专利名称：一种提高宠物免疫力和促进生长和发育的微生物添加剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种提高宠物免疫力和促进生长和发育的微生物添加剂，是利用 多种微生物发酵产生多酶的技术产品，能促进宠物毛皮光亮、体格健壮、增强宠 物免疫能力，预防腹泻、便秘急慢性肠炎等肠道疾病和佝偻病、骨质疏松等疾病； 同时减轻畜禽粪便对环境的污染，属于农业技术产品领域。
技术背景目前，已公开的一项中国发明专利，申请号为200510110758.1，名称为 "一种宠物保健的药物组合物及其制备方法"。该发明属中药领域，具体涉及一种动物宠物狗或猫保健的药物组合物，该发 明采用灵芝等药食同源的药物提取物加辅料和特殊调味添加剂制成，颗粒剂或粉 剂型药物组和物，添加在宠物饲料中，经动物实验证实，无毒性作用，具有抗氧 化、延缓衰老的作用，经饲养宠物观察，可达到提高宠物的免疫功能，增强体质， 延缓衰老的效果，预防、治疗宠物癌症、心血管病或消化道病变等病，此专利技 术为简单的中药材料添加，无法从根本上建立宠物的免疫系统，无法提供宠物发 育需要的消化酶和内源性抗免疫物质，其应用价值不高。随着城乡人民生活水平的日益提高和生活、工作节奏的加快，宠物饲养已成 为缓解工作压力、促进身心健康的一种生活方式，宠物是人类的亲密伙伴，宠物 健康有助于建立更健康的家庭，宠物健康的关键是免疫力。宠物的免疫系统是一 个复杂的系统，它就像一个联合军团，需要消化吸收、免疫系统、排泄系统等的 协同作战，随时粉碎来自不同的传染物质包括细菌、病毒、真菌的入侵以及来自 最新形成的癌细胞的攻击。但是，如果宠物的免疫力低下， 一些常见病就会乘虚 而入，由于宠物具有体温调节机能不健全，对寒冷应激的抵抗力差、消化器官不 健全，消化腺机能不完善、缺乏先天免疫力，容易得病等特点，宠物在一般饲养 条件下易患肠炎、腹泻、食欲不振、消化不良、免疫力弱等疾病。 发明内容本发明的目的是提供一种可充分发挥免疫激活能力，调节机体微生态平衡， 增强肠道的吸收能力，使宠物毛皮光亮，并明显增强骨骼及牙齿健康提高宠 物免疫力和促进生长和发育的微生物添加剂。为实现以上目的，本发明的技术方案是提供--种提高宠物免疫力和促进生长 和发育的微生物添加剂，其特征在于，由以下重量百分比原料组成枯草芽孢杆 菌30—34%、植物乳杆菌40—45%、双歧杆菌21—30%;其制备方法采用同步复合培养方法，使所有菌种在同一培养基中培养，它包括下列步骤 第一步发酵菌株选育(1) 菌株传代采用农业部菌种保存中心提供的枯草芽孢杆菌菌株和植物 乳杆菌、双歧杆菌，通过营养琼脂培养基传代培养，选育生长速度快、菌落 特征明显的菌种，在0'C—4'C温度下保存菌种；(2) 菌种的复合诱导将保存的枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌用0.9%的生理盐水稀释至10—5 — 10—7，在微波炉中用低火处理菌悬液30S — 50S， 利用血球计数法计数，将处理后的菌悬液在淀粉培养基的平板上涂布，在30 一4(TC温度下倒置培养48小时，选育出培养基中透明圈直径与菌落直径的比 值大于0.6的菌落，接种至营养琼脂试管中保存；将保存的菌种制作菌悬液， 稀释至10—6，在30cm处用波长为260nm，功率为15W的紫外灯处理15s，处 理后的菌悬液在营养琼脂平板中35。