专利名称：从管花肉苁蓉中提取的组合物及其用途和提取方法
技术领域：
本发明涉及一种从管花肉苁蓉中提取的组合物及其含有该组合物的用途和提取 方法，尤其是一种从管花肉苁蓉中提取含有松果菊苷和麦角甾苷的组合物及其主要由 该组合物构成的用以治疗高血压的药物用途和该组合物提取方法。
背景技术：
管花肉苁蓉[^sta/7c力e ^/w7asa"cAe/ vt^j>i^.]为列当科肉苁蓉属多年生寄 生植物， 一般是作为滋补类药使用，其主要活性成份是苯乙醇苷类化合物，它由咖啡 酸、苯乙醇苷元、糖三部分组成，包括松果菊苷、麦角甾苷、肉苁蓉苷等物质。目前所公知的药理作用具有补肾阳，益精血，润肠通便的功能，用于阳萎，不孕， 腰膝酸软，筋骨无力，肠躁便秘和老年痴呆，日本学者佐藤调研究证明苯乙醇苷类物 质还具有明显增强学习记忆力作用。但目前入药时主要是采用传统的炮制方法，如浸泡、熬煮等，其有效成分的利用 很有限。特别是传统的炮制所提取的是一种混合物，在使用时不能将其中的各种有效 成分分开，并针对具体的对象分别施用，造成了有效成分的浪费，另一方面由于是各 种成分的混合，因而其中某一种有特定作用的成分含量较低，其效能也难以得到很好 地发挥。
发明内容
本发明的一个主要目的是提供一种方法简单、提取效果好、易于工业推广应用的 从管花肉灰蓉中提取的组合物，尤其是一种从管花肉苁蓉中提取的含有松果菊苷和麦 角甾苷的药物组合物以及将该药物组合物应用于治疗高血压的药物用途，同时，本发 明还提供了上述管花肉苁蓉中提取所述组合物的工艺方法。本发明的从管花肉苁蓉中提取的组合物，其特点为含有中松果菊苷的含量为 30% 60%，麦角甾苷的含量为5 15%。上述的从管花肉苁蓉中提取的组合物的用途，其特点是用以作为治疗高血压疾病。上述从管花肉苁蓉中提取含有中松果菊苷和麦角甾苷的组合物的方法，其特点是
主要由如下工艺过程组成原料准备:取管花肉苁蓉药材，进行粉碎，以利于提取。浸提以管花肉苁蓉药材重量的4 10倍、浓度为80% 100%的乙醇浸提2 5次，每次浸提2 7天，每次浸提后用250 149um滤网过滤，将所得滤液在温度《60'C 下减压至沸腾浓縮至《原药材重量，得浸膏，所述浸膏最好为水分含量不超过30%。水沉将所得浸膏加入5 60倍、粒度为0.i 1.0min的大孔树脂柱顶，用浓度 5% 50%的乙醇溶液进行冲洗至大孔树脂柱至无色，分别使用，收集冲洗物干燥脱水在温度40 70'C负压下干燥至水分含量不超过30%得管花肉苁蓉提取物。作为进一歩改进，上述的水沉工序中，乙醇溶液进行冲洗时最好为梯度冲洗2~5 次，梯度冲洗时后一次乙醇溶液浓度高于前一次。作为进一步改进，上述水沉工序前，最好将浸提所得浸膏进行萃取用乙酸乙酯 萃取1 5次，每次萃取用乙酸乙酯的量是原药材重量的1 4倍，分层后，舍去乙酸 乙酯部分，在温度《60。C下减压至沸腾浓縮为重量《原药材重量的浸膏，所述浸膏最 好为水分含量不超过30%。上述的水沉工序后，可采用浓度〉50%的乙醇溶液冲洗树脂柱1 2次，使树脂柱 在下一轮工序中可重复使用。本发明的方法采用醇提、水沉、并经过大孔树脂柱过滤，方法简单、提取效果好、 易于工业推广应用，并且提取物中松果菊苷和麦角甾苷的含量明显增大，经检测分别 可达到56.3%和9.78%，总量达到66.1%，同时所述提取物对治疗高血压具有明显作用。