专利名称：一种从植物滇丁香中提取熊果酸的方法
技术领域：
本发明涉及一种从植物中提取熊果酸的方法，尤其涉及一种从茜草科植 物滇丁香中提取分离熊果酸的方法。
背景技术：
熊果酸(ursolic acid, UA)，别名乌索酸，在自然界分布很广，存在于杜 鹊花科植物熊果的叶、果实，选森参植物毛泡桐的叶，茜草科植物栀子的果 实，龙胆科植物湿生蕾、木樨科植物女贞的叶等植物中。熊果酸具有广泛的 生物学效应，1990年被日本列为最有希望的肿瘤预防药物之一。它对中枢神 经系统有明显的安定与降温作用；体外对6+和G -菌及酵母菌均有抗菌活 性；有抗糖尿病、抗溃疡及降低血脂的作用；对多种致癌、促癌物有抵抗作 用；对多种恶性肿瘤细胞有抑制生长作用；熊果酸及其衍生物对病毒具有抑 制活性；另外，可诱导F9畸胎瘤细胞成为内胚层细胞及抗血管生成。由于熊 果酸在自然界分布广泛，存在于很多植物中，且有良好的生物活性。通常情 况下，熊果酸是通过化学方法合成的，采用化学方法合成存在有"三废"处 理量大且处理困难，易对环境产生污染，并且成本较高。到目前为止，有关 从其他植物中提取分离熊果酸的报道有很多，但大多都是从木樨科植物及杜 鹘药科植物中提取，从茜草科植物滇丁香中得到熊果酸尚未有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从茜草科植物滇丁香中提取分离熊果酸的方 法，其提取方法简单、成本低、产率高。
为了实现上述目的，本发明的技术方案采用了一种从植物滇丁香中提取 熊果酸的方法，包括以下步骤(1)取干燥滇丁香，粉碎，用浓度为95%的 乙醇10L重复冷浸3次，每次7天，过滤，减压回收乙醇得浓縮液；(2) 将得到的乙醇浓縮液进行试验；
(3) 将步骤(2)得到的浓縮物进行SephadexLH-20凝胶柱层析，以 甲醇为洗脱剂，标准品对照，分离得到纯品。
所述的步骤(2)对乙醇浓縮液进行试验的步骤为将乙醇浸膏用10%乙 醇水(体积比)分散，按照浸膏与D101大孔树脂重量比为1: 30;将分 散了浸膏的10%乙醇水溶液加入树脂柱，水-乙醇溶剂梯度洗脱，60%乙 醇水部分进行浓縮得浓縮物。
所述的步骤(2)对乙醇浓縮液进行试验的步骤为将浓縮的提取物分
散在2L水中，用乙酸乙酯萃取三次；乙酸乙酯提取物进行200—300目硅胶
中压柱层析，用石油醚一丙酮溶剂(体积比为30: l)洗脱，以薄层层析参照
标准品检测，合并该化合物的部位，减压蒸发得浓縮物。
本发明所采用的滇丁香awcw/^;^"Vm" Hook.)为茜草科滇丁香属植物， 分布于喜马拉雅山至我国云南和广西，具有较高的园林、药用价值。由于滇 丁香株型优美，枝叶繁茂，翠绿光亮，花期长，花絮密集而繁茂，花色艳丽 而芳香，目前主要作为观赏花木。但其在民间作为中药材也具有悠久的历史。 据记载丁香叶，即家中盆内栽者是也，其味苦、辛，性微温；芳香入肺， 止肺寒咳嗽、或咳血、或痰上带血。关于滇丁香属植物的药用价值，吴征镒 主编的《新华本草纲要》有详细记载根有活血调经、消炎止痛、降压功能。
可用于月经不调、风湿疼痛、跌打损伤、偏头痛、心慌等，外用可治毒蛇咬
伤；花果有止咳化痰功能，可用于百日咳、慢性支气管炎、肺结核；叶有消
肿功能，可敷外伤肿痛。滇丁香原料来源丰富，提取熊果酸的成本低。本发 明的提取方法中使用到的分离材料有大孔吸附树脂和凝胶，它们不仅理化性 质稳定，不溶于酸，碱及有机溶媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及
强离子低分子化合物存在的影响；并且易于洗脱再生，有益于多次循环利用。
具体实施方式
实施例1
取干燥滇丁香20kg，粉碎，用95。/。工业乙醇10L冷浸3次，每次7天， 过滤，减压回收乙醇得浓縮液，将浓縮的提取物分散在2L水中，依次用乙酸乙酯，正丁醇各萃取三次，乙酸乙酯提取物进行200—300目硅胶中压柱层析， 用石油醚一丙酮溶剂(体积比为30: 1)洗脱，以薄层层析参照标准品检测， 合并该化合物的部位，进行SephadexLH-20凝胶柱层析以甲醇洗脱，得到该 化合物纯品。 实施例2
大孔树脂的预处理D101树脂装柱，用5% NaOH浸泡2 h后，以每小 时4个柱体积的流速洗脱2个柱体积，再用蒸馏水洗至PH值中性；加乙醇 浸泡lh，以每小时2个柱体积的流速洗脱3.5个柱体积，最后用蒸馏水洗至 无醇味。样品溶液的制备取干燥滇丁香20kg，粉碎后，用95%工业乙醇冷 浸3次，每次7天，过滤，减压回收乙醇得浓缩液，加水至适宜浓度按照h 30 (浸膏与大孔树脂重量比)；将样品溶液加入树脂柱，水一乙醇溶剂梯度洗 脱，60%乙醇水部分浓縮成浸膏，进行Sephadex LH-20凝胶柱层析，以甲醇
为洗脱剂，标准品对照，分离得到纯品。
采用本发明的方法提取到的熊果酸，其性状为白色粉末。分子式:(:30仏803, 分子量456。
仪器材料熔点用四川科学仪器厂生产的XRC-1型显微熔点仪测定，温
