专利名称：一种中药挥发油中化学成分的测定方法
技术领域：
本发明属分析化学领域，涉及一种分离分析中药挥发油中化学成分的方法。具体地说涉及一种利用微波辅助单点微萃取装置萃取中药挥发油后，利用气相色谱-质谱联用法测定中药挥发油中化学成分，并计算相对含量的方法。
背景技术：
中药是中华民民族的瑰宝，其临床医疗作用早已在整个医学界享有盛誉。其中，挥发油是中药的一种重要活性成分，它又名精油，是一类与水不相混溶的挥发性油状物的总称，重要散发出的气味就是由挥发油引起的。它在临床上有多方面的医疗作用，如止咳、平喘、祛痰、驱风、镇痛、杀虫、抗菌等。因此，中药的挥发油成分的分析，对于深入探究中药的作用机理及其疗效，以及在新型药物开发方面的应用都具有重要意义。
传统的分析方法大多采用水蒸气蒸馏法来萃取药物成分，然后在气相色谱或液相色谱上分析萃取物。采用的萃取装置是Franz Soxhlet在1879年发明的索氏提取装置，原理是利用溶剂在高温状态下对分析物的重复萃取。在水蒸气蒸馏中，萃取溶剂为蒸馏水。在萃取过程结束后，收集漂浮在蒸馏水表层的有机溶剂。这种方法的缺点是，耗时特别长，达到几个小时甚至是几天，而且需要的样品量和试剂量都比较大，萃取物有时必须经过除水或是浓缩。同时，长时间的加热，可能使某些物质发生化学反应，从而改变自身结构。
发明内容
本发明的目的是提供一种分析时间短、效率高、操作简单、准确性好的中药挥发油中化学成分的测定方法。
本发明的提出的一种中药挥发油中化学成分的测定方法，是取待测中药样品，加入微波吸收剂后，放置于微波辅助微萃取装置中在微波辅助下，进行挥发油萃取并浓缩，然后用气相色谱-质谱联用法定性测定挥发油中各组分，并测定相对含量。
本发明中，所述装置是微波腔中悬置一反应器，反应器开口处伸出微波腔顶层并连接一“Y”型管，该管一端连接冷凝管，另一端连接微量进样器。
本发明中，测定时微量进样器已吸取了0.5-3.0ml的高沸点溶剂，推动微量进样器活塞使高沸点溶剂在针头处形成液滴，在微波辅助下，萃取中药中挥发油成分。
本发明方法能简便快速的提取中药挥发油，并定性测定中药挥发油中化学成分，计算相对含量。具体测定步骤如下(1)取待测中药(0.5-5g)样品于反应器，加入相当样品重量1-2倍的微波吸收剂(蒸馏水)(2)在反应器瓶口的”Y”型支管上放置一个10μL规格的、事先吸取了0.5～3.0μL正十二烷溶剂的微量进样器。
(3)将反应器放置于微波辅助-单点微萃取装置中，推动微量进样器的活塞使高沸点溶剂在针头处形成一个液滴，在微波辅助下，萃取中药中的挥发油成分。
(4)萃取完成后，将液相微萃取头直接插在气相色谱仪进样口进行解吸附，用气相色谱-质谱法定性测定中药挥发油中各化学成分，并计算相对含量。
(5)用气相色谱-质谱联用法定性测定中药挥发油中各组分(6)测定各组分相对含量采用标准质谱库对各组分峰进行定性鉴定，气相色谱-质谱检测法测定挥发油中各化学成分的峰面积，按照各色谱峰面积占总峰面积比例计算各成分的相对含量。
上述测定中取待测中药样品量为0.5-5g，加入相当样品重量1-2倍的微波吸收剂。
上述提取并测定中药挥发油中化学成分的方法中，加入的微波吸收剂为蒸馏水。
上述提取并测定中药挥发油中化学成分的方法中，使用的微波功率为400-700W。
上述提取并测定中药挥发油中化学成分的方法中，使用的萃取时间为1-10分钟。
上述提取并测定中药挥发油中化学成分的方法中，使用的溶剂为高沸点的有机溶剂是正十二烷。
上述提取并测定中药挥发油中化学成分的方法中，采用气相色谱-质谱检测法测定中药挥发油中各化学成分的峰面积，用峰面积归一化法计算各成分相对浓度。
上述提取并测定中药挥发油中化学成分的方法中，所用的定性方法为使用Wiley 6.0质谱库对化合物进行定性。
本发明的微波辅助单点微萃取(MA-LPME)是微波解析技术和液相微萃取技术的结合，它融合了两者的优点，在中药分析研究方面具有很好的应用前景。首先，利用微波辐射的解析作用，使样品中的有机化合物挥发到反应器的顶部空间。因为微波的加热效率很高，这个过程一般只需要2～10分钟。装置的顶部是一个10μL规格的微量进样器，里面事先吸取了0.5～3.0μL的有机萃取溶剂，比如正十二烷。在萃取开始前，缓慢推动微量进样器的活塞，使萃取溶剂在进样针头处形成一个悬挂着的液滴，置于反应器瓶口进行萃取。这个便是单点液相微萃取的过程，它需要的萃取时间在10分钟以内，与微波辐射正好同步进行。
