专利名称：：一种治疗哮喘的中药复方挥发油部位及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药复方有效部位及其制备方法，具体地说是涉及一种治疗哮喘的中药复方挥发油部位及其制备方法，以及在制备治疗哮喘药物中的应用，属于中医药领域。二
背景技术：
：支气管哮喘(简称哮喘)是常见的呼吸系统疾病，近年来许多国家和地区哮喘的发病率和死亡率均呈逐年增高的趋势，全球至少有1亿人患哮喘病，发达国家哮喘总患病率达7%8%，我国约为1%2%。因此哮喘的防治受到世界卫生组织以及各国政府的重视，成为呼吸系统疾病中最为活跃的研究领域。但是哮喘的治疗仍是一个未能完全解决的问题，同时由于化学药物存在副作用，因此积极寻求有效的防治哮喘方法,一直是医药界不倦探索的课题。中医药治疗哮喘又悠久的历史，其治则为发时攻邪治标，未发之时扶正治本。从目前临床哮喘治疗来看，以辨证辨病结合，中医药愈加显现其独特的治疗优势，但存在使用不便、效应部位不甚确切的问题。三
发明内容本发明的目的是提供一种治疗哮喘的中药复方挥发油部位及其制备方法，以及在制备治疗哮喘药物中的应用。本发明的目的是通过以下的技术方案来实现的一种治疗哮喘的中药复方挥发油部位，其特征在于它是由下列原药按生药重量份配比制成甘草2-20份、麻黄3-30份、苦杏仁5-50份、半夏5-50份、生石膏10-100份、细茶5-50份、五味子3-30份。一种治疗哮喘的中药复方挥发油部位的制备方法，其特征在于该方法步骤如下:(1)称取甘草2-20份、麻黄3-30份、苦杏仁5-50份、半夏5-50份、生石膏310-100份、细茶5-50份、五味子3-30份混合后粉碎，置于圆底烧瓶中，加纯净水，振摇混合后，浸泡；(2)将圆底烧瓶连接挥发油提取器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油提取器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，置电热套中缓缓加热至沸腾，并保持微沸，至提取器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启提取器下端活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止，放置后，再开启活塞时油层下降至其上端恰与刻度O线平齐，读取挥发油量；(3)将上步骤的挥发油经无水硫酸钠干燥后得挥发油为红黄色透明油状液体。上述步骤(1)中加纯净水的量是药材量的10倍，振摇混合后，浸泡30分钟。上述步骤(2)中所述置于电热套中缓缓加热至11(TC沸腾，并保持微沸8小时，至油层上端到达刻度口线上面5咖处为止，放置1.5-2小时。上述步骤(3)中所得干燥后的挥发油的得率为0.17%。上述的中药复方挥发油部位在制备治疗哮喘药物中的应用。本发明在前期研究以数据挖掘方法对古今治疗哮喘方剂进行筛选，古今方支持度排前10位的共同药物有麻黄、杏仁、甘草、半夏、五味子等。本复方中麻黄配石膏，清宣肺中郁热而定喘；杏仁宣降肺气，协同麻黄以治喘；半夏、五味子燥湿化痰、敛肺止咳，芽茶化痰除热，甘草和中缓急，调和诸药，全方具有清宣肺热平喘的功效。用治外感风寒，内蕴痰热，痰气喘急的哮喘。提取中药挥发油的技术稳定，如水蒸气蒸馏法提取的挥发油部位的制备方法。但复方挥发油的制备以及用于治疗哮喘药物的应用很少。对本发明提供的复方有效部位进行研究符合中药现代化的发展方向。本发明提供的中药复方挥发油部位及其制备方法，可用于涉及在制备治疗哮喘药物中的应用，从而为临床提供制备与使用方便、有效部位较明确、重复性好的中药新药。一种中药复方挥发油的指纹图谱(1)样品称取全方挥发油49.09mg，置于5mL容量瓶中用丙酮溶解并定容至刻度，得到全方挥发油样品9.02mg/mL。(2)GC-MS联用条件色谱条件色谱柱HP-5，石英毛细管色谱柱(0.25mmX30mX0.25um);进样口温度20(TC，检测器温度250'C;程序升温初始温度60。C，以4'C/min的速率升温至150。C保持3min，以25°C/min的速率升温至200。C保持10min，分流比(40:1)，进样量1P1;载气为氦气(纯度>99.99%)，流速为LOm]/min。质谱条件电子轰击(EI)离子源，电离电压70eV，离子源温度220°C，加速电压200eV;扫描质量m/z35~550。