损伤后神经组织的再生和修复的制作方法

专利名称：损伤后神经组织的再生和修复的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于神经学损伤的基于细胞的治疗或再生治疗领域。具体而言，本发明提供使用细胞再生或修复神经组织的药物组合物、试剂盒和方法。
背景技术：
各种专利和其它出版物在整个本说明书提及。这些出版物中的每一个都在此整体引入作为参考。神经学疾病以及中枢和外周神经系统的其它障碍是个体可以遭受的最使人虚弱的情况之一，这不仅是因为它们的身体影响，而且是因为它们的持久性。在过去，患有脑或脊髓损伤、或中枢或外周神经系统的神经变性状况诸如帕金森氏病、阿尔茨海默氏病或多发性硬化(仅举几个例子)的患者恢复或治愈的希望很小。神经学损害和神经变性疾病被长期认为是不可逆的，这是因为神经元和神经系统的其它细胞不能在成体中生长。然而，成体哺乳动物脑保留一些能力用于可塑性和损伤后的神经元再生。(参见，Kolb, B, Can J Exp Psycho, 1999; 53:62-76; Stroemer, RP,等 k ,Stroke, 1998; 29:2381-93; Walter, DH, ^ A ,Circulation, 2002; 105(25):3017-24; Plate, KH, J Neuropathol Exp Neurol, 1999; 58 (4):313-20; Szpak, GM,等 k ,Folia Neuropathol37(4) :264-8; Jin, K,等人， Natl Acad Sci USA, 2001; 98(8) :4710-5; Parent, JM,等)κ ,Ann Neurol, 2QQ2·, 52(6) :802-13; Stroemer, RP,等 k, Stroke, 1995; 26(11) :2135-44; Keyvani, K,等 k, J Neuropathol Exp Neurol，2WYl\ 61(10) :831-40; Lois, C,等人，1996; 271 (5251) :978-81;和 Dutton, R,等)κ ,Dev Neurosci，2·.，22 (1-2) :96-105)。例如， 室下区(SVZ)包含能够经历分化成为各种细胞类型，包括神经元的细胞群(参见，Chen, J,等 k, Stroke, 2001; 32:1005-1011; Evers, BM,等)κ, J Am Coll Surg, 2003; 197:458-478; Seyfried, D,等k ,J Neurosurg, 2006; 104:313-318)并且缺血性损伤和外伤性脑损伤(TBI)的实验提示该区域中的细胞参与恢复过程。临床研究和动物模型都提示有几个机制与颅内出血(ICH)后的细胞损伤有关。这些包括外伤或机械组分、缺血组分和血凝块的直接毒性作用。(参见，Gong, C,Neurosurgery, 2001; 48:875-883; Gong, C,等)κ,Brain Res, 2000; 871:57-65; Hua, Y,等k,J Cereb Blood Flow Metab, 2002; 22:55—61; Matsushita, K,等)κ ,J Cereb Blood Flow Metab, 2000; 20:396-404; Xi, G,等Jk ,Stroke, 2001; 32:2932-2938;和 Seyfried, D,等人，/ Neurosurg, 2004; 101:104-107)。在临床上，ICH紧密接近室系统发生，且因此，ICH后的损伤恢复可牵涉SVZ。另外，用于组织修复和再生的基于干细胞的疗法的最近出现提供了用于许多神经变性病理学和其它神经学障碍的有希望的治疗。干细胞能够自我更新并分化以产生多种成熟的神经细胞谱系。可以将这种细胞的移植用作临床工具用于重构靶组织，从而恢复生理学和解剖学功能性。干细胞技术的应用是广泛的，包括组织工程改造、基因治疗递送、和细胞治疗，即，通过外源提供的产生或包含这些试剂的活细胞或细胞组分将生物治疗剂递送到靶位置。已从成体组织中分离了具有神经潜能的干细胞。例如，神经干细胞在发育中的脑和在成体神经系统中存在。这些细胞可以经历扩增并且可以分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。然而，成体神经干细胞是稀有的，以及仅可通过侵入性程序得到，并且可具有比胚胎干细胞更有限的在培养中扩增的能力。其它成体组织也可产生用于基于细胞的神经治疗的祖细胞。例如，最近已报道，来源于骨髓和皮肤的成体干细胞可以在培养中扩增并且产生多个谱系，包括一些神经谱系。产后组织诸如脐带已作为干细胞的可选来源引起兴趣。例如，已描述了用于通过灌注胎盘或从脐带血或组织收集而回收干细胞的方法。从这些方法获得干细胞的限制一直是得到的脐带血体积或细胞量不足，以及从那些来源得到的细胞群的异质性或缺乏表征。