专利名称：用于加速胶原蛋白生成的组合物的制作方法
技术领域：
本公开主要涉及一种局部皮肤护理组合物，更具体地，涉及一种用于胶原蛋白加速生成的配制的局部皮肤护理组合物。
背景技术：
胶原蛋白是一种长形纤维结构蛋白质，其功能与例如酶等球状蛋白质具有很大不同。胶原蛋白是在动物体内结缔组织的主要蛋白质，并且是哺乳动物体内最多的蛋白质，占到总量的大约40%。胶原蛋白强韧且不能伸展，具有很大的抗张强度，是软骨、韧带及腱的主要成分，并且是骨头和牙齿的主要蛋白质成分。胶原蛋白连同柔软的角蛋白质一起，形成皮肤的强度和弹性，而且伴随着老化，胶原蛋白的减少导致皱纹的产生。胶原蛋白强化血管并且对组织发育也起作用。胶原蛋白以晶体形式出现在眼睛的角膜和晶状体上。胶原蛋白还用于整容外科手术和烧伤外科手术。胶原蛋白出现在遍及整个人体的许多地方，并且以不同的形式，每一种形式被认为是一种类型。至少有12种不同的胶原蛋白类型，其中I型胶原蛋白是最丰富的。I型胶原蛋白的基本三股螺旋结构是其他大多数胶原蛋白类型的原型。其他类型胶原蛋白在它们的三股螺旋的长度上，以及在它们的氨基或羧基末端是否具有球状区域上不同于I型胶原蛋白。I型胶原蛋白可以在皮肤，腱和骨头中发现，而且类型I -III型被认为对皮肤的发育和形成起重要作用。人们需要能提高胶原蛋白的生成的皮肤护理组合物以及生物体外给药的组合物。
发明内容
本发明在第一实施例中提供了一种用于动物尤其是哺乳动物皮肤的局部施用组合物，该组合物包括结合有一种或多种植物脂肪的十八碳四烯酸。十八碳四烯酸的优选来源是从蓝蓟属的一个或更多个种中萃取的植物油。优选的种是车前叶蓝蓟、紫色蝰蛇牛舌草、佩特森的诅咒(Patterson' s Curse)。本发明的再一实施例中提供了一种用于动物尤其是哺乳动物皮肤的局部施用组合物，该组合物包括结合有一种或多种CODAT’ s的十八碳四烯酸。十八碳四烯酸的优选来源是从蓝蓟属的一个或更多个种中萃取出的植物油。优选的种是车前叶蓝蓟，紫色蝰蛇牛舌草，佩特森的诅咒。优选地，植物脂肪选自含有称为十八碳三烯酸(CODTA’ s)的脂肪酸。优选的 CODTA' s为金盏花酸、梓树酸，α-桐酸，兰花酸和石榴油酸。CODTA' s的优选来源是金盏草成药、梓树、油桐、兰花楹和石榴。蓝蓟属的一个或更多个种选自以下任何一种或多种化合物^Echium acanthocarpum Svent. · Echium aculeatum Poir. · Echium albicans Lag.& Rodr. · Echium angustifolium Lam. · Echium arenarium Guss. · Echium asperrimum Lam. · Echium auberianum Webb et Berth. · Echium bethencourtii Santos · Echium boissieri Steudel · Echium bonnetii Coincy · Echium brevirame Sprague et Hutch. · Echium callithyrsum Webb ex Bolle · Echium candicans L. fil. Pride of Madeira · Echium creticum L. · Echium decaisnei Webb · Echium flavumDesf. · Echium gaditanum Boiss. · Echium gentianoides · Echium giganteum Lfil. · Echium handiense Svent. · Echium humile Desf. · Echium italicum L :Pale Viper' s-bugloss · Echium lancerottense Lems et HoIz. · Echium leucophaeum Webb ex Sprague et Hutch. · Echium lusitanicum L. · Echium marianum Boiss. · Echium nervosum Dryand. in W. T. Aiton · Echium parviflorum Moench Small-flowered Viper' s-bugloss · Echium pavonianum Boiss. · Echium pininana Webb et Berth. Giant Viper ' s-bugloss · Echium plantagineum L PurpIe Viper ' s-bugloss, Patterson' s Curse · Echium pustulatum Sibth. & Sm. · Echium rosulatum Lange :Lax Viper' s-bugloss · Echium russicum J. F. Gme1. · Echium sabulicola Pomel · Echium salmanticum Lag. · Echium simplex DC. · Echium strictum L f. · Echium sventenii Bramw. · Echium tuberculatum Hoffmanns. & Link · Echium virescens DC. :Tower of Jewels · Echium vulgare L :Viper ' s Bugloss · Echium webbii Coincy · Echium wildpretii Pears, ex Hook· Fil0在根据本发明的再一实施例中，提供了一种处理皮肤的方法，其包括局部地将包括结合有一种或更多种植物脂肪的十八碳四烯酸的组合物施加到皮肤上。在根据本发明的再一实施例中，提供了一种处理皮肤的方法，包括在皮肤上局部使用一种组合物，该组合物包括结合有一种或多种CODTA’ s的十八碳四烯酸。在根据本发明的再一实施例中，提供了一种结合有一种或多种植物脂肪的十八碳四烯酸在加速皮肤中胶原蛋白生成中的应用。在根据本发明的再一实施例中，提供了一种结合有一种或多种CODTA’ s的十八碳四烯酸在加速皮肤中胶原蛋白的生成中的应用。在根据本发明的再一实施例中，提供了一种结合有一种或多种植物脂肪或其生理学上可接受的衍生物的十八碳四烯酸或其生理学上可接受的衍生物在制备加速皮肤中胶原蛋白生成的药物中的应用。在根据本发明的再一实施例中，提供了一种结合有一种或多种CODTA’ s或其生理学上可接受的衍生物的十八碳四烯酸或其生理学上可接受的衍生物在制备加速皮肤中胶原蛋白生成的药物中的应用。用于处理皮肤情况包括年老皮肤的药物组合物包括结合有一种或多种植物脂肪或其生理学上可接受的衍生物的十八碳四烯酸或其生理学上可接受的衍生物，以及生理学上可接受的载体。用于处理皮肤情况包括年老皮肤的药物组合物包括十八碳四烯酸或其生理学上可接受的衍生物结合一种或多种CODTA’ s或其生理学上可接受的衍生物，以及生理学上可接受的载体。蓝蓟油具体优选使用超临界二氧化碳萃取工艺从植物种子中提取得到。
图1 由配制在三种不同稀释剂中的蓝蓟油处理过的人类真皮纤维原细胞培养物的细胞生存能力。使用纯蓝蓟油或者稀释在细胞培养基中，2mM BSA或2mM BSA/1. 8% DMSO0 所显示的结果是三倍井方式，并且表示为未处理的控制生存能力的百分比。每项处理中的五个长条分别代表所测试的每一种稀释物的五种不同体积；从左到右分别是10 (无阴影)， 8，6，3和1 μ 1 (最多阴影)。每个井中的细胞培养基体积是100 μ 1。
