专利名称：抗癌剂导致的末梢神经障碍的预防或减轻剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及痘菌病毒接种炎症组织提取物的新型医药用途，具体而言，涉及含有
痘菌病毒接种炎症组织提取物作为有效成分的由抗癌剂导致的末梢神经障碍的预防或减 轻剂。
背景技术：
目前，在癌症(恶性肿瘤)的治疗中，适当地分别单独使用或者并用外科手术、放 射线照射、化学疗法。其中，在化学疗法中所使用的抗癌剂(抗恶性肿瘤剂)是原本具有细 胞毒性、细胞障碍性的物质，不仅对癌(恶性肿瘤)细胞造成损害，对人类的正常细胞也造 成损害，从而产生副作用，因此，对患者给药时，在尽可能预防或减轻这样的副作用的同时 发挥充分的抗癌(抗恶性肿瘤)效果是非常重要的。 作为抗癌剂给药所伴随的副作用，可以列举血液障碍、消化器官障碍、神经障碍， 但是，作为最近的趋势，特别是急性或慢性的神经损害的问题正在增大。其原因在于发挥显 著抗癌效果的新抗癌剂所产生的主要副作用以神经障碍的情况居多、最近成为治疗重点的 多剂并用疗法造成的影响、以及对血液障碍和消化器官障碍的副作用的改善趋势。这样，现 在以癌症的化学疗法所伴随的副作用为中心的神经障碍，由于神经细胞难以再生，一旦发 生则没有有效的对策，从而呈现重病症状或成为不可逆的障碍，因此在治疗上成为重要的 问题。 抗癌剂给药所伴随的神经障碍，除了中枢神经系统、自律神经系统、末梢神经系统 以外，还有味觉等感觉器官。其中，发生频率相对较高的问题有剌痛或烧灼样痛等疼痛、四 肢末端的麻痹、灼热感等知觉异常、对冷剌激过敏等知觉过敏、感觉消失、感觉麻痹和不协 调感等感觉异常、知觉性运动失调、肌肉无力等末梢神经系统的神经障碍。该抗癌剂给药所 导致的末梢神经系统的病变主要是由轴索的变性引起的。轴索中的微管在细胞分裂时形成 纺锤体，在维持细胞器的配置和物质输送等细胞的正常机能中发挥重要作用，但是紫杉醇、 多西紫杉醇等紫杉烷类药剂、和长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨等长春花碱类药剂 通过以微管为目标发挥作用来抑制恶性肿瘤细胞的增殖，因此对正常的神经细胞的微管也 造成伤害，从而引起神经障碍。另外，奥沙利铂、卡铂、顺铂、奈达铂等铂制剂对神经细胞造 成直接损伤，结果继发轴索障碍。 但是，抗癌剂导致的神经毒性仍然是研究进展甚微的领域，神经障碍的预防和对 症方法还没有确立。因此，为了缓和麻痹症状而使用甲钴胺等维他命制剂和中药牛车肾气 丸，对疼痛使用抗抑郁药(盐酸阿米替林)、抗癫痫药(卡马西平)、抗心律失常药(盐酸美 西律)和肾上腺皮质类固醇等，但是目前为止，仍然没有确立根治或预防的方法，将药剂终 止或减量给药是控制住神经障碍的唯一确实的方法(但是，即使给药终止后，神经障碍有 时也会持续或者恶化)。由于如上所述的现状，临床上强烈要求一种对由抗癌剂导致的神经 障碍有效的预防或减轻剂。 关于作为本发明药剂的有效成分的痘菌病毒接种炎症组织提取物，公开有镇痛作用、镇静作用、抗应激作用、抗过敏作用(参照专利文献D、免疫促进作用、抗癌作用、肝 硬化抑制作用(参照专利文献2)、对特发性血小板减少性紫癜的治疗效果(参照专利文 献3)、对带状疱疹后神经痛、脑水肿、痴呆、脊髓小脑变性症等的治疗效果(参照专利文献 4)、对雷诺综合症、糖尿病性神经障碍、亚急性视神经脊髓病后遗症等的治疗效果(参照专 利文献5)、激肽释放酶产生抑制作用、末梢循环障碍改善作用(参照专利文献6)、骨萎縮 改善作用(参照专利文献7)、对败血症和内毒素性休克的治疗有效的一氧化氮产生抑制作 用(参照专利文献8)、对骨质疏松症的治疗效果(参照专利文献9)、基于Nef作用抑制作 用.