用途，其中所述新生血管性眼病是视网膜新生血 管性疾病。
20. 权利要求17的用途，其中所述新生血管性眼病选自渗出性年龄 相关性黄斑变性、血管样紋、葡萄膜炎和黄斑水肿。
21. 权利要求20的用途，其中所述脉络膜新生血管性疾病是渗出性 年龄相关性黄斑变性。
22. 权利要求20的用途，其中所述脉络膜新生血管性疾病是黄斑水肺。
全文摘要
本发明涉及通过给用嘧啶衍生物、苯并二氮杂基衍生物、和包含其的药物组合物治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法。本发明包括通过给用5-[[4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基]氨基]-2-甲基苯磺酰胺、(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙基氧基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂-4-乙酸或其盐或溶剂合物治疗新生血管性眼病的方法。本发明还提供了组合治疗新生血管性眼病的方法。
文档编号A61K31/506GK101370505SQ200680044563
公开日2009年2月18日 申请日期2006年11月29日 优先权日2005年11月29日
发明者M·莱维克, R·A·布里甘迪, W·H·米勒 申请人:史密丝克莱恩比彻姆公司