专利名称：：白芷总香素提取物在制备5-羟色胺调节剂的药物中的用途的制作方法
技术领域：
：本发明提供了白芷总香素提取物的用途，属于药物领域。
背景技术：
：5-羟色胺(5-Hydroxytryplamine.5-HT)，5-羟色胺(5-HT)又称血清素，含量为0.222.06umol/L，39361ug/L;主要来自胃肠道及中枢神经系统，其余分布在血小板、肺、血清、唾液腺等组织中。当体内5-羟色胺升高时，会出现消化道、肝、肾、肺或脑类癌综合征、慢性胰腺炎；5-羟色胺降低时，会出现震颤麻痹、偏头痛、苯酮尿症、类风湿关节炎。偏头痛的发病机制较为复杂，其发病机理至今仍是世界医学研究的课题，众多学者根据自己的研究成果提出了不同的解释，都有一定的研究依据，但也存在相当的局限性。到目前为止有关偏头痛的发病机理主要有生化源学说、血管学说、神经学说、神经血管联合学说等，其中，生化源学说指出5-羟色胺与偏头痛的关系，早在上个世纪60年代，国外学者就发现偏头痛发作期患者血浆中5-羟色胺(5-hydroxvtryptamine，5-HT)含量降低，5-HT可减轻偏头痛的急性发作。该学说认为5-HT的释放在偏头痛的病理过程中扮演了十分重要的角色。首先因某些原因偏头痛患者血液中可特异性作用于血小板的5-HT释放因子升高，使血小板释放5-HT。释放的5-HT使颅内血管收縮，引起缺血的前驱症状，同时颅内血管收縮导致应激反应，兴奋交感神经，使血中肾上腺素和游离脂肪酸增加，作用于血小板，产生血栓素A2(ThromboxanA2，TXA2)，TXA2主要在血小板微粒体内合成，具有很强的收縮血管作用，进一步促进5-HT对颅内血管的收縮。升高的5-HT被单胺氧化酶A(Monoamineoxidasea，MAO-A)所不断分解，变成五羟卩引哚乙酸(5-hydroxyindoleaceticacid，5-HIAA)由尿中排出，其结果使5-HT耗竭，继发性地引起血管的过度扩张，从而产生搏动性头痛。此外，5-HT能增加血管通透性，使缓激肽或组胺渗出，导致血管周围肿胀，产生无菌性炎症，使搏动性头痛不久后变成持续性头痛。目前现代医学治疗偏头痛急性发作有效药物，主要包括两类非选择性受体激动剂和选择性5-HT^受体激动剂。麦角碱类，如麦角胺、二氢麦角胺(麦角胺的衍生物)等属非选择性5-HT,受体激动剂，对5-HT,、5-HT2、去甲肾上腺素和多巴胺受体都有作用，导致外周血管收縮，从而缓解偏头痛；曲坦类为选择性5-HT,受体激动剂，为新的一类急性偏头痛治疗药；包括第一代曲坦类,药物如:舒马曲坦(sumatriptan),也称英明格，5-HT1B/1D受体激动剂，具收縮血管作用外，还能于三叉神经轴索中存在的抑制性受体结合，抑制三叉神经核的c-fos的产生，抑制神经源性炎症，降低导致P物质(substanceP，SP)和降转素基因相关肽(calcitoningene-relatedpeptide,CGRP)等神经递质的释放。第二代曲坦类药物如:佐米曲坦(zolmitriptan)、那拉曲坦(naratriptan)、禾廿扎曲坦(rizatriptan)、氟伐曲坦(frovatriptan)、依立曲坦(eletriptan)、阿莫曲坦(almotriptan)等。该类药物对大部分偏头痛发作患者有效。白芷为一种常用中药，具有驱风散寒、燥湿排脓之功效，常用于治疗风寒感冒、鼻渊头痛等症。《中国药典》2000年版收载的白芷为伞形科植物白芷Angelicadahurica(Fisch.exHoffin.)Benth.etHook.f.或杭白芷A.dahurica(Fisch.exHoffin.)Benth.etHook.f.var.formosana(Boiss.)ShanetYuan的干燥根，所含有效成分主要为氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素等香豆素类化合物。白芷香豆素有抗炎、抑制前列腺素E2的产生、抗组胺作用、光敏作用、对脂肪细胞的作用、对平滑肌的作用、抗微生物作用等(见杜兴旭等，中药白芷香豆素类成分的研究进展，井冈山学院学报(自然科学)，第26巻第2期，2005年10月)；秦旭华等，川白芷总香豆素治疗偏头痛的部分药效学实验研究，四川中医，2008年06期，报道中药白芷香豆素对硝酸甘油致实验性偏头痛的药效。目前尚无相关白芷总香素提取物作为5-羟色胺调节剂的药物的文献报道。