图2 测试油(第一筛选)处理过的人类真皮纤维原细胞培养物中的细胞生存能力。将测试油预稀释，1/10，在2mM BSA/1.8%DMS0中。所显示的结果是三倍井方式，并且表示为未处理的控制生存能力的百分比。每项处理中的五个长条分别代表所测试的每一种测试油的五种不同体积；从左到右分别是10 (无阴影)，8，6，3和1 μ 1 (最多阴影)。每个井中的细胞培养基体积是100 μ 1。图3 测试油(第二筛选)处理过的人类真皮纤维原细胞培养物中的细胞生存能力。将测试油预稀释，如所示，在2mM BSA/1.8%DMS0中。所显示的结果是三倍井方式，并且表示为未处理的控制生存能力的百分比。每项处理中的五个长条分别代表所测试的每一种测试油的五种不同体积；从左到右分别是10(无阴影)，8，6，3和1 μ 1 (最多阴影)。每个井中的细胞培养基体积是100 μ 1。图4 所选择的测试油稀释物以及测试油混合物的配制。配制蓝蓟油/测试油混合物并以最终体积10 μ 1加入到100 μ 1的细胞培养基中。图5 测试油混合物通过人类真皮纤维原细胞对于I型胶原蛋白分泌的效果。通过ELISA(CoSmo生物有限公司)确定I型胶原蛋白的水平，并且表示为在来自于仅使用稀释剂(赋形剂)处理的培养物的样品中所观察到的水平的百分比。分析来自于每一项处理过的培养物井中的细胞培养基和细胞培养物表面(平皿)上的胃蛋白酶消化物。每一长条表示重复抽样样品的平均数。该图右侧显示了每一种测试油的编码。根据图4中的详细信息配制测试油混合物(3 1，蓝蓟油测试油比率)。图6 试验平皿设计以及蓝蓟油(Epi63)稀释物WST-I细胞生存能力化验中的吸光率读数。图形表示450nm下的吸光率减去620nm下的吸光率。平皿2中的下列井给出了出乎意料低的读数-M，C2，E2，E3，F2，F3，F4-这些是稀释在2mM BSA中的样品并且不认为值得重复，来自于稀释在2mM BSA/1. 8% DMSO-优选的稀释剂-中的样品的结果-显示出很好的一致性。图7 细胞生存能力表示为未处理过的对照细胞的生存能力相对于使用蓝蓟油 (Epi63)稀释物处理过的细胞培养物井的百分比。活细胞数目直接与修正后的吸光率读数 (A45Onm-A620nm)有关。未处理过的控制培养井的平均吸光率读数是14 . 57。图8 平皿设计以及来自测试油第一细胞毒性筛选的吸光率读数。图9 细胞生存能力表示为未处理过的对照细胞生存能力相对于使用测试油稀释物处理过的细胞培养物井的百分比-筛选I。活细胞数目直接与修正后的吸光率读数 (A45Onm-A620nm)有关。未处理过的控制培养井的平均吸光率读数是1764. 17。所有油都以1/10 在 2mM BSA/1. 8% DMSO 中稀释。图10 平皿布局以及来自测试油第二细胞毒性筛选的吸光率读数。平皿1上的两个井Gl和Hl (10 μ 1赋形剂)给出了非常低的吸光率读数，显示没有WST-I试剂加入到这些井中。图11 细胞生存能力表示为未处理过的对照细胞生存能力相对于使用测试油稀释物处理过的细胞培养物井的百分比-筛选II。活细胞数目直接与修正后的吸光率读数 (A45Onm-A620nm)有关。未处理过的对照培养井的平均吸光率读数是1235. 8。所有油都在2mM BSA/1. 8% DMSO 中稀释。图12 平皿布局以及来自蓝蓟油/测试油混合物的细胞毒性筛选中的吸光率读数。蓝蓟油/测试油混合物按照表3.1进行配制；向每一个井(100 μ 1细胞培养基体积) 中加入10 μ 1的每种油。带有蓝蓟记号的井只用蓝蓟油进行处理。图13 细胞生存能力表示为未处理过的对照细胞生存能力相对于使用蓝蓟油/ 测试油混合物处理过的细胞培养物井的百分比。