另外，脑缺血后间充质干细胞(MSC)引起的神经再生与生长因子诸如定位于损伤区域的血管内皮生长因子(VEGF)和脑衍生神经营养因子(BDNF)升高的水平相关。在围绕实验性梗死的脑区域中，已显示存在增加的微血管(microvessel)形成和细胞沿微血管迁移的证据，尤其是来自SVZ的细胞。(参见，Evers，BM, ,J Am Coll Surg, 2003; 197:458-478)。另外，已显示出，MSC与增加的突触发生相关，因而新形成的或恢复中的细胞展现更多的连接，这与改进的功能恢复的观察一致。(参见，Seyfried，D,等人，/ Neurosurg, 2006; 104:313-318)。细胞恢复过程可受到碎片去除和/或生长因子分泌的帮助，从而产生可诱导神经元细胞再生的环境。已知神经学损伤的虚弱性质，需要开发细胞再生疗法来帮助恢复。发明概述
本发明提供可应用于针对神经学损伤的基于细胞的再生治疗的组合物、试剂盒和方法。具体而言，本发明的特征在于使用产后组织来源的细胞再生或修复神经组织的药物组合物、设备和方法。本发明的一方面的特征在于治疗患有神经学损伤的患者的方法，所述方法包括以有效治疗神经变性状况的量给患者施用脐带组织-来源的细胞(UTC)。在某些实施方案中， 神经学损伤是脑缺血、急性缺血后再灌注、围产期缺氧-缺血性损伤、心跳停止、颅内出血、 颅内损害、颈椎挫伤或惊吓婴儿综合征(whiplash or shaken infant syndrome)。本发明的另一方面特征在于刺激患者SVZ再生能力的方法，所述方法包括以有效增加SVZ中神经发生、血管发生或突触发生的量给患者施用脐带组织-来源的细胞。本发明的另一方面特征在于减少患者脑的损害或损伤部分中的凋亡的方法，所述方法包括以有效减少患者脑的损害或损伤部分中的凋亡细胞数目的量给患者施用脐带组织-来源的细胞。本发明的另一方面特征在于改进患有神经学损伤的患者的神经学功能的方法，所述方法包括以有效改进神经学功能的量给患者施用脐带组织-来源的细胞。本发明的另一方面特征在于用于治疗患有神经学损伤的患者的药物组合物，所述组合物包含药学上可接受的载体和脐带组织-来源的细胞。待治疗的神经学损伤可为脑缺血、急性缺血后再灌注、围产期缺氧-缺血性损伤、心跳停止、颅内出血、颅内损害、颈椎挫伤或惊吓婴儿综合征。在某些实施方案中，药物组合物包含在组合物配制前已被体外诱导以分化成神经细胞或其它谱系的细胞，或已被基因工程改造以产生促进神经学损伤治疗的基因产物的细胞。在某些实施方案中，药物组合物包含至少一种其它细胞类型，诸如星形胶质细胞、少突胶质细胞、神经元、神经祖先、神经干细胞或其它多能(multipotent)或多潜能 (pluripotent)干细胞。在这些或其它实施方案中，药物组合物包含至少一种其它试剂，诸如用于神经治疗的药物，或另一有益的附加试剂，诸如抗炎药、抗凋亡剂、抗氧化剂或生长因子。在某些实施方案中，药物组合物被配制用于通过注射或输注施用。可选地，其可包含其中被囊化有细胞的可植入设备、或含有细胞的基质或支架。根据本发明的再另一方面，提供了用于治疗患有神经学损伤的患者的试剂盒。该试剂盒包含药学上可接受的载体、脐带组织-来源的细胞群和在治疗患者的方法中使用试剂盒的说明书。该试剂盒可进一步包含至少一种试剂和用于培养脐带组织-来源的细胞的说明书。其也可包含至少一种其它细胞类型的群体、或用于治疗神经学损伤的至少一种其它试剂。根据本发明的另一方面，提供了用于治疗患有神经学损伤的患者的方法，所述方法包括给患者施用由脐带组织-来源的细胞制成的制剂。这种制剂可包括脐带组织-来源的细胞的细胞裂解物(或其级分)、脐带组织-来源的细胞的细胞外基质、或脐带组织-来源的细胞在其中生长的条件培养基。在另一方面，本发明特征在于包含药学上可接受的载体和由脐带组织-来源的细胞制成的制剂的药物组合物，所述制剂可为脐带组织-来源的细胞的细胞裂解物(或其级分)、脐带组织-来源的细胞的细胞外基质、或脐带组织-来源的细胞在其中生长的条件培养基。也提供用于实施本发明该方面的试剂盒。它们可包含药学上可接受的载体或其它剂或试剂中的一种或多种，来自脐带组织-来源的细胞的细胞裂解物或其级分、细胞外基质或条件培养基中的一种或多种，以及试剂盒组分的使用说明书。在各种实施方案中，脐带组织-来源的细胞在施用前被体外诱导以分化成神经细胞或其它谱系。在一些实施方案中，细胞被基因工程改造以产生促进神经学损伤治疗、改进神经学功能和/或促进再生能力的基因产物。在本发明的各种实施方案中，将脐带组织-来源的细胞连同至少一种其它细胞类型施用，诸如星形胶质细胞、少突胶质细胞、神经元、神经祖先、神经干细胞或其它多能或多潜能干细胞。在这些实施方案中，其它细胞类型可以与脐带组织-来源的细胞同时、在脐带组织-来源的细胞之前或在脐带组织-来源的细胞之后施用。同样地，在这些或其它实施方案中，将细胞连同至少一种其它试剂，诸如用于神经治疗的药物，或另一有益的附加试剂诸如抗炎药、抗凋亡剂、抗氧化剂或生长因子施用。在这些实施方案中，其它试剂可以与脐带组织-来源的细胞同时、在脐带组织-来源的细胞之前或在脐带组织-来源的细胞之后施用。在一些实施方案中，将细胞施用在患者的中枢或外周神经系统中的预定位点。可以将它们通过注射或输注、或被囊化在可植入设备中、或通过植入含有细胞的基质或支架而施用。在某些实施方案中，将细胞在神经学损伤后不同的时间点施用。例如，可在范围为损伤后约M小时至约168小时(约1天至约7天)的时间施用细胞。根据下面的详述和实施例，本发明的其它特征和优点将是显而易见的。附图简述