以下是通过动物试验测试管花肉苁蓉提取物对高血压、红细胞膜流动性的影响材料管花肉灰蓉提取物，松果菊苷、麦角甾苷的含量为60%;试抓5-NS，批号29545-48-0;美国Sigma公司；试验对象动物SD大鼠(SPF级)，体重(180土20)g;仪器成都泰盟科技有限公司的BP-6动物无创血压测定系统；德国Bruker公司的 电子顺磁共振仪ESP—300型；美国贝克曼公司的冷冻大容量高速离心机XL-8型；实验动物的高血压模型的建立及红细胞膜的提取、EPR测定实验动物的高血压模型将大鼠随机分组，每组5只。除正常组外，其它均给予含盐4%的高盐饲料；经过40 天的饲养，于第40天测定血压，给予高盐词料的三个组血压明显高于正常组，见表l，组别血压(收缩压)空白组156.93±14.04模型组176.30± 16.02*林小剂量181.32土22.53林中计量192.44±8. 74***大剂量1诉.91±11.238林*200710149388.1说明书第3/9页提示造膜成功；继续给予高盐饲料的同时，每日l次给予大、中、小三个剂量的本发 明所述的管花肉苁蓉提取物；空白组均给生理盐水。给药18天后，测定血压，见表2， 全血粘度见表3，表明管花肉苁蓉提取物对于血压的降低具有较明显的作用，对红细 胞全血粘度也有不同程度的影响。 表l给药前各组动物收缩压值与空白组比较*P>0.05林P《0.05 林承P《0.01 表2肉苁蓉提取物对各组动物收縮压值的影响血压(收缩压)130.08 ±5. 66林* 170.53 ±13. 62 154.42± 15. 20** 130.45 ±9. 48*** 129.54± 11.31***与模型组比较*P>0.05林P《0.05 ***P《0.01 表3肉苁蓉提取物对各组动物全血粘度的影响组别全血粘度(mp. s)1.005.0030.002,0红细胞聚集指数空白组41.19± 10.4314.85 ±3.256.90 ±1.294.45 ±4.459.06±1.43模型组肌65土26.52 ±U.02土6.50±11.99±2.68*林32.24***9.26*林3.16*林6.56*林小剂量59.29±19.60±8.22 ±4.89土11.85 ±3.37*22.99*5.97*1.69*0.66*中计量66.73±9.26 ±5.52 ±11.78 土 1.67*21.98 ±5.25*18.91*1.72*0.77承大剂量59.95 ±8.80土5.35 ±1U6±0.77*20.37±4.73*14.39*1.97*U7*与空白组比较*P〉0.05**P《0.05 ***P《0.01 红细胞膜的提取、EPR测定大鼠心脏取血，将所取血液在4'C环境下静置12小时分层,用滴管吸去上层白细胞，组组组量量量白型剂计剂空模小中大5
合并相同组的红细胞，加入40倍4。C的0.05 mol'L—1 (pH=8.0)的PBS，搅匀，在4。C 环境中静置l分钟，用低温高速离心机(4X:、 12000 r，min"离心10次，每次IO min， 得红细胞膜。取膜，加入少许O. 05 mol L—1 (pH=7.4)的PBS，摇匀，装入多个微量 离心管中。冷冻(-20。C)，待测。将冷冻的红细胞膜解冻，用旋涡混悬器振摇混匀，吸出250J4溶液置微量离心中， 加入25叱1. 3咖o1 L1 5-DS,用O. 05 mol L-1 (pH二7. 4)的PBS稀释至l. 0 ml左右， 微量离心管于冰水中，轻轻搅拌3min，置4。