专利名称：：一种血府逐瘀口服液的质量控制检测方法
技术领域：
：本发明公开一种血府逐瘀口服液的质量控制检测方法，属于医药学检测方法
技术领域：
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背景技术：
：本发明涉及的"血府逐瘀口服液"是通过以下工艺制备的将当归180g、川芎90g、柴胡60g、赤芍120g、枳壳120g酌予碎断，加6倍量水用水蒸汽蒸馏法蒸馏8小时提取挥发油，挥发油备用；药渣与桃仁240g、红花180g、地黄180g、牛膝180g、桔梗90g、甘草60g等六味加水煎煮三次，加水量第一次6倍药材量，第二次6倍药材量，第三次5倍药材量，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，浓縮至相对密度1.101.14(6(TC)的清膏，放冷，加入乙醇使溶液中含醇量达70%，静置48小时，滤过，滤液回收乙醇，放冷，加入炼制好的蜂蜜600g，混匀，再缓缓加入挥发油及含苯甲酸钠3g、羟苯乙酯0.375g的乙醇溶液，加水至1000ml，搅拌均匀，灌封，即得，棕褐色粘稠液体；气微，味甜，微苦。功能主治活血化瘀，行气止痛。用于瘀血内阻，头痛或胸痛，内热憋闷，失眠多梦，心悸怔仲，急躁善怒。"血府逐瘀口服液"的原检测标准收载于中华人民共和国卫生部药品标准新药转正标准第十三册，原标准中只有药材枳壳和赤芍的薄层色谱鉴别以及赤芍的高效液相色谱法检测含量，由于原标准的检测方法很少，因此，不能保证对该药品进行全面的检测。
发明内容本发明一种血府逐瘀口服液的质量控制检测方法，用于血府逐瘀口服液药物的质量控制，用于对该药品作全面的质量控制。本发明的技术解决方案如下1)取血府逐瘀口服液lOml，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2^，分别点于同一以1%氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯一甲醇一水(100:17:13)为展开剂，展开，展距3cm，取出，晾干，再以甲苯一醋酸乙酯一甲酸一水(20:10丄1)的上层溶液为展开剂，展开，展距8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；2)取血府逐瘀口服液40ml，用水饱和正丁醇提取3次，每次30ml，合并提取液，蒸干，残渣加水30ml及盐酸3ml，加热回流1小时，用氯仿提取3次，每次30ml，氯仿层蒸干，残渣加无水乙醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；另取牛膝对照药材3g，加甲醇40ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml及盐酸3ml，以下同供试溶液制备，审U成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各lOpl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已垸一二甲苯一醋酸乙酯一甲酸(5:3:2:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105t:烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；3)取步骤2)项下的供试品溶液，作为供试品溶液；另取甘草对照药材2g，加甲醇40ml，回流提取l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml及盐酸3ml，回流1小时，用氯仿提取3次，每次30ml，合并提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各5^1，分别点于105'C活化30分钟的硅胶G薄层板上，以石油醚(609(TC)一甲苯一醋酸乙酯一冰醋酸(4:8:5:0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；4)检査PH值为3.55.5，相对密度为1.141.18;其它应符合合中国药典2005年版一部附录IJ剂项下有关的各项规定；5)含量测定阿魏酸照高效液相色谱法测定阿魏酸照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇一1%醋酸(24:76)为流动相；检测波长为313nm，柱温为室温。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备称取阿魏酸对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，阿魏酸每lml含0.2mg:供试品溶液的制备精密吸取装量差异项下本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，摇匀，用稀盐酸调PH23，再用乙醚提取5次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣用甲醇溶解于5ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；每支含川芎、当归以阿魏酸Q。H,o04计，不得少于0.07mg。本发明的积极效果在于在原标准基础上增加了血府逐瘀口服液处方中牛膝、甘草的薄层色谱法检测方法，改进了枳壳的薄层色谱法，增加了处方中当归、川芎的高效液相色谱法测定含量。本发明提供的方法先进，精密度及重现性好，能够全面的对该药品进行质量控制，保证产品质量的稳定性均一性。图1:枳壳薄层色谱1、4、5供试品，2阴性对照，3橙皮苷图2:牛膝的薄层谱谱1、2供试品，3牛膝对照药材，4齐墩果酸，5阴性对照图3:甘草的薄层色谱l甘草对照药材，2、3、4供试品，5阴性对照图4:阿魏酸对照品紫外吸收图；图6:阿魏酸对照品的HPLC色谱图；图7:供试品溶液的HPLC色谱图；图8:阴性对照液的HPLC色谱图；图9:溶剂的HPLC色谱图。