图1示出在损伤后M小时或72小时用PBS或3X IOfiUTC治疗大鼠(n=8)中的损伤后 1天、4天、7天、14天、21天和28天的改良的神经学严重性分数，如在0至18的评分等级上通过运动、感觉、平衡和反射测试所测定的，0是正常分数，并且18是最大缺陷。图2示出在损伤后M小时或72小时用PBS或3X IO6UTC治疗大鼠(n=8)中的损伤后1天、4天、7天、14天、21天和28天的墙角测试分数。图3示出在损伤并随后在损伤后72小时用PBS治疗(图3A)、在损伤后72小时用3X IOfiUTC治疗(图3B)、在损伤后M小时用PBS治疗(图3C)、和在损伤后M小时用 3 X IOfiUTC治疗(图3D)之后，大鼠中SVZ的细胞中的BrdU掺入；图3E示出在损伤并随后在损伤后72小时用PBS或3X IO6UTC治疗之后，大鼠SVZ中BrdU阳性细胞的平均数目(n=8)， 以及图3F示出在损伤后M小时应用PBS ^ 3 X IO6UTC的平均数目(n=8)。图4示出在损伤并随后在损伤后M小时用PBS治疗(图4A)、在损伤后M小时用3X IOfiUTC治疗(图4B)、在损伤后72小时用PBS治疗(图4C)、和在损伤后72小时用 3X IO6UTC治疗(图4D)之后，大鼠脑损害区域中血管中的VWF表达；图4E示出在损伤并随后在损伤后M小时用PBS或3 X IO6UTC治疗之后，大鼠脑损害区域中血管的平均直径(μ m) (n=8)；以及图4F示出在损伤后72小时应用PBS或3X IOfiUTC的平均直径(μ m) (n=8)。图5A示出在损伤之后，大鼠脑损害区域中的血管内皮细胞中的BrdU掺入。图5B 示出在损伤之后，大鼠脑损害区域中的血管中的VWF表达。图5C示出在损伤之后，在大鼠脑损害区域中的血管中，与VWF表达组织共定位的内皮细胞中的BrdU掺入。图6示出在损伤并随后在损伤后M小时用PBS治疗(图6A)、在损伤后对小时用3X IOfiUTC治疗(图6B)、在损伤后72小时用PBS治疗(图6C)、在损伤后72小时用 3X IO6UTC治疗(图6D)之后，大鼠脑的SVZ中的双皮层蛋白(DCX)表达；图6E示出在损伤并随后在损伤后M小时用PBS或SXlOfiUTC治疗之后，对双皮层蛋白(DCX)表达呈阳性的大鼠脑SVZ的平均面积百分比(n=8)，并且图6F示出在损伤后72小时应用PBS或 3X IO6UTC,对双皮层蛋白(DCX)表达呈阳性的平均面积百分比(ri=8)。图7示出在损伤并随后在损伤后M小时用PBS治疗(图7A)、在损伤后M小时用3X IO6UTC治疗(图7B)、在损伤后72小时用PBS治疗(图7C)、和在损伤后72小时用 3X IO6UTC治疗(图7D)之后，大鼠脑的SVZ中的TUJl表达；图7E示出在损伤并随后在损伤后M小时用PBS或3X IOfiUTC治疗之后，对TUJl表达呈阳性的大鼠脑SVZ的平均面积百分比(n=8)，并且图7F示出在损伤后72小时应用PBS或3X IO6UTC,对TUJl表达呈阳性的平均面积百分比(n=8)。图8示出在损伤并随后在损伤后M小时用PBS治疗(图8A)、在损伤后M小时用3X IOfiUTC治疗(图8B)、在损伤后72小时用PBS治疗(图8C)、和在损伤后72小时用 3X IO6UTC治疗(图8D)之后，大鼠脑的血肿界面区中的突触小泡蛋白表达；图8E示出在损伤并随后在损伤后M小时用PBS或3X IO6UTC治疗之后，对突触小泡蛋白表达呈阳性的大鼠脑的血肿界面区的平均面积百分比(ri=8)，并且图8F示出在损伤后72小时应用PBS或 3X IO6UTC,对突触小泡蛋白表达呈阳性的平均面积百分比(n=8)。图9示出在损伤并随后在损伤后M小时用PBS治疗(图9A)、在损伤后M小时用3X IO6UTC治疗(图9B)、在损伤后72小时用PBS治疗(图9C)、和在损伤后72小时用 3 X IOfiUTC治疗(图9D)之后，大鼠脑的损害区域中凋亡细胞的TUNEL染色；图9E示出在损伤并随后在损伤后M小时用PBS或3X IOfiUTC治疗之后，大鼠脑的损害区域中每个载玻片的凋亡细胞平均数目(n=8)，并且图9F示出在损伤后72小时应用PBS或3X IO6UTC的平均数目(阔)。图10示出在损伤并随后在损伤后M小时应用PBS或3X IOfiUTC治疗(n=8)(图 10A)、和在损害后72小时应用PBS或3X IO6UTC治疗(n=8)(图10B)之后，大鼠脑中纹状体丢失的平均百分比。