C过夜后，取出离心(3000r Tnin—、 3min)， 吸取上层液测定，如果具有吸收信号，红细胞膜用0.05 mol.i;1 (pH二7.4)的PBS 离心至上清液无EPR吸收信号，把红细胞膜装管，放人EPJ 波谱仪的谐振腔中进行测 定。EPR测定参数及计算公式EPR测试参数:中心磁场(CF): 3500 G，扫描宽度(SW): 150 G，扫描时间(sT): 50S，调制幅度(MA): 3.2E+0G,调制频率(MF): 100KHz，微波频率(MF) :9. 802GHz.微 波功率(MP). 20mW，测试温度(T):室温计算公式S-0. 568X 3(A〃-AJ / (A〃+2 A丄目标参数S与红细胞膜流动性成 反比，其值越小红细胞膜流动性越好。表4肉苁蓉提取物对各组动物红细胞膜流动性的影响_与模型组比较*P>0.05林P《0.05 林承P《0.01制造大鼠高血压模型成功后，其血压升高、全血黏度升高、红细胞膜流动性相对 较差，通过给与管花肉苁蓉提取物能够明显的降低血压(P《0.01)，这说明管花肉 灰蓉提取物具有较好的降血压作用，同时管花肉苁蓉提取物中剂量和大剂量红细胞膜 流动性相对于模型组也有明显增加(P《0.01)。膜流动性是细胞膜的主要特性之一，是对膜脂、膜蛋白的运动状态、膜脂组成成分 的动态变化及膜蛋白构型改变的综合反应，细胞在损伤或外源性影响因素作用下均可 引起细胞膜流动性变化。从红细胞全血粘度数据分析，肉苁蓉提取物对高血压大鼠低 切变率、高切变率均存在不同的影响，使其参数更接近正常值高血压模型组大鼠表
现低切变率、高切变率升高，说明红细胞聚集性高，血液处于高凝状态，红细胞变形 性差，脆性高，经过给药的大鼠红细胞聚集性降低，红细胞变形性好，脆性好，说明 肉苁蓉提取物对高血压动物全血粘度有一定的影响。从全血粘度的数值来看，低切和高切能反映红细胞的聚集性和红细胞的变形性， 红细胞膜的流动性的高低也反映红细胞膜的状态，从血压测定值、全血粘度的测定值 与红细膜的测定值来看，肉苁蓉提取物具有降低高血压大鼠的血压的作用，提示肉苁 蓉提取物有降压的药理作用。
图1是本发明的提取方法工艺过程的示意图。图2为所述提取物中松果菊苷对照品高效液相色谱图。图3为所述提取物中麦角甾苷对照品高效液相色谱图。图4为所述管花肉苁蓉提取物高效液相色谱图。
具体实施例方式实旌例1:原料准备取管花肉灰蓉药材干品100Kg粉碎至于《0. 3mm的颗粒备用；浸提以管花肉苁蓉药材重量的10倍、浓度为90%的乙醇浸提4次，每次浸提5 天，每次浸提后用149um滤网过滤，取滤液；浓縮将浸提所得滤液在温度55'C下减压至沸腾，浓縮至总重量为80Kg;萃取用乙酸乙酯萃取5次，每次萃取用乙酸乙酯的量120Kg，分层后，舍去乙 酸乙酯部分，在温度55'C下减压至沸腾浓縮至含水量30%得浸膏；水沉将所得浸膏加入5000Kg、粒度为0. 5mm的大孔树脂柱顶，按先后顺序分 别用浓度10%、 20%、 30%、 40%的乙醇溶液各冲洗4次，至大孔树脂柱至无色iJ&集 冲洗物；干燥脱水在温度4(TC下减压至沸腾，干燥浓縮至含水量30%得管花肉苁蓉提取物。上述水沉后的树脂柱，再用浓度55%的乙醇溶液冲洗2次，以备下一轮生产重复 使用。