发明内容本发明的技术方案是提供了白芷总香素提取物的新用途，具体地，是在制备5-羟色胺调节剂的药物中的用途，本发明另一技术方案是提供了一种具有5-羟色胺调节剂的药物组合物。本发明提供了白芷总香素提取物在制备5-羟色胺调节剂的药物中的用途。其中，所述的药物是治疗偏头痛的药物。其中，所述的白芷总香素素提取物中总香豆素的含量应不低于44.672mg/g，欧前胡素的含量应不低于68.623mg/g。其中，所述的白芷总香素素提取物的HPLC色谱如图1所示，含有14个共有指纹峰；其色谱条件为色谱柱AichromReliasilC18色谱柱(4.6mmx250mm，5)um)，流动相甲醇、水和四氢呋喃梯度洗脱，柱温40°C，流速lml/min，波长300nm，进样量5pl，甲醇、水及四氢呋喃梯度洗脱时间和比例为洗脱时间Omin，水、四氢呋喃、甲醇的重量百分比分别为水占60%，四氢呋喃8%，甲醇32%;洗脱时间10min，水、四氢呋喃、甲醇的重量百分比分别为水占60%，四氢呋喃8%，甲醇32%;洗脱时间50min，水、四氢呋喃、甲醇的重量百分比分别为水占20%，四氢呋喃16%，甲醇64%。其中，所述的共有峰的平均相对保留时间(min)为7.911、9.731、13.390、16.59、19.997、23.964、29.512、30.271、31.949、34.525、37.298、39,161、39.957、42.096。其中，所述的白芷香豆素的制备方法包括如下步骤a、白芷55-95%乙醇提取液减压回收乙醇，浓縮；b、将a步骤浓縮，加入石油醚萃取，弃去石油醚萃取层；萃余相加入乙酸乙酯萃取，合并萃取相，减压回收乙酸乙酯，即得。进一步优选地，a步骤所述的白芷药材粒度为20目，乙醇提取为75%乙醇热回流提取。本发明还提供了一种调节5-羟色胺的药物组合物，它是由所述的白芷总香豆素提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料制备而成的药剂。其中，所述的药剂是口服制剂或经皮给药制剂。其中，所述的经皮给药制剂中辅料促渗剂为氮酮、油酸和冰片。本发明药物5-羟色胺调节剂，除了治疗偏头痛外，还可治疗5-羟色胺降低引起的其它疾病，药效明确，适应症针对性强，为临床提供了一种新的选择。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。图l标注共有峰的样品HPLC色谱图图210批样品的HPLC指纹图谱具体实施例方式实施例l本发明白芷香豆素的制备称取白芷药材粗粉(20目)5000g，共10份，分别加入8倍量75%的乙醇提取3次，每次3小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，将药液减压浓縮至浓度为每ml相当于2g药材，放冷，分别加入2倍量石油醚萃取1次后，弃去石油醚层(即萃取相)，萃余相再分别加入乙酸乙酯萃取3次，每次加入2倍量乙酸乙酯，合并萃取相，减压回收乙酸乙酯，将浸膏进行真空浓縮干燥，即得川白芷香豆素有效部位提取物。上述川白芷香豆素有效部位提取物为活性成分，可制备成常用口服制剂及经皮给药制剂。除了采用上述方法制备的白芷香豆素外，还可以直接购买市售的白芷香豆素。实施例2本发明白芷香豆素的制备称取白芷药材粗粉(20目)5000g，共10份，分别加入8倍量55%的乙醇提取3次，每次3小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，将药液减压浓縮至浓度为每ml相当于2g药材，放冷，分别加入2倍量石油醚萃取1次后，弃去石油醚层(即萃取相)，萃余相再分别加入乙酸乙酯萃取3次，每次加入2倍量乙酸乙酯，合并萃取相，减压回收乙酸乙酯，将浸膏进行真空浓縮干燥，即得川白芷香豆素有效部位提取物。实施例3本发明白芷香豆素的制备称取白芷药材粗粉(20目)5000g，共10份，分别加入8倍量95%的乙醇提取3次，每次3小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，将药液减压浓縮至浓度为每ml相当于2g药材，放冷，分别加入2倍量石油醚萃取1次后，弃去石油醚层(即萃取相)，萃余相再分别加入乙酸乙酯萃取3次，每次加入2倍量乙酸乙酯，合并萃取相，减压回收乙酸乙酯，将浸膏进行真空浓縮干燥，即得川白芷香豆素有效部位提取物。实施例4本发明药物的制备取实施例l制备的白芷香豆素10g，加入淀粉制粒，整粒，得颗粒剂。实施例5本发明经皮给药制剂的制备取实施例1的制备的白芷香豆素10g，加入氮酮、油酸和冰片中的一种或混合，作为促渗剂，可直接制备成外用透皮给药制剂。