微波辐射主要通过分子偶极转动和离子电导吸收的方式加热，直接作用于分析物，所以加热效率非常高，萃取时间也大大缩短。同时，对于热稳定性差的化合物，微波也不会产生破坏作用，从而保证了实验结果的准确性。而液相微萃取技术，具有溶剂用量少，成本低，操作简单的特点，而且萃取物无需纯化可以直接进样。
本发明测定中药样品挥发油中化学成分的方法简便、准确、可靠，高效，快速，费用低，萃取时间短，样品用量少，萃取效率高，重现性好，RSD小于10％。本方法可用于中草药挥发油中化学成分的定性测定。
图1是本发明方法使用的微波辅助单点微萃取装置示意图。其中1是微波腔，2是反应器，3是“Y”型管，4是微量进样器，5是回流冷凝管。
图2是以正十二烷作萃取剂的微波辅助-单点微萃取提取茵陈挥发油的GC-MS图。
具体实施例方式
实例1色谱-质谱条件美国HP 6890-MS5973气相色谱质谱仪；HP-Chemstation System工作站；色谱柱HP-5MS(30m×0.25mm i.d.×0.25μm film)；进样方式不分流进样；柱温开始温度40℃(保持3min)升温速度8℃/min升到160℃(保持10min)，然后12℃/min升到300℃；进样口温度250℃，离子源温度230℃，电离方式为EI；载气氦气；流速1mL/min；离子化能量70eV；数据被获得通过全扫描，范围为40-350amu。化合物鉴定通过Wiley 6.0(Wiley，New York，USA)质谱库。典型图谱见图2。
样品预处理取干燥中药样品，均匀粉碎后，取粉末1g放置于50mL烧瓶中，加入2mL蒸馏水，将烧瓶放于微波辅助-单点微萃取装置中后，将微波功率设定为700W，使用10μL规格，含有1μL正十二烷的微量进样器进行萃取2分钟，萃取完成后，将正十二烷抽回微量进样器，将微量进样器直接插入气相色谱仪进样口进样，作GC-MS测定。
方法重现性试验相同条件下，取相同量的中药样品进行MA-LPME-GC-MS方法重现性考察，样品经MA-LPME-GC-MS提取和鉴定，重复3次实验，所有测定结果偏差都小于10％，该结果表明该方法具有良好的重现性。
权利要求
1.一种中药挥发油中化学成分的测定方法，其特征是取待测中药样品，加入微波吸收剂后，放置于微波辅助微萃取装置中在微波辅助下，进行挥发油萃取并浓缩，然后用气相色谱-质谱联用法定性测定挥发油中各组分，并测定相对含量。
2.如权利要求1所述的方法，其特征是所述装置是微波腔中悬置一反应器，反应器开口处伸出微波腔顶层并连接一“Y”型管，该管一端连接冷凝管，另一端连接微量进样器。
3.如权利要求2所述的方法，其特征是测定时微量进样器已吸取了0.5-3.0ml的高沸点溶剂，推动微量进样器活塞使高沸点溶剂在针头处形成液滴，在微波辅助下，萃取中药中挥发油成分。
4.如权利要求1所述的方法，其特征是取待测中药样品量为0.5-5g，加入相当样品重量1-2倍的微波吸收剂。
5.如权利要求1所述的方法，其特征是加入的微波吸收剂为蒸馏水。
6.如权利要求1所述的方法，其特征是微波功率是400-700W。
7.如权利要求1所述的方法，其特征是萃取时间是1-10分钟。
8.如权利要求1所述的方法，其特征是高沸点溶剂是正十二烷。
9.如权利要求1所述的方法，其特征是采用气相色谱-质谱检测法测定中药挥发油中各化学成分的峰面积，用峰面积归一化法计算各成分相对浓度。
10.如权利要求1所述的方法，其特征是通过Wiley6.0质谱库对挥发油中化合物进行定性检索。
全文摘要
本发明公开了一种提取并测定中药挥发油中化学成分的方法。本发明利微波辅助－单点微萃取装置，在对反应器中的少量中药样品进行微波加热的同时，用一根针头悬挂了0.5～3.0μL有机溶剂液滴的微量进样器，萃取挥发至反应器顶部空间的挥发油。萃取过程结束后，采用气相色谱－质谱联用法(GC－MS)定性鉴定中药挥发油中的化学成分，并计算各成分的相对含量。本萃取装置具有萃取时间短，萃取效率高，样品消耗量少，操作简单，重现性好等优点，十分适合用于中药挥发性化学成分的快速分析。
文档编号G01N30/06GK1865987SQ200610027429
公开日2006年11月22日 申请日期2006年6月8日 优先权日2006年6月8日
发明者邓春晖, 纪杰, 张祥民 申请人:复旦大学