消除运动性疲劳的营养素组合物的制作方法

专利名称：：消除运动性疲劳的营养素组合物的制作方法
技术领域：
：本发明属于药物学领域，更具体的，本发明涉及一种营养素组合物及其在消除运动性疲劳中的应用。
背景技术：
：随着现代竞技体育竞争越来越激烈，运动员在训练中需要承受更大的负荷，出现运动性疲劳的几率也越来越大。适度的运动和合理的恢复手段可以促进运动员机能水平的提高，相反可能导致运动员过度疲劳，致运动员运动能力下降，并可造成机体运动系统、心血管系统、神经系统、呼吸系统、内分泌系统等器官、组织的损伤。因此，解决超负荷训练的运动性过度疲劳是当前竞技运动训练中所面临的主要问题之一。合理、高效的运动营养补剂可以加快运动员训练、比赛后的体能恢复，从而提高训练的效率，有效促进体能、机能的提高。因此，近年来国内外对高效运动营养补剂的应用研究逐渐重视。但目前国内所使用的运动营养补剂其效果并不理想。究其原因，一是国内运动营养补剂的研发环节薄弱，而从国外引进的商业化、大众化的产品并不能针对中国运动员；其二未能从运动性过度疲劳的发生和修复的机制上进行针对性的产品研发，以至于运动生理、生化的最新科研成果未能很好地转化到运动营养领域。因此，如何应用现代科技研究手段，研制新一代有针对性的高效运动营养品，使运动员向"更高，更快，更强"水平冲击，迫在眉睫。
发明内容本发明的目的在于提供一种抗疲劳的混合物，其含有R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸。本发明的另一目的在于提供含有所述混合物的组合物。在本发明的第一方面，提供一种混合物的用途，所述的混合物含有R-硫辛酸(LA)、乙酰肉碱(ALCAR)、生物素(Biotin)、尼克酰胺(Nictinamide)、核黄素(VB2)、吡哆醛(VB6)、肌酸(Creatine)、辅酶Q10(CoQ10)、白藜芦醇(Resveratrol)和牛磺酸(Taurine);所述的混合物用于制备抗疲劳的组合物。在另一优选例中，所述的混合物基本上由R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸组成。在另一优选例中，所述的混合物由R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸组成。在另一优选例中，所述的组合物用于提高哺乳动物运动能力；降低哺乳动物血清尿素氮和肌酐含量；降低外周血淋巴细胞的凋亡；降低外周血淋巴细胞活性氧的产生；促进脾淋巴细胞增殖；增加血清总抗氧化力和GST酶活力；增加骨骼肌肌糖原的含量；增加骨骼肌肌原纤维中线粒体数目；增加线粒体复合物I，II或III蛋白的表达；促进线粒体DNA的合成；上调调控线粒体生成的转录因子PPARGC1A，Nrfl或Tfam的表达；或促进骨骼肌的线粒体融合。在另一优选例中，所述的混合物含有在另一优选例中，所述的混合物中，R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸之间的重量比例R-硫辛酸乙酰肉碱生物素尼克酰胺核黄素吡口多醛肌酸1-50重量份;2-100重量份;0.002-0.1重量份;辅酶QIO白藜芦醇牛磺酸0.3-15重量份；0.12-6重量份；0.12-6重量份；1-30重量份;0.1-5重量份;0.1-5重量份;2-50重量份。是:(5-15):(15-25):(0.015-0.025):(2-4):(1-1.5):(1-1.5):(5-15):(0.8-1.2):(0.8-1.2):(15-25)。在本发明的第二方面，提供一种组合物，所述组合物用于抗疲劳，并且所述的组合物含有(a)R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸；和(b)药学或食品学上可接受的载体。在另一优选例中，所述的组合物含有R-硫辛酸1-50重量份；乙酰肉碱2-100重量份；生物素0.002-0.1重量份；尼克酰胺0.3-15重量份；核黄素0.12-6重量份；吡眵醛0.12-6重量份；肌酸1-30重量份；辅酶QIO0.1-5重量份；白藜芦醇0.1-5重量份；牛磺酸2-50重量份；药学或食品学上可接受的载体10-1000重量份。在另一优选例中，所述的组合物含有R-硫辛酸1-25重量份；乙酰肉碱2-50重量份；生物素0.002-0.05重量份;尼克酰胺0.3-7.5重量份；核黄素0.12-3重量份-，吡眵醛0.12-3重量份；肌酸1-15重量份；辅酶QIO0.1-2.5重量份；白藜芦醇0.1-2.5重量份；牛磺酸2-25重量份。药学或食品学上可接受的载体10-1000重量份。在另一优选例中，组合物中，R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸之和占组合物总重量的75-100%;较佳的10-60%。在另一优选例中，组合物中，R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸之间的重量比例是(5-15):(15-25):(0.015-0.025):(2-4):(1-1.5):(1-1.5):(5-15):(0.8-1.2):(0.8-1.2):(15-25)。在本发明的第三方面，提供一种抗疲劳的方法，所述方法包括给予需要的受试者有效量的R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸。本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。图IA.各试验组大鼠体重质量数的测定结果。图IB.大鼠运动跑台跑距离的测定；从跑台运动后第5周开始，每天记录动物完成的跑距(米)；其中，*p<0.05，与安静对照组相比有显著性差异。图IC.血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的测定结果。图ID.