白芷香豆素的透皮促进作用试验皮肤表皮的角质层对外用药物形成了-道难以渗透的生理屏障，要使药物在一定时间内经皮渗透并达到治疗所需的血药浓度，皮用透皮吸收促进剂是增加药物透皮吸收的首选方法。渗透促进剂种类繁多，本实验分别选择了有机溶剂类、有机酸脂类、氮酮类和天然产物四类渗透促进剂中具有代表性的乙醇、油酸、氮酮和冰片进行实验。称取一定量川白芷香豆素类有效部位，用不同浓度乙醇溶液超声处理制备成促渗剂为乙醇的供试品；用蒸馏水处理后加入各比例量的水溶性氮酮作为促渗剂为氮酮的供试品；油酸和冰片用少量乙醇溶解后，加入到白芷有效部位的混悬液中超声处理作为促渗剂分别为油酸和冰片的供试液，进行实验，结果如下。(1)乙醇乙醇的促渗机制一定程度上是通过对角质层细胞的溶剂化(水化)作用，降低角质层的界面张力。根据其常用剂量选择10%、20%、40。/。浓度乙醇配制样品溶液，按上述确定的透皮实验条件进行筛选。结果见表l、2。表l不同比例乙醇对累积渗透量的影响(n=3)促渗剂Q(|ig/cm2)lh2h4h6h8h10h12h18h24h10%乙醇3.55017.856320.032733.856246.012453.206161.023476.5932109.032120。/o乙醇3.69638.021325.698340.231550.230260.231577.963291.1203120.321040%乙醇3.56938.123024.963242.751253.632066.032175.8210卯.8652125.4723表2不同比例乙醇的体外渗药动力学方程促渗剂方程J(pg/cm2h)10%乙醇Q=4.4291t+3.85454.42910.98920%乙醇Q=5.0228t+5.61945.02280.98540%乙醇Q=5.1554t+5.89155.15540.983上述结果表明单独使用乙醇对川白芷香豆素有效部位中欧前胡素的促渗作用较弱。(2)油酸(OA)油酸属于脂肪酸类渗透促进剂，其与皮肤中的脂肪酸有相似的结构，分子中存在的不饱和双键使其具有不对称的空间结构。其作用机制主要是渗入角质层脂质双分子层疏水结构时，由于其不饱和疏水链的顺式结构，使双分子层扭转，形成微细的易于渗z透的流动性通道，有效地影响了角质层脂质结构的有序排列，影响其有序排列；降低角质层脂质双分子层的相转变温度；引起角质层脂质固-液相分离和晶型转变；增加药物在角质层的分布。油酸主要是影响非极性通道，由于它的不饱和疏水链的顺式结构，形成不对称的空间构型，增加了膜的运动自由度和流动性。油酸常用量为5%，浓度过高(〉20%)则对皮肤有刺激性，故选择加入2%、5%、8%三种不同浓度的油酸，测定其对白芷香豆素有效部位中欧前胡素体外渗透性的影响，结果见表3、表4。_表3不同比例油酸对累积渗透量的影响(n=3)_Q(jig/cm2)促渗剂-lh2h4h6h8h10h12h18h24h2%OA12.023130.212090.2300125.6354198.0325238.2305270.5862396.0235472.02355%OA10.365226.302362.350184.3210130.2563186.3201221.3560300.2354398.32018%OA10.247522.530245.230277.0231110.2365152.368201.4023256.3210302.7563表4不同比例油酸的体外渗药动力学方程(n==3)促渗剂方程J(i-ig/cm2h)2%OAQ=20.653t+8.613220.6530.9925%OAQ=17.165t-4.359917.1650.9968%OAQ=13.574t+2.705913.5740.986试验结果表明，白芷香豆素有效部位中加入2%的油酸作为渗透促进剂时，其渗透速率最大。(3)氮酮(Azone)氮酮是近年来国内外使用较多的促渗剂，由弱极性长链垸烃或烯烃组成，其性质稳定、无毒、无味、无刺激性。氮酮的作用机制是①与脂质相互作用渗入皮肤角质层和经毛囊途径渗入毛囊内根鞘，与细胞间脂质或生物膜类脂质作用，溶解脂质后形成间隙(表现为表皮裂隙增大和毛囊口孔径拓宽)或使该层细胞间脂质排列有序性下降，膜脂的流动性增加，导致细胞结构变得疏松，外层角质易于脱落，降低药物在角质层和毛囊内根鞘扩散阻力，促进药物经表皮细胞间隙和毛囊途径吸收②与角质细胞内基质相互作用，进入角质层内的氮酮液化细胞内脂质使扩散阻力减少③水化机制氮酮增加皮肤角质层含水量，使该层细胞(尤其是基底角质层的细胞)膨胀(体积增大)，药物在该层形成储库，从而维持一定的药物释放和作用时间，促进水溶性物质经水性通道渗透吸收。