具体实施例方式为了便于理解本发明，特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而非对本发明的任何形式的限制。实施例l1)取血府逐瘀口服液10ml，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2u1，分别点于同一以1%氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯一甲醇一水(100:17:13)为展开剂，展开，展距3cm，取出，晾干，再以甲苯一醋酸乙酯一甲酸一水(20:10:1:1)的上层溶液为展开剂，展开，展距8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点见图1;2)取血府逐瘀口服液40ml，用水饱和正丁醇提取3次，每次30ml，合并提取液，蒸干，残渣加水30ml及盐酸3ml，加热回流1小时，用氯仿提取3次，每次30ml，氯仿层蒸千，残渣加无水乙醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；另取牛膝对照药材3g，加甲醇40ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml及盐酸3ml，以下同供试溶液制备，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10"1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷一二甲苯一醋酸乙酯一甲酸(5:3:2:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图2;3)取步骤2)项下的供试品溶液，作为供试品溶液；另取甘草对照药材2g，加甲醇40ml，回流提取l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml及盐酸3ml，回流1小时，用氯仿提取3次，每次30ml，合并提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各5u1，分别点于105。C活化30分钟的硅胶G薄层板上，以石油醚(609(TC)一甲苯一醋酸乙酯一冰醋酸(4:8:5:0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10°/。硫酸乙醇溶液，105。C烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图3;4)检查PH值为3.55.5，相对密度为1.141.18;其它应符合合中国药典2000年版一部附录IJ剂项下有关的各项规定；5)含量测定芍药苷照高效液相色谱法测定；色谱法条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(35:65)为流动液；检测波长为230nm;理论板数按芍药苷峰计算应不低于1400;对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品5mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得每lml中含芍药苷0.2mg;供试品溶液的制备精密量取本品lml，置于D,(H型大孔吸附树脂柱上，为玻璃柱，内径约1.5cm，柱长约10cm，湿法装柱，以每分钟1.5ml的流速，依次用水51ml、氨试液2ml、水50ml洗柱，继以40%乙醇洗脱，收集洗脱液80ml置水浴上蒸干，残渣以甲醇-水(35:65)混合溶液溶解至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5tU，注入液相色谱仪，观l淀，计算，即得；每lml含赤芍以芍药苷C23H2s0n计，不得少于1.40mg;阿魏酸照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇一1%醋酸(24:76)为流动相；检测波长为313nm，柱温为室温。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备称取阿魏酸对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，阿魏酸每lml含0.2mg:供试品溶液的制备精密吸取装量差异项下本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，摇匀，用稀盐酸调PH23，再用乙醚提取5次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣用甲醇溶解于5ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；每支含川芎、当归以阿魏酸Cu)HH)04计，不得少于0.07mg。高效液相色谱测定阿魏酸含量法标准确定说明一、仪器与试药仪器LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津)；SPD-10AVP检测器；试药阿魏酸对照品购于中国药品生物制品检定所，批号0773-9708;规格供含量测定用。二、对照品溶液的制备称取阿魏酸对照品约10mg,精密称定为ll.Omg，置50ml量瓶中。加甲醇溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每lml含阿魏酸0.22mg)。三、供试品溶液的制备与测定同前述。四、检测波长的确定供试品溶液、对照品溶液及阴性对照液同时进行紫外光谱的测定，测定结果供试品溶液及对照品溶液的紫外吸收光谱均在313nm处有吸收峰，阴性对照液在此处无吸收峰。确定检测波长为313nm。见图4五、流动相的选择流动相为甲醇-1%醋酸(24:76)。六、色谱条件十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-1%醋酸(24:76)为流动相；检测波长为313nm;柱温为40'C;流速lml/min。