专利名称：一种黄酮苷类物质的提取方法
技术领域：
本发明属天然药物成分生物类黄酮的提取分离纯化方法，特别涉及一种从植物柿树科柿 树属植物柿树(Diospyros kaki Thunb)的叶与芸香科植物橘(Citrus reticulata Blanco)及其栽培变种的干燥成熟的果皮中分离提取黄酮苷类物质的新工艺，本发明不仅涉 及用水-乙醇提取、还涉及以硅藻土滤除、超滤、以分子蒸馏技术分离提纯黄酮苷类物质的 新的工艺方法。
背景技术：
生物类黄酮(bioflavonoids)是自然界中广泛存在的酚类物质，亦称维生素P，常与 维生素C伴存，为植物的次生代谢产物。类黄酮系色原烷或色原酮的衍生物，其基本骨架具 有C6-C3-C6的特点，即由两个芳香环A和B，通过中央三碳链相互连结而成的一系列化合 物。根据中央三碳链的氧化程度、B环在C环上的连接位置以及三碳链是否构成环状等特点 ，将类黄酮分为黄酮及黄酮甙、黄酮醇及黄酮醇甙、査耳酮、噢瞎橙酮类、花色素和花色甙 、黄烷醇、双氢黄酮、双氢黄酮醇、碳-甙黄酮、双黄酮及二聚黄酮、异黄酮、异黄烷酮、 口山酮类或称苯并色原酮和新黄酮14大类，总数约有2700多个。类黄酮在植物界分布很普遍 ，在藻类、菌类中很少发现。
类黄酮具有多种生物学功能，主要为(1)对抗氧化的调节作用，如单杨(2007)报 道了通过体外抗氧化实验对柑橘皮中五种多甲氧基黄酮单体的抗氧化功能进行研究，表明柑 橘皮中五种黄酮单体均有一定抗亚油酸氧化能力，且均强于芦丁；类黄酮单体抑制脂质体氧 化能力均表现出一定的浓度依赖关系，清除OH自由基能力与相应浓度也存在正相关关系。( 2)对脂质代谢的调节作用，如林秋石(2000)报道，山楂叶黄酮可使大鼠低密度脂蛋白受 体(LDLR)的mRNA转录增强，同时LDLR表达也增强，从而增加低密度脂蛋白(LDL)的降解 。Lichtenstein (1998)认为大豆产品预防动脉粥样硬化、冠心病的作用归因于大豆类黄酮 等。(3)抑菌抗病毒作用，如张丽杰(2009)报道了柑橘皮渣粗提物中具有抑菌作用的类 黄酮物质，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌具有良好的抑菌作用，抑菌圈的直 径分别是5.9、 5.7、 6.0mm。阎凤海(申请号98113018. 6)中提出，从柿树叶中提取黄酮甙 作药理及抑菌试验，结果表明它同青梅素和甲硝唑作用基本一致，同时它对血小板的减少以及神经性失眠有一定疗效。(4)对内分泌的影响，如Nielsen (1998) 、 Shen (1993)报道
类黄酮能够促进胰岛e细胞的恢复，降低血糖和血清胆固醇，改善糖耐量，对抗肾上腺素的
升血糖作用，同时它还能够抑制醛糖还原酶，可以治疗糖尿病及其并发症。Rbards和 Antolovich (1997)研究指出类黄酮可用于治疗骨病和骨质疏松等症，其作用机理在于它既 可抑制前列腺素E2 (PGE2)的胶原蛋白合成增加，又能抑制PGE2的非胶原蛋白合成减少，并 在低浓度PGE2时主要作用于非胶原蛋白的合成，高浓度PGE2时主要作用于胶原蛋白合成，可 以用于治疗骨病；并且能提高甲状腺对雌激素的敏感性，使甲状腺C细胞分泌降钙素的作用 加强，最终抑制骨再吸收而治疗骨质疏松。(5)对动物生产性能的影响，如王国杰等( 1995)给大鼠皮下注射大豆黄酮16天，RNA/DNA比值提高18. 7%，表明大豆黄酮的促肌肉生长 作用主要是肌纤维的营养性肥大和蛋白质合成代谢加强，而不是加速卫星细胞繁殖的结果。
(6)抗癌作用，如M Noroozi (1998)报道了柑橘皮中的六甲氧基黄酮具有抑制血小板凝集 、抗血栓形成的作用，七甲氧基黄酮对胃癌细胞和白血病细胞均有较强的抑癌活性等。