氮酮的常用浓度一般为1%10%，有文献报道它的促渗作用往往不随使用浓度的提高而增加。氮酮的最佳浓度与药物的物理化学性质及所用介质有关，最佳用量须根据药物及其剂型通过实验求出，用量过多，可能得到相反的效果。因此我们分别比较了2%、4%、6%三种不同浓度的氮酮对白芷香豆素有效部位中欧前胡素体外渗透性的影响，结果见表5、表6。表5不同比例氮酮对累积渗透量的影响(n=3)促渗剂Q(ng/cm2)lh2h4h6h8h10h12h18h24h2%Azotic4%AzoneG%Azonc8.230511.02305.032121.032532.052316.352060.325388.356240.253684.2365137.023563.3204142.0235220.3562115.0232172.3205263.5632132.0524203.2102304.2578163.0247245.3687401.2307198.6572302.3208485.0231256.3257表6不同比例氮酮的体外渗药动力学方程促渗剂方程J(pg/cm2h)r2%AzoneQ=13.121t+13.75113.1210.998斗o/oAzoneQ=21.231t+15.3621.2310.9846%Azone0=11.148t+4.716211.1480.983由以上数据可以看出，氮酮对欧前胡素的经皮渗透具有明显的促进作用，在一定范围内，随着氮酮浓度的增加促渗作用逐渐增大，当浓度增大到4%时，促渗效果最好，但继续提高氮酮的浓度，其促渗作用反而下降。有文献报道，对一些药物而言，氮酮的浓度与促渗作用之间呈抛物线的关系，即在一定的浓度范围内具有最佳的促渗作用，以后随着氮酮浓度的增加其促渗作用反而降低，甚至有抑制药物经皮渗透的作用。(4)冰片冰片的促渗作用与氮酮类似，其常用剂量为1%3%，故选择1%、2%、3%三个浓度进行试验，结果见表7、表8。表7不同比例冰片对累积渗透量的影响(n=3)促渗剂Q(ng/cm2)lh2h4h6h8h10h12h18h24h1%冰片2%冰片3%冰片9.365418.320112.302414.250330.230520.321570.3656150.2304120.3214102.3210200.3201153.0254135.6853256.3214203.4527182.0452336.0258256.3254200.8563410.2356312.0547224.0245463.3201352.7856342.0235652.3214503.2546表8不同比例冰片的体外渗药动力学方程促渗剂方程J((ig/cm2h)r1%冰片Q=13.83X+11.70613.830.9782%冰片Q:26.卯5t十25.60226.9050.9823%冰片Q=20.666t+19.69720.6660.981测定结果表明冰片对欧前胡素有较强的促渗作用，其中加入2%的冰片后渗透速率J值最大。综合以上实验结果①除乙醇外，氮酮、油酸和冰片均具有促进白芷香豆素类有效部位渗透的作用，其中浓度为2%的冰片促透作用最强。这是由于冰片为双环单萜类化合物，可不同程度地改变皮肤的理化性质，从而改变了药物在皮肤和介质间的分配特性，增加了药物的透过性。②促渗剂浓度大小同样影响对白芷香豆素类有效部位的渗透作用，3种促渗剂中以浓度为2%的促透作用最强。这与促渗剂的作用机理、在接受介质中的溶解性以及药物的性质有关。@加入2%的氮酮或冰片后，以欧前胡素为定量指标的渗透系数与未加前相比分别增加了5.2和6.6倍。实施例4本发明白芷香豆素提取物的含量测定①色谱条件色谱柱AichromReliasilC18色谱柱(4.6mmx250mm，5fim);流动相甲醇-水(70:30);流速l.OmLmin—1;检测波长300nm;柱温35°C。②溶液的制备A对照品溶液的制备精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每lml含0.0521mg的溶液作为对照品溶液。B样品供试液的制备称取实施例1川白芷香豆素有效部位样品0.101g(批号061008)置50ml量瓶中，用甲醇溶解并定至刻度，精密量取2ml至10ml量瓶中，用甲醇稀释并定至刻度，摇匀，用0.45Wn微孔滤膜滤过，取续滤液，即得样品供试液。