和趋化因子产生抑制作用的艾滋病治疗效果(专利文献10、11)、对脑梗塞等缺血性疾 病的治疗效果(专利文献12)、对纤维肌痛症的治疗效果(专利文献13)、对感染症的治疗 效果(专利文献14)等。 特别是在专利文献5中，记载了作为本发明药剂的有效成分的痘菌病毒接种炎症 组织提取物改善由机体局部的血流障碍导致的陷入缺血状态的组织和脏器的机能障碍所 伴随产生的麻痹、疼痛、四肢冷感、知觉异常等症状。但是，专利文献5中公开的痘菌病毒接 种炎症组织提取物对麻痹、疼痛、四肢冷感、知觉异常等的改善作用是基于对血流障碍导致 的缺血状态的血流改善作用的效果，如本发明这样的由抗癌剂给药的副作用(细胞损伤) 产生的末梢神经障碍的预防或减轻作用，是该提取物基于完全不同的发病机理对末梢神经 障碍的效果，是迄今为止仍然未知的知识。即，该提取物对起因于抗癌剂给药导致的神经轴 索的微管障碍、神经轴索的脱髓鞘、对神经细胞的直接障碍等产生的末梢神经障碍的减轻
等有效仍然是未知的，至今也没有这样的医药用途相关的发表文章和报告。 专利文献1 :日本特开昭53-101515号公报 专利文献2 :日本特开昭55-87724号公报(第3、5、6页) 专利文献3 :日本特开平1-265028号公报(第1、2页) 专利文献4 :日本特开平1-319422号公报(第3、4页) 专利文献5 :日本特开平2-28119号公报(第3页) 专利文献6 :日本特开平7-97336号公报(第4页) 专利文献7 :日本特开平8-291077号公报 专利文献8 :日本特开平10-194978号公报 专利文献9 :日本特开平11-80005号公报(第2、3页) 专利文献10 :日本特开平11-139977号公报 专利文献11 :日本特开2000-336034号公报(第2、3页) 专利文献12 :日本特开2000-16942号公报 专利文献13 :国际公开W02004/039383号公报 专利文献14 :日本特开2004-300146号公报
发明内容
本发明的目的在于提供一种对作为抗癌剂给药时的副作用而产生的末梢神经障 碍的预防或减轻有效且安全性高的药剂。 本发明的发明者进行了深入研究，结果发现，痘菌病毒接种炎症组织提取物对由 抗癌剂导致的末梢神经障碍显示出优异的预防或减轻效果，从而完成了本发明。
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发明的效果 痘菌病毒接种炎症组织提取物具有预防或减轻由抗癌剂的给药引起的末梢神经 障碍的优异的药理作用。另外，含有该提取物作为有效成分的本发明的药剂是副作用等问 题少的安全的药剂，有用性极高。
图1是以von Frey试验研究本发明的痘菌病毒接种炎症组织提取物对由紫杉醇 给药导致产生的知觉过敏的减轻作用的结果。 图2是以丙酮试验研究本发明的痘菌病毒接种炎症组织提取物对由紫杉醇给药 导致产生的知觉异常的减轻作用的结果。 图3是使用PC12细胞研究本发明的痘菌病毒接种炎症组织提取物对由紫杉醇诱 发的神经突起伸展阻碍的抑制作用的结果。 图4是使用DRG细胞研究本发明的痘菌病毒接种炎症组织提取物对由紫杉醇诱发 的神经突起伸展阻碍的抑制作用的结果。 图5是以von Frey试验研究本发明的痘菌病毒接种炎症组织提取物对由奥沙利 铂导致产生的知觉过敏的减轻作用的结果。 图6是以冷板试验研究本发明的痘菌病毒接种炎症组织提取物对由奥沙利铂导 致产生的知觉过敏的减轻作用的结果。