分析方法对复方总离子流图中的化学色谱峰通过气相质谱分析工作站NIST标准图库进行检索并参照有关文献进行确认，按峰面积归一化法计算各组分相对百分含量，对挥发油进行分析。分析结果挥发油中百分含量大于1%的成分共有16个。其中含量最高的是苯甲醛，保留时间为6.15min，相对百分含量为18.93%。其次含量较高的有a-衣兰袖烯和Y-杜松油烯，保留时间分别为22.86，23.32min，百分含量分别为8.71%和8.62%。其它百分含量高于1%的成分有a-松油醇(百分含量为1.65%，保留时间为13.12min)，a-檀香烯(百分含量为1.83%，保留时间为19.50min)，Y-衣兰油烯(百分含量为1.23%,保留时间为21.65min)，P-花柏烯(百分含量为1.49%，保留时间为22.30min)，a-古芸烯(百分含量为1.39%，保留时间为22.66min)，a-雪松烯(百分含量为2.60%，保留时间为24.03min)，大根香叶烯(百分含量为1.77%，保留时间为24.48min)，Cubenol(百分含量为1.57%，保留时间为27.22min)，a-檀香醇(百分含量为1.86%，保留时间为27.92min)和广藿香烯(百分含量为2.76%，保留时间为29.40min),本发明的有益效果如下本发明用于治疗哮喘的中药复方挥发油部位及其制备方法，从甘草、麻黄、苦杏仁、半夏、生石膏、细茶、五味子组成的中药复方中，提取挥发油部位，并进行指纹图谱分析。该制备工艺简单、重现性好、成本低。用本发明提供的中药复方挥发油部位，进行支气管哮喘相关的药理实验，结果表明，本发明提供的中药复方挥发油部位具有明显延长哮喘潜伏期、改善呼吸功能、减轻炎细胞浸润、降低炎症因子水平等抗炎、平喘、调整免疫功能的疗效。四.具体实施方式实施例l一种中药复方挥发油部位的制备方法，步骤如下取甘草40g，麻黄60g，苦杏仁100g，半夏100g，生石膏200g，细茶100g，五味子60g，组成全方共660g，粉碎后置于20000mL圆底烧瓶中，加药材量10倍量纯净水，振摇混合后，浸泡30min;连接挥发油提取器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至1](TC沸腾，并保持微沸8小时，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。放置l小时以上，再开启活塞时油层下降至其上端恰与刻度0线平齐。经无水硫酸钠干燥后得挥发油为红黄色透明油状液体，具有特殊浓郁香味。得到挥发油的量为l.lmL。实施例2—种中药复方挥发油的制备方法，步骤如下取甘草80g，麻黄120g，苦杏仁200g,半夏200g,生石膏400g，细茶200g，五味子120g，组成全方共1320g，粉碎后置于20000mL圆底烧瓶中，加10倍量纯净水，振摇混合后，浸泡30min。连接挥发油提取器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油提取器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至110'C沸腾，并保持微沸8小时，至提取器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启提取器下端活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5ran处为止。放置l小时以上，再开启活塞时油层下降至其上端恰与刻度0线平齐。经无水硫酸钠干燥后得挥发油为红黄色透明油状液体，具有特殊浓郁香味。得到挥发油的量为2.3mL。实施例3本发明提供的中药复方挥发油部位治疗哮喘的实验研究本发明对豚鼠卵蛋白哮喘模型的药效，具体实验结果如下选取健康豚鼠，体重250士20g，雌雄各半。随机分为空白组、模型组、挥发油组。(1)本发明提供的中药复方挥发油对引喘潜伏期和行为学影响表1中药复方挥发油对豚鼠引喘潜伏期和行为学的影响(^土SD,n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>模型组中药复方挥发油组4.96172±57站6284±99*4.0±0##3.0±1.1*正常对照组与模型组比较，##P<0.01;给药组与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01。结果显示，与模型组相比中药复方挥发油能够明显改善豚鼠的行为学评分(P〈0.05)，明显延长豚鼠的引喘潜伏期(P〈0.05)。