C倒置培养48h，选出生长速度快的菌落 进行摇瓶实验，观察菌种生长速度； 第二歩生产制种将筛选出的枯草芽孢杆菌菌株和植物乳杆菌、双歧杆菌菌分别转接入装有 营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35 — 4(TC温度下培养36—48小时，待茄子瓶 表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放入2—4'C的冰箱中保存； 第三步复合菌剂的培养(1) 、按重量百分比称取步骤2培养的各菌种(2) 、复合菌剂的高速培养将称取的菌种接种于经过蒸汽灭菌的培养基中，ph值调至6.8-7.2:放入 发酵罐中培养，搅拌转速为200r/min—240r/min，培养温度为35—37'C，通气量l: 0.6,发酵时间为18-20小时，得到复合菌剂； 第四步复合菌剂的固体扩大培养(1) 将复合菌剂17%比例加入以下固体培养基均匀混合后置入密闭罐内发酵， 发酵温度为35 — 37。C，发酵时间为8—10天，进行同步发酵；(2) 发酵过程中进行水分和活菌总数的检测，当活菌总数》30亿/g时发酵结 束；第五步产品制剂(1) 添加辅料按产品质量的20%添加载体；(2) 制粒干燥将添加载体后的产品在摇摆制粒机上制粒，制粒大小为20 —30目，然后在沸腾干燥机内进行干燥，当水分小于等于5%时干燥结束；(3) 将干燥后的产品利用药品机械压片机压片，制成厚度为2mm、重量0.5g 的片剂，即得宠物多酶添加剂的成品。所述的第三步中的复合菌剂培养基由豆饼粉、玉米粉、玉米浆、淀粉、豆奶 粉、糖蜜、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、水中的至少7种组成，其重量百 分比分别为豆饼粉2-5%、玉米粉2-3.5%、淀粉1—4%、豆奶粉0-0.5%、糖蜜 3-5%、磷酸二氢钾0.04-0.1%、硫酸镁0.1-0.15%、酶促进剂0.01-0.5%、水 81.25-86.85%。所述的酶促进剂为吐温；所述的固体培养基由以下重量百分比原料组成青糠33—35%、豆粕粉5 — 7%、玉米粉8 —10%、糖蜜10—13%、酵母粉0.5—0.8%、 磷酸镁0.2 — 0.3%、磷酸二氢钾0.5-1%、蛋白源1一3%、无菌水29.9 —41.8% ; 所述的蛋白源为鱼粉、蚕蛹粉、玉米蛋白粉之一或它们的混合物，其重量百分比 为鱼粉17-20%、蚕蛹粉15-23%、玉米蛋白粉57-68%;所述的载体由淀粉90— 98%和2—10%的糊精组成。本发明采用动物肠道定植的多种有益菌种通过复合分级发酵而制成，其主要 特征是，有益活菌含量达30亿/g，富含氨基酸、活性酶、微量元素、及微生物 源抗氧化物、维生素、活性钙等天然物质，无抗生素、激素等化学物质添加，宠 物服用后，可充分发挥免疫激活能力，调节机体微生态平衡，增强肠道的吸收能 力，使宠物毛皮光亮，并明显增强骨骼及牙齿的健康。本发明采用的菌种由农业部菌种保藏中心提供，全部为植于健康动物肠道中 的有益菌种，主要种类为枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌，其中芽孢杆 菌属于好氧菌，在动物肠道中能争夺氧气，形成厌氧和兼性厌氧的环境，有利于 肠道中兼性厌氧的乳酸菌类的生长，同时芽孢杆菌在发酵过程中产生重要的代谢 产物一杆菌肽，为一种微生物源的抗生素，属多肽类抗生素，其抗菌谱与青霉素G相似，主要对革兰氏阳性菌有搞菌作用，此外，对少数阴性菌，螺旋体和 放线菌以及对耐青霉素的葡萄球菌也有效，能显著提高宠物的免疫能力，而植物 乳杆菌、双歧杆菌同属肠道中的主要菌种，他们的作用是形成肠道酸性的生长环 境，防止有害细菌、病毒的侵入和繁殖，同时分泌乳酸、糖菌素、抗菌物质、嗜 酸菌素等，提高对宠物食品中高蛋白、高脂肪营养成分的吸收，同时糖菌素、抗 菌物质、嗜酸菌素还可提高宠物免疫球蛋白的浓度和巨噬细胞的活性，活化机体 免疫功能，提高宠物对病原性物质(细菌、病毒)的抵抗力，因而可减轻宠物因 运输惊吓、环境变化引起的应激反应，提高抗应激能力。