一种蛋氨酸的用途的制作方法

专利名称：一种蛋氨酸的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药领域。具体地涉及蛋氨酸在制备治疗或预防内耳前庭毛细 胞的药物性损伤的组合物中的用途。
背景技术：
许多累及内耳的疾病往往在引起耳聋的同时还伴有前庭系统的损害。前庭 系统的损害往往会直接导致人丧失行动能力。前庭系统症状往往是病人到五官 科求诊的第一原因。因此前庭毛细胞损伤是种严重影响人类健康的疾病。
许多抗肿瘤化学制剂，以及各种神经毒素和噪声等对耳蜗和前庭都具有一 定的毒性损害作用。铂(Platinum)是一种常用、有效的临床化疗药剂中的有 效成份。铂被大量用于抗肿瘤铂制剂中。但是临床化疗上大量使用的卡铂
(Carb叩latin)和顺铂(Cisplatin)对内耳、肾脏、胃肠道、骨髓、性腺、 外周神经系统和免疫系统有严重的毒副作用，其毒性机理是Carb叩latin (卡 铂)和Cisplatin (顺铂)会直接杀死内耳毛细胞。
内耳毛细胞的损伤直接造成病人听力损失形成耳聋和耳鸣。前庭毛细胞损 伤可引起病人平衡失调，直接导致人眩晕并丧失行动能力。例如中毒性耳聋、 梅尼埃病、迟发性膜迷路积水、病毒性、化脓性迷路炎、特发性耳聋、噪声性 损伤等。梅尼埃病是一以膜迷路积水为主要病理特征的内耳病。临床表现为反 复发作性眩晕，感音神经性耳聋，耳鸣，可有耳内涨满感。膜迷路积水主要出 现于蜗管和球囊，当膜迷路水肿加重时，内淋巴压力明显升高，则引起前庭膜、 球囊膜或基底膜破裂，导致内外淋巴液混淆，致使原浸浴于外淋巴液中的听神 经纤维和毛细胞的外环境发生重要变化。造成内耳及前庭毛细胞损伤、死亡， 引起耳鸣、耳聋、眩晕等症状。
许多药物和化学试剂具有耳毒性，也可引起耳蜗和前庭中毒性损伤，造成 耳聋和(或)前庭功能障碍。
引起耳聋和前庭功能障碍的原因有很多，例如现代人普遍生活规律不正 常，多数人过度疲劳，导致耳的免疫功能降低；都市的"声污染"增加；精神
3压力过重，心理因素刺激，尤其是医疗治疗上不规范使用抗生素及化疗药物， 都是引起耳聋和前庭功能障碍的重要的因素。
内耳前庭感觉终器是机体负责平衡的重要感觉器官。内耳毛细胞死亡之后 不可再生。
因此本领域迫切需要提供一种保护内耳前庭感觉终器中的毛细胞的方法。

发明内容
本发明旨在提供蛋氨酸在治疗或预防内耳前庭毛细胞疾病中的用途。 本发明的另一个目的是提供一种保护内耳前庭毛细胞的方法。
在本发明的第一方面，提供了一种蛋氨酸在制备治疗或预防内耳前庭毛细胞
疾病的组合物中的用途。
在另一优选例中，所述的内耳前庭毛细胞疾病选自梅尼埃病(Meniere
disease)，中毒性耳聋，噪声性损伤，或特发性耳聋。
在另一优选例中，所述的内耳前庭毛细胞疾病由化疗药物引起。 在另一优选例中，所述的化疗药物是含铂制剂；优选卡铂、顺铂或其混合。 在另一优选例中，所述的组合物是药物组合物，保健品组合物或食品组合物。
在另一优选例中，所述的药物组合物中含有
(a) 50 — 200重量份蛋氨酸和/或其多肽；
(b) 400 — 2000重量份药学上可接受的载体；
且(a) + (b)的重量是药物组合物总重量的50 — 99% 。 在另一优选例中，所述的药物组合物中含有-
(a) 75—150重量份蛋氨酸和/或其多肽；
(b) 600—1500重量份药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的药物组合物中还含有辅助性活性成分，所述的辅
助性活性成分选自维生素类物质；优选B族维生素。
在另一优选例中，所述的药物组合物是固体制剂或液体制剂。 在另一优选例中，所述的固态制剂包括片剂、丸剂、胶囊、散剂、颗粒剂；
所述的液体制剂包括乳浊剂、溶液剂、悬浮剂、糖浆剂、滴剂。在本发明的第二方面，提供了一种保护内耳前庭毛细胞的方法，就是施用 含有蛋氨酸的组合物。所述的组合物可以是药物组合物，保健品组合物，或食 品组合物。