具体实施例方式
本发明涉及含有痘菌病毒接种炎症组织提取物作为有效成分的、由抗癌剂导致的 末梢神经障碍的预防或减轻剂。本发明中的产生末梢神经障碍的抗癌剂，是特别对微管造 成损伤从而引起末梢神经障碍的抗癌剂。作为这样的药剂，能够列举紫杉醇、多西紫杉醇 等紫杉烷类药剂，和长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨等长春花碱类药剂。另外，作为 神经细胞的损伤引起轴索损伤从而导致末梢神经障碍的药剂，可以列举奥沙利铂、卡铂、顺 钼、奈达铂等铂制剂。作为这些抗癌剂导致的末梢神经障碍，有疼痛、麻痹、知觉异常、感觉 异常、知觉过敏等，因此，引起不能很好地握住物体、扣纽扣困难、步行障碍等运动失调和深 部腱反射降低等日常生活上的障碍。作为本发明药剂的预防、改善对象的由抗癌剂导致的 末梢神经障碍，不仅包括使用一类抗癌剂的单剂疗法产生的末梢神经障碍，还包括组合作 用机制不同的多个药剂而给药的多剂并用疗法、和以使作用机制不同的药剂能够发挥最大 有效性的方式将药剂的组合和给药方式优化的生化调节(biochemical modulation)的疗 法中产生的末梢神经障碍。 关于本发明的药剂中使用的痘菌病毒接种炎症组织提取物，对于接种了痘菌病毒 的炎症组织中产生的生理活性物质、将该物质从病态组织中提取的方法以及它们的药理活 性等，存在如上所述的各种报道(上述专利文献1至14等)。 另外，作为市售的医药品，存在痘菌病毒接种家兔炎症皮肤提取液制剂。该制剂， 如医疗用医用品集(2007年版，财团法人日本医药情报中心编辑发行)的2697-2699页中 的记载，是含有从接种了痘菌病毒的家兔的炎症皮肤组织提取分离的非蛋白性的活性物质 的药剂，确认适用于腰痛症、颈肩腕综合征、症状性神经痛、肩周炎、变形性关节炎、皮肤病(湿疹、皮炎、荨麻疹)伴有的瘙痒、过敏性鼻炎、亚急性视神经脊髓病后遗症的冷感_知觉异常-疼痛、带状疱疹后神经痛等，皮下、肌肉注射、静脉注射用的注射剂以及片剂作为医疗用医药品取得制造认可，并在市场上销售。 本发明的药剂中所使用的痘菌病毒接种炎症组织提取物，是从上述那样的痘菌病毒接种炎症组织提取的非蛋白性的机体功能调节物质，在上述的医疗药日本医药品集中也得到刊载的痘菌病毒接种家兔炎症皮肤组织提取液制剂已经取得医药品制造认可并在市场上销售，因而能够获得。另外，能够将在上述专利文献中记载的各种痘菌病毒接种炎症组织提取物作为本发明物质利用，它们的制造方法和优选的给药量等也在文献中得到说明。
本发明的药剂中使用的痘菌病毒接种炎症组织提取物，能够通过以下操作得到接种痘菌病毒，破碎发痘的炎症组织，添加提取溶剂，除去组织碎片之后，进行除蛋白处理，使其吸附在吸附剂中，接着洗脱有效成分。 痘菌病毒接种炎症组织提取物，例如，采用以下工序制造。 (a)接种痘菌病毒，采集发痘的兔、小鼠等的皮肤组织等，破碎发痘组织，加入水、苯酚水、生理食盐水或加酚甘油水等提取溶剂后，过滤或离心分离，由此得到提取液(滤液或上清液)。 (b)将上述提取液调整为酸性的pH并加热，进行除蛋白处理。接着，将除去蛋白的溶液调整为碱性并加热后，过滤或离心分离。
(c)将得到的滤液或上清液调整为酸性，使之吸附在活性碳、高岭土等吸附剂上。
(d)在上述吸附剂中加入水等提取溶剂，调整为碱性的pH，洗脱吸附成分，由此能够得到痘菌病毒接种炎症组织提取物。此后，根据希望，也能够适当将洗脱液在减压下蒸发干燥固体化或冷冻干燥而得到干固物。 作为用于接种痘菌病毒得到炎症组织的动物，可以使用兔、牛、马、绵羊、山羊、猴、
