水痘带状疱疹病毒-病毒样颗粒(vlp)和抗原的制作方法

专利名称：水痘带状疱疹病毒-病毒样颗粒(vlp)和抗原的制作方法
水痘带状疱疹病毒-病毒样颗粒(VLP)和抗原相关申请本申请要求2007年7月19日提交的美国申请60/950，707的优先权，本文出于所有目的通过提及而完整收录。对电子形式提交的文本文件的描述本文通过提及而完整收录与本文一起以电子形式提交的文本文件的内容计算机 可阅读形式拷贝的序列列表(文件名:N0VV 019 01W0SeqList_ST25. txt，2008年7月21日 记录的数据，文件大小106千字节)。
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水痘带状疱疹病毒(VZV)(也称为人疱疹病毒3(HHV_3))是病毒疱疹病毒科 (Herpesviridae)白勺 α(alphaherpesvirus subfamily)白勺。VZV i—禾中 有包膜病毒，具有约125，000个核苷酸的线性双链DNA基因组。它的基因组被二十面体核 壳体装入。位于核壳体和病毒包膜间间隔的间层是由病毒编码的蛋白质和酶构成的结构。 病毒包膜是从宿主细胞膜获得的，并且含有病毒编码的糖蛋白。人疱疹病毒中最小的VZV基因组编码至少70个可读框，其中8个编码推定的 糖蛋白(gE、gl、gB、gH、gK、gL、gC、和gM)，它们在病毒复制周期的不同步骤中发挥功能。 糖蛋白E(gE，也称为ORF 68)对于病毒复制是必要的(Mallory等(1997) J. Virol. 71 8279-8288 ；Mo等(2002) Virology 304 176-186)，并且是受感染细胞以及成熟病毒体中存 在的最丰富的糖蛋白(Grose, 2002, The predominant varicella-zoster virus gE and gl glycoproteincomplex,In Structure-function relationships of human pathogenic viruses, Holzenburg 禾口 Bogner (编)，Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York, NY)。糖蛋白I (gl，也称为ORF 67)在受感染的细胞中与gE形成复合物，这便于两种糖蛋 白质的胞吞，并将它们引导至反式高尔基体(trans-Golgi)，在那里获得最终的病毒包膜 (Olson 和 Grose (1998) J.Virol. 72 1542-1551)。糖蛋白 B(gB，也称为 ORF 31)(认为其在 病毒进入中发挥作用)结合中和性抗体，并且是第二普遍的糖蛋白(综述于Arvin(1996) Clin. Microbiol. Rev. 9 361-381) 0认为糖蛋白H(gH)具有便于病毒的细胞间传播的 融合功能。针对gE、gB、和gH的抗体在天然感染后和疫苗接种后是普遍的，并且已经显 示了在体外中和病毒感染性(Keller 等(1984) J. Virol. 52 293-297 ；Arvin 等(1986) J. Immunol. 137 1346-1351 ；Vafai 等(1988)J.Virol. 62 :2544_2551 ；Forghani 等(1990) J.Clin. Microbiol. 28 :2500_2506)。用VZV的初次感染引起禽痘(水痘)，其特征在于主要在面部和躯干上发生的极端 传染性的皮疹。初始感染后，病毒DNA可以整合入宿主神经元细胞的基因组中，并保持潜伏 达数年。病毒可以再活化，并在成人中引起疾病带状疱疹(shingles，herpes zoster) 0带 状疱疹产生的皮疹不同于初次感染过程中产生的。皮疹与严重的疼痛有关，并且可以导致 更严重的疾患，诸如疱疹后神经痛(post-herpetic neuralgia)。水痘疫苗(Varivax)是公众可获得的，并且已经在数个国家(包括美国)被添加 至推荐的儿童疫苗接种日程表。更浓的水痘疫苗(Zostavax)配制剂已得到食品药品管理局(Food and Drug Administration)批准用于在人群的老年成员中预防带状疱疹。虽然已经证明了水痘疫苗是安全的，但是有一些如下的证据，即由疫苗赋予的对VAV感染的免 疫随时间而减弱(Chaves等(2007) N. Engl. J. Med. 356 :1121_1129)。因此，经过疫苗接种的 个体仍会对带状疱疹，即由VZV引起的更为严重的疾患易感。另外，疫苗是由活的减毒病毒 制成的，这产生从疫苗接种形成禽痘或带状疱疹的个体的可能性。实际上，已经有数例报告 的似乎由疫苗中使用的毒株所引起的带状疱疹病例(Matsubara等(1995). Acta Paediatr Jpn 37 648-50 ；Hammerschlag 等(1989). J Infect Dis. 160 :535_7)。疫苗中存在的活的 减毒病毒还限制了疫苗在无免疫应答的个体中的应用。病毒样颗粒(virus like particle ；VLP)在结构上类似于成熟的病毒体，但是缺 乏病毒基因组而使其不可能发生病毒复制。VLP含有类似完整病毒的抗原性蛋白质，诸如壳 体和病毒包膜蛋白，并且也可以进行构建以在其表面上表达外来结构蛋白。因此，VLP可以 作为免疫原性组合物(例如疫苗)安全施用。此外，因为VLP类似天然病毒，而且是多价颗 粒结构，所以VLP可以比可溶性抗原更有效地诱导中和性抗体。先前已经从不同疱疹病毒科成员生成了表达糖蛋白或间层蛋白的VLP。由有包膜 的间层蛋白构成的轻颗粒(L颗粒)已经获自用单纯疱疹病毒1型(HSV-I)、马疱疹病毒 1 型(EHV-I)、或假狂犬病病毒感染的细胞(McLauchlan 和 Rixon (1992) J. Gen. Virol. 73 269-276 ；美国专利号5，384，122)。可以通过在存在病毒DNA复制抑制剂的情况中用HSV-I 感染细胞来生成不同类型的VLP，其称作病毒DNA复制前包膜颗粒(PREP)。PREP在结构上 类似L颗粒，但是含有不同的蛋白质组成(Dargan等(1995) J. Virol. 69 :4924_4932 ；美国 专利号5，994，116)。已经通过使用由酵母Ty反转录转座子编码的蛋白pi进行的技术来 生成表达来自VZV的gE蛋白的片段的杂合VLP (Garcia-Valcarcel等(1997) Vaccine 15 709-719 ；Welsh 等(1999) J. Med. Virol. 59 :78_83 ；美国专利号 6，060，064)。本发明描述了 自VZV衍生的新型抗原和VLP，其不需要酵母Ty蛋白的表达，也不需要用病毒自身进行感 染。这些新的VLP作为抗原性配制剂或疫苗制剂是有用的。发明概述本发明包含一种纯化的来自水痘带状疱疹病毒(VZV)的病毒样颗粒(VLP)，其包 含VZV gE蛋白，但是不包含VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述VZV-VLP进 一步包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自感染原的 另外的蛋白质来自病毒。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自真菌。 在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自寄生物。在另一个实施方案中， 所述来自感染原的另外的蛋白质来自细菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外 的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP基本上由VZV gE组成。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP衍生自包含克隆的gE VZV的重组表达系统。本发明还包括一种纯化的VZV-VLP，其包含VZV gE蛋白和另外的VZV蛋白，但是不 含VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gl (0RF 67)。在另 一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gM(0RF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的 VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所 述另外的VZV蛋白是间层蛋白(tegument protein) 0在另一个实施方案中，所述VZV-VLP 进一步包含来自感染原的另外的蛋白质。
本发明还提供一种生成VLP的方法，包括将编码VZV gE蛋白的载体转染入合适的 宿主细胞中，并在容许形成、分离和/或纯化VLP的条件下表达所述VZV gE蛋白，其中所 述宿主细胞不包含酵母Ty蛋白，并且所述VLP不包含VZV核酸。在一个实施方案中，所述 VZV-VLP进一步包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自 感染原的另外的蛋白质来自病毒。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质 来自真菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自寄生物。在另一个实 施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自细菌。在另一个实施方案中，所述来自感染 原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP基 本上由VZV gE组成。在另一个实施方案中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。在另一个实施 方案中，所述宿主细胞是禽类细胞。在另一个实施方案中，所述宿主细胞是两栖动物细胞。 在另一个实施方案中，所述宿主细胞是酵母细胞。在一个优选的实施方案中，所述宿主细胞 是昆虫细胞。在另一个优选的实施方案中，所述昆虫细胞是Sf9细胞。本发明还包括一种生成VLP的方法，包括将编码VZV gE蛋白的载体转染入合适的 宿主细胞中，并在容许形成、分离和/或纯化VLP的条件下表达所述VZV gE蛋白，其中所述 宿主细胞不包含酵母Ty蛋白，并且所述VLP不包含VZV核酸，且其中所述VLP进一步包含 另外的VZV蛋白。在一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gl (0RF 67)。在另一个实施 方案中，所述另外的VZV蛋白是gM(0RF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白 是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述另外 的VZV蛋白是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述VLP进一步包含来自感染原的另外的 蛋白质。本发明还包含一种抗原性配制剂，其包含VZV-VLP，其中所述VLP-VLP包含VZV gE且其中所述VLP不包含酵母Ty蛋白，并且不包含VZV核酸。在一个实施方案中，所述 VZV-VLP进一步包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自 感染原的另外的蛋白质来自病毒。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质 来自真菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自寄生物。在另一个 实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自细菌。在另一个实施方案中，所述来自感 染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP 基本上由VZV gE组成。在另一个实施方案中，所述抗原性配制剂进一步包含佐剂。本发明还包含一种抗原性配制剂，其包含如下的VZV-VLP，所述VZV-VLP包含VZV gE蛋白和另外的VZV蛋白，但是不含VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述另 外的VZV蛋白是gl (0RF 67)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gM(0RF 50)。 在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋 白是gB。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是间层蛋白。在另一个实施方案中，所 述VZV-VLP进一步包含来自感染原的另外的蛋白质。本发明还包括一种疫苗，其包含VZV-VLP，其中所述VZV-VLP包含VZVgE且其中所述VLP不包含酵母Ty蛋白并且不包含VZV核酸。在一个实施方案中，所述VZV-VLP进一步 包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外 的蛋白质来自病毒。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自真菌。在 另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自寄生物。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自细菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的 蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP基本上由VZV gE组成。在另一个实施方案中，所述疫苗进一步包含佐剂。本发明还包括一种疫苗，其包含如下的VZV-VLP，其包含VZV gE蛋白和另外的VZV 蛋白，但是不含VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gl (0RF 67)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gM(0RF 50)。在另一个实施方案中，所 述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施 方案中，所述另外的VZV蛋白是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP进一步包含 来自感染原的另外的蛋白质。本发明还包括一种在人或动物中引发针对感染的保护性免疫的方法，包括给所述 人或动物施用包含VZV-VLP的抗原性配制剂或疫苗，其中所述VLP-VLP包含VZV gE且其中 所述VLP不包含酵母Ty蛋白，并且不包含VZV核酸。在一个实施方案中，所述VZV-VLP进 一步包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自感染原的 另外的蛋白质来自病毒。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自真菌。 在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自寄生物。在另一个实施方案中， 所述来自感染原的另外的蛋白质来自细菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外 的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP基本上由VZV gE组成。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP衍生自包含克隆的gE VZV的重组表达系统。本发明还包括一种在人或动物中引发针对感染的保护性免疫的方法，包括给所述 人或动物施用包含VZV-VLP的抗原性配制剂或疫苗，其中所述VLP-VLP包含VZV gE和另外 的VZV蛋白，但是不含VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白 是gI(0RF 67)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gM(0RF 50)。在另一个实施 方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在 另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP 进一步包含来自感染原的另外的蛋白质。附图简述