图11示出在损伤后7天应用PBS或3X IO6UTC治疗(n=10)(图11A)、以及在损伤后3天应用PBS或SXlOfiUTC治疗(n=10)(图11B)大鼠中的损伤后1天、4天、7天、14 天、21天、28天、31天和35天的mNSS。图12示出在损伤后7天应用PBS或3X IO6UTC治疗(n=10)(图12A)、以及在损伤后3天应用PBS或SXlOfiUTC治疗(n=10)(图12B)大鼠中的损伤后1天、4天、7天、14 天、21天、28天、31天和35天的墙角测试分数。图13示出在损伤后7天应用PBS或3X IO6UTC治疗(n=10)(图13A)、以及在损伤后3天应用PBS或SXlOfiUTC治疗(n=10)(图13B)大鼠中的损伤后1天、4天、7天、14 天、21天、28天、31天和35天的圆筒测试分数。图14示出在损伤后7天应用PBS或3X IO6UTC治疗(n=10)(图14A)、以及在损伤后3天应用PBS或SXlOfiUTC治疗(n=10)(图14B)大鼠中的损伤后1天、4天、7天、14 天、21天、28天、31天和35天的粘合剂测试分数。图15示出在损伤并随后在损伤后72小时用PBS治疗(图15A)、在损伤后72小时用3X IOfiUTC治疗(图15B)、在损伤后7天用PBS治疗(图15C)、和在损伤后7天用 3 X IOfiUTC治疗(图15D)之后，大鼠SVZ的细胞中的BrdU掺入；图15E示出在损伤并随后在损伤后72小时用PBS或3X IO6UTC治疗之后，大鼠SVZ中BrdU阳性细胞的平均数目(n=8)， 并且图15F示出在损伤后7天应用PBS或3X IOfiUTC的平均数目(n=8)。图16示出在损伤并随后在损伤后7天用PBS治疗(图16A)、在损伤后7天用 3 X IO6UTC治疗(图16B)、在损伤后72小时用PBS治疗(图16C)、和在损伤后72小时用 SXlOfiUTC治疗(图16D)之后，大鼠脑的损害区域中的血管中VWF表达；图16E示出在损伤并随后在损伤后7天用PBS或3X IOfiUTC治疗之后，大鼠脑的损害区域中的血管平均直径(μ m) (n=10)，以及图16F示出在损伤后72小时应用PBS或3X IO6UTC的平均直径(μ m) (n=10)。图17A示出在损伤并随后在损伤后3天用SXlOfiUTC治疗之后，大鼠脑的损害区域中血管内皮细胞中的BrdU掺入(n=10)，并且图17B示出在损伤后7天应用3X IO6UTC的内皮细胞中的BrdU掺入(n=10)。图17C示出在损伤并随后在损伤后3天用SXlOfiUTC治疗之后，大鼠脑的损害区域中的血管中VWF表达(n=10)，并且图17D示出在损伤后3天应用3 X IO6UTC的血管中VWF表达(n=10)。图17E示出在损伤并随后在损伤后3天用3 X IOfiUTC 治疗之后，大鼠脑的损害区域中与血管中的VWF表达组织共定位的内皮细胞中的BrdU掺入 (n=10)，并且图17F示出在损伤后7天应用3 X IO6UTC的内皮细胞中的BrdU掺入(n=10)。图18示出在损伤并随后在损伤后7天用PBS治疗(图18A)、在损伤后7天用 3 X IO6UTC治疗(图18B)、在损伤后3天用PBS治疗(图18C)、在损伤后3天用3 X IOfiUTC 治疗(图18D)之后，大鼠脑的SVZ中的TUJl表达；图18E示出在损伤并随后在损伤后7 天用PBS或3X IO6UTC治疗之后，对TUJl表达呈阳性的大鼠脑的SVZ的平均面积百分比 (n=10)，并且图18F示出在损伤后72小时应用PBS或3X IOfiUTC,对TUJl表达呈阳性的平均面积百分比(n=10)。图19示出在损伤并随后在损伤后72小时用PBS治疗(图19A)、在损伤后72 小时用SXlOfiUTC治疗(图19B)、在损伤后7天用PBS治疗(图19C)、在损伤后7天用 3 X IOfiUTC治疗(图19D)之后，大鼠脑的血肿界面区中的突触小泡蛋白表达；图19E示出在损伤并随后在损伤后72小时用PBS或3X IO6UTC治疗之后，对突触小泡蛋白表达呈阳性的大鼠脑的血肿界面区的平均面积百分比(ri=10)，并且图19F示出在损伤后7天应用PBS或 3X IO6UTC,对突触小泡蛋白表达呈阳性的平均面积百分比。图20示出在损伤并随后在损伤后7天用PBS治疗(图20A)、在损伤后7天用 3X IO6UTC治疗(图20B)、在损伤后72小时用PBS治疗(图20C)、在损伤后72小时用 SXlOfiUTC治疗(图20D)之后，大鼠脑的损害区域中凋亡细胞的TUNEL染色；图20E示出在损伤并随后在损伤后7天用PBS或3X IOfiUTC治疗之后，大鼠脑的损害区域中每个载玻片的凋亡细胞平均数目(n=10)，并且图20F示出在损伤后72小时应用PBS或3 X IO6UTC的平均数目(n=10)。图21A示出在损伤并随后在损伤后7天用PBS或3X IO6UTC治疗之后，大鼠脑中纹状体丢失的平均百分比(n=10)，并且图21B示出在损伤后72小时应用PBS或3X IO6UTC 的平均百分比(n=10)。