活细胞数目直接与修正后的吸光率读数 (A45Onm-A620nm)有关。未处理过的控制培养井的平均吸光率读数是1552. 33。所有油都在2mM BSA/1. 8% DMSO 中稀释。图14 平皿布局以及使用ELISA确定I型胶原蛋白的吸光率读数。I型胶原蛋白的水平在细胞培养基样品(标记为黄色)的胃蛋白酶消化物和组织培养物表面(标记为绿色)的胃蛋白酶消化物中确定，这是按照ELISA套件生产商的介绍(Cosmo Bio Co Ltd)准备。I型胶原蛋白的标准浓度也已经给出并且展示了 I型胶原蛋白的标准曲线图。每一个样品来自于单独的细胞培养物井。图15 分析用试样中I型胶原蛋白的浓度。I型胶原蛋白的浓度由μ g/ml表示并经ELISA分析的标准曲线中计算公式所确定。在蓝色列中突出显示的油混合物指示，对于所给的一组样品(介质或培养物表面)相对于在仅使用稀释剂(赋形剂=2mM BSA/1.8% DMS0)处理的培养物赋形剂中所观测到的水平，胶原蛋白浓度具有> 10%的增长的样品。 黑体的图是不仅增加了培养物介质中的还增加了附着于细胞培养物表面上的I型胶原蛋白的水平的油混合物。图16 测试油的配制。按照从之前的研究中所得到的数据，使用或不使用蓝蓟(基础)油配制蔷薇(精炼)，琉璃苣，兰花楹和金盏草油；将200 μ 1的每一种测试油加入到aiil 的培养基中。使用2mM BSA/1. 8% DMSO作为稀释剂——在培养物井中得到的DMSO的最大量是0. 18%。图17 在使用测试油/测试油化合物处理过的人类真皮纤维原细胞培养基中分泌的I型胶原蛋白的水平。显示的数据是从两种各自的细胞培养物井中得到数值的平均值。 通过它们的参考数字(见图16)将油对应到X轴上去。测试油结合精制蔷薇油(Epi29)和蓝蓟油(Epi63)导致I型胶原蛋白在培养基中最一致的增长。可以在图19到30中找到原始数据。图18 来自于使用测试油/测试油化合物处理过的人类真皮纤维原细胞中的，附着于培养物平皿的井上的分泌的I型胶原蛋白的水平。显示的数据是从两种各自的细胞培养物井中得到数值的平均数。通过它们的参考数字(见图16)将油对应到χ轴上去。相对于赋形剂-处理和未处理控制，所有的测试油化合物都增强了附着型I型胶原蛋白的水平。除蓝蓟油(Epi60)以外，供体2的细胞对于测试油的响应比供体1的细胞的响应要大。 可以在图19到30中找到原始数据。图19 供体1——平皿布局以及介质样品的原始吸光率数据。相邻列中具有相同标记的样品来自于相同的培养物井中的重复抽样样品。同一列中的具有相同标记的样品来自于不同培养物井。测定450nm下的吸光率。图20 供体1——介质样品的标准曲线图21 供体1——由介质样品的标准曲线确定的I型胶原蛋白的值。图22 供体1——平皿布局以及平皿(附着性胶原蛋白)的原始吸光率数据。相邻列中具有相同标记的样品是来自于相同培养物井中的重复抽样样品。同一列中的具有相同标记的样品来自于不同培养物井。测定450nm下的吸光率。图23 供体1——平皿(附着性胶原蛋白)样品的标准曲线。图M 供体1——由平皿(附着性胶原蛋白)样品的标准曲线确定I型胶原蛋白的值。图25 供体2——平皿布局以及介质样品的原始吸光率数据。相邻列中具有相同标记的样品是来自于相同培养物井中的重复抽样样品。同一列中的具有相同标记的样品来自于不同培养物井。测定450nm下的吸光率。图沈供体2——介质样品的标准曲线。图27 供体2——由介质样品的标准曲线确定的I型胶原蛋白的值。图观供体2——平皿布局以及平皿(附着性胶原蛋白)样品的原始吸光率数据。 相邻列中具有相同标记的样品是来自于相同培养物井中的重复抽样样品。同一列中的具有相同标记的样品来自于不同培养物井。测定450nm下的吸光率。图四供体2——平皿(附着性胶原蛋白)样品的标准曲线。图30 供体2——由平皿(附着性胶原蛋白)样品的标准曲线确定的I型胶原蛋白的值。