③系统适用性试验分别吸取对照品溶液7pL、样品溶液10pL，按以上色谱条件注入液相色谱仪测定，记录色谱图。采用上述色谱条件，欧前胡素的保留时间为。1.5min，分离度大于1.5，可见欧前胡素的分离效果较好。重现性试验按上述含量测定方法，对同一批样品(批号061008)平行实验5次，测定样品中欧前胡素的含量，其结果见表9。表9样品重复性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>上述结果表明相对偏差RSD为0.52%<2%，说明测定时样品供试液重现性良好。⑤白芷有效部位中总香豆素及欧前胡素的含量测定取10批样品(批号:061006、061008、061010、061012、061014、061016、061018、061020、061022、061024)，按UV含量测定方法和上述HPLC含量测定方法对川白芷香豆素提取物进行总香豆素和欧前胡素含量测定，结果见表10。表io白芷有效部位提取物含量测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>以上结果表明制备工艺条件较稳定，各批川白芷香豆素有效部位含量变化较小，总香豆素含量平均值为55.849%，欧前胡素的平均值为85.779%，以上述平均值的80%计，暂定川白芷药材中总香豆素的含量应不低于44.672mg/g，欧前胡素的含量应不低于68.623mg/g。实施例5川白芷香豆素有效部位的HPLC指纹图谱(1)溶液制备①对照品溶液的制备，精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每lml含欧前胡素O.0521mg的溶液作为对照品溶液。②样品供试液的制备取川白芷香豆素有效部位样品(批号061008)0.lg置50ml量瓶中，加甲醇溶解并定至刻度，用0.45Mm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得样品供试液。(2)色谱方法的建立川白芷香豆素有效部位HPLC指纹图谱研究的最佳色谱条件为色谱柱AichromReliasilC^色谱柱(4.6mmx250mm，5nm)，流动相甲醇、水和四氢呋喃梯度洗脱，柱温40°C，流速lml/min，波长300nm，进样量5^1。(3)川白芷香豆素有效部位HPLC指纹图谱的建立与分析①供试品溶液的制备取川白芷香豆素有效部位样品(批号:061006、061008、061010、061012、061014、061016、061018、061020、061022、061024)各约0.lg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并定至刻度，摇匀，用0.45Mm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得样品供试液。②川白芷香豆素有效部位指纹图谱的建立和相似度评价a参照物选择欧前胡素为香豆素类成分，同时也是白芷中主要药效成分之一，含量较大，结构明确，在样品HPLC色谱图中，欧前胡素的色谱峰与相邻色谱峰分离度良好，峰位较居中，同时是所有样品所共有的色谱峰，因此选择香豆素的主要指标成分欧前胡素(9号色谱峰)为白芷有效部位指纹图谱的参照物。b共有峰的确定按上述实验方法及色谱条件对10批样品进行测定，比较各样品的色谱图，找出其相对稳定的共有峰，以欧前胡素为参照峰(9号峰)，其它峰以阿拉伯数字按顺序标定，共标定14个共有指纹峰，见图l。c共有峰相对保留时间及相对峰面积的比较进行10批样品分析，以9号峰作为参照峰，各指纹峰的峰面积及相对峰面积、保留时间及相对保留时间均具有较好的重现性，RSD值均低于3%。共有峰的平均相对保留时间(min)为7.911、9.731、13.390、16.59、19.997、23.964、29.512、30.271、31.949、34.525、37.298、39.161、39.957、42.096，见图1。d指纹图谱的建立将所得的IO批样品HPLC色谱图数据用国家药典委员会颁布的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版A"进行共有图谱拟合，结果见图2。由上图结果可知IO批样品的HPLC色谱峰的峰数、峰位、各峰面积之间均具有较高的相似性。