由于采用常用的粮食副产品进行传统发酵，所有产物中还含有富含氨基酸、 活性酶、微量元素、及微生物源抗氧化物、维生素、活性钙等天然物质，微量元 素能显著提高动物毛皮光亮度，维生素E不仅是宠物的重要营养，而且是一种 非常有效的天然抗氧化剂，能够使机体的细胞膜免受氧化自由基的损害，维持免 疫细胞的完整性，从而提高宠物的自然免疫力。活性钙能提高宠物牙齿、骨骼的 坚硬度，缺乏钙、磷会造成佝偻病和骨软化症，硒的缺乏可能影响犬的骨骼和心 肌。本产品在发酵过程中另一个特点是产生大量的多肽及微生物酶，其中0 —葡聚糖酶、木聚糖酶能水解水溶性e —葡聚糖酶、木聚糖，有效降低动物肠道中食糜粘度，有利于内源消化液充分和食糜混合，充分消化，减少畜禽下痢，利 于营养物的吸收提高饲料的利用率及能量，降低料重比；植酸酶能催化植酸向正 磷酸盐、肌醇和肌醇衍生物转化，可使植酸中的磷水解释放出来，使其中的磷得 以为动物利用，这样可减少外加无机酸盐，减少粪便磷的排放，减轻对环境的污 染，多酶添加剂还可减少氨及其它腐败物质的生成，使肠内容物、粪便和静门脉 中的氨量下降，肠内容物中的对甲甲酚吲曾和3 —甲基吲增等恶臭物质减少，从而减少粪便产生的臭气，达到除臭效果。本发明提供一种有益菌数高、产酶能力强并具有多种活性酶及小肽等物质的 添加剂。在添加饲喂后，可在宠物消化道内形成动物机体良性生态环境，同时含 有大量活性的微生物酶添加剂，能弥补宠物消化道先天性的消化腺发育和分泌的 不足，显著提高宠物的饲料转换率。同时添加剂中含有一定数量的杆菌肽等代谢 抗生素，能显著提高宠物的肌体免疫能力，预防常见消化道传染病的发生，提高 宠物的存活率。本发明的优点是1、 采用的所有菌种都来自于农业部658公告的饲料添加中规定的微生物菌种，利用微波辐射和诱变育种技术对各菌种进行育种而来。2、 含有高达30亿/g的健康动物肠道的定植菌种群，可在肠道粘膜迅速生长 繁殖，形成对肠道保护的菌群屏障，保持有益菌的优势，3、 采用液体高速培养和固体扩大培养技术，保证有益菌种、氨基酸、活性 酶、微量元素、及微生物源抗氧化物、维生素、活性钙在培养物中完全 保留。4、 提供促进宠物毛发光亮的微量元素、微生物源抗氧化物、活性钙，促进 宠物新陈代谢，促进牙齿和骨骼发育。5、 发酵过程中产生多种活性酶免疫多肽，既可提供外源酶，消除饲粮中的 抗营养因，又可增强宠物的自然免疫能力，预防常见传染性疾病；提高 饲料转化率，减轻粪便对环境的污染；6、 采用常用粮食作物副产品进行两级发酵，无微量元素、抗生素添加，是 一种绿色、环保的宠物饲料添加剂。提高饲料转化率，减轻粪便对环境 的污染；具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明。实施例 第一步发酵菌株选育a.菌株传代采用农业部菌种保存中心提供的枯草芽孢杆菌菌株和植物乳杆菌、双歧杆菌，通过营养琼脂培养基传代培养，选育生长速度快、 菌落特征明显的菌种，在2'C温度下保存菌种；b.菌种的复合诱导将保存的枯草芽孢杆菌用0.9%的生理盐水稀释至10 —'"一10—7，在微波炉中用低火处理菌悬液30S，利用血球计数法计数，将 处理后的菌悬液在淀粉培养基的平板上涂布，在38。C温度下倒置培养 化小时，选育出培养基中透明圈直径与菌落直径的比值(HC值)大于 0.6的菌落，接种至营养琼脂试管中保存；将保存的菌种制作菌悬液， 稀释至10—6，在30cm处用功率为15W的紫外灯(波长为260nrn)处理 15s，处理后的菌悬液在营养琼脂平板中35。