图22示出在损伤后M小时用PBS或4X IO6UTC或MSC治疗大鼠中的损伤后1天、 4天、7天、14天、21天、观天和35天的改良的神经学严重性分数(n=8)。图23示出在损伤后M小时用PBS或4X IOfiUTC或MSC治疗大鼠中(n=8)的损伤后31天、32天、33天、34天和35天的Morris水迷宫分数。图M示出在损伤后M小时用PBS或4X IOfiUTC或MSC治疗大鼠中(n=8)的损伤后作为脑半球的百分比的损害体积。图25A示出在损伤后M小时用PBS或4X IO6UTC或MSC治疗大鼠中(n=8)的损伤后35天的E5204抗体染色以鉴定UTC。利用PBS对照没有发现阳性染色的细胞。图25B示出在损伤后M小时用PBS或4X IO6UTC或MSC治疗大鼠中(n=8)的损伤后35天的E5204 抗体染色以鉴定MSC。图2队示出在损伤后M小时用PBS或4X IO6UTC或MSC治疗大鼠中的损伤后35 天的BrdU阳性UTC细胞。图^B示出在损伤后M小时用PBS或4X IO6UTC或MSC治疗大鼠中的损伤后35 天的BrdU阳性MSC细胞。图27示出在损伤后M小时用PBS或4X IOfiUTC或MSC治疗大鼠中(n=8)的损伤后35天损害界面区中每Him2BrdU阳性细胞的数目。图28示出在损伤后M小时用PBS或4X IOfiUTC或MSC治疗大鼠中(n=8)的损伤后35天齿状回中每Him2BrdU阳性细胞的数目。图^A示出在损伤后24小时用4X IO6UTC治疗大鼠中的损伤后35天的vWF染
色血管。图^B示出在损伤后24小时用4X IOfiMSC治疗大鼠中的损伤后35天的vWF染
色血管。图30示出在损伤后M小时用PBS或4X IOfiUTC或MSC治疗大鼠中(n=8)的损伤后35天损害界面区中vWF阳性血管的数目。图31示出在损伤后M小时用PBS或4X IOfiUTC或MSC治疗大鼠中(n=8)的损伤后35天齿状回中vWF阳性血管的数目。图32A示出损害界面区中BrdU和Map_2阳性双重染色的细胞和仅BrdU阳性染色的细胞。图32B示出齿状回中BrdU和Map-2阳性双重染色的细胞以及仅BrdU阳性染色的细胞。发明详述
在下面的说明性实施方案详述中，对构成其一部分的附图进行参考。这些实施方案被足够详细地描述，以使本领域技术人员能够实践本发明，并且理解的是，可以利用其它实施方案并且可以在不背离本发明的精神或范围的情况下进行合理的结构、机械、电和化学改变。为了避免使本领域技术人员能够实践本文描述的实施方案所不需要的细节，该描述可省略本领域技术人员已知的某些信息。因此，下面的详述不以限制性意义采用。对贯穿说明书和权利要求书中应用的各种术语进行定义，如下文所列出。如本文使用的术语“个体"、“患者“或“受试者“通常指任何形式的动物，包括哺乳动物，诸如人和猴，其用药物或治疗组合物或根据所描述的方法进行治疗。"干细胞"是未分化的细胞，其由单细胞自我更新和分化以产生后代细胞的能力所限定，包括自我更新祖先、非更新祖先和终末分化细胞。干细胞的特征也在于它们的下列能力在体外分化成来自多胚层(内胚层、中胚层和外胚层)的各种细胞谱系的功能细胞， 以及在移植后产生多胚层的组织，和在注射到胚泡中之后基本上有助于大多数组织，如果不是所有组织的话。干细胞根据它们的发育潜能被分类为(1)全能的；(2)多潜能的 (pluripotent) ； (3)多能的(multipotent) ； (4)寡能的；和(5)单能的。“全能”细胞能够产生全部胚胎和胚外细胞类型。“多潜能”细胞能够产生全部胚胎细胞类型。“多能”细胞包括能够产生细胞谱系亚群，但全部在特定组织、器官或生理学系统中的那些(例如，造血干细胞(HSC)可以产生包括HSC (自我更新)、血细胞-限制性寡能祖先及为血液正常组分的全部细胞类型和元件(例如，血小板)的后代)。“寡能”细胞可以产生比多能干细胞更加受限的细胞谱系亚群，且“单能”细胞能够产生单细胞谱系(例如，生精干细胞)。干细胞也基于可获得它们的来源进行分类。“成体干细胞“通常是在包含多个分化的细胞类型的组织中发现的多能的未分化细胞。成体干细胞可以自我更新。在正常情况下，其也可以分化以产生其从中起源的组织并且有可能地其它组织类型的特化的细胞类型。"胚胎干细胞"是来自胚泡期胚胎的内细胞团的多潜能细胞。“胎儿”干细胞是起源自胎儿组织或胎膜的干细胞。“产后干细胞“是基本上起源于出生后可得的胚外组织，即脐带和胎盘的多能或多潜能细胞。已发现这些细胞拥有多潜能干细胞特有的特征，包括快速增殖和分化成许多细胞谱系的潜能。产后干细胞可为血液来源的(例如，如得自脐带血的那些)或非血液来源的(例如，如得自脐带和胎盘的非血液组织)。各种术语用于描述培养中的细胞。“细胞培养“通常指细胞从活生物取得并在受控条件下生长(“在培养中“或“被培养的“)。“原代细胞培养“是在第一传代培养之前从生物(一个或多个)直接取得的细胞、组织或器官的培养。当在促进细胞生长和/或分裂的条件下将细胞置于生长培养基中时，细胞在培养中“扩增"，从而导致产生较大的细胞群。当细胞在培养中扩增时，细胞增殖速度有时通过细胞数目加倍所需的时间量测量。