图1描绘了 VZV表达构建体的SDS PAGE和两次Western印迹。图2描绘了对gE VLP S400凝胶过滤的颗粒分析。图3描绘了㈧含有在AcMNPV杆状病毒多角体蛋白启动子(PolH)的转录控制下的IE62(ICP4)间层基因的pFastBacl质粒的图示。(B)描绘了用考马斯蓝染色的 SDS-PAGE (左侧小图)和针对抗IE62单克隆抗体的Western印迹(右侧小图)。第1道.表 达重组IE62的总体受感染的Sf9细胞的样品，第2道.勻浆化并通过离心除去细胞碎片后 的细胞溶胞物，第3道.TMAE离子交换柱的流过物，第4道和第5道.含有IE62的TMAE级 分，第6道.加载至Fractogel阳离子交换硫酸盐(SO3)柱上的样品，第7道.S03-柱流过 物，第8道.纯化的IE62洗脱物。图4描绘了(A)用于构建在Sf9细胞中表达VZV gE和gl的串联重组杆状病毒的 PFastBacl转移载体。gE和gl基因在杆状病毒多角体蛋白启动子(PolH)的转录控制下。 gl具有其天然的、可切割的信号肽，而gE用来自杆状病毒包膜糖蛋白GP64的信号序列替 换。(B)描绘了用考马斯蓝染色的SDS-PAGE凝胶(左侧小图)和针对抗gE的Western印迹(中间小图)、或针对抗完整病毒VZV的Western印迹(右侧小图)。第1道.S200凝胶 过滤柱的加载物和第2道.出S200柱的最终的纯化的gE/gl异二聚物。抗gE识别分泌的 gE，其中主要的蛋白质是预测质量为约60KDa的gE(中间小图)，并且多克隆抗体与30KDa gl起反应(右侧小图)。图5描绘了(A)含有C末端截短的VZV gE基因的pcDNA3. 1质粒(Invitrogen)。(B)描绘了用考马斯蓝染色的SDS-PAGE (左侧小图)和针对抗gE单克隆抗体的Western印 迹(右侧小图)。在第1道中的是蛋白质大小标志物，第2道是加载的来自用质粒DNA转 染后4天的HEK293细胞的2 μ 1组织培养物上清液，而凝胶的第3道是出凝集素亲和柱的 4 μ 1纯化的gE。发明详述本发明的VLP和制备VLP的方法如本文中所使用的，术语“病毒样颗粒”(VLP)指在至少一种属性上类似病毒但是 已经证明其没有感染性的结构。依照本发明的病毒样颗粒不携带编码所述病毒样颗粒的蛋 白质的遗传信息。一般而言，病毒样颗粒缺乏病毒基因组，并且不能复制。另外，病毒样颗 粒通常可以通过异源表达来大量生产，而且可以容易地纯化。该术语还指通过下文所描述 的方法生成的任何亚病毒颗粒。此术语包括可以通过下文所描述的或本领域中已知的任何 方法纯化的蛋白质聚集物。如本文中所使用的，术语“抗原性配制剂”或“抗原性组合物”指在给脊椎动物(例 如哺乳动物)施用时会诱导免疫应答的制备物。如本文中所使用的，术语“纯化的VLP ”指本发明的VLP制备物，其至少50%、55%、 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或更大地不含混合物 中其它分子(不包括溶剂在内)。例如，本发明的VLP可以基本上没有与制备本发明的VLP 有关的其它病毒、蛋白质、脂质、和碳水化合物。该术语还涵盖已经从具有污染的VZV基因 组DNA或其部分的VLP分离的VLP。如本文中所使用的，术语“嵌合VLP”指含有来自至少两种不同感染原的蛋白质 (异源蛋白质)或其部分的VLP。通常，所述蛋白质之一衍生自可以驱动VLP自宿主细胞形 成的病毒(例如VZV gE)，而另一种蛋白质来自异源感染原。术语“感染原”指在脊椎动物中引起感染的微生物。感染原可以是病毒、真菌、细 菌和/或寄生物。可以在VZV VLP的表面上表达的蛋白质可以源自病毒、真菌、细菌和/或 寄生物。源自病毒、真菌、细菌和/或寄生物的蛋白质可以在脊椎动物中诱导免疫应答(细 胞的和/或体液的)，其会在所述脊椎动物中预防、治疗、控制(manage)和/或改善传染病。如本文中所使用的，术语“疫苗”指含有本发明VLP的配制剂，其处于能够向脊椎 动物施用的形式，而且其诱导的保护性免疫应答足以诱导免疫以预防和/或改善感染和/ 或减轻至少一种感染症状和/或增强另一剂VLP的功效。如本文中所使用的，术语“有效量”指实现想要的生物学效应所必需的或足以实现 想要的生物学效应的VLP的量。组合物的有效量将是达到选定结果的量，并且该量可以由 本领域技术人员作为常规事项确定。例如，用于预防、治疗和/或改善感染的有效量可以是 引起免疫系统活化所必需的量，其导致在暴露于本发明VLP时形成抗原特异性免疫应答。 该术语也是“足够量”的同义词。
如本文中所使用的，术语“保护性免疫”或“保护性免疫应答”指由脊椎动物(例 如人)展现出的针对感染原的免疫或引发针对感染原的免疫应答，其阻止或改善感染或减 少至少一种其症状。如本文中所使用的，术语“脊椎动物”或“受试者”或“患者”指脊椎动物亚门 (subphylum cordata)的任何成员，包括但不限于人和其它灵长类，包括非人灵长类，诸如 黑獲獲(cgunoabzee)禾口其它猿类(apes)禾口猴物禾中(monkey species)。家畜(farm animal) (诸如牛、绵羊、猪、山羊和马)；家养哺乳动物(domestic mammal)(诸如狗和猫)；实验动 物(包括啮齿动物，诸如小鼠、大鼠(包括棉鼠)和豚鼠)；鸟类(包括家禽、野鸟和猎禽， 诸如鸡、火鸡及其它鹑鸡类鸟类、鸭、鹅)等也是非限制性例子。该定义中包括术语“哺乳动 物”和“动物”。意图涵盖成体和新生个体两者。发明人已经发现了，在细胞中表达VZV gE蛋白诱导VLP形成。如此，本发明包含通 过表达VZV gE形成的VZV VLP。发明人还已经开发了来自表达gE和至少一种另外的VZV 蛋白的宿主细胞的新型VLP。另外，这些VLP还可以表达来自其它感染原的抗原性蛋白质。 本发明还涵盖制备和施用由本发明的VZV VLP构成的“抗原性配制剂”的方法。本发明还 涵盖制备和施用由本发明的VZV VLP构成的疫苗的方法。此新型疫苗配制剂克服了使用目 前可用的由活的减毒病毒制成的疫苗遇到的一些问题和忧虑。本发明包含包含VZV gE的VZV VLP，其中所述VZV VLP不包含VZV核酸或酵母Ty 蛋白。在另一个实施方案中，本发明的VLP基本上由gE蛋白组成。在另一个实施方案中，所 述VZV VLP不包含VZV壳体蛋白(例如ORF 20、0RF40、0RF 41)。在另一个实施方案中，本 发明的VLP包含至少一种掺入VLP中的另外的VZV蛋白。在另一个实施方案中，所述另外 的VZV蛋白包含gl (0RF 67)蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gM(0RF 50)蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另 外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含至少一种间层蛋白。 在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gl、gM、gH、gB或间层蛋白的组合。本发明的另一个实施方案包含嵌合VZV VLP，其包含VZV gE蛋白和至少一种来自 另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白 质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施 方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另 一种感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染 原的蛋白质在VLP的表面上表达。 另一种类型的本发明嵌合VLP还包含如下的VLP，其包含VZV gE蛋白、至少一种来 自VZV的其它蛋白质、和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中，所述来 自VZV的其它蛋白质是gl (0RF 67)。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是 gM(0RF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述 另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是间层蛋白。在 另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白质。在另一个实施方案中， 所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感 染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是来 自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。可以衍生所述感染原蛋白质的病毒的非限制性例子如下流感(甲型和乙型，例如HA和/或NA)、冠状病毒(例如SARS)、甲型、乙型、丙型、丁型和戊3型肝炎病毒、 人免疫缺陷病毒(HIV)、疱疹病毒1、2、6和7，巨细胞病毒、水痘带状疱疹、乳头瘤病毒、 埃巴病毒(Epstein Barr virus)、腺病毒、布尼亚病毒(bunya virus)(例如汉坦病毒 (hanta virus))、柯萨奇病毒(coxsakievirus)、小 RNA 病毒(pi coma virus)、轮状病毒、 鼻病毒、风疹病毒(rubella virus)、腮腺炎病毒、麻疹病毒(measles virus)、风疹病毒 (Rubella virus)、脊髓灰质炎病毒(多种类型)、腺病毒(多种类型)、副流感病毒(多 种类型)、禽流感(各种类型)、运输热病毒(shipping fever virus)、西方和东方马脑 W"·炎(Western andEastern equine encephalomyelitis) > H ^lSf WM iit (Japanese enc印halomyelitis)、禽痘、狂犬病病毒、脑慢病毒(slow brain virus)、劳斯肉瘤病毒 (rous sarcomavirus)、乳多空病毒禾斗(Papovaviridae)、细小病毒禾斗(Parvoviridae)、 小 RNA 病毒科(Picomaviridae)、痘病毒科(Poxviridae)(诸如天花(Smallpox)或 牛痘(Vaccinia))、呼肠孤病毒科(Reoviridae)(例如轮状病毒)、逆转录病毒科 (Retroviridae) (HTLV-I、HTLV-II、慢病毒属(Lentivirus))、披膜病毒科(Togaviridae) (例如风疹病毒属(Rubivirus))、新城疫病毒、西尼罗河热病毒(West Nile fever virus)、 蜱媒脑炎(Tick borne enc印halitis)、黄热病、屈曲病毒(chikungunya virus)、呼吸道合 胞病毒、和登革病毒(所有血清型)。在另一个实施方案中，来自病毒的特定蛋白质可以包含来自流感病毒(包括禽 流感病毒)的HA和/或NA、来自冠状病毒的S蛋白、来自HIV的gpl60、gpl40和/或gp41， 来自呼吸道合胞病毒的F或G蛋白、来自黄热病毒、登革病毒(所有血清型)或任何黄病毒 (flavivirus)的E和preM/M。还包括的是能在脊椎动物中诱导免疫应答(细胞的和/或 体液的)的来自病毒的任何蛋白质，其可以预防、治疗、控制和/或改善所述脊椎动物中的 传染病。可以从中衍生所述感染原蛋白质的细菌的非限制性例子可以从下列各项衍生百 日咳杆菌(B. pertussis)、波摩那钩端螺旋体(Leptospira Pomona)、甲型和乙型副伤寒沙 门氏菌(S. paratyphi A and B)、白喉棒杆菌(C. diphtheriae)、破伤风梭菌(C. tetani)、 肉毒梭菌(C.botulinum)、产气荚膜梭菌(C. perfringens)、费氏梭菌(C. feseri)及其它 气性坏疽细菌，炭疽芽孢杆菌(B. anthracis)、鼠疫巴斯德氏菌(P. pestis)、多杀巴斯德 氏菌(P. multocida)、脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitides)、淋病奈瑟氏球菌 (N. gonorrheae)、流感嗜血菌(Hemophilus influenzae)、方文线菌属(Actinomyces)(例 如诺卡氏菌属(Norcardia))、不动杆菌属(Acinetobacter)、芽胞杆菌科(Bacillaceae) (例如炭疽杆菌(Bacillus anthracis))、拟杆菌属(Bacteroides)(例如脆弱拟杆菌 (Bacteroides fragilis))、芽生菌病(Blastomycosis)、博德特氏菌属(Bordetella)、 疏螺旋体属(Borrelia)(例如布氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi))、布鲁氏菌 属(Brucella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、衣原体属(Chlamydia)、球孢子菌属 (Coccidioides)、棒杆菌属(Corynebacterium)(例如白喉棒杆菌(Corynebacterium diptheriae))、大肠杆菌(E. coli)(例如肠产毒性大肠杆菌和肠出血性大肠杆菌)、 肠杆菌属(Enterobacter)(例如产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes))、肠杆菌禾斗(Enterobacteriaceae)(克雷伯氏菌属(Klebsiella)、沙门氏菌属(Salmonella)(例 如伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis))、沙 雷氏菌属(Serratia)、耶尔森菌属(Yersinia)、志贺氏菌属(Shigella))、丹毒丝菌属 (Erysipelothrix)、嗜血杆菌属(Haemophilus)(例如乙型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type B))、螺杆菌属(Helicobacter)、军团菌属(Legionella)(例如侵肺军 团菌(Legionellapneumophila))、钩端螺方宠体属(L印tospira)、禾丨J其jf特菌属(Listeria) (例如单核细胞增生利斯特菌(Listeria monocytogenes))、支原体属(Mycoplasma)、分枝 杆菌属(Mycobacterium)(例如麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)和结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis))、弧菌属(Vibrio)(例如霍舌L弧菌(Vibriocholerae))、 巴斯德氏菌属(Pasteurellacea)、变形菌属(Proteus)、假单胞菌属(Pseudomonas)(例 如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))、立克次氏体科(Rickettsiaceae)、螺体属 (Spirochetes)(例如密螺旋体(Treponema spp.)、钩端螺旋体(Leptospira spp.)、疏螺旋 体(Borrelia spp.))、志贺氏菌(Shigella spp.)、脑膜炎球菌属(Meningiococcus)、肺炎 球菌属(Pneumococcus)禾口链球菌属(Streptococcus)(例如月市炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)和A组、B组、和C组链球菌)、尿枝原体属(Ureaplasmas)、苍白密螺旋 体(Tr印onemapollidum)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、溶血巴斯德氏 菌(Pasteurellahaemolytica)、白喉棒杆菌类毒素(Corynebacterium diptheriae toxoid)、脑膜炎球菌多糖(Meningococcal polysaccharide)、百日咳博德特氏菌 (Bordetellapertusis)、月市炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、破伤风梭菌类毒素 (Clostridium tetani toxoid)、禾口牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)。可以从中衍生所述感染原蛋白质的寄生物的非限制性例子如下利什曼病 (leishmaniasis)(墨西哥热带利什曼原虫(Leishmania tropica mexicana)、热带利 什曼原虫(Leishmania tropica)、硕大利什曼原虫(Leishmania major)、±矣塞俄比亚 禾1JffMJI^ii (Leishmania aethiopica) > EiM^'Jff MHi ife (Leishmaniabraziliensis) > 杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)、婴儿利什曼原虫(Leishmania infantum)、 恰氏利什曼原虫(Leishmania chagasi))、锥虫病(trypanosomiasis)(冈比亚布氏 HI 虫(Trypanosoma brucei gambiense)、罗■西亚 ^f1[？氏 Ifl 虫(Trypanosoma brucei rhodesiense))、弓形体病(toxoplasmosis)(刚地弓形体(Toxoplasma gondii))、 血吸虫病(schistosomiasis) ( ±矣及血吸虫(Schistosomahaematobium)、日本血吸 虫(Schistosoma japonicum)、曼森氏血吸虫(Schistosoma mansoni)、湄公血吸虫 (Schistosoma mekongi)、间插血吸虫(Schistosoma intercalatum))、疱疾(间日疱原虫 (Plasmodium virax)、恶性疱原虫(Plasmodium falciparium)、三曰疱原虫(Plasmodium malariae)和卵形疟原虫(Plasmodium ovale))、阿米巴病(溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica))、巴贝西虫病(Babesiosis)(田鼠巴贝西虫(Babesiosis microti))、 Kt ？fe ^ ^ ^！ (Cryptosporidiosis) ( W Kt ？fe ^ ^ (Cryptosporidium parvum)