七、理论板数的计算依前述色谱条件测定，测定结果以阿魏酸峰计为N=5.54X(100.2/3.8)2=3852故确定以阿魏酸峰计理论板数不少于3000。八、方法学考察1、标准曲线的制备分别精密吸取阿魏酸对照品溶液2.0、5.0、10.0、15.0、20.0ul注入液相色谱仪，测定，以峰面积分值为纵坐标，以对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，见图5，表l。表l阿魏酸标准曲线数据进样量"g)0.0440.1100.2200.3300.440峰面积积分值298055735330148078722168402965652回归方程A=-2177.659+6737370.885C，r=0.9999线性范围0.0440.440ug2、空白试验为迸一步确定方法的可行性，取不含当归、川芎的阴性对照液，依法测定，结果阴性对照液色谱在与对照品峰相应的保留时间处无色谱峰，表明无干扰，方法可行见图6、7、8、9。3、稳定性试验取同一供试品溶液，进样10ul，在依正文方法在O、2、4、6、8小时结果见表2。表2稳定性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>试验结果表明供试品中阿魏酸在8小时以内基本稳定。4、精密度试验吸取同一供试品溶液lOtU,连续进样5次，依法测定，结果见表3表3精密度试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>试验结果表明重现性较好。6、回收率试验取批号为030501样品，已知含量的样品(含阿魏酸0.9572mg/g)约3g。精密吸取装量差异下的本品5ml，加入阿魏酸对照品溶液2ml(浓度为0.022mg/ml)，按正文含量测定项下方法测定，计算回收率，结果见表5。表5回收率测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>根据10批样品测定结果，考虑到原料的采收、贮藏、运输及阿魏酸的稳定性，确定每支含阿委酸不得少于0.07mg。权利要求1、一种血府逐瘀口服液的质量控制检测方法，包括以下步骤1)取血府逐瘀口服液10ml，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以1％氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯—甲醇—水(100:17:13)为展开剂，展开，展距3cm，取出，晾干，再以甲苯—醋酸乙酯—甲酸—水(20:10:1:1)的上层溶液为展开剂，展开，展距8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；2)取血府逐瘀口服液40ml，用水饱和正丁醇提取3次，每次30ml，合并提取液，蒸干，残渣加水30ml及盐酸3ml，加热回流1小时，用氯仿提取3次，每次30ml，氯仿层蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；另取牛膝对照药材3g，加甲醇40ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml及盐酸3ml，以下同供试溶液制备，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷—二甲苯—醋酸乙酯—甲酸(5320.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；3)取步骤2)项下的供试品溶液，作为供试品溶液；另取甘草对照药材2g，加甲醇40ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml及盐酸3ml，回流1小时，用氯仿提取3次，每次30ml，合并提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各5μl，分别点于105℃活化30分钟的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)—甲苯—醋酸乙酯—冰醋酸(4850.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；4)检查PH值为3.5～5.5，相对密度为1.14～1.18；其它应符合合中国药典2005年版一部附录IJ剂项下有关的各项规定；5)含量测定阿魏酸照高效液相色谱法测定阿魏酸照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇—1％醋酸(2476)为流动相；检测波长为313nm，柱温为室温。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备称取阿魏酸对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，阿魏酸每1ml含0.2mg供试品溶液的制备精密吸取装量差异项下本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，摇匀，用稀盐酸调PH2～3，再用乙醚提取5次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣用甲醇溶解于5ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；每支含川芎、当归以阿魏酸C10H10O4计，不得少于0.07mg。全文摘要本发明公开一种血府逐瘀口服液的质量控制检测方法，在原检测标准基础上增加了血府逐瘀口服液处方中牛膝、甘草的薄层色谱法检测方法，改进了枳壳的薄层色谱法，增加了处方中当归、川芎的高效液相色谱法测定含量。本发明提供的方法先进，精密度及重现性好，用于血府逐瘀口服液药物的质量控制，能够全面的对该药品进行质量控制，保证产品质量的稳定性均一性。文档编号A61K36/75GK101361839SQ20081005068公开日2009年2月11日申请日期2008年5月7日优先权日2008年5月7日发明者于江波,伟李,王永彬,解钧秀,许加胜,郭淑芹申请人:吉林敖东延边药业股份有限公司