这被称为“倍增时间“。术语“间充质干细胞”(MSCs)指来自未成熟的胚胎结缔组织的细胞。许多细胞类型来自间充质干细胞，包括产生软骨的软骨细胞。术语“室下区”(SVZ)指位于整个侧室侧壁的成对脑结构。侧室是脑的室系统的部分。侧室被分类为端脑的部分，它们是室中最大的。侧室通过Monro的室间孔与中央第三脑室连接。室下区连同齿状回的颗粒下区(subgranular zone)充当成体神经发生过程中神经干细胞的来源。如本文使用的术语〃标准生长条件〃指在37°C、在包含5% CO2的标准气氛和维持在约100%的相对湿度中培养细胞。虽然前述条件对于培养是有用的，但要理解的是，将认识到本领域中可用于培养细胞的选项的技术人员能够改变该条件。本发明中使用的细胞通常被称为“产后细胞“或“产后-来源的细胞“(PPDC)“。 该细胞更具体地为“脐-来源的细胞“或"脐带-来源的细胞“(UDC)，或“脐带组织来源的细胞"(UTC)。此外，该细胞可被描述为干细胞或祖细胞，后一术语被广义地使用。术语" 来源的"用于指示，细胞已得自它们的生物学来源并生长或另外地在体外操作(例如，在生长培养基中培养以扩增群体和/或产生细胞系)。本发明脐干细胞的体外操作和脐-来源的细胞的独特特征在下文详细描述。"分化"是下列过程，通过该过程，非特化的("未定型的“)或特化较差的细胞获得特化细胞的特征，例如，诸如神经细胞或肌细胞。“分化的“细胞是已占据细胞谱系中更加特化的(“定型的“)位置的细胞。当用于分化过程时，术语“定型的“指已在分化途径中行进到一点的细胞，在该点，在正常情况下，其将继续分化成特定细胞类型或细胞类型亚型，并且在正常情况下不能分化成不同细胞类型或回复成分化较差的细胞类型。“去分化“ 指下列过程，通过该过程，细胞回复到细胞谱系中特化(或定型)较差的位置。如本文所用的，细胞的"谱系“限定细胞的遗传，即，其来自哪些细胞和其可以产生什么细胞。细胞谱系将细胞置于发育和分化的遗传安排中。广义地，"祖细胞“是具有产生比其本身更加分化的后代的能力、并且仍然保持补充祖先库的能力的细胞。通过该定义，干细胞本身也是祖细胞，终末分化细胞的更直接前体也如此。当提及本发明的细胞时，如下文更详细地描述的，祖细胞的该宽泛定义可被使用。 较狭义地，祖细胞常常被限定为在分化途径中间的细胞，即，其起自干细胞并在成熟细胞类型或细胞类型亚型产生的中间。该类型的祖细胞通常不能自我更新。因此，如果该类型的细胞在本文中提及，其将被称为“非更新祖细胞“或称为“中间祖细胞或前体细胞“。
如本文所用的，短语“分化成神经谱系或表型”指变得部分或完全定型到CNS或 PNS的特定神经表型的细胞，即，神经元或神经胶质细胞，神经胶质细胞种类非限制性地包括星形胶质细胞、少突胶质细胞、施旺细胞和小胶质细胞。术语“细胞系“通常指由原代细胞培养物的一次或多次转种形成的细胞群。每轮传代培养被称为传代。当细胞被传代培养时，它们被称为已被"传代"。具体的细胞群或细胞系有时通过其被传代的次数进行提及或表征。例如，已传代10次的培养的细胞群可被称为PlO培养物。原代培养物，即，细胞从组织分离后的第一培养物被指定为P0。第一传代培养后，细胞被描述为第二培养物(Pl或传代1)。第二传代培养后，细胞变为第三培养物(P2 或传代幻等等。本领域的技术人员将理解，在传代时间段期间可有许多群体倍增；因此，培养物的群体倍增数目大于传代数目。在传代之间的时间段期间，细胞的扩增(即，群体倍增数目)取决于许多因素，包括但不限于，接种密度、基质、培养基、生长条件和传代之间的时间。如本文使用的，术语“生长培养基“通常指足以培养脐带组织来源的细胞的培养基。具体地，用于培养本发明的细胞的一种培养基包括Dulbecco’ s改良必需培养基 (DMEM)。特别优选的是DMEM-低葡萄糖(DMEM-LG) (Invitrogen, Carlsbad, Ca.) DMEM-LG 优选地补加有血清，最优选地胎牛血清或人血清。一般地，加入15% (ν/ν)胎牛血清(例如，确定成分胎牛血清，Hyclone，Logan UT)连同抗生素/抗真菌剂(优选地100单位/毫升青霉素，100毫克/毫升链霉素和0.25微克/毫升两性霉素B; Invitrogen, Carlsbad, Ca.)和0.001% (ν/ν) 2-巯基乙醇(Sigma, St. Louis Mo.)。在一些情况下，使用不同的生长培养基或提供不同的补充，并且这些正常在文中指示为生长培养基的补充。在某些化学成分确知培养基中，细胞可在根本不存在血清的情况下生长。在这种情况下，细胞可需要某些生长因子，其可以加入培养基以支持和维持细胞。待加入用于在无血清培养基中生长的目前优选的因子包括bFGF、EGF、IGF-I和PDGF中的一种或多种。在更优选的实施方案中，将因子中的两种、三种或全部四种加入无血清或化学成分确知培养基中。在其它实施方案中，将LIF加入无血清培养基以支持或改进细胞的生长。“条件培养基“是其中特定细胞或细胞群已被培养并且然后被取出的培养基。 