实验检测仪器、试药与药材高效液相色谱系统岛津2010CHT， LC-solution色谱工作站；Mettler-AE163电子天平(德国Mettle:r公司》，KQ32G0型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，甲 醇、乙腈均为Fisher试剂；醋酸分析纯(西安化学试剂公司)，超纯水(自制)，松 果菊苷(中国药品生物制品检定所，111670-200502),麦角甾苷(中国药品生物制品 检定所，11530-200505)。 方法与结果色谱条件Waters symmetry C18色谱柱(4. 6X250咖，5iim )，流动相甲醇一 乙腈—1%醋酸(15: 10: 75)，流速0.6mL'mii^柱温30。C，检测波长334 nm。 检测样品本发明的管花肉苁蓉提取物，检测前干燥至含水量《10%。 结果见对照品和样品色谱分离图见图2 图4。松果菊苷的含量为56. 3%，麦角甾苷的含量为9.78%。总含量达66.08%。 实施例2:原料准备取管花肉苁蓉药材干品100Kg粉碎至于《3. Omm的颗粒备用；浸提以管花肉苁蓉药材重量的4倍、浓度为80%的乙醇浸提3次，每次浸提6 天，每次浸提后用250um滤网过滤，取滤液；浓縮将浸提所得滤液在温度55'C下减压至沸腾，浓縮至总量低于90Kg;萃取用乙酸乙酯萃取2次，每次萃取用乙酸乙酯的量350Kg，分层后，舍去乙 酸乙酯部分，在温度55'C下减压至沸腾浓缩至含水量28%得浸膏；水沉将所得浸膏加入800Kg、粒度为0. 5咖的大孔树脂柱顶，按先后顺序分别 用浓度15%、 20%、 25%、 30%、 35%的乙醇溶液各冲洗1次，至大孔树脂柱至无色， 收集冲洗物；干燥脱水在温度30'C下减压至沸腾，干燥浓縮至含水量28%得管花肉苁蓉提取物。实施例3:原料准备取管花肉苁蓉药材干品100Kg粉碎至于《lmm的颗粒备用；浸提以管花肉苁蓉药材重量的于6倍、浓度为85%的乙醇浸提5次，每次浸提 4天，每次浸提后用149um滤网过滤，取滤液；浓縮将浸提所得滤液在温度50"C下减压至沸腾，浓縮至总重量为80Kg;萃取用乙酸乙酯萃取4次，每次萃取用乙酸乙酯100Kg，分层后，舍去乙酸乙 酯部分，在温度45°(:下减压至沸腾浓縮至含水量25%得浸膏；水沉将所得浸膏加入3000Kg、粒度为0. 3咖的大孔树脂柱顶，按先后顺序分
别用浓度15%、 25%、 35%的乙醇溶液各冲洗1次，至大孔树脂柱至无色L收集冲洗物; 干燥脱水在温度65'C下减压至沸腾，干燥浓縮至含水量20%得管花肉苁蓉提取物。上述水沉后的树脂柱，再用浓度60%的乙醇溶液冲洗2次，以备下一轮生产重复 使用。实施例4:原料准备取管花肉苁蓉药材干品100Kg粉碎至于《1. 5mn的颗粒备用；浸提以管花肉苁蓉药材重量的于10倍、浓度为89%的乙醇浸提2次，每次浸提6天，每次浸提后用210Bni滤网过滤，取滤液；浓縮将浸提所得滤液在温度4(TC下减压至沸腾，浓縮至含水量20%总重量为60Kg;萃取用乙酸乙酯萃取2次，每次萃取用乙酸乙酯360Kg，分层后，舍去乙酸乙 酯部分，在温度50r下减压至沸腾浓縮至总重《60Kg;水沉将所得浸膏加入4000Kg、粒度为0. 7鹏的大孔树脂柱顶，按先后顺序分 别用浓度20%、 30%的乙醇溶液各冲洗1次，至大孔树脂柱至无色^_收集冲洗物；干燥脱水在温度50'C下减压至沸腾，将所得冲洗物干燥浓縮至含水量低于20% 得管花肉苁蓉提取物。实施例5:原料准备取管花肉苁蓉药材干品100Kg粉碎至于《1. 