尽管天然植物中的类黄酮具有多种生物学功能，但也存在潜在副作用。在植物与植食者 的共同进化中，植物建立了化学防御系统以抵御植食者的侵害。植物的化学抗性因素中，次 生代谢物质对植食者的抗性主要有排趋性(即使寄主植物具有不选择性或阻碍取食作用)和 抗生性(即在植食者消化吸收后起毒素致死作用或通过降低消化吸收等生理活动而抑制其生 长发育的作用)两方面的作用。类黄酮的排趋性和抗生性已被许多研究工作和实际应用所证 实，研究结果表明植物体内的低分子量类黄酮因与蛋白质的结合能力较弱，不表现出明显的 抗营养作用。分子量太大的类黄酮(主要指聚合度较高的黄烷醇类黄酮，其分子量在3000以 上)，由于溶解性差，在动物体内不易降解，也不会对植物的营养价值产生影响，会产生显 著的影响(Bravo等，1993)。
基于以上这些作用，黄酮类化合物的分离纯化尤为重要。黄酮类化合物的分离纯化方法 很多，有柱层析、薄层层析、铅盐沉淀、硼酸络合、pH梯度萃取、溶剂萃取以及近年来应用 的高效液相色谱(HPLC)、液滴逆流层析(DCCC)、气相层析等，但均存在不同程度的缺点而限 制了其工业化生产，可用于工业化的超临界C02萃取法适合于分离过程的前阶段，吸附树脂 法要达到对产品的精制，需要的步骤繁，用于类黄酮的纯化，均不理想。分子蒸馏( molecular distillation)技术是在高真空条件下进行的非平衡蒸馏，能解决大量常规蒸馏 技术所不能解决的问题，适合于把粗产品中的高附加值的成分进行分离和提纯，并且这种分 离和提纯是其他常用分离手段难以完成的，特别适合天然物质的提取与分离，目前已成功应 用于石油化工、食品、塑料、医药等行业，但还只限于脂溶性物质的使用。
5分子蒸馏在实际工业化的应用中与常规蒸馏技术相比具有以下明显的优势(1)在远 低于物料沸点的温度下操作，且物料停留时间短，对于高沸点、热敏及易氧化物料的分离， 提供了最佳分离方法。(2)可极有效地脱除液体中的物质如有机溶剂、臭味等，对于采用 溶剂萃取后液体的脱溶是非常有效的方法；(3)分子蒸馏可有选择地蒸出目的产物，去除 其它杂质，通过多级分离可同时分离2种以上的物质；(4)分子蒸馏的分馏过程是物理过程 ，因而可很好地保护被分离物质不受污染和侵害。
从天然植物中分离纯化出黄酮类化合物，不但在医药、食品加工业将有广阔的应用前景 ，在环境保护等方面做出了一定贡献，对进一步研究其生理学功能亦具有重要意义。
发明内容
本发明目的在于寻求一种更为经济、高效的从天然产物中提取黄酮类成分的方法。 本发明采用的技术方案是
一种黄酮苷类物质的提取方法，所述的方法为取柑橘皮、柿树叶的干燥碎片为原料按如
下步骤进行(1)取去杂质的柑橘皮、柿树叶的干燥粉末为原料，(2)加入质量为柑橘皮 、柿树叶干燥碎片质量总和10 20倍的20 80%乙醇，30 7(TC保温提取2 4h，离心、过滤 ，得滤液A，滤渣再重复提取1 5次，合并每次提取的滤液A得提取液；(3)将步骤(2)所 得提取液静置沉淀，取上清液，加入质量为所述上清液1 5%的硅藻土，充分搅后，以板框 过滤机压滤，通常用3 10层单复丝滤布压滤，取滤液B;单复丝滤布在本发明中简称滤布； (4)将滤液B用聚醚砜膜材料进行膜过滤，截留分子量5kD，取滤过膜的小分子溶液；(5) 取步骤(4)得到的小分子溶液，通入薄膜蒸发器进行分离，所述的薄膜蒸发器包括四级蒸 馏器，控制物料流速1 3 ml/min，各级的刮膜转速为100-300 rpm，优选各级的刮膜转速为 100-200 rpm，各级循环水温度各自为30 7(TC ;控制第一蒸馏器的真空度为600 900Pa、 蒸馏温度为4(TC 6(TC、冷凝面温度为15 25'C的条件下进行薄膜蒸发，得馏余物A直接进 入第二蒸馏器，控制第二蒸馏器的真空度为100 300Pa、蒸馏温度为6(TC 8(TC、冷凝面温 度为15 25。