具体实施例方式众所周知十八碳四烯酸和作为十八碳四烯酸原料的蓝蓟油能够获利性地用于改善皮肤的外观。然而十八碳四烯酸或蓝蓟油在提高该活性方面的生物功能还未被确定。此外，十八碳三烯酸(C0DTA’s)例如金盏花酸、梓树酸、α -桐酸、兰花酸和石榴油酸，并且植物脂肪作为十八碳三烯酸的原料能用于皮肤再生中也是已知的。与背景技术相反，本发明人决定研究十八碳四烯酸与十八碳三烯酸的组合在生物体外生成胶原蛋白的效果。令人惊讶地，他们发现十八碳四烯酸，包括作为十八碳四烯酸原料的蓝蓟油与十八碳三烯酸，包括作为十八碳三烯酸原料的不同植物脂肪的组合通过增加可溶性胶原蛋白的水平和附着型I型胶原蛋白的水平从而增加了人体皮肤纤维原细胞培养物中I型胶原蛋白的分泌。这些化合物的提高I型胶原蛋白生成的性能以前从未被发现。八种测试油的混合物增加了胃蛋白酶消化物细胞培养物表面上可测量的I型胶原蛋白的量(表现为分泌的胶原蛋白粘附于细胞培养物井的外壁以及底部上，含有处理过的纤维原细胞)该八种测试油为蔷薇(精炼)、琉璃苣、兰花楹、金盏花、石榴、琉璃苣(精炼)以及基础蓝蓟油。这些数据用附随的图来说明。四种油的混合物一蔷薇(精炼)、琉璃苣、兰花楹和金盏花——能够看出它们在细胞培养基中增加了可溶性I型胶原蛋白并且在细胞培养物的表面增加了附着性I型胶原蛋白。而且可以发现兰花酸(一种十八碳三烯酸)与十八碳四烯酸的混合物能通过人类皮肤纤维原细胞强烈地催生出I型胶原蛋白分泌物。金盏花酸(也是一种十八碳三烯酸)具有与兰花酸相似的能力。这些令人惊讶的发现从未被预知，并且从现有的关于这些材料的信息中也不是显而易见的。他们同样也证明这些十八碳四烯酸和十八碳三烯酸对于促进胶原蛋白的产生具有协同效用。通过提高胶原蛋白的产生，可以预料到，该含有十八碳四烯酸，蓝蓟油作为十八碳四烯酸原料，与十八碳三烯酸，植物脂肪作为十八碳三烯酸原料，的组合物作为局部的化妆品制剂具有很大实用性。在本发明之前，人们还没认识到该含有十八碳四烯酸，蓝蓟油作为十八碳四烯酸原料，与十八碳三烯酸，植物脂肪作为十八碳三烯酸原料，的组合物能促进皮肤中胶原蛋白的生成，并且因而用于施用于在皮肤局部的用途。本发明第一方面提供一种用于动物皮肤的局部旋滴用组合物，该组合物包括结合有一种或多种十八碳三烯酸(CODTA’ s)的十八碳四烯酸。十八碳四烯酸是ω-3必需脂肪酸，有时被叫做十八碳-4，8，12，15-四烯酸。它是通过使用S-6-去饱和酶用生化方法由α-亚麻酸合成的。这种脂肪酸的天然来源是大麻， 黑醋栗和蓝蓟的种子油。它的化学式是C18H28O2。化学纯的十八碳四烯酸能够从多家不同的供应商那得到。例如，Cayman化学 (http://www. caymanchem. com/)提供十八碳四烯酸乙酯，产品号码是10006856。然而本发明中的组合物中，十八碳四烯酸优选使用天然原料的提取物的一部分， 例如植物或种子油提取物。这些植物或种子油提取物被来源广泛，例如含有十八碳四烯酸的大麻油可在商业上由大量的供应商得到。十八碳四烯酸的其他来源包括黑醋栗油提取物，其也是可以从大量不同的原料中得到的。本发明该方面的组合物优选包含有从蓝蓟属中的一个种中提取出的植物油作为十八碳四烯酸的原料。上文的W010]段中列举了这种蓝蓟属，从这些物质中可以得到合适的提取物。植物油提取物优选来自于车前叶蓝蓟、紫色蝰蛇牛舌草、佩特森的诅咒，油提取物优选含有大约13%的十八碳四烯酸。蓝蓟油从车前叶蓝蓟，例如已知的紫色蝰蛇牛舌草，的植物种子中得到。这种油能够从很多供应商那获得，例如G4/SSD有限公司(Orford Hall, Binbrook Business Park, Brookenby, Market Rasen, Lincolnshire LN8 6HF)。