(2)本发明提供的中药复方挥发油对气管灌洗液中EOS的影响表2中药复方挥发油对哮喘豚鼠BALF中EOS的影响(7±SD,ri=8)组别BALF中E0S(%)正常对照组2.67±1.03模型组8.17±1.17##挥发油组2.67±2.16**正常对照组与模型组比较，##P<0.01;给药组与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01。结果表明，复方挥发油组与模型组相比，BALF中EOS百分率有显著差异(P〈0.01)。(3)本发明提供的中药复方挥发油对血清IL-4、IL-5、IFN-Y的影响表3中药复方挥发油对血清IL-4、IL-5、IFN-y的影响("±SD,n=8)组别IL—4IL-5IFN-Ypg/ral正常对照组15.11±5.7713.30±7.4922.77±10.69模型组27.60±8.68#61.74±22.56##9.11±4.74#挥发油组18.37±3.00*23.22±21.78*19.75±6.84*正常对照组与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01;给药组与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。结果表明，与模型组相比，中药挥发油组对IL-4、IL-5和IFN-Y的影响均有差异(P〈0.05)。(4)本发明提供的中药复方挥发油对肺组织病理形态学的影响结果见药物应用后能减轻肺及支气管Eos等炎细胞浸润，减轻支气管周围炎等肺部炎性病变的程度。在本实验中，与模型组比较，本发明提供的中药复方挥发油能够明显延长动物的引喘潜伏期，显著降低BALF中EOS百分率(P〈0.01)。模型组与正常对照组相比较，血清IL-4和IL-5均明显上升(P<0.05，P<0.01)，且血清IFN-y明显降低(P〈0.05)。给药后，挥发油能够明显抑制血清IL-4、IL-5(P〈0.01,P〈0.05)，显著提高血清IFN-Y含量，调节Thl/Th2的平衡关系，改善炎症细胞因子的释放，还能够在肺组织中抑制主要炎症细胞E0S的聚集，明显改善哮喘的行为学体征。实施例4本发明提供的中药复方挥发油部位治疗哮喘的实验研究本发明提供的中药复方挥发油部位对呼吸道合胞病毒诱导的致敏小鼠作用，具体实验结果如下Balb/C小鼠，清洁级，雌性，6-8周龄，体重18-20g。复制合胞病毒诱导的致敏小鼠哮喘模型。随机分为空白组、模型组、阳性对照组(地塞米松)、挥发油组。(1)气道反应性变化气道反应性结果见表4，分别以45、135、405ng/mLAch激发时，与PBS对照组比，模型组Rt增高值均明显升高(尸均<0.01);阳性药DM组、本发明提供的中药复方挥发油组比均显著降低(P均<0.01)。表4中药复方挥发油对气道反应性的影响±S，n=10)Group生药剂量RL[cmH20mL-ls](g/kg)baseline45.0ug/mL135.0ng/mL405.0ng/mL空白对照组13.45±0.5917.27±0.7821.38±5.1228.02±9.14模型组28.76±2.2538.70±0.58**61.31±2.96**65.18±1.77**阳性药组O.讓,3.2418.74±2.04AA27.97±8.79AA26.42±0.39AA挥发油13'415.93±3.9319.87±7.36AA21.52±7.73AA29.99±0.67AA注'Z5〈0.05'/><0.01VS.PBScontrolgroup;a尸〈0.05aa尸<0.01VS.OV感SVgroup(2)BALF中细胞分类计数BALF中细胞分类计数结果见表5，给药组TCS、macrophages.lymphocytes、eosinophils'、neutrophils数量与OVA/RSV组比均明显降低(尸均<0.01)，用药组的炎细胞明显减少。