当细胞在培养基中培养时，它们可分泌可以对其它细胞提供营养支持的细胞因子。这种营养因子包括但不限于激素、细胞因子、细胞外基质(ECM)、蛋白质、小泡、抗体和颗粒 (granule)。包含该细胞因子的培养基是条件培养基。通常地，“营养因子”被定义为促进细胞存活、生长、增殖和/或成熟，或刺激细胞的增加的活性的物质。当提及培养的脊椎动物细胞时，术语“衰老”(也称“复制衰老”或“细胞衰老”) 指可归因于有限细胞培养的性质，即，它们不能生长超过有限的群体倍增数目(有时称为 Hayflick's极限)。尽管细胞衰老首先使用成纤维细胞_样细胞进行描述，但可以在培养中成功生长的大多数正常人细胞类型经历细胞衰老。不同细胞类型的体外寿命不同，但最大寿命一般少于100次群体倍增(这是所有细胞在培养中变得衰老并且因而使得培养物不能分裂的倍增数目)。衰老不取决于按时间发生顺序的时间，而是通过培养物已经历的细胞分裂或群体倍增的数目来测量。因而，通过去除必需生长因子而休眠的细胞在重新引入生长因子时能够恢复生长和分裂，并在之后完成与连续生长的等价细胞相同的倍增数目。类似地，当将细胞在各种数目的群体倍增之后在液氮中冷冻并随后解冻和培养时，它们经历与在培养物中维持未冷冻的细胞基本上相同的倍增数目。衰老细胞不是死亡或垂死的细胞，它们实际上抵抗程序性细胞死亡(凋亡)并已维持在其不分裂状态长达3年。这些细胞非常活跃并且是代谢上有活性的，但它们不分裂。尚未发现衰老细胞的不分裂状态可通过任何生物学、化学或病毒试剂逆转。术语“神经学损伤”是包含性术语，其包括与神经元细胞死亡或损害有关的状况， 包括脑血管机能不全、局灶性或弥散性脑外伤、弥散性脑损害和外伤性神经病(包括但不限于压迫、压榨、撕裂和节段神经病)。神经学损伤的实例是脑缺血或梗死，包括栓塞性阻塞和血栓性阻塞；急性缺血后再灌注；围产期缺氧-缺血性损伤；心跳停止；任何类型的颅内出血(诸如硬膜外、硬膜下、蛛网膜下和大脑内)；颅内和脊椎内损害(诸如挫伤、 穿透、剪切、压迫和撕裂)；颈椎挫伤或惊吓婴儿综合征(whiplash and shaken infant syndrome)。其它神经学损伤包括肿瘤和侵袭CNS和PNS的其它瘤形成状况。尽管基础疾病被考虑为增殖性的(而不是损伤)，但周围组织可被损害。另外，可利用细胞疗法将凋亡或其它抗瘤分子递送到肿瘤位点，例如，通过递送产生这种试剂的基因修饰细胞。术语“治疗神经学损伤(或神经学损伤的治疗)，，指改善如本文定义的神经学损伤的影响，或延迟、停止或逆转如本文定义的神经学损伤的发展，或延迟或防止如本文定义的神经学损伤的发病。术语刺激“SVZ的再生能力”指增加室下区再形成或重制外围组织包括神经学和内皮组织的能力。术语改进“神经学功能”指使功能更好，所述功能诸如例如，肌肉强度、反射性反应或感觉知觉。神经学功能已得到改进的确定是通过各种行为测试以及运动、感觉、反射和平衡测试评估的。术语“减少患者脑的损害或损伤部分中的凋亡”指降低已遭受一些其它损伤或损害的患者脑的一部分中经历凋亡或程序性细胞死亡的细胞的数目。凋亡可以通过本领域已知的任何方法进行确定，包括但不限于基于流式细胞术的凋亡检测方法、免疫组织化学方法、DNA断裂测定、胱天蛋白酶活性测定等。凋亡也可以通过本领域已知的模拟或预测体内反应的体外测定进行确定。术语“有效量“指如本文所描述的化合物、材料或组合物的浓度或量，其有效实现特定的生物学结果。这种结果包括但不限于体外或体内细胞生长和/或分化，以及如本文所描述的神经学损伤的治疗。关于生长因子，有效量可为约1纳克/ml至约1微克/ml的范围。关于体内施用给患者的UTC，有效量可为少至几百或更少至多至几百万或更多的范围。 在具体实施方案中，有效量可为约IO3至约IO11细胞的范围、更具体地至少约IO4细胞。将认识到，待施用的细胞数目将取决于待治疗的神经学损伤的细节而变化，所述细节包括但不限于待治疗的尺寸或总体积/表面积，以及施用位点对待治疗区域位置的接近度，和医学生物学家熟悉的其它因素。术语“有效期“、“有效时间段“或“有效条件“通常指时间段或其它可控条件 (例如，对于体外方法的温度、湿度)，其对于试剂或药物组合物实现其预期结果是必要的或优选的。
可与术语“生物相容性载体“或“生物相容性介质“互换使用的术语“药学上可接受的载体“或“药学上可接受的介质“指试剂、细胞、化合物、材料、组合物和/或剂型， 其不仅与待治疗性施用的细胞和其它试剂相容，而且也适于与人类和动物的组织接触使用，而没有过度的毒性、刺激、变态反应或与合理的利益/风险比相称的其它并发症。如本文更详细地描述的，适于在本发明中使用的药学上可接受的载体包括液体、半固体(例如， 凝胶)和固体材料(例如，细胞支架和基质、管、片和如本领域已知的和本文更详细地描述的其它这种材料)。这些半固体和固体材料可进行设计以抵抗体内降解(非-生物可降解的)或它们可进行设计以在体内降解(生物可降解的，生物可侵蚀的)。生物可降解材料可进一步为生物可再吸收的或生物可吸收的，即，它可溶解和吸收到体液中(水溶性植入物是一个例子)，或降解并最终从身体消除，或是通过转化成其它材料或是通过天然途径破坏和消除。