5mn的颗粒备用；浸提以管花肉苁蓉药材重量的于5倍、浓度为92%的乙醇浸提4次，每次浸提 7天，每次浸提后用149"in滤网过滤，取滤液；浓縮将浸提所得滤液在温度55'C下减压至沸腾，浓縮至总重量为100Kg;萃取用乙酸乙酯萃取4次，每次萃取用乙酸乙酯150Kg，分层后，舍去乙酸乙 酯部分，在温度50'C下减压至沸腾浓缩至含水量209&得浸膏；水沉将所得浸膏加入1000Kg、粒度为0. 4咖的大孔树脂柱顶，按先后顺序分 别用浓度10%、 15%、 25%、 30%的乙醇溶液各冲洗1次，至大孔树脂柱至无色^收集 冲洗物；干燥脱水在温度70'C下减压至沸腾，干燥浓縮至含水量低于10%得管花肉苁蓉提取物。实施例6:
原料准备取管花肉灰蓉药材干品100Kg粉碎至于《2.5咖的颗粒备用；浸提以管花肉苁蓉药材重量的于9倍、浓度为94%的乙醇浸提3次，每次浸提 4天，每次浸提后用210um滤网过滤，取滤液；浓縮将浸提所得滤液在温度45-C下减压至沸腾，浓縮至总重量为75Kg;萃取用^酸乙酯萃取4次，每次萃取用乙酸乙酯250Kg，分层后，舍去乙酸乙 酯部分，在温度55。C下减压至沸腾浓缩至含水量26劣得浸膏；水沉将所得浸膏加入2000Kg、粒度为0. 2mm的大孔树脂柱顶，按先后顺序分 别用浓度10%、 15%、 20%、 25%、 30%的乙醇溶液各冲洗1次，至大孔树脂柱至无色i 收集冲洗物；干燥脱水在温度4(TC下减压至沸腾，干燥浓縮至含水量低于25%得管花肉苁蓉 B实施例7:原料准备取管花肉灰蓉药材干品100Kg粉碎至于《0.5咖的颗粒备用；浸提以管花肉苁蓉药材重量的于8倍、浓度为95%的乙醇浸提5次，每次浸提 5天，每次浸提后用150nm滤网过滤，取滤液；浓縮将浸提所得滤液在温度45'C下减压至沸腾，浓縮至总重量为75Kg;萃取用乙酸乙酯萃取2次，每次萃取用乙酸乙酯380Kg，分层后，舍去乙酸乙 酯部分，在温度50。C下减压至沸腾浓縮至总重《50Kg;水沉将所得浸膏加入3000Kg、粒度为0. 6mm的大孔树脂柱顶，按先后顺序分 别用浓度10%、 20%、 30%、 40%的乙醇溶液各冲洗1次，至大孔树脂柱至无色^收集 冲洗物；干燥脱水在温度65。C下减压至沸腾，将所得冲洗物干燥浓缩至含水量低于10%得管花肉苁蓉提取物。 实施例8:原料准备取管花肉苁蓉药材干品100Kg粉碎至于《1. 5mm的颗粒备用；浸提以管花肉灰蓉药材重量的于6倍、浓度为97%的乙醇浸提4次，每次浸提 7天，每次浸提后用180um滤网过滤，取滤液；浓縮将浸提所得滤液在温度5(TC下减压至沸腾，浓缩至总重量为50Kg;萃取用乙酸乙酯萃取3次，每次萃取用乙酸乙酯280Kg，分层后，舍去乙酸乙 酯部分，在温度5(TC下减压至沸腾浓縮至含水量35呢得浸膏； 水沉将所得浸膏加入3000Kg、粒度为0. 8鹏的大孔树脂柱顶，按先后顺序分 别用浓度15%、 25%、 35%、 40%的乙醇溶液各冲洗1次，至大孔树脂柱至无色」^收集 冲洗物；干燥脱水在温度60。C下减压至沸腾，将所得冲洗物干燥浓縮至含水量低于10%得管花肉苁蓉提取物。 实施例9:原料准备取管花肉苁蓉药材干品100Kg粉碎至于《1.8咖的颗粒备用；浸提以管花肉灰蓉药材重量的于7倍、浓度为98%的乙醇浸提3次，每次浸提7天，每次浸提后用150nm滤网过滤，取滤液；浓縮将浸提所得滤液在温度40'C下减压至沸腾，浓缩至总重量为70Kg得浸膏； 水沉将所得浸膏加入3000Kg、粒度为0. 