e指纹图谱相似度评价将所得的10批样品HPLC色谱图数据用国家药典委员会颁布的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版A"进行全谱的相似度评价，结果见表11。表ll<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>上述结果表明:IO批样品相似度值分别为:0.998、0.991、0.998、0.999、0.991、0.996、0.996、0.997、0.997、0.999、1(参照图谱)，10批样品相关系数>0.99，具有较好的相似度。本法选取10批样品建立共有模式，较好地保证了共有模式建立的代表性和科学性，样品指纹图谱中主要峰群的整体图貌基本一致，虽然不同批次川白芷香豆素提取物中各成分含量的相对比值稍有差别，但相似度计算结果表明，IO批样品相似度较高，相似度计算结果均大于0.99，说明批次之间差异不明显，该指纹图谱能较全面的控制川白芷有效部位的质量。以下通过药效学试验进一步证明本发明的有效效果。试验例1川白芷总香豆素对低5-HT性偏头痛动物模型的影响1、材料1.1药物川白芷购于四川遂宁白芷GAP生产基地，川白芷总香豆素浸膏(由西华大学中药制剂教研室制备，总香豆素含量测定为55.8%)，实验时用蒸馏水(含O.5%吐温-80助溶)配成所需浓度的混悬液备用。1.2试剂麦角胺咖啡因片，上海医药(集团)有限公司信谊制药总厂，生产批号20060401;利血平注射液，广东邦民制药厂有限公司，批号060308;其余药品试剂均为国产分析纯。1.3仪器ACS—M型电子计重秤，上海友声衡器有限公司；FA1004N电子天平(万分之一)，法国塞多利斯公司。1.4动物SD大鼠，雌雄兼用，体重180200g;昆明种小鼠，全雌，体重1820g;均由成都中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号scxk(川2004-11)。2、方法2.l川白芷总香豆素对利血平化低5-HT型偏头痛动物模型的影响用热板法筛选符合实验的合格雌性昆明种小鼠60只(痛阈值大于10s，小于30s)，按体重分层随机分为5组，每组12只，分别为空白组、模型组、川白芷总香豆素高剂量组、中剂量组、低剂量组。除空白组外，其余各组小鼠每只均皮下注射利血平10mg/kg,每日一次，共14d后，实验组予川白芷总香豆素混悬液灌胃(给药剂量见表12)，空白组和模型组给予等容积蒸馏水(含0.5%吐温-80)，每日一次，连续3d。于第3d给药后lh，热板法测痛阈值。2.2统计学方法用《中国医学百科全书医学统计学》统计软件包PEMS3.l进行。两两比较采用t检验，多组比较采用方差分析，方差齐性用LSD或Tukey等多重比较方法，方差不齐用Tamhane'sT2多重比较方法。3、结果表12川白芷总香豆素对利血平化低5-HT型偏头痛模型小鼠痛阈值的影响("s，n=10)组另lj动物数(只)痛阈值(秒)空白对照组12——16.17±4.47模型对照组12—15.83±5.17白芷总香豆素组120,72QdX321.67±5.28*白芷总香豆素组120.36QdX318.83±6.63白芷总香豆素组120.18QdX317.42±7.57注与模型组比较，f〈0.05,**/><0.01表12结果显示川白芷总香豆素高剂量组可明显提高模型小鼠的痛阈值，与模型组比较有显著差异(尸<0.05)。4、讨论本次实验研究显示在单胺类递质耗竭剂利血平诱导低5-HT性偏头痛小鼠模型上，川白芷总香豆素在0.72g/kg剂量下可明显提高小鼠的痛阈值14(尸<0.05)，具有明确的镇痛作用。试验例2川白芷总香豆素对五羟色胺及单胺氧化酶的影响1、材料1.1药物川白芷购于四川遂宁白芷GAP生产基地，川白芷总香豆素浸膏(由西华大学中药制剂教研室制备，总香豆素含量测定为55.8%)，实验时用蒸馏水(含0.5%吐温-80助溶)配成所需浓度的混悬液备用。1.2试剂5-羟色胺硫酸肌酐，中国医药公司上海化学试剂采购站进口分装；其余试剂均为进口或国产分析纯。单胺氧化酶，由南京建成生物工程研究所提供。1.3仪器960CRT荧光分光光度计，上海精密^f学仪器有限公司；751紫外分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；HemeusBioFugepico台式离心机(德国)；HeraeusBioFugestratos低温高速离心机(德国)；SANYO全自动制冰机(日本)；SANYO超低温冰箱(日本)；超声波匀浆机，浙江省三门超声波仪器厂；ACS—AA型电子计重秤,上海友声衡器有限公司；FA1004N电子天平(万分之一)，法国塞多利斯公司。