表5中药复方挥发油对BALF中炎性细胞的影响(^±S，n=10)GroupTCSMacrophages(xloVmL)OloVmL)Lymphocytes(xloVmL)Eosinophils(xl05/mL)Neutrophils(xloVmL)空白对照组模型组13.75±7.9113.30±7.680.15±0.4300.27±0.6380.00±37.89**50.12±19.92**7.22±6.09**4.86±5.21**17.80±12.92**阳性药组14.38±7.76AA11.68±5.97AA1,09±1,03AA0.51±0.99AA0.91±0.78A"挥发油组16.88±7.99AA13.90±6.86AA0.97±0.45AA0.56±0.32AA1.44±0.69A'注"/><0.01VS.PBScontrolgroup:A/><0.05AA尸<0.01VS.OVA/RSVgroup(3)BALF对小鼠血清TNF-a水平变化的影响表6中药复方挥发油部位对小鼠血清中TNF-a水平的影响(7士S，n=10)Group生药剂量(g/kg)TNF-a(ng/ml)空白对照组1.72±0.35模型组2.79±0.55**阳性对照组a(X)241.85±0.63AA挥发油13'41.80±0.38AA本实验中，在以45、135、405貼/mLAch激发时，模型组RL增高值(与基值比较)与空白组对照组比均明显升高(P〈0.05，P<0.01)，给药后RL值有所下降;BALF上清中细胞分类计数表明，模型组较PBS对照组细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞均显著升高(P均〈0.01)，给药组的TCS、macrophages、lymphocytes,eosin叩hils数量与模型组比均明显降低(P均<0.01)。中药复方挥发油部位降低哮喘模型血清中升高的炎细胞因子TNF-a水平。权利要求1、一种中药复方挥发油部位，其特征在于它是由下列原药按生药重量份配比制成甘草2-20份、麻黄3-30份、苦杏仁5-50份、半夏5-50份、生石膏10-100份细茶5-50份、五味子3-30份。2、一种制备权利要求1所述中药复方挥发油部位的方法，其特征在于该方法的步骤如下(1)称取甘草2-20份、麻黄3-30份、苦杏仁5-50份、半夏5-50份、生石膏10-100份、细茶5-50份、五味子3-30份混合后粉碎，置于圆底烧瓶中，加纯净水，振摇混合后，浸泡；(2)将圆底烧瓶连接挥发油提取器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油提取器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，置电热套中缓缓加热至沸腾,并保持微沸，至提取器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启提取器下端活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止，放置后，再开启活塞时油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量；(3)将上述所得挥发油经无水硫酸钠干燥后得挥发油为红黄色透明油状液体。3、根据权利要求2所述中药复方挥发油部位的制备方法，其特征在于在步骤(l)中原药材粉碎后置于20000ml的圆底烧瓶中，加药材量IO倍量的纯净水,振摇混合后，浸泡30分钟。4、根据权利要求2所述中药复方挥发油部位的制备方法，其特征在于在步骤(2)中所述置于电热套中缓缓加热至ll(TC沸腾，并保持微沸8小时，至油层上端到达刻度口线上面5mm处为止，放置1.5-2小时。5、根据权利要求2所述中药复方挥发油部位的制备方法，其特征在于在步骤(3)中所得干燥后的挥发油的得率为O.17%。6、如权利要求1所述的中药复方挥发油部位在制备治疗哮喘药物中的应用。全文摘要一种用于治疗哮喘的中药复方挥发油部位及制备方法。它是从甘草、麻黄、苦杏仁、半夏、生石膏、细茶、五味子按一定重量份配比的原料药用水蒸气蒸馏法提取的中药复方挥发油部位，得率为0.17％。本发明具有制备工艺简单、重现性好、成本低的优点。经药理试验证明本发明提供的中药复方挥发油部位能够显著延长动物的引喘潜伏期，降低哮喘气道反应性，改善哮喘的行为学体征；显著降低BALF中EOS，抑制肺组织中主要炎症细胞EOS的聚集；同时显著抑制血清炎性因子IL-4、IL-5水平、提高血清IFN-γ水平，调节Th1/Th2的平衡关系，因此，本发明的中药复方挥发油部位是用于制备治疗哮喘病的理想药物。文档编号A61K33/06GK101322783SQ20081002083公开日2008年12月17日申请日期2008年7月29日优先权日2008年7月29日发明者唐于平,立徐,徐惠琴,王明艳,范欣生申请人:南京中医药大学