专利名称：胆色素结石豚鼠动物模型的构建方法
技术领域：
本发明涉及一种动物模型的构建方法，尤其是涉及一种胆色素结石豚鼠动 物模型的构建方法。
背景技术：
胆石症是一种严重危害人类健康的常见病，胆石症可发生于胆囊、肝内胆 管和胆总管。胆结石临床大致可分为胆固醇结石和胆色素结石。
现今，人们一般通过构建胆石症动物模型，运用科学方法，通过研究模型 动物从而寻找胆石症的病因，预防胆石形成、结石携带症状发作和胆石清除后 复发，从根本上寻找防治胆石病彻底有效的办法。
致石饲料所致豚鼠胆结石模型造模方法为体重250-300g豚鼠，以致石词 料喂养6周。实验期间，不限饮食。 一般该模型成石率为80%左右，豚鼠死亡率 近60%，形成结石外形不规则，呈棕黑色泥沙样或棕色絮状沉淀(朱培庭等，升 清胶囊对豚鼠胆石病相关基因的影响，中西医结合学报，2005年5月第3巻第 3期)。致石饲料配方正常饲料45.43 g,致石性药物4.57g(其中酪蛋白lg、 蔗糖1.5g、猪油lg、微晶纤维素lg、胆酸0.2g、胆固醇0.05g)。
一般林可霉素诱导豚鼠胆色素结石模型方法为体重450-500g豚鼠，以盐 酸林可霉素60mg/kg/天剂量大腿根部皮下注射7天。实验期间，不限饮食。实 验期间使用普通饲料喂饲(侯中伟，大柴胡汤加减冲剂防治豚鼠胆红素结石模 型的实验研究，中国学位论文全文数据库)。 一般该模型所形成的结石大小不 一，形状不规则，多为白色絮状沉淀，亦有砂石样沉淀。
上述2种方法存在一定的问题， 一是造模时间长(6周)且死亡率过高(近 60%) ， 二是形成多为白色絮状沉淀，相对较少形成泥沙样沉淀，因此，造模成功率相对较低。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提出一种能减少造模时间并能提高造模成功 率的胆色素结石豚鼠动物模型的构建方法。
本发明的技术方案是在林可霉素诱导胆色素结石形成过程中使用致石饲料 替代普通饲料。具体构建方法是选取体重为300-600g的豚鼠，用盐酸林可霉 素以6-600mg/kg/天的剂量在豚鼠的大腿根部皮下注射3-6天，造模期间以致石 饲料喂养豚鼠。
本发明在造模时使用的致石饲料最好由通常饲料4. 5-450份和致石性药物 0.45-45份构成，所使用的致石性药物的组成和含量最好为酪蛋白0.1-IO份、 蔗糖O. 15-15份、猪油O. l-10份、微晶纤维素O. 1-IO份、胆酸O. 002-0. 2份、胆 固醇O. 005-0. 5份。
本发明在造模时选取的豚鼠最好为普通级雄性豚鼠。
相对现有技术，本发明动物模型的构建方法安全可靠，减少了豚鼠胆色素 模型造模时间、提高造模成功率和造模效率，具有良好的应用前景。
图1是本发明实施例1之胆色素结石豚鼠动物模型豚鼠胆囊状况对比图。 图2是本发明实施例2之胆色素结石豚鼠动物模型豚鼠胆囊状况对比图。 图3是本发明实施例3之胆色素结石豚鼠动物模型豚鼠胆囊状况对比图。
具体实施例方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。 实施例1
1、材料和方法 1. 1药品及试剂盐酸林可霉素(SPECTI腳YCIND lincomycin hydrochloride),注射液， 上海禾丰制药有限公司生产；豚鼠饲料及豚鼠致石饲料，上海斯莱克实验动物 有限责任公司提供，每份致石饲料含正常饲料45. 43 g和致石性药物4. 57g(致 石性药物中含酪蛋白lg、蔗糖1.5g、猪油lg、微晶纤维素lg、胆酸0.2g、 胆固醇O. 05g)。
1.2实验动物
普通级雄性豚鼠(guinea-pig)，购自上海市奉贤县泰日镇银根养兔室，体 重450土50g。