1.4动物昆明种小鼠，雌雄兼用，体重1820g;均由成都中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号scxk(川2004-11)。2、方法2.1实验方法取昆明种小鼠60只，按体重分层随机分为5组，每组12只，分别为空白组、模型组、川白芷总香豆素高剂量组、中剂量组、低剂量组。除空白组夕卜，其余各组小鼠每只均皮下注射利血平10mg/kg，共14d。从第7d起，实验组予川白芷总香豆素混悬液灌胃(给药剂量见表13)，空白组和模型组予等容积蒸馏水(含0.5%吐温-80)，连续7d。于第14d给药后lh，摘眼球取血，而后脱颈椎处死动物，迅速分离脑组织。2.2血和脑中5—HT和单胺氧化酶MAO测定的检测方法血和脑中5—HT按文献方法测定，单胺氧化酶测定按试剂盒说明书进行。脑中5-HT的测定具体方法如下置少量酸化正丁醇于匀浆器中。取组织称重后放入匀浆器中，在冰浴中制备匀浆。将匀浆转移至刻度离心管，用酸化正丁醇补至4ml。振荡5min。离心5min，取上清液2.5ml放入另一离心管。每管加入正庚垸5ml和0.1MHCL1.2ml。振荡5min。离心5min，此时溶液分为两相，从水相中分别取0.5ml于另一支试管中。加0.5。/。半胱氨酸0.1ml，再加0.004%OPT3ml，沸水浴10min后，冷水冷却，在480nm/365nm处测定5-HT荧光强度。然后将测得的5-HT的荧光强度A值代入下列公式即可5-HT含量样品管A值—空白管A值1=-^-^--xf)2x"l-(pg/g)标准管A值一空白管A值''组织重g同法检测血中5-HT含量。z2.3统计学方法用《中国医学百科全书医学统计学》统计软件包PEMS3.1进行。两两比较采用t检验，多组比较采用方差分析，方差齐性用LSD或Tukey等多重比较方法，方差不齐用Tamhane'sT2多重比较方法。3、结果表13川白芷总香豆素对偏头痛模型小鼠脑内5-HT的影响(；±s)组另u动物数(只)给药量(g/kg)5墨HT含量(ng/g)空白对照组12一0.0630±0.0171**模型对照组12—0,0374±0.0153白芷总香豆素组120.72QdX7一0.0531±0.0157*白芷总香豆素组120.36QdX70.0513±0麓0*白芷总香豆素组120.18QdX70.0419±0.0200注与模型组比较，*尸<0.05表13结果显示川白芷总香豆素在0.72g/kg和0.36g/kg剂量下可升高模型动物脑内5-HT含量，与模型组比较有明显差异(代0.05)。表14川白芷总香豆素对偏头痛模型小鼠血中5-HT的影响(x土s)组另lj动物数(只)给药量(g/kg)5-HT含量(ng/g)空白对照组12一0.1358±0.0371**模型对照组12一0.0812±0.0166白芷总香豆素组120.72QdX70.1209±0.0208**白芷总香豆素组120.36QdX70.1149±0.0415*白芷总香豆素组120.18QdX70.1014±0扁0注与模型组比较，林尸<0.01，*尸<0.05表14结果显示川白芷总香豆素在0.72g/kg和0.36g/kg剂量下可升高禾難动物血中5-HT，，与禾難组比皿明M^(尺0.05，AO.01)。表15川白芷总香豆素对偏头痛模型小鼠脑内单胺氧化酶的影口向("s)注与模型组比较，P〉0.05表15结果显示川白芷总香豆素在0.72g/kg和0.36g/kg剂量下对模型动物脑内MAO活性均无明显影响(P〉0.05)。表16川白芷总香豆素对偏头痛模型小鼠血中单胺氧化酶的影响(S土s)组另u动物数(只)给药量(g/kg)MAO含量(U/ml)空白对照组10—7.97±2.79模型对照组10一8.84±2.12白芷总香豆素组100.72QdX710.04±2.79白芷总香豆素组100.36QdX79.13±2.28注与模型组比较，尸〉0.05表16结果显示川白芷总香豆素在0.72g/kg和0.36g/kg剂量下对模型动物血中MAO活性均无明显影响CP〉0.05)。4、讨论在偏头痛的发病理论中，生化源5-羟色胺(5-hydroxvtryptamine，5-HT)的耗竭学说占有重要的位置。首先因某些原因偏头痛患者血液中可特异性作用于血小板的5-HT释放因子升高，使血小板释放5-HT。