阿米巴病(Dientamoebiasis)(脆弱双核阿米巴(Dientamoeba fragilis))、贾第虫病 (Giardiasis)(兰氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblis))、蠕虫病(Helminthiasis)和毛滴虫 属(Trichomonas)(阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis))。可以衍生所述感染原蛋白质的真菌的非限制性例子来自下组犁头霉属(Absidia)(例如伞状犁头霉(Absidia corymbifera))、阿耶罗菌属 (Ajellomyces)(例如荚膜阿耶罗菌(Ajellomyces capsulatus)、皮炎组织胞 浆菌(Ajellomycesdermatitidis))、节皮菌属(Arthroderma)(例如苯黑末节 皮菌(Arthrodermabenhamiae)、粉节皮菌(Arthroderma fulvum)、石膏样节皮 菌(Arthrodermagypseum)、内弯节皮菌(Arthroderma incurvatum)、太田节皮 菌(Arthrodermaotae)、万博节皮菌(Arthroderma vanbreuseghemii))、曲霉 属(Aspergillus)(例如烟曲霄(Aspergillus fumigatus)、黑曲霄(Aspergillus niger))、念珠菌属(Candida)(例如白念珠菌(Candida albicans)、白念珠菌星状变 /[本(Candida albicans var. stellatoidea)、者P # i _ 胃(Candida dublinensis)、 光滑念珠菌(Candidaglabrata)、吉利蒙念珠菌(Candida guilliermondii)(季也 蒙毕赤酵母(Pichiaguilliermondii))、克鲁斯念珠菌(Candida krusei)(东方伊 萨酵母(Issatschenkiaorientalis))、近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)、 菌膜滑念珠菌(Candidapelliculosa)(异常毕赤酵母(Pichia anomala))、热带 念珠菌(Candidatropicalis))、球孢子菌属(Coccidioides)(例如粗球孢子菌 (Coccidioidesimmitis))、隐球菌属(Cryptococcus)(例如新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)(新型线黑粉菌(Filobasidiella neoformans))、组织胞浆菌属 (Histoplasma)(例如夹膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)(荚膜阿耶罗菌)、小孢 子菌属(Microsporum)(例如犬小孢子菌(Microsporum canis)(太田节皮菌)、黄褐色小孢 子菌(Microsporum fulvum)(粉节皮菌)、石膏样小孢子菌(Microsporumgypseum)、毕赤酵 母属(Genus Pichia)(例如异常毕赤酵母、季也蒙毕赤酵母)、肺囊虫(Pneumocystis)(例 如耶氏肺孢子虫(Pneumocystis jirovecii))、隐孢子虫属(Cryptosporidium)、糠秕马拉 色菌(Malassezia furfur)、副球孢子菌(Paracoccidiodes)。上文的目录意图是例示性的， 并且决不意图将发明限制于那些具体的细菌、病毒、真菌或寄生物生物体。本发明还涵盖本发明VLP之上或之中所表达的所述糖蛋白(或蛋白质)的变体 (包括所述嵌合物)。所述变体可以含有在组分蛋白质的氨基酸序列中的变化。术语“变 体”就多肽而言指相对于参照序列改变了一个或多个氨基酸的氨基酸序列。变体可以具有 “保守的”变化，其中用于替代的氨基酸具有类似的结构或化学特性，例如用异亮氨酸替换 亮氨酸。或者，变体可以具有“非保守的”变化，例如用色氨酸替换甘氨酸。类似的次要变 化还可以包括氨基酸缺失和/或插入。使用本领域公知的计算机程序，例如DNASTAR软件， 可以找到确定哪些氨基酸残基可供取代、插入或缺失而不消除生物学活性或免疫学活性的 指导。描述可应用于本发明的分子生物学技术(诸如克隆、突变、细胞培养等)的通 用教禾斗书包括 Berger 禾口 Kimmel，Guide to Molecular Cloning Techniques，Methods 于 Enzymology 卷 152Academic Press，Inc.，San Diego, Calif. (Berger) ；Sambrook 等，Molecular Cloning-A Laboratory Manual(第 3 片反)，卷 1-3，ColdSpring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor，N. Y.，2000( ‘‘Sambrook，，)禾口 Current Protocols in Molecular Biology, F. M. Ausubel 等编，Current Protocols，ajoint venture between Greene Publishing Associates，Inc. and John Wiley & Sons，Inc.，( ‘‘Ausubel，，)。 这些教科书描述了诱变、载体的应用、启动子和许多其它相关的主题，所述主题涉及例如VZV的gE、gl、gM、gH、gB或间层蛋白的克隆和突变等。如此，本发明还涵盖使用已知的 蛋白质工程和重组DNA技术的方法来改进或改变在本发明VLP之上或之中表达的蛋白 质的特性。可以使用多种类型的诱变来产生和/或分离编码蛋白质分子的变体核酸和 /或进一步修饰/突变本发明VLP之中或之上的蛋白质。它们包括但不限于定点诱变、 随机点诱变、同源重组(DNA改组)、使用含尿嘧啶模板进行的诱变、寡核苷酸指导的诱变 (oligonucleotide-directed mutagenesis)、硫代磷酸酯修饰的DNA诱变、使用缺口双链体 DNA的诱变等。其它合适的方法包括点错配修复(pointmismatch repair)、使用修复缺陷的 宿主株的诱变，限制选择和限制纯化、缺失诱变、通过全基因合成的诱变、双链断裂修复等。克隆本发明VZV蛋白的方法是本领域已知的。例如，可以从感染了 VZV病毒的细 胞提取多聚腺苷酸化mRNA，通过RT-PCR从中分离出编码特定VZV蛋白的基因。所得的产物 基因可以作为DNA插入物克隆入载体中。术语“载体”指可用于扩增(propagate)核酸和 /或在生物体、细胞、或细胞组分之间转移核酸的手段。载体包括自主复制或可整合入宿主 细胞的染色体中的质粒、病毒、噬菌体、原病毒、噬菌粒、转座子、人工染色体等。载体还可以 是非自主复制性的裸RNA多核苷酸、裸DNA多核苷酸、在同一条链内由DNA和RNA两者组成 的多核苷酸、聚赖氨酸缀合的DNA或RNA、肽缀合的DNA或RNA、脂质体缀合的DNA等。在许 多但不是所有的常见实施方案中，本发明的载体是质粒。如此，本发明包括克隆入表达载体的编码蛋白质的核苷酸，所述载体可在细胞中 表达，诱导本发明嵌合VLP的形成。“表达载体”是能够促进掺入其中的核酸的表达以及复 制的载体，诸如质粒。通常，要表达的核酸与启动子和/或增强子“可操作连接”，并受该启 动子和/或增强子的转录调节控制。在一个实施方案中，所述核苷酸编码VZV gE(0RF 68) 蛋白。在另一个实施方案中，所述载体包含如下的核苷酸，其编码VZV gE和至少一种另外 的来自感染源的蛋白。在另一个实施方案中，所述载体包含如下的核苷酸，其编码VZV gE 蛋白和gI(0RF 67)、gM(0RF 50)、gH、gB和/或间层VZV蛋白。在另一个实施方案中，所述 表达载体是杆状病毒载体。在本发明的一些实施方案中，蛋白质可以包含含有如下变化的突变，所述变化产 生沉默的取代、添加或缺失，但是不改变所编码蛋白质的特性或活性或者生成所述蛋白质 的方式。可以出于多种原因而产生核苷酸变体，例如为了针对特定宿主优化密码子表达 (将人mRNA中的密码子改变为昆虫细胞诸如Sf9细胞优选的那些密码子)。另外，可对核苷酸测序以确保正确的编码区得到克隆，且不含有任何不想要的突 变。可以将所述核苷酸亚克隆入表达载体(例如杆状病毒)中用于在任意细胞中表达。上 文仅仅是如何能够克隆VZV病毒蛋白的一个例子。本发明技术人员应当理解的是，其它方 法也是可用和可能的。本发明还提供了如下的构建体和/或载体，其包含编码VZV蛋白(包括gE、gI、gM、 gH、gB、间层蛋白、或其部分)的VZV核苷酸。所述载体可以是例如噬菌体、质粒、病毒、或逆 转录病毒载体。包含VZV基因(包括§6^1、811、811、88、间层蛋白、或其部分)的构建体和 /或载体应当与合适的启动子可操作连接，诸如AcMNPV多角体蛋白启动子(或其它杆状病 毒)、X噬菌体PL启动子、大肠杆菌lac、phoA和tac启动子、SV40早期和晚期启动子、和 逆转录病毒LTR的启动子是非限制性例子。根据想要的宿主细胞和/或表达率，本领域技 术人员会知道其它合适的启动子。表达构建体将进一步含有转录起始位点、终止位点、以及被转录区中用于翻译的核糖体结合位点。所述构建体所表达的转录物的编码部分优选在要 翻译的多肽的起始处包含翻译起始密码子，而在该多肽末尾处的合适位置上含有终止密码 子。表达载体将优选包含至少一种选择标志物。此类标志物包括用于真核细胞培养的 二氢叶酸还原酶、G418或新霉素抗性，以及用于培养大肠杆菌和其它细菌的四环素、卡那霉 素或氨苄青霉素抗性基因。优选的载体包括病毒载体，诸如杆状病毒、痘病毒(例如牛痘病 毒、禽痘病毒(avipox virus)、金丝雀痘病毒、禽痘病毒(fowlpox virus)、浣熊痘病毒、猪 痘病毒等)、腺病毒(例如犬腺病毒)、疱疹病毒和逆转录病毒。可与本发明一起使用的其它 载体包括用于细菌的载体，包括pQE70、pQE60和pQE_9，pBluescript载体、Phagescript载 体、pNH8A、pNH16a、pNH18A、pNH46A、ptrc99a、pKK223_3、pKK233_3、pDR540、pRIT5。优选的 真核载体是 pFastBacl pWINEO、pSV2CAT、pOG44、pXTl 和 pSG、pSVK3、pBPV、pMSG、和 pSVL。 其它合适的载体会是本领域技术人员显而易见的。接下来，上文所提及的重组构建体可以用来转染、感染、或转化入真核细胞和/或 原核细胞中，并且可以表达VZV蛋白，包括gE、gl、gM、gH、gB、间层蛋白或其部分。如此，本 发明提供了包含载体(或多个载体)的宿主细胞，所述载体含有的核酸编码VZV蛋白，包括 gE、gl、gM、gH、gB、间层蛋白或其部分，并且允许在容许形成VLP的条件下在所述宿主细胞 中表达VZV基因，包括gE、gl、gM、gH、gB、间层蛋白或其部分。真核宿主细胞包括酵母、昆虫、两栖动物、禽类、植物、秀丽隐杆线虫(C. elegans) (或线虫)和哺乳动物宿主细胞。昆虫细胞的非限制性例子有草地夜蛾(Spodoptera frugiperda) (Sf)细胞、例如 Sf9、Sf21，粉纹夜蛾(Trichoplusiani)细胞，例如 High Five细胞，和果蝇(DrOSOphila)S2细胞。真菌(包括酵母)宿主细胞的例子有酿酒 酵母(S. cerevisiae)、乳克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis ；K. lactis)、假丝酵母属 (Candida)菌种包括白色假丝酵母(C. albicans)和光滑假丝酵母(C. glabrata)、构巢曲霉 (Aspergillus nidulans)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe ；S. pombe)、巴其jf德 毕赤酵母(Pichia pastoris)、和解脂西洋蓍霉(Yarrowia lipolytica)。哺乳动物细胞的 例子有COS细胞、幼仓鼠肾细胞、小鼠L细胞、LNCaP细胞、中国仓鼠卵巢(CH0)细胞、人胚 肾(HEK)细胞和非洲绿猴细胞、CV1细胞、HeLa细胞、MDCK细胞、Vero和H印-2细胞。非洲 爪蟾(Xenopus laevis)卵母细胞，或两栖动物来源的其它细胞也可以使用。原核宿主细胞 包括细菌细胞，例如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌(B. subtilis)和分枝杆菌。可以依照本领域公知的方法将载体，例如包含VZV gE、gl、gM、gH、gB、间层蛋白或 其部分的多核苷酸的载体转染入宿主细胞中。例如，可以通过磷酸钙共沉淀、电穿孔、显微 注射、脂转染、和采用多胺转染试剂的转染来将核酸导入真核细胞中。在一个实施方案中， 所述载体是重组杆状病毒。在另一个实施方案中，所述重组杆状病毒被转染入真核细胞中。 在一个优选的实施方案中，所述细胞是昆虫细胞。在另一个实施方案中，所述昆虫细胞是 Sf9细胞。在另一个实施方案中，所述载体和/或宿主细胞包含如下的核苷酸，所述核苷酸 编码VZV蛋白gE、或其部分。在另一个实施方案中，所述载体和/或宿主细胞基本上由编码 VZV蛋白gE、或其部分的核苷酸组成。在又一个实施方案中，所述载体和/或宿主细胞包含 如下的核苷酸，其编码嵌合VZV蛋白gE、gI、gM、gH、gB、间层蛋白或其部分。上文所描述的载体和/或宿主细胞含有VZV gE、gl、gM、gH、gB、间层蛋白、或其部分，和任选地任何来自感 染源的另外的蛋白质，并且可以含有另外的细胞组分，诸如细胞蛋白、杆状病毒蛋白、脂质、 碳水化合物等，但是不含Ty转座子或任何由Ty转座子编码的蛋白质。