血清尿素氮，肌酐含量的测定结果；其中，*p<0.05，**p<0.01与安静对照组相比较有显著性差异；#p<0.05，##p<0.01与力竭组相比较有显著性差异。图2A.跑台运动8周后红细胞数的测定结果。图2B.跑台运动8周后后血红蛋白的测定结果。图2C.跑台运动8周后红血胞压积的测定结果。其中，**p<0.01与安静对照组相比较有显著性差异；##p<0.01与力竭组相比较有显著性差异。图3A.跑台运动8周后，细胞亚二倍体的定量分析。其中，*<0.05与安静对照组相比较有显著性差异；#p<0.05与力竭组相比较有显著性差异。图3B.跑台运动8周后，外周血淋巴细胞活性氧的测定和脾脏淋巴细胞增殖的测定。细胞DCF染色后流式细胞仪分析的荧光定量。图3C.淋巴细胞增殖率测定结果。其中，*p<0.05与安静对照组相比较有显著性差异；#p<0.05与力竭组相比较有显著性差异。图4.跑台运动8周后外周血抗氧化能力的测定结果。A.丙二醛的含量；B.总抗氧化能力；C.GSH的含量；D.血清GST酶活力；其中，*<0.05与安静对照组相比较有显著性差异；#p<0.05与力竭组相比较有显著性差异。图5.骨骼肌系统。A.腓肠肌和股四头肌指数；B.比目鱼肌的指数；C.骨骼肌肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶的活性；D.骨骼肌ATP和糖原的含量；其中，*p<0.05，*p<0.01与安静对照组相比较有显著性差异；#p<0.05，##p<0.01与力竭组相比较有显著性差异。E.骨骼肌透射电镜图(X1,0000);F.线粒体面密度的定量分析；其中，0.05与安静对照组相比较有显著性差异；#p<0.05与力竭组相比较有显著性差异；G.蛋白印迹分析线粒体复合物蛋白的表达，#p<0.05，弁弁pO.01与力竭组相比较有显著性差异；H.PCR分析线粒体DNA的含量；I.定量PCR分析调控线粒体生成的转录因子Nrfl和Tfam的表达；其中，p<0.05，##p<0.01与力竭组相比较有显著性差异。J.疫蛋白印迹分析骨骼肌PPARGCIA和ERRa的表达，#p<0.05与力竭组相比较有显著性差异；K.投射电镜示骨骼肌线粒体融合，见箭头指示(X2，0000倍)；L.蛋白印迹分析骨骼肌MFN1和MFN2的表达，*p<0.05与安静组相比有显著性差异；#p<0,05，##p<0.01与力竭组相比较有显著性差异。具体实施方式本发明人经过大量的摸索总结以及深入的研究，首次找到了一种对于抗疲劳具有优异效果的混合物，所述混合物的活性成分为R-硫辛酸、乙酰肉碱、生9物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜卢醇和牛磺酸。本发明的混合物可有效地协调机体，使机体达到最佳状态，抑制机体疲劳，特别适合于易疲劳的人群或运动量大的人群使用。如本文所用，所述的"含有"，"具有"或"包括"包括了"包含"、"主要由构成"、"基本上由构成"、和"由构成"；"主要由构成"、"基本上由构成"和"由构成"属于"含有"、"具有"或"包括"的下位概念。如本文所用，术语"基本上由构成"指在混合物或组合物中，除了含有必要成分或必要组份之外，还可含有少量的且不影响有效成分的次要成分和/或杂质。例如，可以含有甜味剂以改善口味、抗氧化剂以防止氧化，以及其他本领域常用的添加剂。如本文所用，术语"有效量"是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。如本文所用，术语"药学上可接受的"或"食品学上可接受的"或"保健品学上可接受的"的成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即有合理的效益/风险比的物质。如本文所用，术语"药学上可接受的载体"指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPub.Co.，N丄1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、润湿剂或乳化剂、矫味剂、pH缓冲物质等。本发明的混合物或组合物中，各组分也可以以"生理学可接受的盐"或"生理学可接受的酸或碱衍生的盐"形式使用。所述的盐包括(但不限于)与如下无机酸形成的盐如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、以及与有机酸形成的盐，而有机酸则指乙酸、草酸、丁二酸、酒石酸、甲磺酸和马来酸。其他盐包括与碱金属或碱土金属(如钠、钾、钙或镁)形成的盐，以酯、氨基甲酸酯或其他常规的"前体药物"的形式(当以这种形式给药时，在体内可转化成活性部分)。如本文所用，术语"单元剂型"是指为了服用方便，将本发明的混合物或组合物制备成单次服用所需的剂型，包括但不限于各种固体剂(如片剂)、液体剂、胶囊剂、缓释剂。如本文所用，"重量份"或"重量份数"可互换使用，所述的重量份可以是任何一个固定的以毫克、克数或千克数表示重量(如lmg、lg、2g、5g、或lkg等)。例如，一个由1重量份组分a和9重量份组分b构成的组合物，可以是l克组分a+9克组分b，也可以是10克组分a+90克组分b等构成的组合物。在所述组合物，某一组分的百分比含量=(该组分的重量份数/所有组分的重量份数之和)><100%。因此，由1重量份组分a和9重量份组分b构成的组合物中，组分a的含量为10°/。，组分b为90%。术语"本发明的组合物"包括但不限于药物组合物、食物组合物或保健品组合物，只要它们含有R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸，或它们的生理学上可接受的盐；或基本上由R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸，或它们的生理学上可接受的盐组成。所述组合物中还可包含其它药学上、食品学上或保健品学上可接受的载体，优选的，在组合物中，所述R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸或它们的生理学上可接受的盐占组合物总重量的5100%，较佳地占1060%。