释放的5-HT使颅内血管收縮，引起缺血的前驱症状。同时颅内血管收縮导致应激反应，兴奋交感神经，使血中肾上腺素和游离脂肪酸增加，作用于血小板，产生血栓素A2(ThromboxanA2，TXA2)，TXA2主要在血小板微粒体内合成，具有很强的收縮血管作用，进一步促进5-HT对颅内血管收縮的作用。升高的5-HT被单胺氧化酶A(monoamineoxidasea，MAO-A)所不断分解，其结果使5-HT耗竭，继发性地引起血管的过度扩张，从而产生搏动性头痛。国外学者发现偏头痛发作期患者血浆中5-HT含量降低，而偏头痛临床治疗中两类5-HT受体激动剂的肯定疗效也部分证明了该学说的合理性。因此，考察了川白芷总香豆素对5-HT和单胺氧化酶的影响。采用利血平化低5-HT实验性偏头痛小鼠模型进行实验，结果显示川白芷总香豆素在0.72g/kg和0.36g/kg剂量下可明显升高模型小鼠脑内及血中5-HT水平(尸〈0.05，PO.01);但在单胺氧化酶的研究中，川白芷总香豆素各剂量组对模型动物中脑和血中单胺氧化酶活性无明显影响，说明川白芷总香豆素升高模型动物脑和血中5-HT的作用。除了可治疗偏头痛外，还适应症针对性强，制剂使质量稳定，可控性强，为综上所述，本发明药物作为5-羟色胺调节剂，可治疗5-羟色胺降低引起的其它疾病，药效明确，用广泛，除了口服制剂外，还包括经皮给药制剂，临床提供了一种新的选择。权利要求1、白芷总香素提取物在制备5-羟色胺调节剂的药物中的用途。2、根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的药物是治疗偏头痛的药物。3、根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的白芷总香素素提取物中总香豆素的含量应不低于44.672mg/g，欧前胡素的含量应不低于68.623mg/g。4、根据权利要求3所述的用途，其特征在于所述的白芷总香素素提取物的HPLC色谱如图1所示，含有14个共有指纹峰；其色谱条件为色谱柱AichromRdiasilC^色谱柱(4.6mmx250mm，5|iim)，流动相甲醇、水和四氢呋喃梯度洗脱，柱温40°C，流速lml/min，波长300nm，进样量5|Lll，甲醇、水及四氢呋喃梯度洗脱时间和比例为洗脱时间Omin，水、四氢呋喃、甲醇的重量百分比分别为水占60%，四氢呋喃8%，甲醇32%;洗脱时间10min，水、四氢呋喃、甲醇的重量百分比分别为水占60%，四氢呋喃8%，甲醇32%;洗脱时间50min，水、四氢呋喃、甲醇的重量百分比分别为水占20%，四氢呋喃16%，甲醇64%。5、根据权利要求4所述的用途，其特征在于所述的共有峰的平均相对保留时间(min)为:7.911、9.731、13.390、16.59、19.997、23.964、29.512、30.271、31.949、34.525、37.298、39.161、39.957、42.096。6、根据权利要求l-5任一一项所述的用途，其特征在于所述的白芷香豆素的制备方法包括如下步骤a、白芷55-95%乙醇提取液减压回收乙醇，浓縮；b、将a步骤浓縮，加入石油醚萃取，弃去石油醚萃取层；萃余相加入乙酸乙酯萃取，合并萃取相，减压回收乙酸乙酯，即得。7、根据权利要求6所述的用途，其特征在于a步骤所述的白芷药材粒度为20目，乙醇提取为75%乙醇热回流提取。8、一种调节5-羟色胺的药物组合物，其特征在于它是由所述的白芷总香豆素提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料制备而成的药剂。9、根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于所述的药剂是口服制剂或经皮给药制剂。10、根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于所述的经皮给药制剂中辅料促渗剂为氮酮、油酸和冰片。全文摘要本发明提供了白芷总香素提取物的用途，具体地，是在制备5-羟色胺调节剂的药物中的用途。本发明还提供了用于5-羟色胺调节剂的药物组合物。本发明药物药效明确，具体适应症针对性强。文档编号A61K36/232GK101637487SQ20091014210公开日2010年2月3日申请日期2009年5月25日优先权日2008年7月29日发明者玲李,李祖伦,秦旭华申请人:成都中医药大学