据此，本发明提供了一种保护内耳前庭感觉终器中的毛细胞的方法。


图1显示了前庭诱发眼震持续时间监测结果。 图2显示了耳聋病毛细胞损害特征；
其中A显示正常对照组，B显示注射卡铂48小时后，毛细胞质膜下的碱性
磷酸酶活性增强的情况。
图3显示了使用蛋氨酸后内耳前庭毛细胞损伤改善的情况；
其中A显示了顺铂和蛋氨酸联合培养前庭的情况，B显示了顺铂单独培养
前庭的情况。
具体实施例方式
发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现蛋氨酸对内耳前庭毛细胞具有 保护作用，因此，可将它用于治疗或预防内耳前庭毛细胞的损伤，尤其可用于 恢复耳毒性耳聋患者的听力。
定义
如本文所用，"蛋氨酸(Methionine)"是一种人体必需的氨基酸，其结
构式为 N& 。
如本文所用，"蛋氨酸多肽"是指含有2 — 30个蛋氨酸残基的肽链，其中 蛋氨酸残基的重量占整条肽链重量的30—100%，较佳地是70—100%，更佳 地是90—100%。
如本文所用，"内耳前庭毛细胞疾病"和"内耳前庭毛细胞损伤"可互换 使用，都是指内耳前庭毛细胞受到损害，甚至是死亡。这可以是各种因素所造 成的，只要是使内耳前庭毛细胞受到了伤害。所述的疾病或损伤包括梅尼埃病(Meniere disease)，中毒性耳聋，噪声性损伤和/或特发性耳聋，尤其是由 药物引起的内耳前庭毛细胞损伤，特别是用于化疗的铂制剂，如卡铂、顺铂等。
用途
本发明将含有蛋氨酸的组合物用于治疗或预防内耳前庭毛细胞损伤。所述 的组合物可以是药物组合物、保健品组合物或食品组合物。
所述组合物中的活性成分含有蛋氨酸，蛋氨酸多肽，还可以含有其它具有 保护耳功能的辅助活性成分，例如但不限于维生素类物质。也可以将治疗有效 量的蛋氨酸同具有耳毒性的药物(例如但不限于顺铂(Cisplatin)、卡铂 (Carboplatin )、 螺铀(Spiroplatin )、 洛铀(Lobaplatin )、 司钼 (Sebriplatin)、右奥马钿(Dexormaplatin)、恩洛钼(Enl叩latin)、异 丙铀(Iproplatin)、奥马铅(0濯platin)、奥沙利钼(Oxaliplatin)、 奈达铂(Nedaplatin)、折尼铂(Zeniplatin))联合使用，以减少这些药物 的副作用。
所述的组合物中还可以含有药学上或食品学上可接受的载体赋形剂或稀 释剂。这类载体包括(但并不限于)盐水、缓冲液、水、甘油、乙醇、及其组合。
本发明的经口给药的固体组合物可采用片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒 剂、滴剂等形式。这些固体组合物中混合了一种或一种以上的活性物质和至少 一种惰性稀释剂，例如，乳糖、甘露醇糖、葡萄糖、羟丙基纤维素、微晶纤维 素、淀粉、聚乙烯吡咯皖酮、琼脂、果胶、硅铝酸镁、铝酸镁。还可按照常用 方法使组合物中含有除了惰性剂之外的添加剂，例如，乳糖稳定剂、谷氨酸或 天冬酸等助溶剂。如是片剂或丸剂，还可根据需要，在其外部包裹上蔗糖、明 胶、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素或胃溶性、肠溶性薄膜。
经口给药的液体组合物包括药剂上允许的乳浊剂、溶液剂、悬浮剂、糖浆 剂等，通常使用的惰性稀释剂包括精制水、乙醇。该组合物中除了惰性稀释剂 之外，还包括湿润剂、悬浮剂、等助剂，甜味剂、矫味剂、芳香剂和防腐剂。
非经口给药的注射剂包括无菌水性或非水性溶液剂、悬浮剂和乳浊剂。水 性溶液剂和悬浮剂中包含注射用蒸馏水及生理盐水。非水性溶液剂和悬浮剂中 包含丙二醇、聚乙二醇、可可脂、橄榄油、蓖麻油、等植物油。这些组合物中 还可包含等渗剂、防腐剂、湿润剂、乳化剂、分散剂、稳定剂、助溶剂。在本发明中，对蛋氨酸的剂量没有特殊的限制，可用任何合适的剂量。载 体的类型以及数量也可以很不相同，这取决于温血动物或人的种类、体重、和 待治疗的毛细胞损害程度等。 一般，合适的含量是蛋氨酸占药物组合物总重量 的0.01%-99%，较佳地O. 1%-99%。作为药物治疗或作为保健品、食品保养时， 蛋氨酸的有效剂量范围通常为0. 01-800毫克/千克/天或更高，较佳的为 0. 1-500毫克/千克/天，更佳的为0. 5-200毫克/千克/天。