C倒置培养48h，选出生长 速度快的菌落进行摇瓶实验，观察菌种生长速度；淀粉培养基蛋白胨10g、氯化钠5g、牛肉膏5g、可溶性淀粉2g、蒸馏水 1000ml、琼脂15—20g;营养琼脂培养基牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaC15g、琼脂15 — 20g、水1000ml 、 pH7.0-7. 2， i21。C灭菌20min; 第二步生产制种将筛选出的枯草芽孢杆菌菌株和植物乳杆菌、双歧杆菌菌分别转接入装 有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35'C温度下培养40小时，待茄子瓶表 面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放入3t:的冰箱中保存； 营养琼脂培养基牛肉膏3g、蛋白胨10g、 NaC15g、琼脂15 — 20g、水1000ml、 pH7. 0-7.2。 12rC灭菌20min。 第三步复合菌剂的培养(1) 、将歩骤2培养的菌种按以下重量百分比称取各菌种枯草芽孢杆菌30%、 植物乳杆菌40%、双歧杆菌30%(2) 、复合菌剂的高速培养:将以上称取的菌种按重量放入液体培养基中培养分 别接种于经过蒸汽灭菌的培养基中，ph值调至7.0;放入发酵罐中培养，搅 拌转速为220r/min，培养温度为36'C,通气量l: 0.6，发酵时间为19小时， 得到复合菌剂.复合菌剂培养基包括豆饼粉、玉米粉、玉米浆、淀粉、豆奶粉、糖蜜、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、水中的至少7种，其重量百分比分别为豆饼粉2%、 玉米粉2%、淀粉1%、豆奶粉0.1%、糖蜜3%、磷酸二氢钾0.04%、硫酸镁0.1%、 酶促进剂0.01%、水86.85%。其中酶促进剂为0. 2%的吐温n'ween) 第四歩复合菌剂的固体扩大培养(1) 将复合菌剂17%比例加入以下固体培养基均匀混合后置入密闭罐内发酵， 发酵温度为36'C，发酵时间为9天，进行同歩发酵.固体培养基:青糠33%、豆粕粉5%、玉米粉8%、糖蜜10%、酵母粉0.5%、、 磷酸镁0.2%、磷酸二氢钾0.5%、蛋白源1%、无菌水41.8% 。所述的蛋白源为鱼粉、蚕蛹粉、玉米蛋白粉之一或它们的混合物，其重量 百分比为鱼粉17%、蚕蛹粉15%、玉米蛋白粉68%。(2) 发酵过程中进行水分和活菌总数的检测，当活菌总数》30亿/g时发酵结 束；第五步产品制剂(1) 添加辅料按产品质量的20%添加载体，载体为淀粉98%和2%的糊精。(2) 制粒千燥将添加载体后的产品在摇摆制粒机上制粒，制粒大小为25目， 然后在沸腾干燥机内进行干燥，当水分小于等于5%时干燥结束；(3)将干燥后的产品利用药品机械压片机压片，制成厚度为2mm、重量0.5g 的片剂，即得宠物多酶添加剂的成品。实施例2第一步发酵菌株选育(1) 菌株传代同实施例l;(2) 菌种的复合诱导将保存的枯草芽孢杆菌用0.9%的生理盐水稀释至10 一5—10—7，在微波炉中用低火处理菌悬液50S，利用血球计数法计数，将处理 后的菌悬液在淀粉培养基的平板上涂布，在35。