大鼠、小鼠等痘菌病毒感染的各种动物，作为炎症组织，优选兔的发痘皮肤组织。 采取这些炎症组织并破碎，加入其1至5倍量的提取溶剂，制成乳浊液。作为提取
溶剂，可以使用蒸馏水、生理食盐水、弱酸性至弱碱性的缓冲液等，也可以适当添加甘油等
稳定剂、苯酚等杀菌-防腐剂、氯化钠、氯化钾、氯化镁等盐类等。此时，也可以通过冷冻融
解、超声波、细胞膜溶解酶或表面活性剂等的处理破坏细胞组织而使提取容易进行。 将得到的乳状提取液通过过滤或离心分离等除去组织碎片后，进行除蛋白处理。
除蛋白操作可以采用通常进行的公知方法实施，可以适用加热处理、采用蛋白质变性剂，例如酸、碱、尿素、胍、丙酮等有机溶剂等的处理、等电点沉淀、盐析等方法。接着，采用除去不溶物的通常方法，例如，使用滤纸(纤维素、硝基纤维素等)、玻璃过滤器、硅藻土制品(Celite)、赛茨过滤板等的过滤、超滤、离心分离等，除去析出的不溶蛋白质。
使用盐酸、硫酸、氢溴酸等酸，将这样操作得到的含有有效成分的提取液调整为酸性，优选调整为pH3. 5至5. 5，进行向吸附剂吸附的操作。作为能够使用的吸附剂，可以列举活性碳、高岭土等，向提取液中添加吸附剂并搅拌，或者使提取液通过填充有吸附剂的柱，从而能够使有效成分吸附在该吸附剂上。当向提取液中添加吸附剂时，通过过滤或离心分离等除去溶液，能够得到吸附了有效成分的吸附剂。 为了使有效成分从吸附剂中洗脱(脱离)，向上述吸附剂中加入洗脱溶剂，在室温或适当加热下或者在搅拌下洗脱，以过滤或离心分离等通常的方法除去吸附剂，从而能够
6实现该洗脱。作为所使用的洗脱溶剂，可以使用碱性溶剂，例如，调整为碱性PH的水、甲醇、
乙醇、异丙醇等或者它们的适当的混合溶液，可以优选使用调整为PH9至12的水。 这样操作而得到的提取物(洗脱液)能够适当调制为作为制剂用原料和医药品制
剂优选的形态。例如，既可以将溶液的PH调整在中性附近制成制剂用原料，也可以通过浓
縮、稀释来符合所希望的浓度。还可以作为注射用制剂而加入氯化钠，调制与生理食盐水等
张的溶液。另外，也可以通过将这些溶液浓縮干固或冷冻干燥而调制为能够作为片剂等的
原料利用的固态物形态。 作为向患者给药的方法，除口服给药外，可以列举皮下、肌肉内、静脉内给药等，给药量可以根据痘菌病毒接种炎症组织提取物的种类适当设定。市售制剂认可的给药量，根据上述的医疗用医药品集(2697页)，作为医疗用医药品基本上表示为内服1日给药16NU、注射剂l日给药3.6至7. 2NU，但能够根据疾病种类、重伤程度、患者个人差异、给药方法、给药期间等适当增减(NU:神经妥乐平单位。所谓神经妥乐平单位，是使用疼痛阈值比正常动物低的慢性应激动物SART应激小鼠，按照Randall-Selitto法进行试验，得到的镇痛效力的ED5。值所规定的单位。1NU为ED5。值为100mg/kg时的神经妥乐平片剂的镇痛活性含有成分lmg所显示的活性。) 以下，列举痘菌病毒接种炎症组织提取物的制造方法的例子，以及该提取物的新的药理作用，即抗癌剂导致的神经障碍的预防或减轻作用相关的药理试验的结果，但是本发明不受这些实施例的记载的任何限制。
实施例 实施例1 在健康的成熟家兔皮肤上接种痘菌病毒，剥出发痘的皮肤，将其破碎，加入苯酚水。接着，将其加压过滤，以盐酸将得到的滤液调整为pH5后，以90 IO(TC加热处理30分钟。过滤除蛋白后，以氢氧化钠调整为pH9，再以90 IO(TC加热处理15分钟后过滤。以盐酸将滤液调整为约PH4. 5，加入2%的活性碳，搅拌2小时后离心分离。向采集的活性碳中加水，以氢氧化钠调整为PHIO，以6(TC搅拌1. 5小时后，离心分离过滤，得到上清液。再向采集的活性碳中加水，用氢氧化钠调整为pHll，以6(TC搅拌1. 5小时后，离心分离，得到上清液。合并两次得到的上清液，以盐酸中和，得到痘菌病毒接种家兔炎症皮肤提取物。在以下的药理试验中，适当调整为适合实验的浓度使用。