C的条件下进行薄膜蒸发，得馏余物B直接进入第三蒸馏器，控制第三蒸馏器的 真空度为10 50Pa、蒸馏温度为8(TC 11(TC、冷凝面温度为15 25。C的条件下进行薄膜蒸 发，得馏余物C直接进入第四蒸馏器，控制第四蒸馏器的真空度为0.01 2Pa，蒸馏温度为150 。C 30(TC、冷凝面温度为15 4(TC的条件下进行薄膜蒸发，收集馏出液；(6)收集的馏出 液进行喷雾干燥制成粉状，即所述的黄酮苷类物质。以上所说的滤液A、滤液B是指工艺过程 中不同工艺阶段的滤液，用A、 B来区别，步骤(2)中重复提取所得的滤液也都定义为滤液A，虽然每次重复得到的滤液A不相同，但属于同一工艺步骤，合并后即为提取液。薄膜蒸发 器各级的刮膜转速大致相同，最好控制在100 200 rpm之间，各级循环水温度各自为30 70 °C;优选第一蒸馏器循环水温为3(TC，第二蒸馏器循环水温为3(TC，第三蒸馏器循环水温为 4CTC ，第四蒸馏器循环水温为70°C 。
本发明通过体外抑菌实验从天然植物中筛选出有利于提取得到黄酮苷类物质的柿树叶与 柑橘皮为复配物，通过用水-醇提得到的总提取物，采用硅藻土滤除、超滤技术去除悬浮物 类杂质、淀粉、半可溶性纤维素、果胶、蛋白质、叶绿素、糖蛋白、脂类等物质后，再采用 分子蒸馏工艺获得黄酮苷类物质。发明的要点在于采用分子蒸馏工艺，并找到合适的工艺参 数以获得采用小分子量、纯度高、质量稳定的黄酮苷类物质。
进一步本发明所述的黄酮苷类物质的提取方法，所述柑橘皮、柿树叶的干燥碎片优选为 过20目筛的干燥粉末。
所述柑橘皮、柿树叶的质量比可以是任意比例，任意质量比的柑橘皮、柿树叶用本发明 的方法提取制备黄酮苷类物质都会有比较好的效果，但本发明更优选柑橘皮、柿树叶的质量 比为2: 3。
本发明所述的黄酮苷类物质的提取方法，所述的沉淀时间为沉淀12 48小时，优选12 24小时。所述的板框压滤机采有3 1 O层滤布压滤。
进一步本发明所述的步骤(5)优选控制第一蒸馏器的真空度为750 850Pa、蒸馏温度 为4(TC 5(TC，冷凝面温度为15 25。C的条件下进行薄膜蒸发，这步分离除去气体和部分酒 精；控制第二蒸馏器的真空度为150 250Pa、蒸馏温度为65。C 75°C ，冷凝面温度15 25r 的条件进行薄膜蒸发，分离除去酒精和部分水；控制第三蒸馏器的真空度为20 40Pa、蒸馏 温度为8(TC 10(TC，冷凝面温度15 25。C的条件进行薄膜蒸发，分离除去大部分水；控制 第四蒸馏器的真空度为0.01 0.5Pa，更优选0.01 0. 1Pa，蒸馏温度为200。C 300°C ，冷凝 面温度为20 3(TC的条件下进行薄膜蒸发，收集馏出液，此时留余物为被除去的高沸点及非 挥发性成分。
本发明步骤(6)中所述的喷雾干燥推荐取步骤(5)收集的馏出液直接用来进行喷雾干 燥制粉。
具体的，本发明所述的黄酮苷类物质的提取方法按如下步骤进行(1)取去杂质的质 量比为2: 3的柑橘皮、柿树叶的干粉为原料；(2)加入质量为柑橘皮、柿树叶干粉质量总 和10 15倍的55% 60%的乙醇，5(TC保温提取2. 5 3h，离心、过滤，得滤液A，滤渣再重复 提取2 3次，合并每次的滤液A得提取液；(3)将步骤(2)所得提取液静置12 24小时，搅后，以板框过滤机用6 8层 滤布压滤，取滤液B;(4)将滤液B用聚醚砜膜材料进行膜过滤，截留分子量5kD，取滤过膜 的小分子溶液；(5)取步骤(4)得到的小分子溶液，通入薄膜蒸发器进行分离，所述的薄 膜蒸发器包括四级蒸馏器，控制物料流速2 3 ml/min，控制第一蒸馏器的真空度为750 850Pa、蒸馏温度为40。