2、动物模型的构建
雄性豚鼠24只；随机分为正常对照组、胆色素结石模型组l，胆色素结石 模型组2，每组8只。
正常对照组用以生理盐水60mg/kg/天剂量大腿根部皮下注射连续7天。
模型组1用以盐酸林可霉素60mg/kg/day剂量大腿根部皮下注射造模5天， 第6天起用以生理盐水60 mg/kg/天剂量大腿根部皮下注射2天；
模型组2用以盐酸林可霉素60mg/kg/天剂量大腿根部皮下注射造模7天， 同时实验期间，模型组1喂以致石饲料，模型组2喂以普通饲料，其它不限饮 食，每日喂以适量青菜。
实验的第8天(即模型组2最后一剂林可霉素后24小时)，戊巴比妥麻醉下 完整切下胆囊，观察成石情况，计算各组成石率，如表1所示。术前动物禁食 12小时。
成石率=患有胆结石的豚鼠数(只)/每组豚鼠数(只)xicm
造模效率^成石率(％) /造模周期(天)
由图1所示，对照组实验豚鼠胆囊正常；模型组1实验豚鼠胆囊可观察到 明显的黑色泥沙样沉淀；模型组2实验豚鼠胆囊可观察到少量的黑色泥沙样沉 淀。表1.致石性词料喂养盐酸林可霉素诱导胆色素结石模型豚鼠成石率
组别n患有胆结石 的豚鼠数成石 率(%)造模周 期沃)
正常对照组8000
模型组1881005
模型组2881007
结果显示在胆色素结石模型中，各实验组的成石率分别为对照组为0%， 模型组1为100%;模型组2为100%。
实施例2
1、材料和方法
1. 1药品及试剂
盐酸林可霉素(SPECTINOMYCIND lincomycin hydrochloride)，注射液， 上海禾丰制药有限公司生产；豚鼠饲料及豚鼠致石饲料，上海斯莱克实验动物 有限责任公司提供，每份致石饲料含正常饲料44. 43 g和致石性药物5. 57g(致 石性药物中含酪蛋白lg、蔗糖1.5g、猪油lg、微晶纤维素2g、胆酸0.2g、 胆固醇O. 05g)。
1.2实验动物
普通级雄性豚鼠(guinea-pig)，购自上海市奉贤县泰日镇银根养兔室，体 重340±30 g。
2、 动物模型的构建
雄性豚鼠24只，随机分为正常对照组、胆色素结石模型组3，胆色素结石 模型组4，每组8只。
6正常对照组用以生理盐水75mg/kg/天剂量大腿根部皮下注射连续7天。
模型组3用以盐酸林可霉素75mg/kg/day剂量大腿根部皮下注射造模5天， 第6天起用以生理盐水75 mg/kg/天剂量大腿根部皮下注射2天；
模型组4用以盐酸林可霉素75mg/kg/天剂量大腿根部皮下注射造模7天， 同时实验期间，模型组3喂以致石饲料，模型组4喂以普通饲料，其它不限饮 食，每日喂以适量青菜。
实验的第8天(即模型组4最后一剂林可霉素后24小时)，戊巴比妥麻醉下 完整切下胆囊，观察成石情况，计算各组成石率，如表2所示。术前动物禁食 12小时。
由图2所示，对照组实验豚鼠胆囊正常；模型组3实验豚鼠胆囊可观察到 大量黑色泥沙样沉淀；模型组4实验豚鼠胆囊仅可观察到胆汁浑浊及少量沉淀。
表2.致石性饲料喂养盐酸林可霉素诱导胆色素结石模型豚鼠成石率
组别n患有胆结石 的豚鼠数成石 率(%)造模周 期沃)
正常对照组8000
模型组38787. 55
模型组486757
结果显示在胆色素结石模型中，各实验组的成石率分别为对照组为0%，
模型组3为87. 5%;模型组4为75%。 实施例3
1、材料和方法 1.1药品及试剂盐酸林可霉素(SPECH廳YCIND lincomycin hydrochloride)，注射液， 上海禾丰制药有限公司生产；豚鼠饲料及豚鼠致石饲料，上海斯莱克实验动物 有限责任公司提供，每份致石饲料含正常词料44. 43 g和致石性药物5. 57g(致 石性药物中含酪蛋白2g、蔗糖1.5g、猪油lg、微晶纤维素lg、胆酸0.2g、 月旦固醇O. 05g)。