作为本发明的优选方式，用于配制本发明的组合物的各组分的用量如表1所示。表1组分有效量较佳量R-硫辛酸1-50重量份1-25重量份乙酰肉碱2-100重量份2-50重量份生物素0.002-0.1重量份0.002-0.05重量份尼克酰胺0.3-15重量份0.3-7.5重量份核黄素0.12-6重量份0.12-3重量份11辅酶QIO0.1-5重量份0.1-2.5重量份白藜芦醇0.1-5重量份0.1-2.5重量份牛磺酸2-50重量份2-25重量份各个组分的一些性能以及已知的主要功效如下(A)R-硫辛酸己报道硫辛酸能保护肝脏及心脏的损害、抑制体内癌细胞的发生，并缓和体内因炎症所引起的过敏、关节炎及气喘等。R-硫辛酸是代谢过程中的一种辅酶，能治疗老年性痴呆，糖尿病神经病变及其他一些疾病，并且R-硫辛酸还作为一种金属螯合剂作用于溶酶体，抑制羟自由基的产生和脂褐质的积累，维持溶酶体的自体吞噬功能，保证线粒体的正常修复，使细胞免受溶酶体膜破裂导致的自溶死亡。(B)乙酰肉碱乙酰肉碱参与线粒体的脂肪酸转运和P-氧化，还能提供线粒体膜组成成份心肌磷脂。其可降低乙酰辅酶A/辅酶A的比值，促进丙酮酸脱氢酶的活性，促进葡萄糖的氧化利用。(C)生物素生物素是人体内多种酶的辅酶，参与体内的脂肪酸和碳水化合物的代谢；促进蛋白质的合成；还参与维生素B12、叶酸、泛酸的代谢；促进尿素合成与排泄。(D)尼克酸或尼克酰胺参与碳水化合物的代谢；参与脂肪的代谢，甘油的合成和分解、脂肪酸的氧化与合成，能降低胆固醇的水平，是一种内源性抗氧化剂。(E)核黄素核黄素参与碳水化合物、蛋白质、核酸和脂肪的代谢可提高肌体对蛋白质的利用率，促进生长发育。是线粒体复合酶I和II的辅酶FMN和FAD的前体。(F)吡哆醛作为许多酶的辅酶，已知其除参与神经递质、糖原、神经鞘磷脂、血红素、类固醇和核酸的代谢外，还参与所有氨基酸代谢。(G)肌酸已知肌酸作为外源性磷酸肌酸具有供给心肌及骨骼肌肉细胞代谢所需的能量和促进膜稳定作用及改善组织微循环等功效。(H)辅酶Q10:辅酶Q10对肝细胞修复、增加肝糖原的合成及增强肝脏对毒物的解毒能力均有一定作用。(I)白藜芦醇已知其能抑制血小板的凝聚，扩张动脉血管，改善微循环，防治冠心病、动脉粥样硬化、高血脂症等。(J)牛磺酸牛磺酸能起到保持心肌功能，改善肝功能、调节血压和降低胆固醇等功效。而本发明人认为，各组分可能通过不同途径、协同的作用，从而可非常有效地发挥抗疲劳的作用。对于本发明所述的组合物的剂型没有特别的限制，可以是任何适用于哺乳动物服用的剂型；优选的，所述的剂型可选自胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、,口服液、软胶囊、混悬液、或乳剂。从易于制备、给药或服用的立场看，优选的组合物是固态组合物，尤其是片剂、颗粒剂和固体填充或液体填充的胶囊。口服给药是优选的。优选的，本发明所述的组合物可以制成缓释的剂型。优选的，本发明所述的组合物可以制成单元剂型，便于携带和服用。本发明的组合物中可以加入制备不同剂型时所需要的各种常规载体或辅料，如填充剂(如淀粉)、矫味剂(如甜菊素)、抗氧化剂、或包衣材料等。可采用常规的方法制备成任何一种常用的剂型，如片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂。本发明的含有R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸的混合物或组合物可直接用于缓解体力疲劳，或可与其它药物或膳食添加剂共同使用。在本发明的实施例中，本发明人通过充分的动物试验，论证了本发明的混合物或组合物可有效地缓解体力疲劳，特别是运动后的疲劳。一系列的论证发现，本发明的混合物或组合物可以提高哺乳动物运动能力；降低哺乳动物血清尿素氮和肌酐含量；降低外周血淋巴细胞的凋亡；降低外周血淋巴细胞活性氧的产生；促进脾淋巴细胞增殖；增加血清总抗氧化力和GST酶活力；增加骨骼肌肌糖原的含量；增加骨骼肌肌原纤维中线粒体数目；增加线粒体复合物I，II或III蛋白的表达；促进线粒体DNA的合成；上调调控线粒体生成的转录因子PPARGC1A，Nrfl或Tfam的表达；或促进骨骼肌的线粒体融合；这些方面的有效改善对于抗疲劳产生了良好的作用。本发明的混合物或组合物的用量可随给予的模式、剂型和受试者的疲劳严重程度而变化。然而，通常当本发明的组合物每天以约0.010.75g/kg动物体重的剂量给予时，能得到令人满意的效果，较佳地每天以14次分开的剂量给予，或以缓释形式给药。对大部分大型哺乳动物而言，每天的总剂量约为0.0550g，较佳地约为0.220g。可调节此剂量方案以提供最佳治疗效果。例如，由治疗状况的需要，可每天分开给予若干次的单一剂量，或将剂量按比例地减少。当然，具体剂量还应考虑施用方式、施用对象的身体状况等因素，这些都是本领域技能范围之内的。本发明的主要优点在于(1)首次发现，含有R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸的混合物或组合物可非常有效地协调机体，使机体达到最佳状态，抑制机体疲劳，特别适合于易疲劳的人群或运动量大的人群使用。(2)本发明的混合物或组合物中含有纯天然成分，更安全，副作用小。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室指南(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。I.材料和方法A.材料抗PPARGC1A，MINI,MfN2和ERRa抗体购于美国SantaCruz公司；抗tubulin抗体和ATP酶测试盒购于美国Sigma公司；TRIzol购于美国Invitrogen公司；抗Complexl，II，III的抗体购自美国Invitrogen公司；逆转录酶试剂盒购于美国Promega公司；热启动Taq酶购于日本TaKaRa公司；D-loop，Nrfl，Tfam和18SrRNA引物由上海博亚公司合成；实时定量PCR测定试剂盒购自日本东洋坊生物公司；BCA蛋白测定试盒和WestPicochemiluminescent发光底物来自美国PIERCE公司；淋巴细胞分离液购于上海康成生物公司；R-硫辛酸由德国K.Wessel博士赠送(或可购自上海新嵩巍有限公司)，乙酰肉碱购自于美国sigma公司。