实施例2 在健康的成熟家兔皮肤上接种痘菌病毒使之感染后，无菌剥出发痘的皮肤，将其切碎后，加入加酚甘油水，以匀浆器磨碎成为乳状。接着，将其过滤，以盐酸将得到的滤液调整为弱酸性(pH4. 5 5. 5)后，以IO(TC加热处理并过滤。以氢氧化钠将滤液调整为弱碱性(pH8. 5 10. 0)，再以IO(TC加热处理后过滤。以盐酸将滤液调整为约pH4. 5，加入约1. 5%的活性碳，搅拌1 5小时后过滤。向滤取的活性碳中加入水，以氢氧化钠调整为pH9. 4 10，搅拌3 5小时后过滤，以盐酸中和滤液。
实施例3 在健康的成熟家兔皮肤上接种痘菌病毒，使之活化后，无菌剥出活化的皮肤，将其切碎，加入水，以匀浆器磨碎成为乳状物。接着，将其加压过滤，以盐酸将得到的滤液调整为pH5.0后，在流通蒸气下以IO(TC加热处理。过滤除蛋白后，以氢氧化钠调整为pH9. l，再以 IO(TC加热处理后过滤。以盐酸将滤液调整为pH4. 1，加入2%的活性碳，搅拌2小时后过滤。 再向滤液中加入5. 5%的活性碳，搅拌2小时后过滤。向最初滤取的活性碳中加水，以氢氧 化钠调整为pH9. 9，以6(TC搅拌1. 5小时后过滤。向最初的活性碳和其后的活性碳中加水， 以氢氧化钠调整为PHIO. 9，以6(TC搅拌1. 5小时后过滤。合并滤液，以盐酸中和后，以使用 分子量100的膜的电透析法进行脱盐处理，在减压下干燥固化。 接着，列举将上述实施例1中得到的本发明的痘菌病毒接种炎症组织提取物作为 被检药物使用的由抗癌剂导致的神经障碍的减轻作用相关的药理试验的结果的一个例子。 另外，在全部药理试验中，显著性差异检验使用Tukey-Karmer法。
药理试验1 :对紫杉醇导致的大鼠末梢神经障碍的作用 研究本发明的提取物(实施例1制造的痘菌病毒接种家兔炎症皮肤提取物)对将 抗癌剂紫杉醇给药时产生的由机械剌激引起的异常性疼痛(通常不引起疼痛的触觉剌激 引起的剧痛)等知觉过敏以及低温剌激时的知觉异常的效果。将本发明的提取物作为被检 药物向大鼠口服给药，进行以下的实验(von Frey test以及acetone test)。
(1)被检药物的给药 作为实验动物，使用7 8周龄的SD雄性大鼠，分成对照组、紫杉醇给药组、紫杉 醇以及被检药物给药组(紫杉醇+被检药物给药组)三组。对紫杉醇给药组，持续四周将 紫杉醇每周一次向腹腔内给药(6mg/kg)，共计实施4次。对紫杉醇+被检药物给药组，持续 四周将被检药物在紫杉醇即将给药前、给药1天后、给药2天后每周三次口服给药(200NU/ kg)，共计实施12次。另外，对对照组将紫杉醇给药时的溶剂(聚氧乙烯蓖麻油乙醇= 1 : 1)同样给药。
(2)von Frey试验 在以金属网形成底部的笼子中，放入上述(1)中的三组大鼠，使其驯化1小时后， 使用2、4、6、8、10、15g强度的von Frey细丝，对后肢内侧垂直地按压细丝直至弯曲，静止6 秒，左右各进行6次，测定回避反应的次数。并且，测定在从给药开始0、2、4、5、6周后进行。 以细丝强度(g)为x、回避反应次数为y做成散点图后，基于使用最小二乘法描绘的y = A/ (l+(e邓(-BX (x-C)))的S形曲线，将相当于6次(50%)反应的细丝强度作为50%反应阈 值求出，测试被检药物对异常性疼痛的效果。 在图1中表示上述试验结果的一个例子。紫杉醇给药组与对照组相比，50%反应