本发明还提供了生成VLP的方法，所述方法包括在容许VLP形成的条件下表达VZV 基因(包括gE、gI、gM、gH、gB、间层蛋白或其部分)和任选地来自感染原的任何另外的蛋白 质。根据所选的表达系统和宿主细胞，在表达重组蛋白和形成VLP的条件下通过培养用表 达载体转化的宿主细胞来生成VLP。在一个实施方案中，本发明包含生成VLP的方法，包括 将编码VZV gE蛋白的载体转染入合适的宿主细胞中，并在容许VLP形成的条件下表达所述 VZV gE蛋白。在另一个实施方案中，所述真核细胞选自由酵母细胞、昆虫细胞、两栖动物细 胞、禽类细胞或哺乳动物细胞组成的组。合适的培养条件的选择在本领域普通技术人员的 技术之内。培养经过工程化改造而生成本发明VLP的细胞的方法包括但不限于分批、分批补 料、连续和灌注(perfusion)细胞培养技术。细胞培养意思是在生物反应器(发酵室)中 使细胞生长和增殖，细胞在生物反应器中增殖并表达蛋白(例如重组蛋白)以供纯化和分 离用。典型地，细胞培养在生物反应器中无菌、受控的温度和大气条件下进行。生物反应器 是用于培养细胞的腔室(chamber)，其中可以监控环境条件诸如温度、大气、搅拌和/或pH。然后使用保持VLP完整性的方法来分离VLP，诸如通过梯度离心，例如氯化铯、蔗 糖和碘克沙醇(iodixanol)梯度离心，以及标准纯化技术，包括例如离子交换和凝胶过滤 层析。在一个实施方案中，本发明包含本发明的纯化的VLP。在另一个实施方案中，本发明的 所述 VLP 至少 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、 99%或更多地没有混合物中存在的其它分子(不包括溶剂在内)。在另一个实施方案中， 本发明的所述VLP基本上没有与制备本发明的VLP有关的其它病毒、蛋白质、脂质、和碳水 化合物。以下是可以如何制备、分离和纯化本发明的VLP的一个例子。通常，VLP是由重组 细胞系生成的，所述细胞系经过工程化改造从而当所述细胞在细胞培养(见上文)中生长 时产生VLP。本领域技术人员应当理解的是，可以使用其它的方法来制备和纯化本发明的 VLP，如此本发明不限于所述的方法。本发明VLP的生产可首先将Sf9细胞(未感染的)接种到摇瓶中，使细胞随着细胞 生长繁殖而膨胀和规模放大(例如从125ml烧瓶到50L Wave袋)。培养细胞所用的培养基 是为合适的细胞系配制的(优选无血清培养基，例如昆虫培养基ExCell-420，JRH)。接着， 用重组杆状病毒以效率最高的感染复数(例如每个细胞约1个到约3个噬斑形成单位)感 染所述细胞。一旦发生感染，VZV gE和/或其它蛋白质自装配成VLP，并在感染后大约24 到72小时从细胞分泌。通常，在细胞处于生长的对数中期(mid-log phase) (4-8xl06个细 胞/ml)且至少约90%存活时，感染效率最高。可以在感染后大约48到96小时，在细胞培养基中VLP水平接近最大值但在广泛 的细胞溶解之前收获本发明的VLP。收获时的Sf9细胞密度和生存力可以为约0. 5xl06个 细胞/ml至约1. 5xl06个细胞/ml，生存力至少为20%，如染料排除测定法所示。接着，取出 培养基并将其澄清。可以向培养基添加NaCl至浓度为约0. 4至约1. 0M，优选至约0. 5M，以 避免VLP聚集。可利用一次性使用的预灭菌中空纤维0. 5或1. 00 y m筒式滤器或类似的装 置，通过切向流过滤(TFF)来实现从含有本发明VLP的细胞培养基中除去细胞和细胞碎片。
接着，可以使用一次性的、预灭菌的500，000分子量截留中空纤维筒通过超滤来 浓缩经过澄清的培养基中的VLP。可以将经过浓缩的VLP对10倍体积的含0. 5M NaCl的 pH 7. 0至8. 0的磷酸盐缓冲盐水(PBS)进行渗滤(diafiltrate)来除去残余的培养基成 分。可以将经过浓缩、渗滤的VLP在含0. 5M NaCl的pH7. 2PBS缓冲液中20% -60%不连续 蔗糖梯度上，于约4°C至约10°C以6，500xg离心18小时来进一步纯化。通常，VLP将在约 30%至约40%蔗糖之间或者在界面上(在20%和60%的分步梯度中)形成显著可见的条 带，可从该梯度中收集该条带并保存。可稀释该产物使其包含200mM NaCl,以准备纯化过程 的下一步。该产物含有VLP，并可能含有完整的杆状病毒颗粒。可以通过阴离子交换层析或者44%等密度蔗糖垫层(cushion)离心来实现VLP 的进一步纯化。在阴离子交换层析中，将来自蔗糖梯度(见上文)的样品上样入含有带阴 离子的介质(例如Matrix Fractogel EMD TMAE)的柱中，并经由盐梯度(从约0. 2M至约 1.0M NaCl)洗脱，该梯度可以将VLP与其它杂质(例如杆状病毒和DNA/RNA)分开。在蔗糖 垫层方法中，将包含VLP的样品添加到44%蔗糖垫层，并在30，000g离心约18小时。VLP在 44%蔗糖的顶部形成条带，而杆状病毒沉淀于底部，其它污染蛋白停留在顶部的0%蔗糖层 中。收集VLP峰或VLP带。若想要的话，可以将完整的杆状病毒灭活。可以通过化学方法，例如甲醛或丙 内酯(BPL)灭活。还可以使用本领域已知的选择性沉淀和层析方法，如上文例示的，来大部 分实现完整杆状病毒的除去和/或灭活。灭活方法包括将含有VLP的样品在0. 2% BPL中 于约25°C至约27°C温育3小时。还可以通过将含有VLP的样品在0. 05% BPL于4°C温育 3天，然后在37°C温育1小时，来灭活杆状病毒。灭活/除去步骤后，可使含有VLP的产物运行经过另一渗滤步骤以除去任何来自 灭活步骤的试剂和/或任何残余的蔗糖，并将VLP置入期望的缓冲液(例如PBS)中。包含 VLP的溶液可以通过本领域已知的方法(例如无菌过滤)灭菌，并保存在冰箱或冷冻箱中。上文的技术可以在多种规模上实施。例如，T形瓶(T-flasks)、摇瓶、转瓶 (spinner bottle)、乃至工业尺寸的生物反应器。生物反应器可包括不锈钢罐或预灭菌的 塑料袋(例如，Wave Biotech, Bridgewater, NJ出售的系统)。本领域技术人员会知道用 于其目的的最佳选择。 药物或疫苗配制剂和施用 本文中有用的药物组合物含有本发明的VLP和药学可接受载体(包括任何合适的 稀释剂或赋形剂)，所述药学可接受载体包括本身不诱导产生对接受该组合物的脊椎动物 有害的免疫应答、并且可以不带有异常毒性地(without undue toxicity)施用的任何药 剂。如本文中所使用的，术语“药学可接受的”指获得联邦或州政府监管部门批准，或者在美 国药典、欧洲药典或其它公认的药典中列出的用于哺乳动物，更具体地用于人类中。这些组 合物可以用作疫苗和/或抗原性配制剂，用于在脊椎动物中诱导保护性免疫应答。本发明 涵盖抗原性配制剂，其包含如下的VLP，所述VLP包含VZV gE蛋白，但不包括VZV核酸或酵 母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述抗原性配置及包含基本上由gE蛋白组成的VLP。在另 一个实施方案中，所述抗原性配制剂包含如下的VLP，其包含至少一种另外的掺入VLP中的 VZV蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gI(0RF 67)蛋白。在另一个实 施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gM(0RF 50)蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所 述另外的VZV蛋白包含间层蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gI、gM、 gH、gB或间层蛋白的组合。在另一个实施方案中，所述VZV VLP不包含VZV壳体蛋白(例 如 ORF 20、ORF 40、ORF 41)。本发明还包括抗原性配制剂，其包含如下的嵌合VLP，所述嵌合VLP包含VZV gE蛋 白和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中，所述来自另一种感染原的 蛋白质是病毒蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白 质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施 方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所 述来自另一种感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。本发明还提供抗原性配制剂，其包含纯化的嵌合VLP，所述纯化的嵌合VLP包含 VZV gE蛋白、至少一种来自VZV的其它蛋白质、和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在 一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是gl (0RF 67)。在另一个实施方案中，所述来 自VZV的其它蛋白质是gM(0RF50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在 另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它 蛋白质是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白质。 在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施方案 中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种 感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的 蛋白质在VLP的表面上表达。通常，疫苗包含本发明组合物悬浮或溶解于其中的常规盐水或缓冲的水溶液介 质。处于这种形式，便可以方便地使用本发明的组合物以预防、改善或以其它方式治疗感 染。导入宿主中后，疫苗能够刺激免疫应答，包括但不限于抗体和/或细胞因子的生成和/ 或细胞毒性T细胞、抗原呈递细胞、辅助T细胞、树突细胞的活化和/或其它细胞应答。本发明还包括疫苗配制剂，其包含如下的VLP，所述VLP包含VZV gE蛋白，但不包 括VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述疫苗配制剂包含基本上由gE蛋白组 成的VLP。在另一个实施方案中，所述疫苗配制剂包含如下的VLP，其包含至少一种另外的 掺入VLP中的VZV蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gl (0RF 67)蛋 白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gM(0RF 50)蛋白。在另一个实施方案 中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一 个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含间层蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV 蛋白包含gI、gM、gH、gB或间层蛋白的组合。在另一个实施方案中，所述嵌合VZV VLP不包 含 VZV 壳体蛋白(例如 ORF 20、0RF40、0RF 41)。本发明还包括疫苗配制剂，其包含如下的嵌合VLP，所述嵌合VLP包含VZVgE蛋白 和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋 白质是病毒蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。 在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案 中，所述来自另一种感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来 自另一种感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。
本发明还提供疫苗配制剂，其包含嵌合VLP，所述嵌合VLP包含VZV gE蛋白、至少 一种来自VZV的其它蛋白质、和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中， 所述来自VZV的其它蛋白质是gl (0RF 67)。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋 白质是gM(0RF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案 中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是间层蛋 白。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白质。在另一个实施 方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另 一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白 质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质在VLP 的表面上表达。本发明的所述抗原性和疫苗配制剂包含如上文所描述的本发明的VLP和药学可接受载体或赋形剂。药学可接受载体包括但不限于盐水、缓冲盐水、葡萄糖(dextrose)、 水、甘油、无菌等渗缓冲水溶液，和它们的组合。对药学可接受载体、稀释剂和其它赋形剂 的全面讨论呈现于 Remington’ sPharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co. N. J. current edition)中。配制剂应当适合施用模式。在一个优选的实施方案中，配制剂适于给人施用， 优选是无菌、非颗粒性(non-particulate)和/或非热原性的。若想要的话，药学组合物还可以含有小量的润湿剂或乳化剂，或PH缓冲剂。组合 物可以是固体形式，诸如适于重构的冻干粉末；液体溶液；悬液；乳液；片剂；丸剂；胶囊； 持续释放配制剂；或粉剂。口服配制剂可包括标准的载体，诸如药品级的甘露糖醇、乳糖、淀 粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。本发明提供了 VLP配制剂包装在标示组合物量的密封容器诸如安瓿或小药囊 (sachette)中。在一个实施方案中，所述VLP组合物作为液体提供，在另一个实施方案中， 作为密封容器中的干燥无菌冻干粉末或无水浓缩物提供，并且可以用例如水或盐水重构为 用于向受试者施用的合适浓度。在一个可选的实施方案中，在标示VLP组合物的量和浓度的密封容器中以液体形 式提供VLP组合物。优选地，在密封容器中以至少约50 μ g/ml、更优选至少约100 μ g/ml、 至少约200 μ g/ml、至少500 μ g/ml、或至少lmg/ml提供液体形式的VLP组合物。一般而言，本发明的VZV VLP以足以刺激针对一种或多种VZV毒株的免疫应答的 有效量或数量施用。优选地，施用本发明的VLP引发针对VZV的免疫。典型地，可以根据 例如年龄、身体健康状况(physical condition)、体重、性别、饮食、施用时间和其它临床因 素，在该范围内调节该剂量。预防性疫苗配制剂是全身施用的，例如通过使用针头和注射 器或无针头注射装置进行皮下或肌内注射来施用。或者，疫苗配制剂是鼻内施用的，通过滴 齐U、大颗粒气溶胶(大于约10微米)、或喷雾入上呼吸道中。虽然上文的任何递送途径均导 致免疫应答，但鼻内施用还带来额外的益处，即在许多病毒(包括VZV)进入的部位引发粘 膜免疫。如此，本发明还包括诱导哺乳动物中针对感染或其至少一种症状的免疫的疫苗或 抗原性组合物的配制方法，包括向所述配制剂添加有效剂量的VZVVLP。在一个实施方案中， 所述感染是VZV感染。“有效剂量” 一般指足以诱导免疫、预防和/或改善感染或减轻至少 一种感染症状、和/或增强另一剂VLP的功效的本发明VLP的量。有效剂量可以指足以延迟感染发作或使之最小化的VLP的量。有效剂量还可以指在感染的治疗或控制中提供治疗益处的VLP的量。此外，有效剂量是就单独的或与其它疗法组合在感染的治疗或控制中提 供治疗益处的本发明VLP而言的量。有效剂量还可以是足以增强受试者(例如人)自己针 对后来向感染原暴露的免疫应答的量。免疫水平可以通过例如测量中和性分泌抗体和/或 血清抗体的量来加以监测，所述测量例如通过噬斑中和(plaque neutralization)、补体结 合(complement fixation)、酶联免疫吸附、或微中和(microneutralization)测定法来进 行。在疫苗的情况中，“有效剂量”是预防疾病和/或降低症状严重性的剂量。虽然优选用单剂刺激免疫，但是可以通过相同或不同路径施用额外的剂量，以达 到想要的效果。例如在新生儿和婴儿中，可能需要多次施用来引发足够的免疫水平。按照 维持足够水平的抗感染(例如VZV感染)保护的需要，可以在整个儿童期以一定间隔继续 进行施用。类似地，特别容易受到反复或严重的感染的成年人，例如卫生保健工作者、日间 护理工作者、幼儿的家人、老年人、以及心肺功能受损的个体等，可能需要进行多次免疫来 建立和/或维持保护性免疫应答。可以通过例如测量中和性分泌和血清抗体的量来监测诱 导产生的免疫的水平，并按照引发和维持期望的保护水平的需要来调整剂量或重复接种。包含VLP的组合物(疫苗和/或抗原性配制剂)的施用方法包括，但不限于，胃肠 外施用(例如皮内、肌内、静脉内和皮下)、硬膜夕卜、和粘膜(例如鼻内和口腔或肺途径或通 过栓剂)。在一个具体实施方案中，本发明的组合物通过口服、皮内、鼻内、肌内、腹膜内、静 脉内或皮下施用。组合物可以通过任何方便的途径施用，例如通过输注或推注，通过经由上 皮或粘膜皮肤衬里(例如口腔粘膜、结肠、结膜、鼻咽、口咽、阴道、尿道、膀胱和肠粘膜等) 的吸收，并且可以与其它生物学活性剂一起施用。在一些实施方案中，含本发明VLP的组合 物的鼻内或其它粘膜施用途径可以诱导显著高于其它施用途径的抗体或其它免疫应答。在 另一个实施方案中，含本发明VLP的组合物的鼻内或其它粘膜施用途径可诱导这样的抗体 或其它免疫应答，所述抗体或其它免疫应答会诱导针对其它VZV毒株的交叉保护。施用可 以是全身性的或者是局部的。本发明的疫苗和/或抗原性配制剂还可以按照剂量日程表(dosageschedule)来 施用，例如用疫苗组合物进行初次施用，随后进行加强施用。在具体的实施方案中，第二剂 组合物在初次施用后大约两周至一年的任何时间，优选约1个月、约2个月、约3个月、约4 个月、约5个月到约6个月施用。