G4/SSD 有限公司出产的蓝蓟油对于必需脂肪酸具有优良的平衡性，有大约45% n-3，含有13%十八碳四烯酸(SA)，25% n_6，还含有10%伽马亚麻酸(GLA)，和18% n-9脂肪酸。蓝蓟油含有两种通常在天然种子油中不能得到的脂肪酸，这两种脂肪酸叫做伽玛亚麻酸(GLA)和十八碳四烯酸(SA)。这两个必须脂肪酸在长链脂肪酸，前列腺素和其他代谢物的形成过程中是必需的。冷压蓝蓟油因为保留了大部分的抗氧化剂，因而不仅有助于天然油的保存，而且还被证明了有益于促进健康。除十八碳四烯酸和作为十八碳四烯酸原料的蓝蓟油外，本发明该方面的组合物还含有一种或多种十八碳三烯酸(CODTAs)。通过“十八碳三烯酸”，该组合物包括一种或多种这种类型的聚合不饱和脂肪酸化合物。十八碳三烯酸可以由大量的不同化学供应商那获得，例如Sigma-Aldrich就提供大量的这种化合物。该组合物优选包含一种或多种植物脂肪作为十八碳三烯酸的原料。通过“一种或多种植物脂肪”，该组合物包含有从一种或多种不同植物原料中提取出的脂肪。例如，本发明的一种组合物含有从琉璃苣中得到的植物油，除十八碳四烯酸外明确使用蓝蓟油作为十八碳四烯酸原料，该组合物被认为是本发明该方面的组合物。这种植物脂肪可以从大量的不同天然原料中得到。下面举例说明可以用于本发明该方面组合物中的植物脂肪Seatons (http://www. seat, ons-uk. co. uk/)提供的蔷薇油(冷压；有机；精炼)；石榴油(batons)；桐油(http://www.made-in_china.com/)； 琉璃苣油(含有精制的琉璃苣油；Seatons)；大麻籽油(batons)；亚麻油(http://www. bulknaturaloils. com/)；麦芽油(katons)；山茶油(katons)；兰花楹油(G4/SSD 有限公司，详细资料如上)；金盏草油(Springdale)。
植物脂肪优选琉璃苣油(琉璃苣)，麦芽油(小麦)，蔷薇油(精炼；亚马逊蔷薇)， 兰花楹油(兰花楹)，和/或金盏草油(金盏草)。该十八碳三烯酸优选金盏花酸，梓树酸，α -桐酸，兰花酸和/或石榴油酸。本发明特别优选的实施例中，该组合物包括从车前叶蓝蓟，紫色蝰蛇牛舌草，佩特森的诅咒中提取出的植物油，以及植物脂肪为琉璃苣油(琉璃苣)。本发明再一优选实施例中该组合物包括从车前叶蓝蓟，紫色蝰蛇牛舌草，佩特森的诅咒中提取出的植物油，以及植物脂肪为麦芽油(小麦)。本发明该方面的组合物中十八碳四烯酸/十八碳三烯酸(CODTAs)的比率的数值范围例如从10 1到1 10。然而优选的比率是大约1 1;2 1 ；3 1 ；4 1或5; 1。最优选的比率是大约3 1。而且，根据本发明该方面的实施例，植物油提取物与植物脂肪的比率的适宜数值范围例如从10 1到1 10。然而优选的植物油提取物与植物脂肪的比率是大约1 1; 2 1 ；3 1 ；4 1或5 1。最优选的比率是大约3 1。本领域技术人员可以理解，基于能增加胶原蛋白生成的有效组分的量，施用的组合物的量以及向皮肤施用局部组合物的频率，本发明该方面的组合物也可以含有不同量的十八碳四烯酸，蓝蓟油作为十八碳四烯酸的原料，以及十八碳三烯酸，植物脂肪作为十八碳三烯酸原料。作为指导，下面列举的例子提供了能够促进胶原蛋白的产生的蓝蓟油提取物和植物脂肪的比率以及量。该例子还提供了一系列的分析试验以确定该组合物在产生胶原蛋白方面的效果，其中本发明所使用的组合物包括蓝蓟油和琉璃苣油，该例子中显示了最终含有10%蓝蓟油和3. 33%琉璃苣油的组合物能促进胶原蛋白的产生。对于精炼的蔷薇油，可以使用10%蓝蓟油和3. 33%琉璃苣油的混合物。对于兰花楹和金盏草，可以使用