C温度下倒置培养48小时，选 育出培养基中透明圈直径与菌落直径的比值(HC值)大于0.6的菌落，接种 至营养琼脂试管中保存；将保存的菌种制作菌悬液，稀释至i0—6，在30cm处 用功率为15W的紫外灯(波长为260nm)处理15s，处理后的菌悬液在营养琼 脂平板中35'C倒置培养48h，选出生长速度快的菌落进行摇瓶实验，观察菌种生长速度；淀粉培养基蛋白胨10g、氯化钠5g、牛肉膏5g、可溶性淀粉2g、蒸馏水1000ml、琼脂15—20g; 营养琼脂培养基牛肉膏3g、蛋白胨10g、 NaC丄5g、琼脂15 — 20g、水1000ml、 pH7. 0-7. 2。 12rC灭菌20min; 第二歩生产制种同实施例l; 第三歩复合菌剂的培养(1) 、将步骤2培养的菌种按以下重量百分比称取各菌种枯草芽孢杆菌34%、 植物乳杆菌45%、双歧杆菌21%;(2) 、复合菌剂培养基包括豆饼粉、玉米粉、玉米浆、淀粉、豆奶粉、糖蜜、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、水中的至少7种，其重量百分比分别为豆饼粉5%、玉米粉3.5%、淀粉4%、豆奶粉0.5%、糖蜜5%、磷酸二氢钾 0.1%、硫酸镁0.15%、酶促进剂0.5%、水81.25%，其中酶促进剂为0.2%的 吐温(Tween) 其余同实例1 第四步复合菌剂的固体扩大培养(1) 将复合菌剂17%比例加入以下固体培养基均匀混合后置入密闭罐内发酵， 发酵温度为35—37"，发酵时间为8—10天，进行同步发酵；固体培养基:青糠35%、豆粕粉7%、玉米粉10%、糖蜜13%、酵母粉0.8%、、 磷酸镁0.3%、磷酸二氢钾1%、蛋白源3%、无菌水29.9% ;所述的蛋白源为鱼粉、蚕蛹粉、玉米蛋白粉之一或它们的混合物，其重量 百分比为鱼粉20%、蚕蛹粉23%、玉米蛋白粉57%(2) 发酵过程中进行水分和活菌总数的检测，当活菌总数》30亿/g时发酵结 束；第五步产品制剂同实施例l。在使用时，小型犬用量为l片/天，中型犬用量为2片/天，大型犬用量为4 片/天，猫为1片/天，添加到宠物饲料中喂养，本产品需在千燥通风处密封保 存，开瓶后应立即拧紧瓶盖。本产品在上海交大农学院宠物养殖场进行了为期3个月的试验，试验前期的闩增重提高了 3% (P<0.05)，试验后期的R增重 提高了8.2% (PO.05)，全期日增重提高7.2%;前期的采食量无明显变化， 但后期增加了 3.2%,试验组与对照组相比，毛皮光亮、体格健壮、发病率降低 47%。
权利要求
1. 一种提高宠物免疫力和促进生长和发育的微生物添加剂，其特征在于，由以下重量百分比原料组成枯草芽孢杆菌30-34％、植物乳杆菌40-45％、双歧杆菌21-30％；其制备方法采用同步复合培养方法，使所有菌种在同一培养基中培养，它包括下列步骤第一步发酵菌株选育(1)菌株传代采用农业部菌种保存中心提供的枯草芽孢杆菌菌株和植物乳杆菌、双歧杆菌，通过营养琼脂培养基传代培养，选育生长速度快、菌落特征明显的菌种，在0℃-4℃温度下保存菌种；(2)菌种的复合诱导将保存的枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌用0.9％的生理盐水稀释至10-5-10-7，在微波炉中用低火处理菌悬液30S-50S，利用血球计数法计数，将处理后的菌悬液在淀粉培养基的平板上涂布，在30-40℃温度下倒置培养48小时，选育出培养基中透明圈直径与菌落直径的比值大于0.6的菌落，接种至营养琼脂试管中保存；将保存的菌种制作菌悬液，稀释至10-6，在30cm处用波长为260nm，功率为15W的紫外灯处理15s，处理后的菌悬液在营养琼脂平板中35℃倒置培养48h，选出生长速度快的菌落进行摇瓶实验，观察菌种生长速度；第二步生产制种将筛选出的枯草芽孢杆菌菌株和植物乳杆菌、双歧杆菌菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