另外，可以在第二剂之后，且在距初次施用后约3个月至 约两年甚至更长时间，优选约4个月、约5个月、或者约6个月、或者约7个月至约1年施用 第三剂。在第二剂后在受试者的血清和/或尿或者粘膜分泌物中没有检测到或者检测到低 水平的特异性免疫球蛋白时，可任选地施用第三剂。在一个优选的实施方案中，第二剂在第 一次施用后约1个月施用，而第三剂在第一次施用后约6个月施用。在另一个实施方案中， 第二剂在第一次施用后约6个月施用。在另一个实施方案中，所述本发明的VLP可以作为 联合疗法的一部分施用。例如，本发明的VLP可以与其它免疫原性组合物、抗病毒剂和/或 抗生素一起配制。技术人员可以容易地确定药物配制剂的剂量，例如通过首先鉴定有效引发预防性 或治疗性免疫应答的剂量，例如通过测量病毒特异性免疫球蛋白的血清效价或通过测量血 清样品或尿样品或粘膜分泌物中抗体的抑制比。所述剂量可以由动物研究确定。用于研究 疫苗功效的动物的非限制性目录包括豚鼠、仓鼠、雪貂(ferret)、灰鼠(chinchilla)、小鼠和棉鼠。大多数动物不是感染原的天然宿主，但仍可用于该疾病的各个方面的研究。例如， 可以对任何上文的动物定量给予疫苗候选物，例如本发明的VLP，以部分地表征所诱发的免 疫应答，和/或确定是否生成了任何中和性抗体。例如，已经在小鼠模型中进行了许多研 究，因为小鼠体型小，而且它们的成本低使得研究者可以进行更大规模研究。另外，技术人员可以进行人体临床研究来确定用于人的优选有效剂量。这样的临 床研究是常规的，且为本领域公知。要使用的确切剂量还将依赖于施用途径。可以从源自 体外或动物试验系统的剂量_应答曲线外推得到有效剂量。如本领域中还公知的，可以使用免疫应答的非特异性刺激物来增强特定组合物的 免疫原性，这样的刺激物称为佐剂。术语“佐剂”指这样的化合物，在其与特定的免疫原(例 如VLP)在配制剂中组合使用时，会增进或以其它方式改变或修饰由此所致的免疫应答。对 免疫应答的修饰包括对抗体和/或细胞免疫应答的强化或使其特异性增宽。对免疫应答的 修饰还可以意味着降低或抑制某些抗原特异性免疫应答。实验上已经使用佐剂来促进针对 未知抗原的免疫的普遍增加(例如美国专利号4，877，611)。免疫规程使用佐剂来刺激应答 已有多年，因此，本领域普通技术人员对佐剂是熟知的。有些佐剂影响抗原呈递的方式。例 如，在蛋白抗原被明矾沉淀时，免疫应答增加。抗原的乳化也延长抗原呈递的持续时间。本 发明的范围意图涵盖Vogel 等，"ACompendium of Vaccine Adjuvants and Excipients (第 2版)，”(本文通过提述收录该文献全部内容用于所有目的)中所述任何佐剂。例示性的佐剂包括完全弗氏佐剂(一种免疫应答的非特异性刺激物，含有已杀死 的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis))、不完全弗氏佐剂和氢氧化铝佐剂。其 它佐剂包括GMCSP、BCG、氢氧化铝、MDP化合物诸如thur_MDP和nor_MDP、CGP (MTP-PE)、月旨 质A和单磷酰脂质A (MPL)。还设想使用RIBI，其在2%角鲨烯/Tween 80乳剂中含有从细 菌提取的3种成分MPL、海藻糖二霉菌酸(TDM)和细胞壁骨架(CWS)。还可以使用MF-59、 Novasomes 、MHC 抗原。在本发明的一个实施方案中，所述佐剂是少片层(paucilamellar)脂质小泡，其具有大约2到10个双层，它们排列成多个基本呈球形的壳的形式，其由水性层隔开，所述 水性层围绕着不含脂质双层的无定形中心大空腔。少片层脂质小泡可以通过数种方式起 作用来刺激免疫应答作为非特异性刺激物、作为抗原的载体、作为其它佐剂的载体，以及 这些方式的组合。例如，在通过混合抗原与预先形成的小泡，使得抗原相对于小泡保持在 胞外的方法制备疫苗时，少片层脂质小泡起非特异性免疫刺激物的作用。通过将抗原包囊 在小泡的中心空腔中，小泡起到免疫刺激物和抗原载体两方面的作用。在另一个实施方案 中，小泡主要由非磷脂小泡构成。在其它实施方案中，小泡是Novasomes 。Novasomes 是约IOOnm到约500nm范围的少片层非磷脂小泡。它们包含Brij 72、胆固醇、油酸和角鲨 烯。Novasomes已被证明是流感抗原的有效佐剂(参见美国专利5，629，021、6，387，373和 4,911,928,本文通过提述收录它们的全部内容用于所有目的)。本发明的VLP还可以与“免疫刺激物” 一起配制。术语“免疫刺激物”指经由身体 自身的化学信使(细胞因子)增强免疫应答的化合物。这些分子包括具有免疫刺激、免疫 强化和促炎症活性的各种细胞因子、淋巴因子和趋化因子，诸如白介素(例如IL-I、IL-2、 IL-3、IL-4、IL-12、IL-13)；生长因子(例如粒细胞-巨噬细胞(GM)集落刺激因子(CSF))； 及其它免疫刺激分子，诸如巨噬细胞炎性因子、Flt3配体、B7. 1 ；B7. 2等。免疫刺激物分子可以在与本发明VLP相同的配制剂中施用，或者可以分开施用。可以施用蛋白质或编码该蛋白质的表达载体来产生免疫刺激效应。如此，在一个实施方案中，本发明包含包含佐剂和 /或免疫刺激物的抗原性和疫苗配制剂。刺激免疫应答的方法本发明的VLP可用于制备刺激赋予针对感染原的免疫或实质免疫(substantial immunity)的免疫应答的组合物。粘膜和细胞免疫两者可以促成针对感染原和疾病的免疫。 上呼吸道中局部分泌的抗体是抗天然感染的主要因子。分泌性免疫球蛋白A(SlgA)牵涉对 上呼吸道的保护，而血清IgG牵涉对下呼吸道的保护。对呼吸道的保护在VZV感染的情况 下是重要的，因为不像其它疱疹病毒，VZV可经由呼吸系统传染。由感染诱导的免疫应答针 对用相同病毒或在抗原方面类似的病毒株的再次感染进行保护。本发明的VLP可以刺激抗体的生成，所述抗体能例如中和感染原、阻断感染原进 入细胞、阻断所述感染原的复制、和/或保护宿主免于感染和破坏。所述术语还指如下的免 疫应答，其由针对感染原的T淋巴细胞和/或其它白细胞介导，由脊椎动物(例如人)展现， 预防或改善VZV感染或减轻它的至少一种症状。本发明包括在受试者中诱导针对感染的保护性免疫的方法，其包括给所述受试者 施用包含VZV-VLP的抗原性配制剂或疫苗，其中所述VZV-VLP包含VZV gE蛋白，但是不包 括VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述感染是由病毒引起的。在另一个实施 方案中，所述感染是由真菌引起的。在另一个实施方案中，所述感染是由寄生物引起的。在 另一个实施方案中，所述感染是由细菌引起的。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP基本上 由VZV gE蛋白组成。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP源自包含克隆的VZVgE的重组表 达系统。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP包含至少一种掺入VLP中的另外的VZV蛋白。 在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gl (0RF 67)蛋白。在另一个实施方案中， 所述另外的VZV蛋白包含gM(0RF50)蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是 gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述另外的 VZV蛋白包含间层蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gl、gM、gH、gB或 间层蛋白的组合。本发明的另一个实施方案包括在受试者中诱导针对感染的保护性免疫的方法，其 包括给所述受试者施用包含VZV-VLP的抗原性配制剂或疫苗，其中所述VZV-VLP包含嵌合 VLP，所述嵌合VLP包含VZV gE蛋白和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施 方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另 一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白 质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是来自寄生物的 蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。本发明还提供在受试者中诱导针对感染的保护性免疫的方法，包括向所述受试者 施用包含VZV-VLP的抗原性配制剂或疫苗，其中所述VZV-VLP包含嵌合VLP，所述嵌合VLP 包含VZV gE蛋白、至少一种来自VZV的其它蛋白质、和至少一种来自另一种感染原的蛋白 质。在一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是gl (0RF 67)。在另一个实施方案中， 所述来自VZV的其它蛋白质是gM(0RF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是 gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒 蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个 实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来 自另一种感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种 感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。如上文所提及的，本发明的VLP预防或减少受试者中VZV感染的至少一种症状。由 VZV感染引起的两种疾病的症状是本领域公知的。由初次VZV感染产生的禽痘(水痘)的 症状包括发热、不适、头痛、腹痛、疲劳、食欲缺乏、和主要在头皮、面部、和躯干上发生的皮 肤损伤(skin lesion)。源自于潜伏VZV的再活化的带状疱疹的特征在于下列症状通常 在胸部生皮节单侧出现的皮疹、急性神经炎痛(neuritic pain)、和超敏感性。如此，本发明 的方法包括预防或减轻与VZV感染有关的至少一种症状。症状的减轻可以主观地或者客观 地确定，例如通过受试者的自我评估、由内科医生评估、或通过实施合适的测定或测量(例 如体温)，包括例如生活质量评价、VZV感染或其它症状的进展减慢、VZV症状的严重程度降 低或者合适的测定法(例如抗体效价和/或T细胞活化测定法)。客观评价包括动物和人 的评价。通过下面的实施例进一步例示本发明，这些实施例不应解释为限制性的。本文通 过提述收录本申请中引用的所有参考文献、专利和已公开的专利申请，以及附图的内容用 于所有目的。
实施例实施例1细胞、病毒、和构建体将草地夜蛾Sf9昆虫细胞(ATCC CRL-1711)于28°C作为HyQ-SFX昆虫无血清培养 基(HyClone，Logan，UT)中的悬浮培养物维持。将Bac-to-Bac (细菌至细菌)杆状病毒表 达系统(Invitrogen，Carlsbad, CA)与大肠杆菌DHlOBac细胞中的pFastBacl转移载体一 起使用以产生表达流感基因的重组杆状病毒载体。VZV基因基于GenBank序列NC_001348。对编码蛋白质(参见下文)的基因进行 密码子优化以在Sf9细胞中高水平的表达，并于GeneArt (Regensburg，Germany)合成。将 合成的基因转移入PFastBacl中，在AcMNPV多角体蛋白启动子的下游，如先前关于流感病 毒所详细描述的(Pushko等，2005.)。如下产生重组杆状病毒，即将含有感兴趣的VZV基因的转移质粒转化入大肠杆菌 DHlOBac感受态细胞中后进行位点特异性同源重组，所述大肠杆菌DHlOBac感受态细胞含 有AcMNPV杆状病毒基因组(Invitrogen)。从大肠杆菌细胞提取重组杆粒(bacmid) DNA，并 使用CellFectin(Invitrogen)转染入Sf9细胞中。回收重组杆状病毒，进行噬斑纯化、扩 增，并通过使用Sf9细胞进行的琼脂糖噬斑测定法来测定重组杆状病毒储液(stock)的效 价。以下是在rBV载体中克隆和表达并针对VLP形成进行评估的VZV蛋白和基因序列 的列表0RF50 3 型包膜糖蛋白 MMGTQKKGraSEKVSPYDTTTPEVEALDHQMDTLNWRIWIIQVMMFTLGAVMLLATLIAASSEYTGIPCFYAAVVDYELFNATLDGGVWSGNRGGYSAPVLFLEPHSVVAFTYYTALTAMAMAVYT LITAAIIHRETKNQRVRQSSGVAWLVVDPTTLFWGLLSLffLLNAVVLLLAYKQIGVAATLYLGHFATSVIFTTYFCG RGKLDETNIKAVANLRQQSVFLYRLAGPTRAVFVNLMAALMAICILFVSLMLELVVANHLHTGLWSSVSVAMSTFST LSVVYLIVSELILAHYIHVLIGPSLGTLVACATLGTAAHSYMDRLYDPISVQSPRLIPTTRGTLACLAVFSVVMLLL RLMRAYVYHRQKRSRFYGAVRRVPERVRGYIRKVKPAHRNSRRTNYPSQGYGYVYENDSTYETDREDELLYERSNSG WE (SEQID NO 1)0RF62 转录调节子 ICP4MDTPPMQRSTPQRAGSPDTLELMDLLDAAAAAAEHRARVVTSSQPDDLL FGENGVMVGREHEIVSIPSVSGLQPEPRTEDVGEELTQDDYVCEDGQDLMGSPVIPLAEVFHTRFSEAGAREPTGAD RSLETVSLGTKLARSPKPPMNDGETGRGTTPPFPQAFSPVSPASPV⑶AAGNDQREDQRSIPRQTTRGNSPGLPSVV HRDRQTQSISGKKPGDEQAGHAHASGDGVVLQKTQRPAQGKSPKKKTLKVKVPLPARKPGGPVPGPVEQLYHVLSDS VPAKGAKADLPFETDDTRPRKHDARGITPRVPGRSSGGKPRAFLALPGRSHAPDPIEDDSPVEKKPKSREFVSSSSS SSSWGSSSEDEDDEPRRVSVGSETTGSRSGREHAPSPSNSDDSDSNDGGSTKQNIQPGYRSISGPDPRIRKTKRLAG EPGRQRQKSFSLPRSRTPIIPPVSGPLMMPDGSPWPGSAPLPSNRVRFGPSGETREGHWEDEAVRAARARYEASTEP VPLYVPEL⑶PARQYRALINLIYCPDRDPIAWLQNPKLTGVNSALNQFYQKLLPPGRAGTAVTGSVASPVPHVGEAM ATGEALffALPHAAAAVAMSRRYDRAQKHFILQSLRRAFASMAYPEATGSSPAARISRGHPSPTTPATQAPDPQPSAA ARSLSVCPPDDRLRTPRKRKSQPVESRSLLDKIRETPVADARVADDHVVSKAKRRVSEPVTITSGPVVDPPAVITMP LDGPAPNGGFRRIPRGALHTPVPSDQARKAYCTPETIARLVDDPLFPTAWRPALSFDPGALAEIAARRPGGGDRRFG PPSGVEALRRRCAWMRQIPDPEDVRLLIIYDPLPGEDINGPLESTLATDPGPSWSPSRGGLSVVLAALSNRLCLPST HAWAGNWTGPPDVSALNARGVLLLSTRDLAFAGAVEYLGSRLASARRRLLVLDAVALERWPRDGPALSQYHVYVRAP ARPDAQAVVRWPDSAVTEGLARAVFASSRTFGPASFARIETAFANLYPGEQPLCLCRGGNVAYTVCTRAGPKTRVPL SPREYRQYVLPGFDGCKDLARQSRGLGLGAADFVDEAAHSHRAANRWGLGAALRPVFLPEGRRPGAAGPEA⑶VPTW ARVFCRHALLEPDPAAEPLVLPPVAGRSVALYASADEARNALPPIPRVMWPPGFGAAETVLEGSDGTRFVFGHHGGS ERPSETQAGRQRRTADDREHALELDDWEVGCEDAWDSEEGG⑶DGDAPGSSFGVSIVSVAPGVLRDRRVGLRPAVKV ELLSSSSSSEDEDDVWGGRGGRSPPQSRG(SEQID NO 2)0RF63 调节蛋白 ICP22MFCTSPATRGDSSESKPGASVDVNGKMEYGSAPGPLNGRDTSRGPGAFCT PGWEIHPARLVEDINRVFLCIAQSSGRVTRDSRRLRRICLDFYLMGRTRQRPTLACWEELLQLQPTQTQCLRATLME VSHRPPRGEDGFIEAPNVPLHRSALECDVSDDGGEDDSDDDGSTPSDVIEFRDSDAESSDGEDFIVEEESEESTDSC