肌酸，辅酶Q，核黄素，尼克酰胺，牛磺酸，吡哆醛和生物素购自于上海伯奥生物科技有限公司；白藜芦醇购自于上海倍翔生物科技有限公司。肌糖原测试盒，总抗氧化力测试盒，丙二醛测试盒，还原性谷胱甘肽测试盒和谷胱甘肽硫转移酶测试盒均购自于南京建成生物工程研究所。营养素组合物的配制本发明人还配制了组合物，精密称量如下重量的各组分:<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>胶囊剂制备将按照上表组合物1的配方称取组分，充分混合，置于常规的胶囊中，充于常规的胶囊中，每粒约0.25g。将按照上表组合物4的配方称取组分，充分混合，置于常规的胶囊中，充于常规的胶囊中，每粒约0.25g。功能型饮料制备将按照上表组合物2的配方称取组分，充分混合，与低聚糖2000g，柠檬酸2000g，柠檬香精400g,氯化钠250g，氯化钾45g，磷酸二氢钠45g，碳酸氢钠45g，配于200L水中制成饮料。饲料配方基础饲料由斯莱克实验动物中心提供，总热量为15.36KJ/g，其中蛋白质21%、碳水化合物55%、脂肪6%。添加营养素种类R-硫辛酸，乙酰肉碱，肌酸，辅酶Q，白藜芦醇，核黄素，尼克酰胺，吡哆醛，生物素和牛磺酸。采用上述制备的胶囊剂的内容物给予动物，其中组合物1用于组1，组合物4用于组2。在给予时，将营养素按照设定的剂量添加于动物基础饲料中，制成含有营养素的饲料。也可将营养素配制成溶液，对动物进行胃词。添加药物营养素干预组组1(低剂量)组2(高剂量)R-硫辛酸(LA)50mg/kg/d250mg/kg/d乙酰肉碱(ALCAR)100mg/kg/d500mg/kg/d生物素(Biotin)0.1mg/kg/d0.5mg/kg/d尼克酰胺(Nictinamide)15mg/kg/d75mg/kg/d核黄素(VB2)6mg/kg/d30mg/kg/d吡卩多醛(VB6)6mg/kg/d30mg/kg/d肌酸(Creatine)50mg/kg/d150mg/kg/d辅酶Q10(CoQ)5mg/kg/d25mg/kg/d白藜芦醇(Resveratrol)5mg/kg/d25mg/kg/d牛磺酸(Taurine)幽mg/kg/d250mg/kg/d咖啡因组咖啡因20mg/kg/dB.方法实验分组1)安静组正常对照组SD大鼠；2)训练组慢性力竭组(模型对照组)；3)训练组营养素干预组(低剂量组)；4)训练组营养素干预组(高剂量组)；5)训练组咖啡因千预组；其中，第1组动物为雄性12只，2-5组初始为雄性20只，后经适应性训练后，筛选每组12只进行后续实验。16训练安排安静对照组大鼠笼内常规饲养，不进行运动训练。慢性力竭组大鼠在DSPT-202型电动跑台上进行训练。运动方式参照Bedford(1979)根据大鼠体重/摄氧量回归方程所建立的递增负荷运动模型，按以下程序进行，包括一般训练和力竭性训练各4周，动物跑台坡度为10度，每周训练6天，周日休息。第l周每天完成10米/分钟，IO分钟的跑台运动；第2周每天完成10米/分钟，IO分钟跑后，继而加速至15米/分钟10分钟；第3周每天进行10米/分钟、15米/分钟、20米/分钟各IO分钟的持续跑台跑；第4周每天分别进行10米/分钟、15米/分钟、20米/分钟、25米/分钟各IO分钟持续运动。力竭性训练从第5周起进行4周递增负荷跑台跑，每天以15米/分钟、20米/分钟、25米/分钟各10分钟运动后，加速至30米/分钟、35米/分钟各20分钟运动，并不断递增跑速，直至大鼠力竭。力竭判断标准按键连续给予大鼠施加声、光、机械刺激后，大鼠不能继续跑动，下跑台后伏地喘息，暂时无逃避反应。实验用电动动物跑台(PT98型)2部，由杭州立泰科技有限公司提供，该跑台可自动记录大鼠训练时间，运动距离和跑动速度。动物实验(1)动物饲养实验动物由中国科学院上海实验动物中心提供，SPF级，合格证号scxk(沪)20030003。大鼠自由摄入食水，控制昼夜节律为12h:12h，室温为23士rC。3周断乳后开始给予本发明的组合物或对照药，约4周后开始跑台运动。(2)给药方式胃饲。(3)处理时间给药时间12周，给药次数是每天l次。(4)动物处理从跑台运动后第5周开始，每天记录动物完成的跑距(米)，每周一称量所有参试动物的体重。第5、7、9周每周一分别予所有参试动物断尾取血一次测定血红蛋白含量(每次断尾约0.2cm，并予断端碘酊消毒及止血)。测定指标营养素组合物干预后，1.对力竭运动大鼠物质能量代谢与代谢能力指标的测定；2.对力竭运动大鼠氧转运系统的指标测定；3.对力竭运动大鼠机体免疫系统的指标测定；4.对力竭运动大鼠机体抗氧化损伤能力的指标测定；5.对力竭运动大鼠骨骼肌系统的各项指标测定。在跑台运动8周后，大鼠力竭运动后即刻腹腔注射质量分数为10%水合氯醛-生理盐水麻醉，心包穿刺直视下采取血液约8ml,—部分静置待凝后，以3000r/min离心10min分离血清，置4°C冰箱备用；另取4ml血液以淋巴细胞分离液从新鲜血中分离淋巴细胞，经PBS洗涤后，用RPMI1640培养液将细胞调至1.5X1()6个/ml。丙二醛的检测血浆脂质过氧化水平测定血浆中TBARS的含量。取新鲜分离的血浆8(HU，操作严格按照试剂盒说明书(购自南京建成生物公司)，测定A532nm处的吸光值。血浆总抗氧化能力的检测机体防御体系的抗氧化能力的强弱与疾病的程度存在着密切联系，测定原理为机体有许多抗氧化物质，能使Fe3+还原为Fe2+，后者可与菲啉类物质形成稳固的络合物，通过比色可测出其抗氧化能力。取新鲜分离的血浆40ul，操作严格按照试剂盒(购自南京建成生物公司)说明书，测定A520nm处的吸光值。