C 5(TC、冷凝面温度为15 25。C 、循环水温度为30 70。C ，优选循 环水温度3(TC的条件下进行薄膜蒸发，得馏余物A直接进入第二蒸馏器，控制第二蒸馏器的 真空度为150 250Pa、蒸馏温度为65。C 75。C、冷凝面温度为15 25。C 、循环水温度为30 7CTC，优选循环水温度3(TC的条件下进行薄膜蒸发，得馏余物B直接进入第三蒸馏器，控制 第三蒸馏器的真空度为20 40Pa、蒸馏温度为8(TC 9(TC、冷凝面温度15 25。C 、循环水温 度为30 7(TC ，优选循环水温度4(TC的条件下进行薄膜蒸发，得馏余物C直接进入第四蒸馏器 ，控制第四蒸馏器的真空度为O. 01 0. 05Pa，蒸馏温度为25(TC 28(TC，冷凝面温度3(TC， 刮膜转速300 rpm，循环水温度为30 7(TC ，优选循环水温度7(TC条件下进行薄膜蒸发，收 集馏出液；(6)取步骤(5)收集的馏出液进行喷雾干燥制成粉状，即所述的黄酮苷类物质
本发明的有益效果主要体现在
1. 本发明中所采用的硅藻土过滤澄清与超滤工艺，除去了提取液中的蛋白质、半可溶性 纤维、果胶、淀粉、叶绿素、糖蛋白、脂类等物质，省去了有机溶剂萃取，聚酰胺树脂精制 ;而且膜材料物理化学稳定性高，机械强度好，可多次使用；工艺操作十分简便，成本低廉
2. 本发明所采用的分子蒸馏方法是纯物理分离过程，可节省大量溶剂，降低对设备的要 求，同时减少对环境的污染，而且不会带入新的杂质和有毒物质，能很好地保证黄酮苷类物 质的天然品质；虽然初期一次性投资比较大，但是后继的生产成本(包括材料，水电，劳动 力等)比较小；适用于大规模工业生产。
3. 由本发明工艺生产出的黄酮类提取物中黄酮苷类成分含量高，总含量在70%以上，总 黄酮转移率可达95%以上，色泽好。现有技述通常采用醇提或超声提取后，酸碱处理或多级 溶剂萃取从植物中提取的黄酮苷类物质，但通常含量很低， 一般只有40%左右，也有采用吸 附树脂法进行纯化，但要达到对产品的精制，需要的步骤繁锁。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此
8实施例l
(1) .原料的制备分别净选浙江省产干燥的柑橘皮、干燥的柿树叶，除去其中的杂质 ，粉碎后，过20目筛，分别得柑橘皮干粉、柿树叶粉待用；
(2) .原料的处理按柑橘皮干粉与柿树叶干粉质量比为2: 3比例取过柑橘皮干燥粉末 0. 2kg、柿树叶干燥粉末O. 3kg，加入质量为柑橘皮干粉与柿树叶干粉质量总和10倍的60%乙 醇水溶液，温控在5(TC 6(TC，提取3h，离心、过滤，得滤液A，滤渣按以上方法再提取2次 ，合并滤液A，得提取液7.2L;
(3) .过滤将步骤(2)所得提取液静置沉淀，将静置沉淀后的上清液7.0L加入上清 液质量2%的硅藻土0. 14kg，以吸附大部分胶质、叶绿素等，然后用板框过滤机压滤将其滤 除；(3)将步骤(2)所得提取液静置沉淀，取上清液，加入质量为所述上清液2%的硅藻 土，充分搅拌后，以板框过滤机压滤，压滤时取8层单复丝滤布，得滤液B 6.2L;
(4) .将滤液B用聚醚砜膜材料(分子量5kD， 95%)进行膜过滤，截留分子量5kD，并进 一步去除鞣质、肽类等，取滤过膜的小分子溶液3. 6L;