度计未校正；旋光用SPEA-300仪测定；红外在Bio-Rad FTS-135红外光谱测 定；紫外在UV-210A紫外光谱测定仪上测定；1H， 13C醒R图谱由Bruker am-400 MHz核磁共振仪测定。TMS为内标；二维核磁共振图谱由DRX-500 M Hz核磁共振仪测定；质谱由VG.AUTOSpec-3000型质谱仪测定。
测定条件及结果Mp: 305-308°C; Optical Rotat-ion: [a]2;| -8.8(c
0. 25， CHCU。 EIMS仿/z (%): 456 (M+, 20) ， 410(8)， 248(100)， 233(30)， 213 (75), 175(33)， 131(30)， 119(40)， 105(45)，91 (35)。 'H丽R (400MHz， C5D5N) 《3. 38 GH，dd，,ll,3，3.4Hz，H-3) ，5. 57(1H，brs， H-12) ， 2. 42 (1H， d，力l
1. 32 Hz, H-18) ， 0. 67 (3H， s， H-23) ， 0. 63 (3H， s， H-24), 0. 84 (3H， s， H-25) ， 0. 81 (3H, s，H-26)，1.03(3H，d， /=5. 9 Hz， H—29)， 1. 01 (3H， d， ,6.1 Hz，H-30).13C NMR(125MHz， "n ppm， pyridine-4) 5:39. 2(C-l)， 29. 1 (C-2)， 77. 9(C-3)， 3
9. 8 (C-4) ， 55. 6 (C-5) ， 18. 6 (C-6， 32. 6 (C-7) ， 37. 0 (C-8) ， 53. 3 (C-9) ， 37. 0 (C-l 0) ， 23. 1 (C-11) ， 125. 4 (C-12) ， 139. 04 (C-13) ，41.6 (C-14) ， 27. 9 (C-15) ， 42. 3 ( C-16)，47. 8 (C-17) ，39.3 (C-18) ，39.2 (C-19) ，33.4 (C-20) ，30.9 (C-21) ，33.0 (C-22) ,24.7 (C-23) ，16.3 (C-24) ，15.5 (C-25) ，17.2 (C-26 )，23.7 (C-27) ，179.7 (C-28) ，28.5 (C-29) ，24.7 (C-30)。
最后所应说明的是以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案 ，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应 当理解依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神 和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
权利要求
1、一种从植物滇丁香中提取熊果酸的方法，其特征在于包括以下步骤(1)取干燥滇丁香，粉碎，用浓度为95％的乙醇10L重复冷浸3次，每次7天，过滤，减压回收乙醇得浓缩浸膏；(2)将得到的乙醇浸膏进行试验；(3)将步骤(2)得到的浓缩物进行Sephadex LH-20凝胶柱层析，以甲醇为洗脱剂，标准品对照，分离得到纯品。
2、 根据权利要求1所述的从植物滇丁香中提取熊果酸的方法，其特征在于所述的步骤(2)对乙醇浸膏进行试验的步骤为将乙醇浸膏用10%乙醇 水(体积比)分散，按照浸膏与D101大孔树脂重量比为1: 30;将分散 了浸膏的10%乙醇水溶液加入树脂柱，水-乙醇溶剂梯度洗脱，60%乙醇水部分进行浓縮得浓縮物。
3、 根据权利要求1所述的从植物滇丁香中提取熊果酸的方法，其特征在于所述的步骤(2)对乙醇浓縮液进行试验的步骤为将浓縮的提取物 分散在2L水中，用乙酸乙酯萃取三次；乙酸乙酯提取物进行200—300目硅胶中压柱层析，用石油醚一丙酮溶剂(体积比为30: l)洗脱，以薄层层析参照标准品检测，合并该化合物的部位，减压蒸发得浓縮物。
全文摘要
本发明涉及一种从植物滇丁香中提取熊果酸的方法，包括以下步骤(1)取干燥滇丁香，粉碎，用浓度为95％的乙醇10L重复冷浸3次，每次7天，过滤，减压回收乙醇得浓缩浸膏；(2)将得到的乙醇浸膏进行试验；(3)将步骤(2)得到的浓缩物进行Sephadex LH-20凝胶柱层析，以甲醇为洗脱剂，标准品对照，分离得到纯品。本发明的提取方法中使用到的分离材料有大孔吸附树脂和凝胶，它们不仅理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响；并且易于洗脱再生，有益于多次循环利用。
文档编号A61K36/185GK101544679SQ20081004940
公开日2009年9月30日 申请日期2008年3月25日 优先权日2008年3月25日
发明者姬志强, 宋艳丽, 康文艺, 王金梅 申请人:河南大学