血浆还原型谷胱甘肽含量的测定取新鲜分离的血桨40ul，按照试剂盒说明书进行GSH含量测定，该试剂盒的原理为二硫代二硝基苯甲酸和巯基化合物反应产生一种黄色化合物，从而进行比色测定。血浆谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性的检测测定方法为取新鲜分离的血浆40|il，在lmMGSH，lmMCDNB，3mg/mlBSA中的反应体系中，测定A340nm处的吸光值，测定GST酶活性。外周淋巴细胞活性氧和凋亡的测试分离的淋巴细胞与含10jiMDCF染料孵育30分钟，弃去含染料的培养基，用冷的PBS洗三次，后送检流式细胞仪(激发波长488nm，发射波长530nm)，读取荧光值反映细胞内活性氧的水平。分离的淋巴细胞加入冰预冷的70%的乙醇固定，4'C，1-2小时，离心弃去固定液，3mlPBS重悬5分钟，400目的筛网过滤1次，500-1000r/min离心5分钟，弃去PBS。用lmlPI染液染色，4。C避光30min。流式细胞仪检测激光光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，在PI荧光的直方图上，凋亡细胞在G1/G0期前出现一亚二倍体峰。ConA对大鼠脾淋巴细胞增殖的影响大鼠麻醉后无菌取出胸腺，制成淋巴细胞悬液，将此悬液用RPMI1640完全培养液配成2xl0VmL的淋巴细胞悬液，加12个复孔(100pl/孔)'其中8孔每孔含ConA(终浓度20叱/ml)的RPMI-1640培养液100pl，混匀后置37°C、5%<:02培养箱中培养48h后，每孔加入5mg/mLMTT液40(xL，继续培养4h，加入腦SDS液(0.01mol/LHCl配制)每孔100|al，过夜之后测570nm吸光值，参考波长630nm.每孔A值^A570nm-A630nm:细胞增殖倍数=(测定孔A值-对照孔A值)/对照孔A值。骨骼肌线粒体制备大鼠末次运动后即刻断头处死，迅速完整切除双侧股四头肌，4。C预冷生理盐水洗净血液，滤纸吸干肌肉组织表面水分，称湿质量后，称取lg标本，眼科剪剪碎，按W:V=I:9加入匀浆介质，匀浆后，在低温高速离心机上作差速离心法分离胞浆和线粒体，以上操作在o4t:下进行，迅速取股四头肌红肌各lg左右，制成10%的组织匀浆，以3000r/min离心5min，取上清液置4°C冰箱备用，以测定肌糖原。线粒体制备方采用南京建成生物工程研究所推荐的方法。骨骼肌肌肉指数测定取右侧腓肠肌，股四头肌或比目鱼肌称量湿质量，分别计算其与体质量之比。肌肉质量与体质量之比按下式计算肌肉质量(mg)/体质量(g)X100%。骨骼肌胞浆内ATP含量的测定胞浆内ATP的测定应用ATP荧光酶的分析测定试剂盒测定。50mg骨骼肌组织加入0.42mol/I高氯酸600^11，匀浆，混匀器混匀，3000rpm/分低温(4。C)离心5分钟，取上清液200加入0.1mol/1KOH，调pH为6.24，混匀器混匀，低温(4°C)离心10分钟，取上清液100|al与100^的含有荧光酶的反应液(10mg/ml)作用，应用酶标仪读取数值。骨骼肌肌糖原含量的测定后肢股四头肌，经冰生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取重量，按照试剂盒说明操作，应用硫酸-蒽酮比色法测定肌糖原含量。电镜观察骨骼肌线粒体超微结构的观察实验各组动物每组随机抽取6只，取部分比目鱼肌按透射电镜技术制备，2.5%戊二醛过夜固定，经10g/L锇酸后固定、丙酮脱水、浸透、树脂包埋、超薄切片、铀-铅复染、透射电镜下观察。电镜下(10000倍)对含线粒体的骨骼肌摄片20张，根据形态学计量方法对骨骼肌胞浆内线粒体体积和面积进行相对测量，以胞浆为参照系测量线粒体面密度(Sv:单位体积包容空间内某相成分所具有的表面积)。线粒体DNA含量的测定总DNA使用DNA提取试剂盒提取(上海优晶生物工程公司)。实时定量PCR使用MasterPremix(日本东洋坊生物公司)。引物序列线粒体D-l0叩上游序列5AATCTACCATCCTCCGTG-3(SEQIDNO:l)，下游序列5-GACTAATGATTCTTCACCGT-3(SEQIDNO:2);2018SrRNA上游序列5-CATTCGAACGTCTGCCCTATC-3(SEQIDNO:3)，下游序列5-CCTGCTGCCTTCCTTGGA-3(SEQIDNO:4)。PCR条件95°C，10min，然后进行40循环为95°C，1min，55°C，1min，最后72°C，1min。应用标准曲线分别进行相对定量，以线粒体D-loop/18SrRNA的比值进行比较。总RNA抽提和qRT-PCR按试剂盒说明，用TRIzol试剂提取组织的总RNA，用紫外分光光度仪测定RNA的纯度和含量。引物序列的设计参考文献，引物由上海赛百盛公司合成，引物序列为上游序列5'-GCAAACGCAAACACAGGCC-3'(SEQIDNO:5)，7Vr/7下游序列5-CTGCATCTCCCTGAGAAGC-3(SEQIDNO:6);上游序列5'-AAAAAGGAAAGCTATGAC-3'(SEQIDNO:7)，^bm下游序列5'-AGCACCATATTTTCGTTG-3'(SEQIDNO:8);18SrRNA上游序列5-CATTCGAACGTCTGCCCTATC-3(SEQIDNO:9)，18SrRNA下游序列5-CCTGCTGCCTTCCTTGGA-3(SEQIDNO:10);RT反应l叫总RNA合成cDNA。总体积20pl，42。C反应60min，95°C反应5min。合成的cDNA，使用Takara公司的DDR305AExTaq(Hotstartversion)进行PCR扩增，PCR条件95°C，10min，然后进行40循环95。C，1min，55°C，1min;最后72°C，1min。数据表示为2'Aa，ACt=靶基因Ct-18SCt。免疫蛋白印迹组织匀浆后，冰上孵育30分钟，1,3000r/min4°C离心10分钟，收集上清即为组织蛋白提取液。应用BCA法进行总蛋白定量，-S(TC保存。