阈值显著降低。在紫杉醇中并用本发明的提取物给药的紫杉醇+被检药物给药组显示与对
照组同等程度的50%反应阈值，与紫杉醇给药组相比显著抑制50%反应阈值的降低。另
外，可以确认，紫杉醇+被检药物给药组中，结束被检药物的给药之后，也能持续维持对疼
痛阈值降低的抑制。从以上结果可以确认，本发明的提取物对紫杉醇导致的知觉过敏具有
优异的预防或改善作用。 (3)丙酮试验(Acetone test) 在以金属网形成底部的笼子中，放入上述(1)中的三组大鼠，使其驯化1小时后， 使用MicroSprayer(PENN-CENTURY公司生产)向后足以丙酮50 y L喷雾5秒钟，利用丙酮 气化时的冷却作用付与冷剌激。观察从喷雾开始40秒钟内大鼠的回避反应，记录直至出现 反应的时间(潜伏时间)。左右各进行三次测试，求出平均值。
在图2中表示上述试验结果的一个例子。对丙酮的冷剌激，紫杉醇给药组的潜伏 时间显著縮短，但是紫杉醇+被检药物给药组的潜伏时间恢复至与对照组基本相同的程 度。从以上结果可以确认，本发明的提取物对紫杉醇导致的知觉异常(对冷剌激的过敏)具 有优异的效果。另外，在热剌激的试验(Plantar test)中，未见紫杉醇给药组导致的潜伏时 间的縮短，在紫杉醇+被检药物给药组中，潜伏时间也与对照组和紫杉醇给药组相同。在抗 癌剂导致的末梢神经障碍的症状中，可以特征性地列举对冷剌激的过敏，本试验(Acetone test)也反映了这种症状，显示本发明的提取物对由抗癌剂导致的知觉过敏的优异的预防 或改善作用。 药理试验2 :in vitro试验体系中对紫杉醇导致的神经细胞变性的作用
以研究本发明的提取物对作为抗癌剂的紫杉醇处理引起的神经细胞变性的药理 作用为目的，使用作为神经分化_突起伸展的模型细胞株的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株 (PC12， Pheochromocytoma 12)以及脊髓后根神经节(dorsal root ganglia, DRG)的细胞
进行以下实验。 (1)细胞的培养 对PC12细胞使用含有5%胎牛血清、10 %马血清、100单位/ml青霉素-链霉素 (Gibco BRL公司生产)的RPMI1640培养基(MPBiomedicals公司生产)，在37°C 、5% C02 的孵箱中培养于80cm3培养瓶中。 另夕卜，DRG细胞从雄性Sprague-Dawley系大鼠中取出进行原代培养之后，将L4-5 的DRG 5节在胶原酶I (Funakoshi公司生产)以及分散酶I (三光纯药公司生产)中进行 处理，接种于24孔板上进行培养。并且，使用含有10%胎牛血清、100单位/ml青霉素-链 霉素(Gibco BRL公司生产)的Dulbecco' s modified Eagle' s培养基(DMEM培养基， MPBiomedicals公司生产)，在37°C、5% C02孵箱中进行培养。