剂量单元包括一种蛋氨酸化合物，或者该蛋氨酸化合物与其他耳聋、耳鸣 治疗剂所形成的混合物。剂量单元还可含有稀释剂、填充剂、载体等。剂量单 元是固体或凝胶形式，如丸剂、片剂、胶囊等，或者是液体形式，它们适合口 服给药、局部给药或肠胃给药、或者静脉内给药。
本发明提供的用于改善耳聋、耳鸣患者的保健品，其中含有l 0 0mg蛋氨 酸化合物/克保健品。
配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括肌内、腹膜 内、静脉内、皮下、皮内、口服、或局部给药。此外，蛋氨酸还可以与其他治 疗耳聋的治疗齐'J (Brain-derived neurotrophic factor) —起使用。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所 揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何 可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特 征仅为均等或相似特征的一般性例子。
本发明的主要优点在于
1、 蛋氨酸可有效改善耳聋病人耳蜗及前庭毛细胞损害，从而纠正听力下 降、耳鸣、眩晕症状。
2、 蛋氨酸是一种条件氨基酸，故使用时安全性好。
3、 蛋氨酸可与其它治疗耳聋的药物合并使用，并可经常规途径给药，使 用方便。4、 蛋氨酸是一种被广泛接受的营养素，并具有一定发药理作用，因此使 用于药品和保健品的商品化。
5、 现阶段，我国因使用顺铂或卡铂而耳聋的病患约1770万(1987年全国 残疾人抽样调査)，因此蛋氨酸具有广泛的市场前景。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说 明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方 法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所 有的百分比和份数按重量计。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟 悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于 本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1
耳聋病毛细胞损害特征-毛细胞内的酶细胞化学反应
方法
5只成年灰鼠(体重在534-689g)按照每公斤体重100mg的剂量腹腔注射 卡铂，用药后48h处死。另外3只成年灰鼠作为正常对照。
麻醉动物被断头后，迅速取出听泡。用固定液在4'C冰箱内固定1小时。 在PBS溶液中分离取出基底膜。将基底膜切成几个片段以分别用于不同的酶细 胞化学孵育反应。
结果
如图2所示。
结果表明，转离子激活的ATP酶在正常灰鼠的内外毛细胞中很少，而在卡 铂耳中毒灰鼠的内外毛细胞中明显增多。
实施例2
前庭诱发眼震持续时间监测 方法
24只体重在475-641克的成年灰鼠平均分为三组，每组8只。第一组为正 常对照组；第二组为早期病变组；第三组为晚期病变组。
8病变组在腹腔注射蛋氨酸(50mg/kg)后皮下注射卡铂(100mg/kg)，或 在皮下同时注射蛋氨酸(50mg/kg)和卡铂(100mg/kg)。
注射卡铂后24小时和72小时各处死4只，此组为早期病变组；注射卡铂后 30天处死8只为晚期病变组。
在使用蛋氨酸前和处死前均检测诱发眼震，前庭终器行铺片检査。
结果
如图1所示。