蛋白用SDS聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离后，转移至固相支持体硝酸纤维素膜上，室温下封闭1小时，加入一抗PPARGC1A(1:1000)，tubulin(1:5000)，complexI(1:1000)，complexII(1:1000)，complexIII(1:1000)，Mfn1(1:1000)，Mfn2(1:1000)和ERRa(l:1000)，4'C孵育过夜，洗膜，加入二抗(辣根过氧化物酶标记的抗体)，室温孵育1小时，ECL发光，X线胶片感光，应用NIHImage图像分析软件对蛋白条带的密度进行半定量分析。统计分析所有数值以均数±标准误表示，进行t检验或者方差分析(ANOVA)，当P<0.05时，认为处理组和对照组之间有显著性差异，p<0.01被认为具有极显著性差异。II.实施例实施例1.一般情况的观察对各组动物进行一般情况的观察，发现安静对照组神态安静，时而活泼好动，皮毛光洁整齐，眼睛有神；慢性力竭组大鼠普遍神态倦怠，易受惊吓，皮毛脱落，体形瘦弱，双眼暗淡无光。各组减数情况各训练组各有两只大鼠训练时发生意外死亡，第8周末时，各组各有IO只用于实验取材。实施例2.物质能量代谢与代谢能力测试体重在跑台运动后第8周，对各组大鼠称重。结果发现，安静组体重增长较各运动组快，呈现正性增长。力竭运动组大鼠体重显著低于安静组(P0.5)，营养素干预组(包括高剂量组，低剂量组)大鼠体重与慢性力竭组相比体重均有所增加，但差异均不显著，见图1A;而咖啡因组与慢性力竭组相比无差异。运动距离从跑台运动后第5周开始，每天测量动物完成的跑距。图1B结果显示营养素干预组低剂量组较力竭运动组的运动距离明显增加(P〈0.05)，而咖啡因组与力竭组相比无显著性差异。表明给予本发明的营养素可显著提高大鼠的运动能力。血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶亦随运动负荷的增加而增加，同时作为评定组织损伤的指标。在跑台运动8周后，动物血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶测定结果如图1C。结果显示力竭组血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶较与安静对照组相比，呈现上升的趋势，但无显著性差异；咖啡因组与力竭运动组相比，血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶亦呈下降的趋势，与力竭组相比有显著性差异(p〈0.05);营养素干预组(高剂量组，低剂量组)的谷丙转氨酶含量也降低，但谷草转氨酶与力竭组相比无差异。血清尿素氮，肌酑含量机体血尿素氮含量随运动负荷的增加而增加；机体对负荷适应能力越差，血清尿素氮增加越明显。在跑台运动8周后，动物血清尿素氮的测定结果如图1D。结果显示力竭组血清尿素氮，肌酐含量较与安静对照组明显增加(pO.01);营养素干预组(高剂量组，低剂量组)与力竭运动组相比，血清尿素氮明显降低(pO.01);咖啡因组的尿素氮含量也呈现下降的趋势，但与力竭组相比无统计学差异。营养素干预低剂量组的肌酐含量也显著降低(与力竭组相比，p<0.01);高剂量组与咖啡因组的肌酐含量也呈现下降的趋势，与力竭组相比无统计学差异。该结果表明，营养素给予后能够对机体起到良好的保护作用，增强机体的抗疲劳能力。实施例3.氧转运系统——红细胞，血红蛋白和红细胞压积的测定跑台运动8周后，动物红细胞，血红蛋白和红细胞压积测定结果见图2A-C。结果显示力竭组红细胞数，血红蛋白的含量较安静对照组明显增加(p<0.01)，红细胞压积也显著高于安静对照组(p<0.01);营养素干预组和咖啡因组与力竭运动组相比红细胞，血红蛋白的含量和红细胞压积明显降低(分别p<0.01),表明力竭组可能由于缺氧，红细胞代偿性增加，血红蛋白代偿性升高，虽然一定程度上能够提高红细胞的携氧能力，改善组织缺氧，但由于红细胞压积的增加，血液粘度增加，进而影响红细胞变形的能力，加重组织缺氧。实施例4.免疫系统测试适度的运动可增强机体免疫力，而过度或激烈运动则会降低机体免疫力。本实施例中，用大鼠跑台运动模拟田径运动中周期性耐力项目的反复超长距离跑步，造成大鼠力竭运动模型，从淋巴细胞活性氧的产生，淋巴细胞凋亡及增殖试验评价营养素干预对于力竭运动大鼠机体免疫功能的调节。外周血淋巴细胞周期的分析外周淋巴细胞活性氧和凋亡的测试显示，力竭组外周血淋巴细胞的凋亡率与安静对照组比较明显增加(p〈0.05)，营养素千预组与力竭运动组相比凋亡率下降(pO.05);而咖啡因组与力竭运动组相比凋亡率无显著性差异，见图3A。外周血淋巴细胞活性氧的测定外周血淋巴细胞活性氧的测定如图3B所示。结果显示力竭组外周血淋巴细胞活性氧的产生与安静对照组比较明显增加(p〈0.05)，营养素干预组与力竭运动组相比活性氧产生下降(pO.05);而咖啡因组与力竭运动组相比无显著性差异。脾淋巴细胞增殖实验的测定脾淋巴细胞增殖实验的测定结果如图3C所示。结果显示力竭组脾淋巴细胞增殖与安静对照组比较明显降低(p0.05)，营养素干预组与力竭运动组相比脾淋巴细胞增殖明显增加(pO.05);而咖啡因组与力竭运动组相比无显著性差异。上述结果表明营养素干预组可以降低外周血淋巴细胞活性氧的产生，减少淋巴细胞的凋亡，促进脾脏淋巴细胞的增殖，显示营养素的给予能够增强机体的免疫功能。实施例5.抗氧化损伤能力测试自由基与运动性疲劳有着密切的关系，是导致运动性疲劳的重要原因。长期以来，人们一直把抑制自由基的产生和提高机体的抗氧化能力，以及恢复自由基代谢平衡作为延缓疲劳的有效手段。为此，本发明人从外周血丙二醛的含量，血清总抗氧化力，还原性谷胱甘肽，GST酶活力的测定评价营养素干预对于大鼠机体抗氧化能力的作用。血清丙二醛含量丙二醛是活性氧自由基对生物细胞膜上多不饱和脂肪酸氧化的产物，丙二醛生成增加干扰双层磷脂排列的生物细胞膜上镶嵌的多种酶的空间结构，进而引起双层脂质的脂类、蛋白质发生交联、聚合形成脂褐质，从而产生细胞膜广泛性损伤及病变，影响细胞膜的正常功能，通常以丙二酸代表自由基产生的数血清丙二醛含量测定结果如图4A所示。