(2)药物的处理以及神经突起长度的测定 将PC12细胞以10000cell/we11接种于24孔板中，3小时后以福斯高林10yM进 行处理使突起伸展，24小时后进行药物处理。另外，对DRG细胞培养一周，确认细胞的贴附 以及突起的伸展之后，进行药物处理。另外，药物为仅有紫杉醇10ng/mL的情况以及紫杉 醇10ng/mL并用各浓度的被检药物(0. 001、0. 003、0. 01、0. 03NU/mL)的情况分别进行处理。 药物处理24小时以及96小时以后，更换为含有各规定浓度的药物以及被检药物的新培养 基，168小时后以台盼蓝染色液染色区分死细胞，使用光学显微镜进行照相(X 200， 3视野/ 恥ll)。照相后，使用分析软件Image J测定活细胞的突起长度。 在图3和图4中表示上述实验结果的一个例子。在PC12细胞和DRG细胞的任一 种细胞中均可以确认，紫杉醇导致神经突起的伸展被阻碍，但是通过并用本发明的提取物 进行处理，可以浓度依赖性地显著抑制突起伸展的阻碍。特别是由于在作为神经细胞的DRG 细胞中确认上述效果，暗示本发明的提取物对末梢神经障碍的减轻作用中，对神经突起伸 展障碍的抑制是其作用机制之一。 药理试验3 :对奥沙利铂导致的大鼠末梢神经障碍的作用 采用与上述的药理试验1同样的方法研究本发明的提取物(实施例1制造的痘菌 病毒接种家兔炎症皮肤提取物)对将作为铂制剂的奥沙利铂给药时产生的机械剌激引起 的异常性疼痛等知觉过敏以及低温剌激中的知觉异常的效果。奥沙利铂也是最容易引起末梢神经障碍的药剂，强烈期望有预防、改善本障碍的方法。
(1)被检药物的给药 与药理试验1同样地将大鼠分为对照组、奥沙利铂给药组、奥沙利铂给药组与被 检药物给药组(奥沙利铂+被检药物给药组)三组。奥沙利铂(100mg冷冻干燥制剂)使 用5%的葡萄糖液溶解。对奥沙利铂给药组，持续四周每周2次将奥沙利铂在连续的两天中 向腹腔内给药(4mg/kg)，共计实施8次。对奥沙利铂+被检药物给药组，将被检药物在奥沙 利铂给药开始日、第二天、第三天，每周三次口服给药(200NU/kg)。被检药物在奥沙利铂即 将给药前给药，持续4周，共计实施12次。另外，对对照物将奥沙利铂给药中的溶剂(5%葡 萄糖液)同样给药(lmL/kg)。
(2)von Frey试验 与药理试验1(2)同样操作，每周从奥沙利铂给药开始日至第六天进行von Frey 试验，试验被检药物对异常性疼痛的效果。 在图5中表示上述试验结果的一个例子(第二周)。在上述实验的第二周，奥沙利 铂给药组与对照组相比，50%反应阈值显著降低。与此相对，在奥沙利铂中并用本发明的提 取物给药的奥沙利铂+被检药物给药组显示与对照组同等程度的50%反应阈值，与奥沙利 铂给药组相比显著抑制50%反应阈值的降低。从以上结果可以确认本发明的提取物对奥沙 利铂导致的知觉过敏具有优异的预防或改善作用。
(3)冷板试验(Cold plate test) 从奥沙利铂给药开始日至第五天进行冷板试验，检测被检药物对低温剌激时的 知觉异常的效果。试验前一天将上述(1)的三组大鼠置于冷板(Hot/Cold plate Cat. No. 35100Ugo Basile Biological ResearchAparatus公司生产)30分钟使其充分驯化。试 验当日将大鼠置于设定于fC的冷板上，在150秒钟期间观察大鼠的行动，测定直至后腿回 避的反应时间(潜伏时间)。并且，为了使行动观察排出试验实施者的先入之见，使大鼠各 组的给药药物无法判断地进行。试验进行三次进行平均，求出平均值、标准误差。多组之间 的比较，在单因素方差分析(oneiay AN0VA)后，将各组间的比较与其它药理试验同样地使 用Tukey-Kramer法进行检验。检验使用Stat View (Abacus Conc印ts， Berkeley, CA， USA)， 以不足5% (p < 0. 05)的临界值视为显著性差异。 在图6中表示上述试验结果的一个例子(第二周)。在上述试验的第二周，对冷板 的冷剌激，奥沙利铂给药组的潜伏时间显著縮短，但是奥沙利铂+被检药物给药组的潜伏 时间恢复至与对照组基本相同的程度。从以上结果可以确认，本发明的提取物对奥沙利铂 导致的知觉异常(对冷剌激的过敏)具有优异的效果。与紫杉醇同样，奥沙利铂导致的末 梢神经障碍的症状中可以特征性地列举对冷剌激的过敏，与上述药理试验1(3)的丙酮试 验的结果同样，本试验(冷板试验)也反映了这种症状，显示本发明的提取物对抗癌剂导致 的知觉过敏的优异的预防或改善作用。