正常对照组及使用蛋氨酸前(图中的"之前"点)，灰鼠诱发眼震持续时 间为61. 0±7. 26秒，使用蛋氨酸30天后为13. 5±5. 61秒。晚期病变组测量值与正 常对照组及早期病变组(l天和3天)比较，均有显著差异(P值均小于0.05)。
结果表明，蛋氨酸对于前庭功能损伤具有预防和治疗作用。
实施例3
使用蛋氨酸后改善的症状
利用cisplatin和cisplatin+蛋氨酸对产后三天小鼠的耳蜗及前庭48小 时培养的比较。 方法
无菌条件下从产后三天的小鼠内耳中解剖出耳蜗和前庭，将解剖出的耳蜗 及前庭用含有2mM Cisplatin的培养液培养，48小时后将其染色并铺片观察。
无菌条件下从产后三天的小鼠内耳中解剖出耳蜗和前庭，将解剖出的耳蜗 及前庭用含有2mM Cisplatin和蛋氨酸的培养液培养，48小时后将其染色并铺 片观察。
结果
如图3所示。
结果表明，单独使用Cisplatin和联合使用Cisplatin和蛋氨酸对小鼠耳 蜗无影响；
单独使用Cisplatin后，前庭系统的毛细胞尤其是球囊的毛细胞全部被损 伤破坏，而使用Cisplatin +蛋氨酸后，前庭系统的毛细胞尤其是球囊的毛细胞 部分被损伤破坏，表明使用蛋氨酸能保护毛细胞。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任 何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相 同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。
权利要求
1. 蛋氨酸在制备治疗或预防内耳前庭毛细胞疾病的组合物中的用途。
2. 如权利要求l所述的用途，其特征在于，所述的内耳前庭毛细胞疾病选 自梅尼埃病，中毒性耳聋，噪声性损伤，或特发性耳聋。
3. 如权利要求l所述的用途，其特征在于，所述的内耳前庭毛细胞疾病由 化疗药物引起。
4. 如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的化疗药物是含铂制剂； 优选卡铂、顺铂或其混合。
5. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物是药物组合物， 保健品组合物或食品组合物。
6. 如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物中含有(a) 50 — 200重量份蛋氨酸和/或其多肽；(b) 400 — 2000重量份药学上可接受的载体；且(a) + (b)的重量是药物组合物总重量的50 — 99% 。
7. 如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物中含有(a) 75 — 150重量份蛋氨酸和/或其多肽；(b) 600—1500重量份药学上可接受的载体。
8. 如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物中还含有辅 助性活性成分，所述的辅助性活性成分选自维生素类物质；优选B族维生素。
9. 如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物是固体制剂 或液体制剂。
10. 如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述的固态制剂包括片剂、 丸剂、胶囊、散剂、颗粒剂；所述的液体制剂包括乳浊剂、溶液剂、悬浮剂、 糖浆剂、滴剂。
全文摘要
本发明公开了蛋氨酸在制备治疗或预防内耳前庭毛细胞疾病的组合物中的用途。本发明还公开了将蛋氨酸作为内耳前庭毛细胞疾病治疗剂或预防剂的使用方法。
文档编号A61K31/185GK101480385SQ200810032590
公开日2009年7月15日 申请日期2008年1月11日 优先权日2008年1月11日
发明者史春梦, 雁 曲 申请人:曲 雁;史春梦