EPDGVPGDCYRDGDGCNTPSPKRPQRAIERYAGAETAEYTAAKALTALGEGGVDWKRRRHEAPRRHDIPPPHGV(SE Q ID NO 3)Orf9 间层蛋白 VP22MASSDGDRLCRSNAVRRKTTPSYSGQYRTARRSVWGPPDDSDDSLGYITTV GADSPSPVYADLYFEHKNTTPRVHQPNDSSGSEDDFEDIDEVVAAFREARLRHELVEDAVYENPLSVEKPSRSFTKN AAVKPKLEDSPKRAPPGAGAIASGRPISFSTAPKTATSSWCGPTPSYNKRVFCEAVRRVAAMQAQKAAEAAWNSNPP RNNAELDRLLTGAVIRITVHEGLNLIQAANEADLGEGASVSKRGHNRKTGDLQGGMGNEPMYAQVRKPKSRTDTQTT GRITNRSRARSASRTDTRK(SEQID NO 4) OrflO 间层蛋白 VP16MECNLGTEHPSTDTWNRSKTEQAVVDAFDESLF⑶VASDIGFETSLYSHAV KTAPSPPWVASPKILYQQLIRDLDFSEGPRLLSCLETWNEDLFSCFPINEDLYSDMMVLSPDPDDVISTVSTKDHVE MFNLTTRGSVRLPSPPKQPTGLPAYVQEVQDSFTVELRAREEAYTKLLVTYCKSIIRYLQGTAKRTTIGLNIQNPDQ KAYTQLRQSILLRYYREVASLARLLYLHLYLTVTREFSWRLYASQSAHPDVFAALKFTWTERRQFTCAFHPVLCNHG IVLLEGKPLTASALREINYRRRELGLPLVRCGLVEENKSPLVQQPSFSVHLPRSVGFLTHHIKRKLDAYAVKHPQEPRHVRADHPYAKWENRNYGSSIEAMILAPPSPSEILP⑶PPRPPTCGFLTR(SEQ ID NO 5)Orf68E 1 型包膜糖蛋白 E(gE)MGTVNKPVVGVLMGFGIITGTLRITNPVRASVLRYDDFHTDED KLDTNSVYEPYYHSDHAESSWVNRGESSRKAYDHNSPYIWPRNDYDGFLENAHEHHGVYNQGRGIDSGERLMQPTQM SAQEDL⑶DTGIHVIPTLNGDDRHKIVNVDQRQY⑶VFKGDLNPKPQGQRLIEVSVEENHPFTLRAPIQRIYGVRYT ETWSFLPSLTCTCDAAPAIQHICLKHTTCFQDVVVDVDCAENTKEDQLAEISYRFQGKKEADQPWIVVNTSTLFDEL ELDPPEIEPGVLKVLRTEKQYLGVYIWNMRGSDGTSTYATFLVTWKGDEKTRNPTPAVTPQPRGAEFHMWNYHSHVF SVGDTFSLAMHLQYKIHEAPFDLLLEWLYVPIDPTCQPMRLYSTCLYHPNAPQCLSHMNSGCTFTSPHLAQRVASTV YQNCEHADNYTAYCLGISHMEPSFGLILHDGGTTLKFVDTPESLSGLYVFVVYFNGHVEAVAYTVVSTVDHFVNAIE ERGFPPTAGQPPATTKPKEITPVNPGTSPLLRYAAWTGGLAAVVLLCLVIFLICTAKRMRVKAYRVDKSPYNQSMYY AGLPVDDFEDSESTDTEEEFGNAIGGSHGGSSYTVYIDKTR(SEQ IDNO 6)gE的Orf68TCM变体；用甲型流感/Fujian TM域和COOH替换gE的跨膜(TM)域 和 COOH(标示下划线的)MGTVNKPVVGVLMGFGIITGTLRITNPVRASVLRYDDraTDEDKLDTNSVYEPYYH SDHAESSWVNRGESSRKAYDHNSPYIWPRNDYDGFLENAHEHHGVYNQGRGIDSGERLMQPTQMSAQEDLiiDDTGIH VIPTLNGDDRHKIVNVDQRQY⑶VFKGDLNPKPQGQRLIEVSVEENHPFTLRAPIQRIYGVRYTETWSFLPSLTCTG DAAPAIQHICLKHTTCFQDVVVDVDCAENTKEDQLAEISYRFQGKKEADQPWIVVNTSTLFDELELDPPEIEPGVLK VLRTEKQYLGVYIWNMRGSDGTSTYATFLVTWKGDEKTRNPTPAVTPQPRGAEFHMWNYHSHVFSVGDTFSLAMHLQ YKIHEAPFDLLLEWLYVPIDPTCQPMRLYSTCLYHPNAPQCLSHMNSGCTFTSPHLAQRVASTVYQNCEHADNYTAY CLGISHMEPSFGLILHDGGTTLKFVDTPESLSGLYVFVVYFNGHVEAVAYTVVSTVDHFVNAIEERGFPPTAGQPPA TTKPKEITPYNPGTSPLLRDffILffISFAISCFLLCVALLGFIMWACQKGNIRCNICI(SEQ ID NO 7)针对昆虫细胞进行过密码子优化的VZV DNA序列进入杆状病毒载体中，并评估 VLP的装配。0RF37 糖蛋白 H (gH) MFALVLAVVILPLffTTANKSYVTPTPATRSIGHMSALLREYSDRNMSLKLEA FYPTGFDEELIKSLHWGNDRKHVFLVIVKVNPTTHE⑶VGLVIFPKYLLSPYHFKAEHRAPFPAGRFGFLSHPVTPD VSFFDSSFAPYLTTQHLVAFTTFPPNPLVWHLERAETAATAERPFGVSLLPARPTVPKNTILEHKAHFATWDALARH TFFSAEAIITNSTLRIHVPLFGSVWPIRYWATGSVLLTSDSGRVEVNIGVGFMSSLISLSSGPPIELIVVPHTVKLN AVTSDTTWFQLNPPGPDPGPSYRVYLLGRGLDMNFSKHATVDICAYPEESLDYRYHLSMAHTEALRMTTKADQHDIN EESYYHIAARIATSIFALSEMGRTTEYFLLDEIVDVQYQLKFLNYILMRIGAGAHPNTISGTSDLIFADPSQLHDEL SLLFGQVKPANVDYFISYDEARDQLKTAYALSRGQDHVNALSLARRVIMSIYKGLLVKQNLNATERQALFFASMILL NFREGLENSSRVLDGRTTLLLMTSMCTAAHATQAALNIQEGLAYLNPSKHMFTIPNVYSPCMGSLRTDLTEEIHVMN LLSAIPTRPGLNEVLHTQLDESEIFDAAFKTMMIFTTWTAKDLHILHTHVPEVFTCQDAAARNGEYVLILPAVQGHS YVITRNKPQRGLVYSLADVDVYNPISVVYLSRDTCVSEHGVIETVALPHPDNLKECLYCGSVFLRYLTTGAIMDII IIDSKDTERQLAAMGNSTIPPFNPDMH⑶DSKAVLLFPNGTVVTLLGFERRQAIRMSGQYLGASLGGAFLAVVGFGI IGWMLCGNSRLREYNKIPLT(SEQ ID NO 8)0RF67 糖蛋白 I (gl)MFLIQCLISAVIFYIQVTNALIFK⑶HVSLQVNSSLTSILIPMQNDNYTEIK GQLVFIGEQLPTGTNYSGTLELLYADTVAFCFRSVQVIRYDGCPRIRTSAFISCRYKHSWHYGNSTDRISTEPDAG VMLKITKPGINDAGVYVLLVRLDHSRSTDGFILGVNVYTAGSHHNIHGVIYTSPSLQNGYSTRALFQQARLCDLPAT PKGSGTSLFQHMLDLRAGKSLEDNPWLHEDVVTTETKSVVKEGIENHVYPTDMSTLPEKSLNDPPENLLIIIPIVAS VMILTAMVIVIVISVKRRRIKKHPIYRPNTKTRRGIQNATPESDVMLEAAIAQLATIREESPPHSVVNPFVK(SEQ ID NO 9)
0RF31 糖蛋白B (gB) MFVTAWSVSPSSFYESLQVEPTQSEDITRSAHL⑶⑶EIREAIHKSQDAET KPTFYVCPPPTGSTIVRLEPTRTCPDYHLGKNFTEGIAVVYKENIAAYKFKATVYYKDVIVSTAWAGSSYTQITNRY ADRVPIPVSEITDTIDKFGKCSSKATYVRNNHKVEAFNEDKNPQDMPLIASKYNSVGSKAWHTTNDTYMVAGTPGTY RTGTSVNCIIEEVEARSIFPYDSFGLSTCDIIYMSPFFGLRDGAYREHSNYAMDRFHQFEGYRQRDLDTRALLEPAA RNFLVTPHLTVGWNWKPKRTEVCSLVKWREVEDVVRDEYAHNFRFTMKTLSTTFISETNEFNLNQIHLSQCVKEEAR AIINRIYTTRYNSSHVRTCDIQTYLARGGFVWFQPLLSNSLARLYLQELVRENTNHSPQKHPTRNTRSRRSVPVEL RANRTITTTSSVEFAMLQFTYDHIQEHVNEMLARISSSWCQLQNRERALWSGLFPINPSALASTILDQRVKARILGD VISVSNCPELGSDTRIILQNSMRVSGSTTRCYSRPLISIVSLNGSGTVEGQLGTDNELIMSRDLLEPCVANHKRYFL FGHHYVYYEDYRYVREIAVHDVGMISTYVDLNLTLLKDREFMPLQVYTRDELRDTGLLDYSEIQRRNQMHSLRFYDI DKVVQYDSGTAIMQGMAQFFQGLGTAGQAVGHVVLGATGALLSTVHGFTTFLSNPFGALAVGLLVLAGLVAAFFAY RYVLKLKTSPMKALYPLTTKGLKQLPEGMDPFAEKPNATDTPIEEI⑶SQNTEPSVNSGFDPDKFREAQEMIKYMTL VSAAERQESKARKKNKTSALLTSRLTGLALRNRRGYSRVRTENVTGV(SEQ ID NO: 10)经过密码子优化并克隆入杆状病毒表达载体中的VZV gE基因序列。0rf68 gEATGGGCACCGTGAACAAGCCCGTGGTGGGCGTGCTGATGGGTTTCGGTATCATCACCGGCA CCCTGCGTATCACCAACCCCGTGCGTGCTTCCGTGCTGCGTTACGACGACTTCCACACCGACGAGGACAAGCTGGAC ACCAACTCCGTGTACGAGCCCTACTACCACTCCGACCACGCTGAGTCCTCTTGGGTGAACCGTGGCGAGTCCTCCCG TAAGGCTTACGACCACAACTCCCCCTACATCTGGCCCCGTAACGACTACGACGGTTTCCTCGAGAACGCTCACGAGC ACCACGGTGTCTACAACCAGGGTCGTGGTATCGACTCCGGCGAGCGTCTGATGCAGCCCACCCAGATGTCCGCTCAG GAGGACCTGGGCGACGACACCGGTATCCACGTGATCCCCACCCTGAACGGTGACGACCGTCACAAGATCGTGAACGT GGACCAGCGCCAGTACGGTGACGTGTTCAAGGGTGACCTGAACCCCAAGCCCCAGGGCCAGCGTCTGATCGAGGTGT CCGTGGAGGAGAACCACCCCTTCACCCTGCGTGCTCCCATCCAGCGTATCTACGGTGTCCGTTACACCGAGACCTGG TCCTTCCTCCCCTCCCTGACCTGCACCGGTGACGCTGCTCCCGCTATCCAGCACATCTGCCTGAAGCACACCACCTG CTTCCAGGACGTGGTGGTGGACGTGGACTGCGCTGAGAACACCAAGGAGGACCAGCTGGCTGAGATCTCCTACAGGT TCCAGGGCAAGAAGGAGGCTGACCAGCCCTGGATCGTGGTGAACACCTCCACCCTGTTCGACGAGCTGGAGCTGGAC CCCCCCGAGATCGAGCCCGGTGTCCTGAAGGTGCTGCGTACCGAGAAGCAGTACCTGGGCGTGTACATCTGGAACAT GCGTGGTTCCGACGGCACCTCCACCTACGCTACCTTCCTCGTGACCTGGAAGGGTGACGAAAAGACCCGTAACCCCA CCCCCGCTGTGACCCCCCAGCCCCGTGGTGCTGAATTCCATATGTGGAACTACCACTCTCACGTGTTCTCCGTGGGT GACACCTTCTCCCTGGCTATGCACCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCTCCCTTCGACCTGCTGCTCGAGTGGCTGTA CGTGCCCATCGACCCCACCTGCCAGCCCATGCGCCTGTACTCCACCTGCCTGTACCACCCCAACGCTCCCCAGTGCC TGTCCCACATGAACTCCGGTTGCACCTTCACCTCCCCCCACCTGGCCCAGCGTGTGGCTTCCACCGTGTACCAGAAC TGCGAGCACGCTGACAACTACACCGCTTACTGCCTGGGTATCAGCCACATGGAGCCTTCCTTCGGTCTGATCCTGCA CGACGGTGGCACCACCCTGAAGTTCGTGGACACCCCCGAGTCCCTGTCCGGTCTGTACGTGTTCGTGGTGTACTTCA ACGGTCACGTGGAGGCTGTCGCTTACACCGTGGTGTCCACCGTGGACCACTTCGTGAACGCTATCGAGGAGCGTGGT TTCCCCCCCACCGCTGGCCAGCCCCCTGCTACCACCAAGCCCAAGGAGATCACCCCCGTCAACCCCGGCACCTCCCC TCTGCTGCGCTACGCTGCTTGGACCGGTGGTCTGGCTGCTGTGGTGCTGCTGTGCCTGGTGATCTTCCTGATCTGCA CCGCTAAGAGGATGCGTGTGAAGGCTTACCGTGTGGACAAGTCCCCTTACAACCAGTCCATGTACTACGCTGGTCTG CCCGTCGACGACTTCGAGGACTCCGAGTCCACCGACACCGAGGAGGAGTTCGGTAACGCTATCGGTGGTTCCCACGG TGGTTCCTCCTACACCGTGTACATCGACAAGACCCGCTAA(SEQ ID NO 11) 0rf68TCM的经过密码子优化的序列，标示下划线的起始和终止密码子MSGGCACCGTGAACAAGCCCGTGGTGGGCGTGCTGATGGGTTTCGGTATCATCACCGGCACCCTGCGTATCACCAACCCCGTGCG TGCTTCCGTGCTGCGTTACGACGACTTCCACACCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACTCCGTGTACGAGCCCTACT ACCACTCCGACCACGCTGAGTCCTCTTGGGTGAACCGTGGCGAGTCCTCCCGTAAGGCTTACGACCACAACTCCCCC TACATCTGGCCCCGTAACGACTACGACGGTTTCCTCGAGAACGCTCACGAGCACCACGGTGTCTACAACCAGGGTCG TGGTATCGACTCCGGCGAGCGTCTGATGCAGCCCACCCAGATGTCCGCTCAGGAGGACCTGGGCGACGACACCGGTA TCCACGTGATCCCCACCCTGAACGGTGACGACCGTCACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGCCAGTACGGTGACGTG TTCAAGGGTGACCTGAACCCCAAGCCCCAGGGCCAGCGTCTGATCGAGGTGTCCGTGGAGGAGAACCACCCCTTCAC CCTGCGTGCTCCCATCCAGCGTATCTACGGTGTCCGTTACACCGAGACCTGGTCCTTCCTCCCCTCCCTGACCTGCA CCGGTGACGCTGCTCCCGCTATCCAGCACATCTGCCTGAAGCACACCACCTGCTTCCAGGACGTGGTGGTGGACGTG GACTGCGCTGAGAACACCAAGGAGGACCAGCTGGCTGAGATCTCCTACAGGTTCCAGGGCAAGAAGGAGGCTGACCA GCCCTGGATCGTGGTGAACACCTCCACCCTGTTCGACGAGCTGGAGCTGGACCCCCCCGAGATCGAGCCCGGTGTCC TGAAGGTGCTGCGTACCGAGAAGCAGTACCTGGGCGTGTACATCTGGAACATGCGTGGTTCCGACGGCACCTCCACC TACGCTACCTTCCTCGTGACCTGGAAGGGTGACGAAAAGACCCGTAACCCCACCCCCGCTGTGACCCCCCAGCCCCG TGGTGCTGAATTCCATATGTGGAACTACCACTCTCACGTGTTCTCCGTGGGTGACACCTTCTCCCTGGCTATGCACC