产业上的可利用性 如从上述的药理试验结果可以明确的那样，本发明的痘菌病毒接种炎症组织提取 物，在以紫杉醇和奥沙利铂等抗癌剂的给药产生的、机械剌激引起的异常性疼痛等知觉过 敏和低温剌激时的知觉异常作为末梢神经障碍的指标而实施的大鼠口服给药试验中，可以 确认对末梢神经障碍具有优异的预防或减轻作用。另外，在紫杉醇诱发的神经突起伸展阻碍相关的in vitro试验中，也显示显著的抑制作用。因此，本发明的痘菌病毒接种炎症组 织提取物对紫杉醇和奥沙利铂等抗癌剂的给药引起的末梢神经障碍是有效的。市售的痘菌 病毒接种家兔炎症皮肤提取液制剂可以常年使用，作为安全性非常高的药剂被认可。这样， 本发明的痘菌病毒接种炎症组织提取物作为对四肢末端的麻痹等知觉异常和疼痛等知觉 过敏等由抗癌剂导致的末梢神经系统的神经障碍的预防或减轻剂有效，是基本没有副作用 且安全性极高、有用性很高的药剂。
权利要求
一种抗癌剂导致的末梢神经障碍的预防或减轻剂，其特征在于含有痘菌病毒接种炎症组织提取物作为有效成分。
2. 如权利要求1所述的末梢神经障碍的预防或减轻剂，其特征在于抗癌剂是微管抑 制剂。
3. 如权利要求2所述的末梢神经障碍的预防或减轻剂，其特征在于微管抑制剂是紫 杉烷类药剂。
4. 如权利要求3所述的末梢神经障碍的预防或减轻剂，其特征在于紫杉烷类药剂是 紫杉醇或多西紫杉醇。
5. 如权利要求3所述的末梢神经障碍的预防或减轻剂，其特征在于紫杉烷类药剂是紫杉醇。
6. 如权利要求2所述的末梢神经障碍的预防或减轻剂，其特征在于微管抑制剂是长 春花碱类药剂。
7. 如权利要求l所述的末梢神经障碍的预防或减轻剂，其特征在于抗癌剂是铂制剂。
8. 如权利要求7所述的末梢神经障碍的预防或减轻剂，其特征在于铂制剂是奥沙利 钼、卡铂、顺铂或奈达铂。
9. 如权利要求7所述的末梢神经障碍的预防或减轻剂，其特征在于铂制剂是奥沙利铂。
10. 如权利要求1 9中任一项所述的末梢神经障碍的预防或减轻剂，其特征在于抗癌剂导致的末梢神经障碍是急性或慢性的疼痛、麻痹、知觉异常、知觉过敏或感觉异常。
11. 如权利要求1 10中任一项所述的制剂，其特征在于炎症组织是兔子的皮肤组织。
12. 如权利要求1 11中任一项所述的末梢神经障碍的预防或减轻剂，其特征在于 其为口服剂。
13. 如权利要求1 11中任一项所述的末梢神经障碍的预防或减轻剂，其特征在于 其为注射剂。
全文摘要
本发明的目的在于，对作为抗癌剂给药时的副作用而产生的末梢神经障碍的预防或减轻，提供一种有效且安全性高的药剂。本发明涉及痘菌病毒接种炎症组织提取物的新型医药用途，涉及含有该提取物作为有效成分的末梢神经障碍的预防或减轻剂。将该提取物作为有效成分的本发明的药剂，作为由抗癌剂给药引起末梢神经障碍的预防或减轻剂，作为副作用小且安全性高的药剂而有用性高。
文档编号A61P25/02GK101790377SQ20088010431
公开日2010年7月28日 申请日期2008年8月28日 优先权日2007年8月31日
发明者伊藤善规, 大石了三, 江头伸昭 申请人:国立大学法人九州大学;日本脏器制药株式会社