(5) .取步骤(4)得到的小分子溶液3.6L，通入薄膜蒸发器进行分离，所述的薄膜蒸 发器包括四级蒸馏器，控制物料流速2 ml/min，各级刮膜转速IOO rpm，控制第一蒸馏器的 真空度为800Pa、蒸馏温度为45。C、冷凝面温度为25。C、循环水温度3(TC的条件下进行薄膜 蒸发，分离除去气体和部分酒精，得馏余物A直接进入第二蒸馏器，控制第二蒸馏器的真空 度为200Pa、蒸馏温度为7(TC、冷凝面温度为25'C、循环水温度3(TC的条件下进行薄膜蒸发 ，分离除去酒精和部分水，得馏余物B直接进入第三蒸馏器，控制第三蒸馏器的真空度为 30Pa、蒸馏温度为9(TC、冷凝面温度25。C、循环水温度4(TC的条件下进行薄膜蒸发，分离除 去大部分水，得馏余物C直接进入第四蒸馏器，控制第四蒸馏器的真空度为0.02Pa，蒸馏温度 为26(TC，冷凝面温度为3(TC、循环水温度7(TC的条件下进行薄膜蒸发，收集馏出液0.26L; 此时留余物为被除去的高沸点及非挥发性成分。
(6) .取步骤(5)收集的馏出液0.26L以喷雾干燥塔制成粉状，即黄酮苷类物质 0. 00603kg，以芦丁为标样，用紫外分光光度法测定其中总黄酮含量为77. 4%。
实施例2
(1) .原料的制备分别净选浙江省产干燥的柑橘皮、干燥的柿树叶，除去其中的杂质 ，粉碎后，过20目筛，分别得柑橘皮干粉、柿树叶粉待用；
(2) .原料的处理按柑橘皮干粉与柿树叶干粉质量比为2: 3比例取过柑橘皮干燥粉末0. 3kg、柿树叶干燥粉末O. 45kg，加入质量为柑橘皮干粉与柿树叶干粉质量总和10倍的40%乙 醇，温控在40。C 5(TC，提取3h，离心、过滤，得滤液A，滤渣按以上方法再提取2次，合并 滤液A，得提取液10.6L;
(3) .将步骤(2)所得提取液静置沉淀，将静置沉淀后的上清液10.2L加入上清液质量 2X的硅藻土0.204kg，以吸附大部分胶质、叶绿素等，然后用板框过滤机压滤将其滤除；充 分搅后，以板框过滤机压滤，压滤时取8层滤布，取滤液B 8.7L;
(4) .将滤液B用聚醚砜膜材料(分子量5kD， 95%)进行膜过滤，截留分子量5kD，并进 一步去除鞣质、肽类等，得滤过膜的小分子溶液4. 9L;
(5) .取步骤(4)得到的小分子溶液4.9L，通入薄膜蒸发器进行分离，所述的薄膜蒸 发器包括四级蒸馏器，控制物料流速2ml/min，各级刮膜转速200 rpm，控制第一蒸馏器的真 空度为750Pa、蒸馏温度为4(TC、冷凝面温度为25。C、循环水温度3(TC的条件下进行薄膜蒸 发，分离除去气体和部分酒精，得馏余物A直接进入第二蒸馏器，控制第二蒸馏器的真空度 为150Pa、蒸馏温度为6(TC、冷凝面温度为25'C、循环水温度3(TC的条件下进行薄膜蒸发， 分离除去酒精和部分水，得馏余物B直接进入第三蒸馏器，控制第三蒸馏器的真空度为40Pa
、蒸馏温度为10(TC、冷凝面温度25'C、循环水温度4(TC的条件下进行薄膜蒸发，分离除去 大部分水，得馏余物C直接进入第四蒸馏器，控制第四蒸馏器的真空度为0.05Pa，蒸馏温度为 270°C，冷凝面温度为25。C、循环水温度7(TC的条件下进行薄膜蒸发，收集馏出液0.42L;此 时留余物为被除去的高沸点及非挥发性成分。
(6) 取步骤(5)收集的馏出液0.42L以喷雾干燥塔制成粉状，即黄酮苷类物质 0.00915kg，以芦丁为标样，用紫外分光光度法测定其中总黄酮含量为74. 1%。
实施例3
(1) .原料的制备分别净选浙江省产干燥的柑橘皮、干燥的柿树叶，除去其中的杂质 ，粉碎后，过20目筛，分别得柑橘皮干粉、柿树叶粉待用；
(2) .原料的处理按柑橘皮干粉与柿树叶干粉质量比为2: 3比例取过柑橘皮干燥粉末 0. 2kg、柿树叶干燥粉末O. 3kg，加入质量为柑橘皮干粉与柿树叶干粉质量总和12倍的50%乙 醇，温控在35。C 45。C，提取2. 5h，离心、过滤，得滤液A，滤渣按以上方法再提取2次，合 并滤液A，得提取液8.3L;