35-40℃温度下培养36-48小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放入2-4℃的冰箱中保存；第三步复合菌剂的培养(1)、按重量百分比称取步骤2培养的各菌种(2)、复合菌剂的高速培养将称取的菌种接种于经过蒸汽灭菌的培养基中，ph值调至6.8-7.2；放入发酵罐中培养，搅拌转速为200r/min-240r/min，培养温度为35-37℃，通气量1∶0.6，发酵时间为18-20小时，得到复合菌剂；第四步复合菌剂的固体扩大培养(1)将复合菌剂17％比例加入以下固体培养基均匀混合后置入密闭罐内发酵，发酵温度为35-37℃，发酵时间为8-10天，进行同步发酵；(2)发酵过程中进行水分和活菌总数的检测，当活菌总数≥30亿/g时发酵结束；第五步产品制剂(4)添加辅料按产品质量的20％添加载体；(5)制粒干燥将添加载体后的产品在摇摆制粒机上制粒，制粒大小为20-30目，然后在沸腾干燥机内进行干燥，当水分小于等于5％时干燥结束；(6)将干燥后的产品利用药品机械压片机上压片，制成厚度为2mm、重量0.5g的片剂，即得宠物多酶添加剂的成品。
2. 根据权利要求1所述的一种提高宠物免疫力和促进生长和发育的微生物添加 齐U，其特征在于，所述的第三歩中的复合菌剂培养基由豆饼粉、玉米粉、玉 米浆、淀粉、豆奶粉、糖蜜、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、水中的至 少7种组成，其重量百分比分别为豆饼粉2-5%、玉米粉2-3.5%、淀粉l一 4%、豆奶粉0-0.5%、糖蜜3-5%、磷酸二氢钾0.04-0.1%、硫酸镁0.1-0.15%、 酶促进剂0.01-0.5%、水81.25-86.85%。
3. 根据权利要求2所述的一种提高宠物免疫力和促进生长和发育的微生物添加 剂，其特征在于，所述的酶促进剂为吐温。
4. 根据权利要求1所述的一种提高宠物免疫力和促进生长和发育的微生物添加 齐ij，其特征在于，所述的固体培养基由以下重量百分比原料组成青糠B — 35%、豆粕粉5 —7%、玉米粉8 —10%、糖蜜10—13%、酵母粉0.5 —0.8%、 磷酸镁0.2 — 0.3。/。、磷酸二氢钾0.5-1%、蛋白源1—3%、无菌水29.9 — 41.8% 。
5. 根据权利要求4所述的一种提高宠物免疫力和促进生长和发育的微生物添加 齐U，其特征在于，所述的蛋白源为鱼粉、蚕蛹粉、玉米蛋白粉之-或它们的 混合物，其重量百分比为鱼粉17-20%、蚕蛹粉15-23%、玉米蛋白粉57-68%。
6. 根据权利要求1所述的一种提高宠物免疫力和促进生长和发育的微生物添加 齐U，其特征在于，所述的载体由淀粉90—98%和2 — 10%的糊精组成。
全文摘要
本发明涉及一种促进宠物生长和发育的微生物多酶添加剂，其特征在于，由定植于健康动物肠道中有益菌种，采用复合诱导经过微波和射线诱导技术进行筛选；采用液体的复合培养和固体扩大培养方法，添加特殊的酶诱导剂和蛋白源，有益活菌总数达30亿/g、同时含有大量的活性酶、小肽、抗氧化物质、游离氨基酸、维生素等生理代谢物质；能促进宠物毛皮光亮，体格健壮，增强宠物免疫能力，预防腹泻、便秘急慢性肠炎等肠道疾病和佝偻病、骨质疏松等疾病；同时减轻畜禽粪便对环境的污染，无抗生素、固醇类激素的添加，是一种绿色、安全的养殖技术新产品。
文档编号A61K35/66GK101219154SQ20071003627
公开日2008年7月16日 申请日期2007年1月9日 优先权日2007年1月9日
发明者瀚 江 申请人:上海创博生态工程有限公司