蓝蓟油和0.3%植物脂肪。目前超临界二氧化碳已经被确定为一种用于萃取的溶剂。这有很多原因。首先是由于超临界二氧化碳具有高扩散率，因而通常能比液体溶剂更快地渗透固体样品，其次由于它具有低粘性，因而可以从样品基质中迅速地运输出已溶解的溶质。当然产品中的溶剂残余也很少。当用于制备植物提取物时，超临界二氧化碳萃取工艺能够提供杂质少于0. 1% 的提取物。发明人已经确定使用超临界二氧化碳萃取工艺从原料物质中提取出的植物油和植物脂肪比起使用其他方法提取出的油和脂肪，保留了更好的促进新增胶原蛋白产生的能力。因此，本发明该方面进一步提供一项实施例，其中植物油提取物和植物脂肪都是使用超临界二氧化碳萃取工艺从植物种子中提取得到的。很多不同的公司都可以完成从天然产品中使用超临界二氧化碳萃取工艺提取物质；例如Botanix (http //botanix. co. uk/ index, html)禾口 NATECO2 (http//www. nateco2. de/index, htm)。本发明的第一方面提供了一种局部施用于动物皮肤尤其是人类皮肤上的组合物。有很多方法可以将根据本发明该第一方面配制的组合物局部施用到动物皮肤上。例如，该组合物可以以粉末，液体，软膏，乳油，凝胶，水凝胶，气溶胶，喷雾，胶囊， 皮肤药贴，脂质体的形式，或者以其他任何适合的可以将该组合物局部施用的形式。因此， 该制剂可以通过撒布或通过喷雾施用于皮肤上。本发明中该组合物的载体应该是一种使受验者可以很好地接受的物质。该制剂中也可以含有更多的成分，例如香料，着色剂，防腐剂或其它生物活性成分。为局部施用于皮肤上，可以将本发明的组合物配制为合适的含有悬浮式活性成分或溶解入活性成分的软膏，例如含有一种或多种下述成分的混合物矿物油，液体矿脂，白矿脂，丙二醇，聚氧乙烯聚氧丙烯化合物，乳化蜡和水。这些物质可以被配制为合适的涂剂或乳油，悬浮或溶解，例如一种含有以下一种或多种物质的混合物矿物油，硬脂酸山梨糖醇脂，聚乙二醇，液体石蜡，聚山梨糖醇酯60，鲸蜡酯基蜡，鲸蜡硬脂酸，2-辛基十二烷醇， 苯甲醇和水。然而本发明的该组合物优选配制为乳剂凝胶中的粒子。这种配制方式受益地允许本发明的该组合物为可溶的，以促进有效输送，尤其是输送到皮肤上。优选的配制技术为 Malvern Cosmeceutics Limited (http://www. malceutics. com/index, html)提供的“纳米乳剂制备”技术。本发明再一方面提供了一种含有本发明第一方面所述组合物的药物组合物和一种制药适合的赋形剂。此处“药物学可接受的赋形剂”是指本领域用于配制药物组合物的普通技术中已知的任意生理学赋形剂。本发明的再一方面提供了一种处理皮肤的方法，该方法包括将本发明上述方面中的组合物或药物组合物应用于皮肤上。本发明的再一方面提供了一种组合物或药物组合物，其用作增加皮肤中胶原蛋白的产生的药剂。本发明的再一方面提供了一种根据本发明上述方面的组合物或药物组合物，该组合物能够增加皮肤中胶原蛋白的产生。本发明上述每一项再一方面中优选的实施例是包含有从车前叶蓝蓟，紫色蝰蛇牛舌草，佩特森的诅咒中提取出的植物油，以及琉璃苣油(琉璃苣成药)和/或麦芽油(小麦)作为植物脂肪。试验例例1 生物体外研究以确定所使用的脂肪对纤维原细胞胶原蛋白合成的效果。该试验是为确定植物——衍生脂肪结合蓝蓟油对在人类真皮纤维原细胞培养基中促进合成I型胶原蛋白的效果。人类真皮纤维原细胞培养基来源于人类真皮的移植培养基，使用酶去除表皮后提供一项有用的皮肤毒性筛选模型，确定紫外保护效果因素和可以修改真皮中基因/蛋白质表达的因素。该研究是为了确定一些系列的由植物得到的油通过真皮纤维原细胞促进I型胶原蛋白分泌的效果。分泌出的I型胶原蛋白在细胞培养基和细胞培养基表面的胃蛋白酶消化物中通过ELISA进行化验。