1. 2实验动物
普通级雄性豚鼠(guinea-pig)，购自上海市奉贤县泰日镇银根养兔室，体 重300土20 g。
2、 动物模型的构建
雄性豚鼠24只，随机分为正常对照组、胆色素结石模型组5，胆色素结石 模型组6，每组8只。
正常对照组用以生理盐水85mg/kg/天剂量大腿根部皮下注射连续7天。
模型组5用以盐酸林可霉素85mg/kg/天剂量大腿根部皮下注射造模5天， 第6天起用以生理盐水85mg/kg/天剂量大腿根部皮下注射2天；
模型组6用以盐酸林可霉素85mg/kg/天剂量大腿根部皮下注射造模7天， 同时实验期间，模型组5喂以致石饲料，模型组6喂以普通饲料，其它不限饮 食，每日喂以适量青菜。
实验的第8天(即模型组6最后一剂林可霉素后24小时)，戊巴比妥麻醉下 完整切下胆囊，观察成石情况，计算各组成石率，如表3所示。术前动物禁食 12小时。
由图3所示，对照组实验豚鼠胆囊正常；模型组5实验豚鼠胆囊可观察到 大量黑色泥沙样沉淀；模型组6实验豚鼠胆囊仅可观察到胆汁浑浊及少量黑色 泥沙样沉淀。表3.致石性饲料喂养盐酸林可霉素诱导胆色素结石模型豚鼠成石率
组别n患有胆结石 的豚鼠数成石 率(%)造模周 期沃)
正常对照组8000
模型组5881005
模型组68787. 57
结果显示在胆色素结石模型中，各实验组的成石率分别为对照组为0%，
模型组5为100%;模型组6为87. 5%。
综上，从表1-3及图1 —3中可以看出，实施例l-3使用致石饲料替代豚鼠 词料后进行林可霉素诱导的豚鼠胆色素结石模型后，减少了造模时间(5天)并 提高造模成功率，从而提高了造模效率。
以上实施例说明，在林可霉素诱导胆色素结石形成过程中使用致石饲料替 代普通饲料，能减少造模时间并提高造模成功率，为进一步实验研究打下良好 的基础。
权利要求
1、一种胆色素结石豚鼠动物模型的构建方法，其特征是选取体重为300-600g的豚鼠，用盐酸林可霉素以6-600mg/kg/天的剂量在豚鼠的大腿根部皮下注射3-6天，造模期间以致石饲料喂养豚鼠。
2、 根据权利要求l所述的所述胆色素结石豚鼠动物模型的构建方法，其特 征是致石饲料由通常饲料4. 5-450份和致石性药物0. 45-45份构成。
3、 根据权利要求2所述的所述胆色素结石豚鼠动物模型的构建方法，其特 征是致石性药物的组成和含量为酪蛋白O. 1-IO份、蔗糖O. 15-15份、猪油 0. 1-10份、微晶纤维素O. l-10份、胆酸O. 002-0. 2份、胆固醇O. 005-0. 5份。
4、 根据权利要求1或2或3所述的所述胆色素结石豚鼠动物模型的构建方法， 其特征是豚鼠为普通级雄性豚鼠。
全文摘要
本发明涉及一种动物模型的构建方法，尤其是公开了一种胆色素结石豚鼠动物模型的构建方法。本发明选取体重为300-600g的豚鼠，用盐酸林可霉素以6-600mg/kg/天的剂量在豚鼠的大腿根部皮下注射3-6天，造模期间以致石饲料喂养豚鼠。本发明使用致石饲料替代普通饲料，减少了造模时间并提高了造模成功率，本发明可扩大胆色素结石模型的应用前景。
文档编号A61B19/00GK101455585SQ20071009443
公开日2009年6月17日 申请日期2007年12月11日 优先权日2007年12月11日
发明者于有军, 刘建文, 叶依依, 吴宏忠, 逊 孙, 孙丽娟, 山冬梅, 张静喆, 文 徐, 房一时, 方邦江, 朱培庭, 炯 李, 李艾斯, 李长龙, 林天碧, 梁晓强, 劲 王, 芳 王, 章学林, 蒋红伟, 邓婉利, 顾宏刚, 马恩伟 申请人:上海中医药大学附属龙华医院;华东理工大学