8mm的大孔树脂柱顶，按先后顺序分别用浓度15%、 25%、 35%的乙醇溶液各冲洗1次，至大孔树脂柱至无色L收集冲洗物； 干燥脱水在温度40'C下减压至沸腾，将所得冲洗物干燥浓缩至含水量低于25%得管花肉苁蓉提取物。 实施例10:原料准备取管花肉灰蓉药材干品100Kg粉碎至于《1.2 fflfll的颗粒备用；浸提以管花肉灰蓉药材重量的于7倍、浓度为94%的乙醇浸提3次，每次浸提7天，每次浸提后用150nm滤网过滤，取滤液；浓縮将浸提所得滤液在温度40'C下减压至沸腾，浓縮至含水量35%得浸膏； 水沉将所得浸膏加入3000Kg、粒度为0. 8mm的大孔树脂柱顶，按先后顺序分别用浓度10%、 20%、 30%、 40%的乙醇溶液各冲洗1次，至大孔树脂柱至无色二收集冲洗物；干燥脱水在温度40'C下减压至沸腾，将所得冲洗物干燥浓缩至含水量低于15% 得管花肉苁蓉提取物。
权利要求
1、一种从管花肉苁蓉中提取的组合物，其特特征在于含有松果菊苷30％～60％，麦角甾苷为5～15％。
2、 一种权利要求1所述的从管花肉苁蓉中提取的组合物的用途，其特征是用以 治疗高血压疾病。
3、 一种权利要求1所述的从管花肉苁蓉中提取的组合物的生产方法，其特征在于主要由如下工艺过程组成原料准备取管花肉苁蓉药材，进行粉碎，以利于提取。浸提以管花肉苁蓉药材重量的4 10倍、浓度为80% 100%的乙醇浸提2 5次， 每次浸提2 7天，每次浸提后用250 149nm滤网过滤，将所得滤液在温度《6(TC 下减压至沸腾，浓縮至《原药材重量，得浸膏；水沉将上述所得浸膏加入5 60倍、粒度为0.1 1.0mm的大孔树脂柱顶，用 浓度5% 50%的乙醇溶液进行冲洗至大孔树脂柱至无色，分别使用，收集冲洗物；干燥脱水在温度40 7(TC负压下干燥至水分含量不超过30%得管花肉苁蓉提取物。
4、 根据权利要求3所述的从管花肉苁蓉中提取的组合物的生产方法，其特征在 于所述的水沉工序前，将浸提所得浸膏进行萃取用乙酸乙酯萃取1 5次，每次萃 取用乙酸乙酯的量是原药材重量的1 4倍，分层后，舍去乙酸乙酯部分，在温度《 60'C下减压至沸腾，浓縮为重量《原药材重量的浸膏；
5、 根据权利要求3或4所述的从管花肉苁蓉中提取的组合物的生产方法，其特 征在于所述的浸膏为水分含量不超过30%。
6、 根据权利要求3或4所述的从管花肉苁蓉中提取的组合物的生产方法，其特 征在于所述的的水沉工序中，乙醇溶液进行冲洗时为梯度冲洗2 5次，梯度冲洗时后 一次乙醇溶液浓度高于前一次。
7、 根据权利要求5所述的从管花肉苁蓉中提取的组合物的生产方法，其特征在 于所述的的水沉工序中，乙醇溶液进行冲洗时为梯度冲洗2 5次，梯度冲洗时后一次 乙醇溶液浓度高于前一次。
全文摘要
本发明涉及一种从管花肉苁蓉中提取的组合物及其含有该组合物的用途和提取方法，本发明的组合物主要含有中松果菊苷和麦角甾苷，并将其用以作为治疗高血压疾病。其提取工艺主要由原料准备、浸提、浓缩、萃取、水沉、干燥脱水组成。本发明的方法采用醇提、水沉、并经过大孔树脂柱过滤，方法简单、提取效果好、易于工业推广应用，并且提取物中松果菊苷和麦角甾苷的含量明显增大，经检测分别可达到56.3％和9.78％，总量达到66.1％，同时所述提取物对治疗高血压具有明显作用。
文档编号A61P9/00GK101129482SQ200710149388
公开日2008年2月27日 申请日期2007年9月12日 优先权日2007年9月12日
发明者勇 李, 熊元君, 谢海辉, 贾晓光 申请人:新疆维吾尔自治区中药民族药研究所