TGCAGTACAAGATCCACGAGGCTCCCTTCGACCTGCTGCTCGAGTGGCTGTACGTGCCCATCGACCCCACCTGCCAG CCCATGCGCCTGTACTCCACCTGCCTGTACCACCCCAACGCTCCCCAGTGCCTGTCCCACATGAACTCCGGTTGCAC CTTCACCTCCCCCCACCTGGCCCAGCGTGTGGCTTCCACCGTGTACCAGAACTGCGAGCACGCTGACAACTACACCG CTTACTGCCTGGGTATCAGCCACATGGAGCCTTCCTTCGGTCTGATCCTGCACGACGGTGGCACCACCCTGAAGTTC GTGGACACCCCCGAGTCCCTGTCCGGTCTGTACGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGTCACGTGGAGGCTGTCGCTTA CACCGTGGTGTCCACCGTGGACCACTTCGTGAACGCTATCGAGGAGCGTGGTTTCCCCCCCACCGCTGGCCAGCCCC CTGCTACCACCAAGCCCAAGGAGATCACCCCCGTCAACCCCGGCACCTCCCCTCTGCTGCGCGACTGGATCTTGTGG ATCTCCTTCGCTATCTCCTGCTTCCTGCTGTGCGTGGCTCTGCTGGGTTTCATCATGTGGGCTTGCCAGAAGGGTAA CATCCGTTGCAACATCTGCATCTAA(SEQ ID NO 12)来自GenBank NC_001348 (VZV Dumas 株)的 0RF62 蛋白与来自 GenBankAB097933 (VZV Oka 亲本株)的 0RF62 蛋白的比对查询I-Oka亲本株查询 2-Dumas 株同一性=(99% )查询1 MDTPPMQRSTPQRAGSPDTLELMDLLDMMMEHRARWTSSQPDDLLFGENGVMVGRE 60MDTPPMQRSTPQRAGSPDTLELMDLLDAAAAMEHRARVVTSSQPDDLLFGENGVMVGRESbjct 1 MDTPPMQRSTPQRAGSPDTLELMDLLDAAAAAAEHRARWTSSQPDDLLFGENGVMVGRE 60 查询61 HEIVSIPSVSGLQPEPRTEDVGEELTQDDYVCEDGQDLMGSPVIPLAEVFHTRFSEAGAR 120HEIVSIPSVSGLQPEPRTEDVGEELTQDDYVCEDGQDLMGSPVIPLAEVFHTRFSEAGARSbjct 61 HEIVSIPSVSGLQPEPRTEDVGEELTQDDYVCEDGQDLMGSPVIPLAEVFHTRFSEAGAR 120 查询121 EPTGADRSLETVSLGTKLARSPKPPMNDGETGRGTTPPFPQAFSPVSPASPVGDAAGNDQ 180EPTGADRSLETVSLGTKLARSPKPPMNDGETGRGTTPPFPQAFSPVSPASPVGDMGNDQSbjct 121 EPTGADRSLETVSLGTKLARSPKPPMNDGETGRGTTPPFPQAFSPVSPASPVGDAAGNDQ 180 查询181 REDQRSIPRQTTRGNSPGIPSVVHRDRQTQSISGKKPGDEQAGHAMSGDGVVLQKTQRP 240REDQRSIPRQTTRGNSPGLPSWHRDRQTQSISGKKPGDEQAGHAHASGDGWLQKTQRP
Sbjct 181REDQRSIPRQTTRGNSPGIPSVVHRDRQTQSISGKKPGDEQAGHAMSGDGVVLQKTQRP 240查询241 AQGKSPKKKTLKVKVPLPARKPGGPVPGPVEQLYHVLSDSVPAKGAKADLPFETDDTRPR 300AQGKSPKKKTLKVKVPLPARKPGGPVPGPVEQLYHVLSDSVPAKGAKADLPFETDDTRPRSbjct 241AQGKSPKKKTLKVKVPLPARKPGGPVPGPVEQLYHVLSDSVPAKGAKADLPFETDDTRPR 300查询 301 KHDARGITPRVPGRSSGGKPRAFLALPGRSHAPDPIEDDSPVEKKPKSREFVSSSSSSSS 360KHDARGITPRVPGRSSGGKPRAFLALPGRSHAPDPIEDDSPVEKKPKSREFVSSSSSSSSSbjct 301KHDARGITPRVPGRSSGGKPRAFLALPGRSHAPDPIEDDSPVEKKPKSREFVSSSSSSSS 360查询 361 WGSSSEDEDDEPRRVSVGSETTGSRSGREHAPSPSNSDDSDSNDGGSTKQNIQPGYRSIS 420WGSSSEDEDDEPRRVSVGSETTGSRSGREHAPSPSNSDDSDSNDGGSTKQNIQPGYRSISSbjct 361WGSSSEDEDDEPRRVSVGSETTGSRSGREHAPSPSNSDDSDSNDGGSTKQNIQPGYRSIS 420查询421 GPDPRIRKTKRUGEPGRQRQKSFSLPRSRTPIIPPVSGPLMMPDGSPWPGSAPLPSNRV 480GPDPRIRKTKRUGEPGRQRQKSFSLPRSRTPIIPPVSGPLMMPDGSPWPGSAPLPSNRVSbjct 421GPDPRIRKTKRUGEPGRQRQKSFSLPRSRTPIIPPVSGPLMMPDGSPWPGSAPLPSNRV 480查询 481 RFGPSGETREGHWEDEAVRAARARYEASTEPVPLYVPELGDPARQYRALINLIYCPDRDP 540
RFGPSGETREGHWEDEAVRAARARYEASTEPVPLYVPELGDPARQYRALINLIYCPDRDPSbjct 481RFGPSGETREGHWEDEAVRAARARYEASTEPVPLYVPELGDPARQYRALINLIYCPDRDP 540查询 541 IAWLQNPKLTGVNSALNQFYQKLLPPGRAGTAVTGSVASPVPHVGEAMATGEALWALPHA 600IAWLQNPKLTGVNSALNQFYQKLLPPGRAGTAVTGSVASPVPHVGEAMATGEALWALPHASbjct 541IAWLQNPKLTGVNSALNQFYQKLLPPGRAGTAVTGSVASPVPHVGEAMATGEALWALPHA 600查询 601 AAAVAMSRRYDRAQKHFILQSLRRAFASMAYPEATGSSPAARISRGHPSPTTPATQTPDP 660AAAVAMSRRYDRAQKHFILQSLRRAFASMAYPEATGSSPAARISRGHPSPTTPATQ PDPSbjct 601MAVAMSRRYDRAQKHFILQSLRRAFASMAYPEATGSSPMRISRGHPSPTTPATQAPDP 660查询 661 QPSAMRSLSVCPPDDRLRTPRKRKSQPVESRSLLDKIRETPVADARVADDHWSKAKRR 720QPSAMRSLSVCPPDDRLRTPRKRKSQPVESRSLLDKIRETPVADARVADDHWSKAKRRSbjct 661QPSAMRSLSVCPPDDRLRTPRKRKSQPVESRSLLDKIRETPVADARVADDHWSKAKRR 720查询 721 VSEPVTITSGPWDPPAVII1PLDGPAPNGGFRRIPRGALHTPVPSDQARKAYCTPETIA 780VSEPVTITSGPWDPPAVII1PLDGPAPNGGFRRIPRGALHTPVPSDQARKAYCTPETIASbjct 721VSEPVTITSGPWDPPAVII1PLDGPAPNGGFRRIPRGALHTPVPSDQARKAYCTPETIA 780查询 781 RLVDDPLFPTAWRPALSFDPGALAEIMRRPGGGDRRFGPPSGVEALRRRCAWMRQIPDP 840RLVDDPLFPTAWRPALSFDPGALAEIMRRPGGGDRRFGPPSGVEALRRRCAWMRQIPDPSbjct 781RLVDDPLFPTAWRPALSFDPGALAEIMRRPGGGDRRFGPPSGVEALRRRCAWMRQIPDP 840查询 841 EDVRLLIIYDPLPGEDINGPLESTLATDPGPSWSPSRGGLSWLAALSNRLCLPSTHAWA 900EDVRLLIIYDPLPGEDINGPLESTLATDPGPSWSPSRGGLSWLAALSNRLCLPSTHAWASbjct 841EDVRLLIIYDPLPGEDINGPLESTLATDPGPSWSPSRGGLSWLAALSNRLCLPSTHAWA 900查询901 GNWTGPPDVSALNARGVLLLSTRDLAFAGAVEYLGSRLASARRRLLVLDAVALERWPRDG 960GNWTGPPDVSALNARGVLLLSTRDLAFAGAVEYLGSRLASARRRLLVLDAVALERWPRDGSbjct 901 GNWTGPPDVSALNARGVLLLSTRDLAFAGAVEYLGSRLASARRRLLVLDAVALERWPRDG 960查询 961 PALSQYHVYVRAPARPDAQAWRWPDSAVTEGLARAVFASSRTFGPASFARIETAFANLY 1020PALSQYHVYVRAPARPDAQAWRWPDSAVTEGLARAVFASSRTFGPASFARIETAFANLY
Sbjct 961 PALSQYHVYVRAPARPDAQAWRWPDSAVTEGLARAVFASSRTFGPASFARIETAFANLY 1020查询 1021 Pgeqplclcrggnvaytvctragpktrvplspreyrqyvlpgfdgckdlarqsrglglga iosoPGEOPLCLCRGGNVAYTVCTRAGPKTRVPLSPREYRgYVLPGFDGCHLARgSRGLGLGASbjct 1021 PGEOPLCLCRGGNVAYTVCTRAGPKTRVPLSPREYRgYVLPGFDGCHLARgSRGLGLGA 1080查询 1081 ADFVDEMHSHRMNRWGLGMLRPVFLPEGRRPGMGPEAGDVPTWARVFCRHALLEPD 1140
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Orf IE62 ICP4 全长。ATGGACACCCCCCCCATGCAGCGTTCCACCCCCCAGCGTGCTGGTTCCCC CGACACCCTCGAGCTGATGGACCTGCTGGACGCTGCTGCTGCCGCTGCCGAGCACCGTGCTCGTGTGGTGACCTCCT CCCAGCCCGACGACCTGCTGTTCGGCGAGAACGGTGTCATGGTCGGTCGTGAGCACGAGATCGTGTCCATCCCTTCC GTGTCCGGTCTGCAGCCCGAGCCCCGTACCGAGGACGTGGGCGAAGAGCTGACCCAGGACGACTACGTGTGCGAGGA CGGCCAGGACCTGATGGGTTCCCCCGTGATCCCCCTGGCTGAGGTGTTCCACACCCGTTTCTCCGAGGCTGGTGCTC GTGAGCCCACCGGTGCTGACCGTTCCCTCGAGACCGTGTCCCTGGGCACCAAGCTGGCTCGTTCCCCCAAGCCCCCC ATGAACGACGGCGAGACCGGTCGTGGCACCACCCCCCCCTTCCCTCAGGCTTTCTCCCCTGTGTCCCCCGCTTCCCC CGTGGGTGACGCTGCTGGTAACGACCAGCGTGAGGACCAGCGTTCCATCCCTCGTCAGACCACCCGTGGTAACTCCC CCGGTCTGCCCTCCGTGGTGCACCGTGACCGTCAGACCCAGTCCATCTCCGGCAAGAAGCCCGGCGACGAGCAGGCT GGTCACGCTCACGCTTCCGGTGACGGTGTTGTGCTGCAAAAAACCCAACGTCCCGCCCAGGGAAAGTCTCCCAAGAA GAAAACCCTGAAGGTCAAGGTGCCCCTGCCCGCTCGTAAGCCCGGTGGTCCCGTGCCCGGTCCCGTGGAGCAGCTGT ACCACGTGCTGTCCGACTCCGTGCCCGCTAAGGGTGCTAAGGCTGACCTGCCTTTCGAGACCGACGACACCCGTCCC CGTAAGCATGACGCTAGGGGCATCACTCCTCGTGTGCCCGGTCGTTCCTCCGGTGGCAAGCCCCGTGCTTTCCTGGC TCTGCCTGGTCGTTCCCACGCTCCCGACCCCATCGAGGACGACTCCCCCGTGGAGAAGAAGCCCAAGTCCCGCGAGT TCGTGTCCTCCTCCTCCAGCTCCTCCTCCTGGGGTTCCAGCTCCGAGGACGAGGACGACGAGCCCCGTCGTGTGTCC GTGGGTTCCGAGACCACCGGTTCCCGTTCCGGTCGCGAGCACGCCCCCTCCCCATCCAACTCTGACGACTCCGACTC CAACGACGGTGGTTCCACCAAGCAGAACATCCAGCCCGGCTACCGTTCCATTTCTGGTCCCGACCCCCGTATCCGTA AGACCAAGCGTCTGGCTGGCGAACCAGGCCGTCAGCGTCAGAAGTCCTTCTCCCTGCCCCGTTCCCGTACCCCTATC ATCCCTCCTGTCTCCGGCCCTCTGATGATGCCCGACGGTTCCCCCTGGCCCGGTTCCGCTCCCCTGCCCTCCAACCG TGTGCGTTTCGGTCCCTCCGGCGAGACCCGTGAGGGCCACTGGGAGGACGAGGCTGTGCGTGCTGCTCGTGCTCGTT ACGAGGCTTCCACCGAGCCCGTGCCCCTGTACGTGCCCGAACTGGGTGACCCTGCCCGTCAGTACCGTGCTCTGATC AACCTGATCTACTGCCCCGACCGTGACCCCATCGCTTGGCTGCAGAACCCCAAGCTGACCGGTGTCAACTCCGCTCT GAACCAGTTCTACCAGAAGCTGCTGCCCCCTGGTCGTGCTGGCACCGCTGTGACCGGTTCCGTGGCTTCCCCTGTGC CCCACGTGGGAGAGGCTATGGCTACCGGCGAGGCTCTGTGGGCTCTGCCTCACGCTGCCGCCGCTGTGGCTATGTCC CGTCGTTACGACCGTGCTCAGAAGCACTTCATCCTGCAGTCCCTGCGTCGTGCTTTCGCTTCCATGGCTTACCCCGA GGCTACCGGTTCCTCCCCCGCTGCTCGTATCTCCCGTGGTCACCCCTCCCCCACCACCCCCGCTACCCAGGCTCCAG ACCCCCAACCCTCTGCTGCTGCTCGTTCCCTGTCCGTGTGCCCCCCTGACGACCGTCTGCGTACCCCCCGTAAGCGC AAGTCCCAGCCCGTGGAGTCCCGTTCCCTGCTGGACAAGATCCGTGAGACCCCAGTGGCTGACGCTCGCGTGGCTGA CGACCACGTCGTGTCCAAGGCTAAGAGGCGCGTGTCCGAGCCTGTGACCATCACCTCCGGTCCTGTGGTGGACCCCC CTGCTGTGATCACCATGCCCCTGGACGGTCCCGCTCCCAACGGTGGTTTCCGTCGTATCCCTCGTGGTGCTCTGCAC ACCCCCGTGCCCTCCGACCAGGCTCGTAAGGCTTACTGCACCCCCGAGACCATCGCTCGTCTGGTGGACGACCCCCT GTTCCCCACCGCTTGGCGTCCTGCTCTGTCCTTCGACCCCGGTGCTCTGGCTGAGATCGCTGCTCGCCGTCCCGGTG GCGGTGATCGTCGCTTCGGTCCTCCCTCCGGTGTCGAGGCTCTGCGTCGTCGTTGCGCTTGGATGCGTCAGATCCCC GACCCTGAGGACGTGCGCCTGCTGATCATCTACGACCCTCTGCCCGGCGAGGACATCAACGGTCCTCTCGAGTCCAC CCTGGCTACCGACCCCGGTCCCTCCTGGTCCCCCTCCCGTGGTGGTCTGTCCGTGGTGCTGGCTGCCCTGTCCAACC GTCTGTGCCTGCCTTCCACCCACGCTTGGGCTGGTAACTGGACCGGTCCCCCCGACGTGTCCGCCCTGAACGCTCGC GGTGTCTTGCTCCTGTCCACCCGTGATCTGGCTTTCGCTGGTGCTGTGGAGTACCTGGGTTCCCGTCTGGCTTCCGC