(3) .将步骤(2)所得提取液静置沉淀，将静置沉淀后的上清液8.0L加入上清液质量 2%的硅藻土0. 16kg，以吸附大部分胶质、叶绿素等，然后用板框过滤机压滤将其滤除；充分搅后，以板框过滤机压滤，压滤时取6层滤布，取滤液B7. 1L;(4) .将滤液B用聚醚砜膜材料(分子量5kD， 95%)进行膜过滤，截留分子量5kD，并进 一步去除鞣质、肽类等，得滤过膜的小分子溶液3. 9L;(5) .取步骤(4)得到的小分子溶液3.9L，通入薄膜蒸发器进行分离，所述的薄膜蒸 发器包括四级蒸馏器，控制物料流速2ml/min，各级刮膜转速150 rpm，控制第一蒸馏器的真 空度为850Pa、蒸馏温度为5(TC、冷凝面温度为25'C、循环水温度3(TC的条件下进行薄膜蒸 发，分离除去气体和部分酒精，得馏余物A直接进入第二蒸馏器，控制第二蒸馏器的真空度 为150Pa、蒸馏温度为75'C、冷凝面温度为25'C、循环水温度3(TC的条件下进行薄膜蒸发， 分离除去酒精和部分水，得馏余物B直接进入第三蒸馏器，控制第三蒸馏器的真空度为40Pa、蒸馏温度为10(TC、冷凝面温度25'C、循环水温度4(TC的条件下进行薄膜蒸发，分离除去 大部分水，得馏余物C直接进入第四蒸馏器，控制第四蒸馏器的真空度为0.08Pa，蒸馏温度为 280°C，冷凝面温度为25。C、循环水温度7(TC的条件下进行薄膜蒸发，收集馏出液0.31L;此 时留余物为被除去的高沸点及非挥发性成分。(6) .取步骤(5)收集的馏出液0.31L以喷雾干燥塔制成粉状，即黄酮苷类物质 0. 00583kg，以芦丁为标样，用紫外分光光度法测定其中总黄酮含量为72. 6%。实施例4步骤(1) (4)同实施例l中的步骤(1) (4)，最终得滤过膜的小分子溶液3. 5L;步骤(5):取小分子溶液3.5L，以石油醚、四氯化碳、氯仿、乙酸乙酯依次萃 取过超滤膜后的小分子溶液，每次萃取各取水层进行下一步萃取，最后用乙酸乙酯萃取时， 取乙酸乙酯层，每种试剂的用量每次均为当时母液的1/3，每种试剂均萃取3次，得到乙酸乙 酯层3.9L后，用旋转蒸发仪浓縮去除乙酸乙酯，得到溶液0.33L，采用真空干燥法进行干燥 ，得到黄酮苷类物质O. 00947kg，以芦丁为标样，用紫外分光光度法测定其中总黄酮含量为 38. 6%。实施例5步骤(1) (4)同实施例l中的步骤(1) (4)方法，得到的小分子溶液4.9L; (5).取步骤(4)得到的小分子溶液4.9L，通入薄膜蒸发器进行分离，所述的薄膜蒸 发器包括四级蒸馏器，控制物料流速2ml/min，控制第一蒸馏器的真空度为850Pa、蒸馏温度11为45。C、冷凝面温度为25。C、循环水温度3(TC的条件下进行薄膜蒸发，分离除去气体和部分 酒精，得馏余物A直接进入第二蒸馏器，控制第二蒸馏器的真空度为350Pa、蒸馏温度为7(TC 、刮膜转速300 rpm，循环水温度3(TC冷凝面温度为25。C的条件下进行薄膜蒸发，分离除去 酒精和部分水，得馏余物B直接进入第三蒸馏器，控制第三蒸馏器的真空度为30Pa、蒸馏温 度为10(TC、冷凝面温度25。C、循环水温度4(TC的条件下进行薄膜蒸发，分离除去大部分水 ，得馏余物C直接进入第四蒸馏器，控制第四蒸馏器的真空度为0.5Pa，蒸馏温度为28(TC，冷 凝面温度为25'C、循环水温度7(TC的条件下进行薄膜蒸发，收集馏出液0.46L;此时留余物 为被除去的高沸点及非挥发性成分；(6).取步骤(5)收集的馏出液0.46L以喷雾干燥塔制成粉状，即黄酮苷类物质 0.00518kg，以芦丁为标样，用紫外分光光度法测定其中总黄酮含量为52.4%。实施例6步骤(1) (4)同实施例l中的步骤(1) (4)方法，得到的小分子溶液3.6L;(5) .取步骤(4)得到的小分子溶液3.6L，通入薄膜蒸发器进行分离，所述的薄膜蒸 发器包括四级蒸馏器，控制物料流速lml/min，刮膜转速IOO rpm，控制第一蒸馏器的真空度 为800Pa、蒸馏温度为45'C、冷凝面温度为25'C、循环水温度3(TC的条件下进行薄膜蒸发， 分离除去气体和部分酒精，得馏余物A直接进入第二蒸馏器，控制第二蒸馏器的真空度为 200Pa、蒸馏温度为7(TC、冷凝面温度为25'C、循环水温度3(TC的条件下进行薄膜蒸发，分 离除去酒精和部分水，得馏余物B直接进入第三蒸馏器，控制第三蒸馏器的真空度为30Pa、 蒸馏温度为9(TC、冷凝面温度25。C、循环水温度4(TC的条件下进行薄膜蒸发，分离除去大部 分水，得馏余物C直接进入第四蒸馏器，控制第四蒸馏器的真空度为2Pa，蒸馏温度为26(TC， 冷凝面温度25'C、循环水温度7(TC的条件下进行薄膜蒸发，收集馏出液0.25L;此时留余物 为被除去的高沸点及非挥发性成分；(6) .取步骤(8)收集的馏出液0.25L以喷雾干燥塔制成粉状，即黄酮苷类物质 0.00203kg，以芦丁为标样，用紫外分光光度法测定其中总黄酮含量为40.6%。本发明优选控制第四蒸馏器的真空度为0.01 0.5Pa，蒸馏温度为20(TC 30(TC，冷凝 面温度为20 30。C，刮膜转速为250-350 rpm，循环水温度30 70。C条件下进行薄膜蒸发， 收集馏出液。实施例6的第5步骤中第的第四蒸馏器的真空度为2Pa相对过大了一些，虽然也 能分离出黄酮苷类物质，但总黄酮收率相对较小。
权利要求
1.一种黄酮苷类物质的提取方法，其特征在于所述的方法为取柑橘皮、柿树叶的干燥碎片为原料按如下步骤进行(1)取去杂质的柑橘皮、柿树叶的干燥碎片为原料，(2)加入质量为柑橘皮、柿树叶干燥碎片质量总和10～20倍的20～80％乙醇，30～70℃保温提取2～4h，离心、过滤，得滤液A，滤渣再重复提取1～5次，合并每次提取的滤液A得提取液；(3)将步骤(2)所得提取液静置沉淀，取上清液，加入质量为所述上清液1～5％的硅藻土，充分搅后，以板框过滤机压滤，取滤液B；(4)将滤液B用聚醚砜膜材料进行膜过滤，截留分子量5kD，取滤过膜的小分子溶液；(5)取步骤(4)得到的小分子溶液通入薄膜蒸发器进行分离，所述的薄膜蒸发器包括四级蒸馏器，控制物料流速1～3ml/min，各级的刮膜转速为100-300rpm，各级循环水温度各自为30～70℃，控制第一蒸馏器的真空度为600～900Pa、蒸馏温度为40℃～60℃、冷凝面温度为15～25℃的条件下进行薄膜蒸发，得馏余物A直接进入第二蒸馏器，控制第二蒸馏器的真空度为100～300Pa、蒸馏温度为60℃～80℃、冷凝面温度为15～25℃的条件下进行薄膜蒸发，得馏余物B直接进入第三蒸馏器，控制第三蒸馏器的真空度为10～50Pa、蒸馏温度为80℃～110℃、冷凝面温度为15～25℃的条件下进行薄膜蒸发，得馏余物C直接进入第四蒸馏器，控制第四蒸馏器的真空度为0.01～2Pa，蒸馏温度为150℃～300℃、冷凝面温度为15～40℃条件下进行薄膜蒸发，收集馏出液；(6)取步骤(5)收集的馏出液进行喷雾干燥制成粉状，即所述的黄酮苷类物质。
2 如权利要求l所述的黄酮苷类物质的提取方法，其特征在于所述柑 橘皮、柿树叶的干燥碎片为过20目筛的干燥粉末。
3 如权利要求l所述的黄酮苷类物质的提取方法，其特征在于所述柑 橘皮、柿树叶的的干燥碎片质量比为2: 3。
4 如权利要求l所述的黄酮苷类物质的提取方法，其特征在于所述的 沉淀时间为沉淀12 48小时。
5 如权利要求l所述的黄酮苷类物质的提取方法，其特征在于所述的 板框压滤机以3 1 O层单复丝滤布压滤。