试验方法在标准条件下培养人类真皮纤维原细胞(最初来自于普通人类胸部真皮的已知培养基)。通过客户提供一系列测试油，开始细胞毒性筛选，该测试使用96井、 甲-基底细胞生存能力测定，该测定使用单一剂量测试油，48小时后检测细胞生存能力。接下来，按照1份测试油混合3份蓝蓟油的比例制备测试油与蓝蓟油(作为原油)的混合物。 这些测试油/蓝蓟油混合物在被用在一个6井型平皿格式分析前也进行筛选生物毒素。将细胞暴露于油混合物中三天。得到细胞培养基，细胞和培养基平皿，并且在分析前在-80°C 下贮藏。使用商用ELISA套件测定培养基中的I型胶原蛋白的含量和附着在细胞培养基井上的分泌出的胶原蛋白的量。
具体方法人类真皮纤维原细胞培养基人类真皮纤维原细胞在具有10% FCS, L-谷氨酸盐(2mM)，青霉素(100IU/ml)和链霉素(100 μ g/ml)的DMEM中，37°C下，95 %空气/5% 二氧化碳的气氛中，95%相对湿度下保持。为用于细胞毒性和I型胶原蛋白分析，通过胰岛素/EDTA处理获得细胞。测试试剂在室温下通过客户机程序以液体形式提供测试试剂。下面，表1列决了测试试剂和它们的参考代码。表权利要求
1.一种向动物皮肤上局部施用的组合物，包括结合有一种或多种十八碳三烯酸 (CODTAs)的十八碳四烯酸。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包括作为所述十八碳四烯酸来源的植物油提取物。
3.如权利要求2所述的组合物，其中所述植物油提取物来自于蓝蓟属物种。
4.如权利要求3所述的组合物，其中所述植物油提取物来源于车前叶蓝蓟、紫色蝰蛇牛舌草、佩特森的诅咒。
5.如上述权利要求中任意一项所述的组合物，其中所述组合物包括一种或多种作为十八碳三烯酸的来源的植物脂肪。
6.如权利要求5所述的组合物，其中所述植物脂肪是琉璃苣油(琉璃苣)、麦芽油(小麦)、蔷薇油(精炼；亚马逊蔷薇)、兰花楹油(兰花楹)、和/或金盏草油(金盏草)。
7.如上述权利要求中任意一项所述的组合物，其中所述十八碳三烯酸是金盏花酸、梓树酸、α -桐酸、兰花酸和/或石榴油酸。
8.如上述权利要求中任意一项所述的组合物，其中所述组合物包括来源于车前叶蓝蓟、紫色蝰蛇牛舌草、佩特森的诅咒的植物油提取物，并且所述植物脂肪是琉璃苣油(琉璃苣)和/或麦芽油(小麦)。
9.如上述权利要求中任意一项所述的组合物，其中所述十八碳四烯酸/十八碳三烯酸的比率为大约3 1。
10.如上述权利要求中任意一项权利要求所述组合物，其中所述植物油提取物和植物脂肪由超临界二氧化碳萃取工艺从植物种子中提取。
11.一种药物组合物，包括上述任意一项权利要求中所述组合物和药物学可接受的赋形剂。
12.一种处理皮肤的方法，包括局部施用上述任意一项权利要求所述的组合物或药物组合物。
13.上述任意一项权利要求所述的组合物或药物组合物用于皮肤以增加皮肤中胶原蛋白生成的用途。
14.根据上述权利要求中任意一项所述组合物或药物组合物，作为药剂用于皮肤以增加皮肤中胶原蛋白的生成。
全文摘要
本发明涉及一种局部施用于动物皮肤上的组合物，该组合物包括结合有一种或十八碳三烯酸(CODTAs)的十八碳四烯酸。该组合物优选包括作为十八碳四烯酸原料的蓝蓟油，以及作为十八碳三烯酸原料的植物脂，例如琉璃苣油(琉璃苣)、麦芽油(小麦)、蔷薇油(精炼的，亚马逊蔷薇)、蓝花楹油(兰花楹)、和/或金盏草油(金盏草)。本发明所涉及的组合物增进Ⅰ型胶原蛋白的分泌，从而对促进皮肤胶原蛋白的生成具有特殊效用。
文档编号A61K8/36GK102164577SQ200980137907
公开日2011年8月24日 申请日期2009年7月31日 优先权日2008年8月1日
发明者克利福德·斯宾塞 申请人:E·S·L·I·有限公司