TCGTCGTCGTCTGCTGGTCCTGGACGCTGTGGCTCTCGAGCGTTGGCCCCGTGACGGTCCAGCCCTGTCTCAATACCACGTGTACGTGCGCGCTCCCGCTCGTCCCGACGCTCAGGCTGTGGTGCGCTGGCCCGACTCCGCTGTCACCGAGGGT CTGGCTCGTGCTGTGTTCGCTTCCTCCCGTACCTTCGGTCCCGCTTCCTTCGCTCGTATCGAGACCGCTTTCGCTAA CCTGTACCCCGGCGAGCAGCCCCTGTGCCTGTGCCGTGGTGGTAACGTGGCTTACACCGTGTGCACCCGTGCTGGTC CCAAGACCCGTGTGCCTCTGTCCCCCCGTGAGTACCGCCAGTACGTGCTGCCCGGTTTCGACGGTTGCAAGGACCTG GCTCGTCAGTCCCGCGGTCTGGGTCTGGGTGCTGCTGACTTCGTCGACGAGGCTGCTCACTCCCACCGTGCTGCTAA CCGTTGGGGCCTGGGCGCTGCTCTGCGTCCCGTGTTCCTGCCCGAGGGTCGTCGTCCTGGTGCTGCTGGTCCCGAGG CTGGCGACGTGCCCACCTGGGCTCGTGTGTTCTGCCGTCACGCTCTGCTCGAGCCCGACCCTGCTGCCGAGCCTCTG GTGCTGCCCCCCGTGGCTGGTCGTTCTGTGGCTCTGTACGCTTCCGCCGACGAGGCTCGCAACGCTCTGCCCCCCAT CCCCCGTGTGATGTGGCCCCCTGGTTTCGGCGCTGCTGAGACCGTCCTCGAGGGTTCCGACGGCACCCGTTTCGTGT TCGGTCACCACGGCGGTTCCGAGCGTCCCTCCGAGACCCAGGCTGGTCGCCAGCGCCGTACCGCTGACGACCGTGAG CACGCTCTCGAGCTGGACGACTGGGAGGTCGGCTGCGAGGACGCTTGGGACTCCGAAGAGGGTGGTGGCGACGACGG TGACGCTCCCGGCTCCTCCTTCGGTGTCTCCATCGTGTCCGTGGCTCCCGGTGTCCTGCGTGACCGTCGTGTGGGTC TGCGTCCTGCTGTGAAGGTGGAGCTGCTGTCCTCCTCTTCCTCTTCTGAGGATGAGGATGACGTGTGGGGTGGTCGT GGTGGTCGCTCCCCCCCTCAGTCCCGTGGTTAA(SEQ ID NO 16)用表达IE62的重组杆状病毒以每个细胞1-3个感染性颗粒(pfu)的感染复数 (MOI)感染约800ml Sf9细胞(在IL摇瓶中约2xl06个细胞/ml)，于27°C在不断摇动的情 况中温育，然后在感染后约64小时时收获。通过低速离心来除去培养基，并通过6000rpm 高剪切勻浆化(Silverson L4RT-A勻浆器)在25mMTrisCl pH 7. 5,250mM NaCl中溶解细 胞。离心后，将细胞溶胞物加载至阴离子交换柱(Fractogel TMAE,Merck KGaA，Germany)， 并用 25mM TrisCl pH 7. 5,500mM NaCl 洗脱。用 S 印hadex G25 (GE Healthcare)层析 柱对洗脱液进行缓冲液交换，交换成25mM NaPi pH 7. 5,375mM NaCl0在阳离子交换柱 (FractogelS03-, Merck KGaA, Germany)上加载来自 G25 柱的流过级分，并用 25mM NaPipH 7. 5,625mM NaCl洗脱。来自S03-柱的洗脱液变成最终产物，即纯化的IE62 (图3B ；第8 道)。结果。纯化的重组IE62具有大于90%的纯度(90%prure)，并且含有全长 (150KDa)和约6KDa的小蛋白质(p6)两者。IE62和p6没有通过大小排阻层析分开并以近 似相等的摩尔量存在。IE62和p6可以形成异二聚物或其它稳定的复合物。实施例4gE/gl的表达和纯化描述了重组VZV gE/gl受体异二聚物自Sf9昆虫细胞的表达和新的纯化方法。gE和gl是表面糖蛋白，并在人和经过免疫接种的动物中引发针对VZV的中和性抗体。开发如 在Sf9昆虫细胞中所生成的gE/gl异二聚物的可溶形式和纯化方法以分开分泌的蛋白质复 合物与宿主细胞和杆状病毒污染物。方法。对杆状病毒进行工程化改造以表达截短的、经过密码子优化的来自VZV Oka 株的gE和gl的基因(参见下文)。gE和gl两者都被除去了它们的跨膜域和羧基端域。 使用天然的gl信号肽来制备gl，并用杆状病毒GP64信号肽替换gE信号肽序列。合成该 基因(GeneArt，Germany)，并串联地克隆入pFastBacl载体中，其中每个基因在杆状病毒多 角体蛋白启动子的控制下(图4A)。将串联的基因盒(gene cassette)转移至AcMNPV杆 状病毒杆粒(Invitrogen)，然后纯化杆粒DNA，并用于转染Sf9昆虫细胞。对所得的重组杆状病毒进行噬斑纯化，并在Sf9细胞中制备病毒储液。gE DeltaTMCTATGGTGTCCGCTATCG
TGCTGTACGTGCTGCTGGCTGCTGCTGCTCACTCCGCTTTCGCTCGTATCACCAACCCCGTGCGTGCTTCCGTGCTG
CGTTACGACGACTTCCACACCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACTCCGTGTACGAGCCCTACTACCACTCCGACCA
CGCTGAGTCCTCTTGGGTGAACCGTGGCGAGTCCTCCCGTAAGGCTTACGACCACAACTCCCCCTACATCTGGCCCC
GTAACGACTACGACGGTTTCCTCGAGAACGCTCACGAGCACCACGGTGTCTACAACCAGGGTCGTGGTATCGACTCC
GGCGAGCGTCTGATGCAGCCCACCCAGATGTCCGCTCAGGAGGACCTGGGCGACGACACCGGTATCCACGTGATCCC
CACCCTGAACGGTGACGACCGTCACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGCCAGTACGGTGACGTGTTCAAGGGTGACC
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ATCCAGCGTATCTACGGTGTCCGTTACACCGAGACCTGGTCCTTCCTCCCCTCCCTGACCTGCACCGGTGACGCTGC
TCCCGCTATCCAGCACATCTGCCTGAAGCACACCACCTGCTTCCAGGACGTGGTGGTGGACGTGGACTGCGCTGAGA
ACACCAAGGAGGACCAGCTGGCTGAGATCTCCTACAGGTTCCAGGGCAAGAAGGAGGCTGACCAGCCCTGGATCGTG
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TTCCATATGTGGAACTACCACTCTCACGTGTTCTCCGTGGGTGACACCTTCTCCCTGGCTATGCACCTGCAGTACA
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CCTGTACTCCACCTGCCTGTACCACCCCAACGCTCCCCAGTGCCTGTCCCACATGAACTCCGGTTGCACCTTCACC
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GCCTGGGTATCAGCCACATGGAGCCTTCCTTCGGTCTGATCCTGCACGACGGTGGCACCACCCTGAAGTTCGTGGA
CACCCCCGAGTCCCTGTCCGGTCTGTACGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGTCACGTGGAGGCTGTCGCTTACACC
GTGGTGTCCACCGTGGACCACTTCGTGAACGCTATCGAGGAGCGTGGTTTCCCCCCCACCGCTGGCCAGCCCCCTG
CTACCACCAAGCCCAAGGAGATCACCCCCGTCAACCCCGGCACCTCCCCTCTGCTGCGCTAA(SEQ ID NO 17)
gE DeltaTMCTMVSAIVLYVL LAAAAHSAFA RITNPVRASV LRYDDFHTDE DKLDTNSVYEPYYHSDHAES
SffVNRGESSR KAYDHNSPYI WPRNDYDGFL ENAHEHHGVYNQGRGIDSGE RLMQPTQMSA QEDLGDDTGI
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ID NO :18)gl DeltaTMCTATGTTCCTCATCCAGTGCCTGATCTCCGCTGTGATCTTCTACATCCAAGTGA
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权利要求
一种纯化的水痘带状疱疹病毒(VZV)病毒样颗粒(VLP)，其包含VZV gE，其中所述VLP不包含酵母Ty蛋白，并且不包含VZV核酸。
2.权利要求1的VZV-VLP，其中所述VZV-VLP包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。
3.权利要求2的VZV-VLP，其中所述来自感染原的另外的蛋白质衍生自病毒、真菌、寄 生物或细菌或其组合。
4.权利要求3的VZV-VLP，其中所述病毒蛋白质衍生自流感病毒、登革病毒、黄热病毒、 单纯疱疹病毒I或II、副流感病毒、水痘带状疱疹病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、人免疫 缺陷病毒、冠状病毒或肝炎病毒。
5.权利要求2的VZV-VLP，其中所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表 面上表达。
6.权利要求4的VZV-VLP，其中所述来自VZV的蛋白质选自下组gl(0RF67)、 gM(0RF50)、gH、gB和间层或其组合。
7.权利要求6的VZV-VLP，其中所述VZV-VLP包含来自感染原的另外的蛋白质。
8.权利要求1的VZV-VLP，其中所述VLP基本上由gE组成。
9.权利要求1的VZV-VLP，其中所述VLP衍生自包含克隆的gEVZV的重组表达系统。
10.一种生成VLP的方法，包括将编码VZV gE蛋白的载体转染入合适的宿主细胞中，并 在容许形成、分离和/或纯化VLP的条件下表达所述VZV gE蛋白，其中所述宿主细胞不包 含酵母Ty蛋白，并且所述VLP不包含VZV核酸。
11.权利要求10的方法，其中所述VZV-VLP包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。
12.权利要求11的方法，其中所述来自感染原的另外的蛋白质衍生自病毒、真菌、寄生 物或细菌或其组合。
13.权利要求12的方法，其中所述病毒蛋白质衍生自流感病毒、登革病毒、黄热病毒、 单纯疱疹病毒I或II、副流感病毒、水痘带状疱疹病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、人免疫 缺陷病毒、冠状病毒或肝炎病毒。
14.权利要求11的方法，其中所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面 上表达。
15.权利要求13的方法，其中所述来自VZV的蛋白质选自下组gI(ORF67)、 gM(0RF50)、gH、gB和间层或其组合。
16.权利要求15的方法，其中所述VZV-VLP包含来自感染原的另外的蛋白质。
17.权利要求10的方法，其中所述VLP基本上由gE组成。
18.权利要求10的方法，其中所述宿主细胞选自下组酵母、昆虫、两栖动物、禽类或哺 乳动物细胞。
19.权利要求18的方法，其中所述宿主细胞是昆虫细胞。
20.权利要求18的方法，其中所述昆虫细胞是Sf9细胞。
21.一种抗原性配制剂，其包含VZV-VLP，其中所述VLP-VLP包含VZV gE且其中所述 VLP不包含酵母Ty蛋白，并且不包含VZV核酸。
22.权利要求21的抗原性配制剂，其中所述VZV-VLP包含至少一种来自感染原的另外 的蛋白质。
23.权利要求22的抗原性配制剂，其中所述来自感染原的另外的蛋白质衍生自病毒、 真菌、寄生物或细菌或其组合。
24.权利要求23的抗原性配制剂，其中所述病毒蛋白质衍生自流感病毒、登革病毒、 黄热病毒、单纯疱疹病毒I或II、副流感病毒、水痘带状疱疹病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病 毒、人免疫缺陷病毒、冠状病毒或肝炎病毒。
25.权利要求22的抗原性配制剂，其中所述来自感染原的另外的蛋白质在所述 VZV-VLP的表面上表达。
26.权利要求24的抗原性配制剂，其中所述来自VZV的蛋白质选自下组gI(0RF67)、 gM(0RF50)、gH、gB和间层或其组合。
27.权利要求26的抗原性配制剂，其中所述VZV-VLP包含来自感染原的另外的蛋白质。
28.权利要求21的抗原性配制剂，其中所述VLP基本上由gE组成。
29.权利要求21的抗原性配制剂，其中所述抗原性配制剂包含佐剂或免疫刺激剂。
30.权利要求21的抗原性配制剂，其中所述配制剂是通过口服、皮内、鼻内、肌肉内、腹 膜内、静脉内或皮下向脊椎动物施用的。
31.一种疫苗，其包含VZV-VLP，其中所述VLP-VLP包含VZV gE且其中所述VLP不包含 酵母Ty蛋白，并且不包含VZV核酸。
32.权利要求31的疫苗，其中所述VZV-VLP包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。
33.权利要求32的疫苗，其中所述来自感染原的另外的蛋白质衍生自病毒、真菌、寄生 物或细菌或其组合。
34.权利要求33的疫苗，其中所述病毒蛋白质衍生自流感病毒、登革病毒、黄热病毒、 单纯疱疹病毒I或II、副流感病毒、水痘带状疱疹病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、人免疫 缺陷病毒、冠状病毒或肝炎病毒。
35.权利要求32的疫苗，其中所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面 上表达。
36.权利要求34的疫苗配制剂，其中所述来自VZV的蛋白质选自下组gl(ORF67)、 gM(0RF50)、gH、gB和间层或其组合。
37.权利要求36的疫苗，其中所述VZV-VLP包含来自感染原的另外的蛋白质。
38.权利要求31的疫苗，其中所述VLP基本上由gE组成。
39.权利要求32的疫苗，其中所述疫苗是与佐剂或免疫刺激剂一起配制的。
40.权利要求31的疫苗，其中所述疫苗是通过口服、皮内、鼻内、肌肉内、腹膜内、静脉 内或皮下向脊椎动物施用的。
41.一种在人或动物中引发针对感染的保护性免疫的方法，包括给所述人或动物施用 包含VZV-VLP的抗原性配制剂或疫苗，其中所述VLP-VLP包含VZV gE且其中所述VLP不包 含酵母Ty蛋白，并且不包含VZV核酸。
42.权利要求41的方法，其中所述感染是由病毒、真菌、寄生物或细菌或其组合引起的。
43.权利要求41的方法，其中所述VZV-VLP包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。
44.权利要求43的方法，其中所述来自感染原的另外的蛋白质衍生自病毒、真菌、寄生 物或细菌或其组合。
45.权利要求44的VZV-VLP，其中所述病毒蛋白质衍生自流感病毒、登革病毒、黄热病 毒、单纯疱疹病毒I或II、副流感病毒、水痘带状疱疹病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、人 免疫缺陷病毒、冠状病毒或肝炎病毒。
46.权利要求43的VZV-VLP，其中所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的 表面上表达。
47.权利要求45的VZV-VLP，其中所述来自VZV的蛋白质选自下组gl(0RF67)、 gM(0RF50)、gH、gB和间层或其组合。
48.权利要求47的VZV-VLP，其中所述VZV-VLP包含来自感染原的另外的蛋白质。
49.权利要求41的VZV-VLP，其中所述VLP基本上由gE组成。
50.权利要求41的VZV-VLP，其中所述VLP衍生自包含克隆的gEVZV的重组表达系统。
全文摘要
本发明公开了新的水痘带状疱疹病毒(VZV)病毒样颗粒(VLP)，其包含VZV的糖蛋白E。本发明还公开了VZV-VLP的疫苗配制剂和在受试者中诱导免疫应答的方法。
文档编号A61K39/245GK101801412SQ200880108051
公开日2010年8月11日 申请日期2008年7月21日 优先权日2007年7月19日
发明者彼得·普什科, 盖尔·史密斯 申请人:诺瓦瓦克斯股份有限公司