结果显示力竭组血清丙二醛含量与安静对照组比较有上升的趋势，营养素干预组和咖啡因组与力竭运动组相比血清丙二醛含量有下降的趋势。血清总抗氧化力，还原性谷胱甘肽，GST酶活力的测定血清总抗氧化力测定结果如图4B;还原性谷胱甘肽含量测定结果如图4C;GST酶活力测定结果如图4D所示；力竭组与安静对照组相比明显降低(pO.05);营养素干预组与力竭运动组相比血清总抗氧化力和GST酶活力显著增加(p<0.05)，还原性谷胱甘肽有增加的趋势。咖啡因组与力竭组相比无变化。以上结果表明，营养素干预组能有效地清除自由基，阻止脂质过氧化，提高机体抗氧化能力，保护机体细胞免受运动性损伤。实施例6，对骨骼肌系统的影响骨骼肌运动性疲劳的发生、发展均与骨骼肌细胞的结构、功能的变化直接相关。这些变化主要包括骨骼肌细胞内能源物质的耗竭，骨骼肌细胞内能量代谢酶活性的抑制，骨骼肌纤维结构的改变，骨骼肌细胞超微结构发生改变，线粒体功能障碍等。骨骼肌肌肉指数力竭组大鼠骨骼肌的单侧腓肠肌指数，股四头肌指数(图5A)及比目鱼肌指数(图5B)与安静组相比均呈现下降的趋势；营养素干预组，咖啡因组与力竭组相比较各项指数均上升，尤其是股四头肌指数上升显示出统计学差异(p<0.05)。血清乳酸脱氢酶活力及肌酸激酶活力随着运动负荷的增加，大鼠运动后骨骼肌的损伤也越严重，更多的肌肉标25志酶会因此而泄漏到血液中，进而导致血液相应酶活性水平的进一步增加。此外，血清酶活性也能反映组织的损伤和修复状况。CPK和LDH都是反映肌肉生理活性的重要代谢酶。血浆酶活力测定结果如图5C所示。结果显示力竭组血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶的活力显著高于安静对照组，营养素干预组，咖啡因组与力竭组相比血清两项酶的活性均下降，咖啡因组肌酸激酶的活力下降有显著性差异(p<0.01);而营养素干预组，咖啡因组乳酸脱氢酶的活力下降均有显著性差异(p<0.01)。骨骼肌肌糖元和ATP含量的测定运动性疲劳时，Ca的浓度升高，线粒体膜电位减少，ATP合成水平下降，图5D的结果显示力竭组肌骨骼肌ATP的含量与安静对照组相比降低，补充低剂量营养素可以增加ATP的含量。运动性疲劳的发生与能量消耗、代谢产物的堆积和内环境的改变等因素有关。肌糖原是运动中重要的供能物质，它的储量大小与疲劳的延缓有直接关系。图5D的结果显示力竭组肌糖原含量与安静对照组相比无变化，补充营养素可以显著增加肌糖原的含量(p〈0.01)。骨骼肌的超微结构电镜观察骨骼肌的超微结构，结果如图5E所示。结果显示大鼠力竭运动后，比目鱼肌z线排列异常，线粒体数目减少，补充营养素后，见肌原纤维中的线粒体数目增加，较力竭组z线排列异常改善。经图象分析，计算线粒体面密度，表明力竭组线粒体面密度较安静组减少，而营养素干预组，线粒体面密度有显著性增加(p0.05)，见图5F。骨骼肌组织线粒体指标的测定骨骼肌细胞内线粒体的生物发生的适应性改变可增强肌肉的氧化能力和抗疲劳性，涉及线粒体生成的转录因子，包括线粒体转录因子A(Tfam)，核呼吸因子(Nrf和Nrf2)和雌激素相关的受体-a(ERRa)。PPARGC1A是具有多重调节功能的转录因子，是调节线粒体生成的关键因素，PPARGC1A刺激Nrfl和Tfam的表达，从而启动编码线粒体蛋白的核基因和线粒体基因的表达。线26粒体基因组和核基因组之间的作用依赖于Nrfl和Tfam的调控，Nrfl调节核编码的线粒体基因的转录并上调Tfam的表达，核Tfam可上调线粒体内Tfam的转录，促进线粒体DNA和蛋白的合成。图5G-J的结果显示，营养素干预组可显著增加线粒体复合物I，II和III蛋白的表达，促进线粒体DNA的合成，同时上调了参与调控线粒体生成的转录因子PPARGC1A，Nrfl和Tfam的表达。表明营养素组可以促进骨骼肌的线粒体生成，改善线粒体的功能。骨骼肌线粒体融合指标的测定线粒体融合对于细胞功能的完善具有十分重要的意义，线粒体融合能够促进线粒体的协作。线粒体连接成网络有利于能量在其中的传递；有利于信息沟通，包括膜电位快速传递以及线粒体内容物的交换。融合还可以使线粒体之间通过线粒体基因组交换进行充分的DNA互补。Mfnl/2在线粒体融合过程中发挥重要作用。图5K观察到线粒体的外膜和内膜在一些地方紧密并列，内膜与外膜紧贴在一起，而其它地方的内膜则向内折叠形成"嵴"。营养素干预可显著上调MFN1和MFN2的表达，表明营养素干预组可以促进骨骼肌的线粒体融合，改善线粒体的功能，如图5L所示。综上，本发明人开发的含有R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸的组合物具有优异的抗疲劳，改善线粒体效果，并且经验证其抗疲劳效果显著高于单用牛磺酸、乙酰肉碱等物质或它们的组合，也高于现有的其它抗疲劳的制剂。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。序列表<110>上海体育科学研究所；中国科学院上海生命科学研究院<120〉消除运动性疲劳的营养素组合物〈130〉085109<160〉10<170〉Patentlnversion3.3<210〉1<211〉18<212>DNA<213〉人工序列<220〉<221>misc一feature<223>引物"00〉1aatctaccatcctccgtg〈210〉2<211〉20<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<221〉misc一feature<223〉引物<400〉2gactaatgattcttcaccgt<210〉3<211>21<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<221〉misc—feature<223>引物<400>3cattcgaacgtctgccctatc<2]0〉4<211〉18<212〉匿<213〉人:l:序列<220〉<221〉misc—feature<223〉引物<400〉4cctgctgccttccttgga<210〉5〈211〉19<212〉DNA<213>人工序列<220〉<221>misc—feature<223〉引物<400〉5gcaaacgc33acac3ggcc<210〉6<211>19<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<221〉misc—feature<223〉引物<400〉6ctgcatctccctgagaagc<210〉7<211〉18<212>DNA<213〉人工序列说明书第25/26页21181929<220><221〉misc—feature<223〉引物<柳〉7aaaaaggaaagctatgac<210〉8<211>18<212〉DNA<213>人工序列<220〉<221〉misc一feature<223〉引物<400>8agcaccatattttcgttg<210〉9<211〉21<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<221〉misc—feature〈223〉引物<400〉9cattcgaacgtctgccctatc<210>10<211〉18<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<221〉misc—feature<223〉引物<400〉10cctgctgccttccttgga说明书第26/26页18182权利要求1.一种混合物的用途，所述的混合物含有R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶Q10、白藜芦醇和牛磺酸；所述的混合物用于制备抗疲劳的组合物。2.如权利要求l所述的用途，其特征在于，所述的组合物用于提高哺乳动物运动能力；降低哺乳动物血清尿素氮和肌酐含量；降低外周血淋巴细胞的凋亡；降低外周血淋巴细胞活性氧的产生；促进脾淋巴细胞增殖；增加血清总抗氧化力和GST酶活力；增加骨骼肌肌糖原的含量；增加骨骼肌肌原纤维中线粒体数目；增加线粒体复合物I，II或III蛋白的表达；促进线粒体DNA的合成；上调调控线粒体生成的转录因子PPARGC1A，Nrfl或Tfam的表达；或促进骨骼肌的线粒体融合。3.如权利要求l所述的用途，其特征在于，所述的混合物含有R-硫辛酸1-50重量份；乙酰肉碱2-100重量份；生物素0.002-0.1重量份；尼克酰胺0.3-15重量份；核黄素0.12-6重量份；吡眵醛0.12-6重量份；肌酸1-30重量份;辅酶QIO0.1-5重量份；白藜芦醇0.1-5重量份;牛磺酸2-50重量份。4.如权利要求l所述的用途，其特征在于，R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡眵醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸之间的重量比例是(5-15):(15-25):(0.015-0.025):(2-4):(1-1.5):(1-1.5):(5-15):(0.8-1.2):(0.8-1.2):(15-25)。5.—种组合物，其特征在于，所述组合物用于抗疲劳，并且所述的组合物含有(a)R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸；和(b)药学或食品学上可接受的载体。6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述的组合物含有R-硫辛酸1-50重量份；乙酰肉碱2-100重量份；生物素0.002-0.1重量份；尼克酰胺0.3-15重量份；核黄素0.12-6重量份；吡眵醛0.12-6重量份；肌酸1-30重量份；辅酶QIO0.1-5重量份；白藜戸醇0.1-5重量份；牛磺酸2-50重量份；药学或食品学上可接受的载体10-1000重量份。7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述的组合物含有:R-硫辛酸1-25重量份；乙酰肉碱2-50重量份；生物素0.002-0.05重量份；尼克酰胺0.3-7.5重量份；核黄素0.12-3重量份；吡眵醛0.12-3重量份；肌酸1-15重量份；辅酶QIO0.1-2.5重量份；白藜戸醇0.1-2.5重量份；牛磺酸2-25重量份。药学或食品学上可接受的载体10-1000重量份。8.如权利要求5-7任一所述的组合物，其特征在于，R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸之和占组合物总重量的5-100%。9.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜芦醇和牛磺酸之间的重量比例是(5-15):(15-25):(0.015-0.025):(2-4):(1-1.5):(1-1.5):(5-15):(0.8-1.2):(0.8-1.2):(15-25)。10.—种抗疲劳的方法，其特征在于，给予需要的受试者有效量的R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶QIO、白藜戸醇和牛磺酸。全文摘要本发明涉及消除运动性疲劳的营养素组合物，公开了一种混合物，所述的混合物含有R-硫辛酸、乙酰肉碱、生物素、尼克酰胺、核黄素、吡哆醛、肌酸、辅酶Q10、白藜芦醇和牛磺酸。所述的混合物对于抗疲劳特别有效，且使用安全，毒副作用小，稳定可控。文档编号A61K31/185GK101669938SQ20081004276公开日2010年3月17日申请日期2008年9月11日优先权日2008年9月11日发明者刘健康,孙孟炜,李之俊,钱风雷申请人:上海体育科学研究所;中国科学院上海生命科学研究院