6.如权利要求l所述的黄酮苷类物质的提取方法，其特征在于所述的 步骤(5)控制第一蒸馏器的真空度为750 850Pa、蒸馏温度为4(TC 50°C ，冷凝面温度为 15 25°C的条件下进行薄膜蒸发。
7.如权利要求l所述的黄酮苷类物质的提取方法，其特征在于所述的 步骤(5)控制第二蒸馏器的真空度为150 250Pa、蒸馏温度为65。C 75°C ，冷凝面温度15 25"C的条件进行薄膜蒸发。
8.如权利要求l所述的黄酮苷类物质的提取方法，其特征在于所述的 步骤(5)控制第三蒸馏器的真空度为20 40Pa、蒸馏温度为8(TC 10(TC，冷凝面温度15 25"C的条件进行薄膜蒸发。
9.如权利要求l所述的黄酮苷类物质的提取方法，其特征在于所述的 步骤(5)控制第四蒸馏器的真空度为0.01 0.5Pa，蒸馏温度为20(TC 30(TC，冷凝面温度 为20 3(TC的条件下进行薄膜蒸发，收集馏出液。
10.权利要求l所述的黄酮苷类物质的提取方法，其特征在于所述的方法为如下(1)取去杂质的质量比为2: 3的柑橘皮、柿树叶的干燥粉末为原料；(2)加入 质量为柑橘皮、柿树叶干燥粉末质量总和10 15倍的55% 60%的乙醇，5(TC保温提取2. 5 3h，离心、过滤，得滤液A，滤渣再重复提取2 3次，合并每次的滤液A得提取液；(3)将 步骤(2)所得提取液静置12 24小时，沉淀，取上清液，加入质量为所述上清液2%的硅藻 土，充分搅后，以板框过滤机用6 8层滤布压滤，取滤液B;(4)将滤液B用聚醚砜膜材料 进行膜过滤，截留分子量5kD，取滤过膜的小分子溶液；(5)取步骤(4)得到的小分子溶 液通入薄膜蒸发器进行分离，所述的薄膜蒸发器包括四级蒸馏器，控制物料流速1 3 ml/min，各级的刮膜转速为100 200 rpm，循环水温度各自为30 7(TC ，控制第一蒸馏器的 真空度为750 850Pa、蒸馏温度为4(TC 50°C 、冷凝面温度为15 25。C的条件下进行薄膜蒸 发，得馏余物A直接进入第二蒸馏器，控制第二蒸馏器的真空度为150 250Pa、蒸馏温度为 65。C 75。C、冷凝面温度为15 25。C的条件下进行薄膜蒸发，得馏余物B直接进入第三蒸馏 器，控制第三蒸馏器的真空度为20 40Pa、蒸馏温度为8(TC 9(TC、冷凝面温度15 25。C的 条件下进行薄膜蒸发，得馏余物C直接进入第四蒸馏器，控制第四蒸馏器的真空度为O. 01 0.05Pa，蒸馏温度为25(TC 28(TC，冷凝面温度3(TC的条件下进行薄膜蒸发，收集馏出液； (6)取步骤(5)收集的馏出液进行喷雾干燥制成粉状，即所述的黄酮苷类物质。
全文摘要
本发明提供了一种黄酮苷类物质的提取方法，所述的方法为取去杂质的柑橘皮、柿树叶的干燥粉末为原料，以20～80％乙醇提取；静置沉淀，取上清液，加入质量为所述上清液1～5％的硅藻土，充分搅后，以板框过滤机压滤，滤液B用聚醚砜膜材料进行膜过滤，取过膜的小分子溶液；再将得到的小分子溶液通入薄膜蒸发器，以分子蒸馏方式除去杂质，收集所需馏出液，进行喷雾干燥制成粉状，即所述的黄酮苷类物质。本发明工艺操作十分简便，成本低廉，可节省大量溶剂，降低对设备的要求，同时减少对环境的污染，能很好地保证黄酮苷类物质的天然品质；产出的黄酮类提取物中黄酮苷类成分含量高，总含量在70％以上，总黄酮转移率可达95％以上，色素残留少。
文档编号A61P3/00GK101670010SQ20091030817
公开日2010年3月17日 申请日期2009年10月10日 优先权日2009年10月10日
发明者何杰民, 张拥军, 朱丽云, 赵灿法, 萍 陈 申请人:杭州富春食品添加剂有限公司;中国计量学院