几个术语在本文中关于细胞或组织移植或细胞置换疗法使用。术语"自体转移"、 “自体移植"、"同体移植"等指其中细胞或移植供体也是细胞或移植受者的治疗。术语“ 同种异体转移"、“同种异体移植"、“同种异体移植物“等指其中细胞或移植供体与受者是相同物种但不是相同个体的治疗。其中供体的细胞已与受者进行组织相容性匹配的细胞转移有时被称为“同系转移“。术语“异种转移"、“异种移植"、“异种移植物“等指其中细胞或移植供体与受者是不同物种的治疗。如本文使用的术语“分离“通常指已从其天然环境中分离的细胞。该术语包括从其天然环境中总的物理分离，例如，从供体动物取出。在优选的实施方案中，分离的细胞在组织中不存在，即，细胞从与其正常接触的邻近细胞中分离或解离。优选地，细胞作为细胞悬浮液施用。如本文使用的，短语“细胞悬浮液“包含与培养基接触和已例如通过使一片组织接受轻柔研磨被解离的细胞。如本文使用的术语“基质“通常指连同细胞施用给患者的生物可降解的和/或生物可再吸收的材料。基质可充当临时支架，直至被新生长的细胞取代。在一些实施方案中， 基质可提供因子或与细胞结合使用的其它试剂的持续释放，并且可提供用于发展患者中组织生长的结构。在其它实施方案中，基质仅提供用于发展组织的临时支架。基质可以是颗粒形式(直径大于10微米的大颗粒或直径小于10微米的微粒)，或其可以是结构上稳定的三维植入物形式(例如，支架)。基质可以是浆液、水凝胶或可选地三维结构诸如立方体、圆柱体、管、块、薄膜、片或适当的解剖形式。如本文使用的术语“支架“通常指三维多孔结构，其提供用于细胞生长的模板。支架由在体内随时间过去降解的生物可降解的和/或生物可再吸收的材料制成。支架降解花费的时间长度可取决于材料的分子量。因而，较高分子量材料可产生较长时间段保持它们的结构完整性的聚合物支架；而较低分子量导致较慢的释放和较短的支架寿命。支架可由本领域已知的任何方式制成。可以用于形成支架的聚合物的例子包括天然和合成聚合物。描述
包括与神经元细胞死亡或损害有关的状况，包括脑血管机能不全、局灶性或弥散性脑外伤、弥散性脑损害和外伤性神经病的神经学损伤具有作为共同特征的神经细胞的特定或易损组的功能障碍或丢失。该共性使得能够开发类似的治疗方法用于易损或损害的神经组织的修复和再生，其中之一是基于细胞的疗法。在本文描述的其各种实施方案中，本发明的特征在于用于神经修复和再生的方法和药物组合物，其利用来源于产后组织的祖细胞和细胞群。本发明适用于任何神经学损伤，但预期其尤其适于许多损伤，所述损害非限制性地包括，脑缺血或梗死，包括栓塞性阻塞和血栓性阻塞，急性缺血后再灌注，围产期缺氧-缺血性损伤，心跳停止，以及任何类型的颅内出血(诸如硬膜外、硬膜下、蛛网膜下和大脑内)， 以及颅内和脊椎内损害(诸如挫伤、穿透、剪切、压迫和撕裂)，也包括颈椎挫伤或惊吓婴儿综合征。如上文概述的，本发明在其一方面总的来说涉及应用分离的脐带组织-来源的细胞(UTC)治疗神经学损伤的方法，所述细胞来源于已使其基本上不含血液的脐带组织。UTC 能够在培养中自我更新和扩增，并且具有分化成神经表型细胞的潜能。某些实施方案的特征在于包含这种细胞的群、包含该细胞或其组分或产物的药物组合物、和应用该药物组合物治疗患有神经学损伤的患者的方法。脐带组织-来源的细胞已通过它们在培养中的生长性质、通过它们的细胞表面标记、通过它们的基因表达、通过它们产生某些生物化学营养因子的能力和通过它们的免疫性性质进行表征。根据本文描述的方法，对哺乳动物脐带组织进行消化并优选地在无菌环境中分离 UTC0在分离UTC之前，优选地从产后组织除去血液和碎片。例如，可用缓冲溶液洗涤产后组织，例如但不限于磷酸缓冲盐水。洗涤缓冲液也可包含一种或多种抗真菌和/或抗生素试剂，例如但不限于青霉素、链霉素、两性霉素B、庆大霉素和制霉菌素。可通过机械力(切碎或剪切力)解聚全部组织或其片段或部分。在目前优选的实施方案中，分离程序也利用酶促消化过程。已知许多酶在本领域中用于从复合组织基质分离个别细胞以促进在培养物中生长。范围为弱消化(例如，脱氧核糖核酸酶和中性蛋白酶， 分散酶)至强消化(例如木瓜蛋白酶和胰蛋白酶)的这种酶是可购得的。这种酶的一个非穷尽性列举包括粘液溶解酶活性、金属蛋白酶、中性蛋白酶、丝氨酸蛋白酶(诸如，胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或弹性蛋白酶)和脱氧核糖核酸酶。目前优选的是选自金属蛋白酶、中性蛋白酶和粘液溶解活性的酶活性。例如，已知胶原酶对于从组织分离各种细胞是有用的。脱氧核糖核酸酶可以消化单链DNA并且可以最小化分离期间的细胞-团块化。优选的方法涉及用胶原酶和分散酶，或胶原酶、分散酶和透明质酸酶的酶促处理。技术人员将认识到，在本领域已知许多这种酶处理用于从各种组织来源分离细胞，并且被充分装备以评估新的或另外的酶或酶组合在分离本发明的细胞中的效用。优选的酶处理可以是约0. 5至2小时长或更长。在其它优选的实施方案中，在解离步骤的酶处理过程中，于约37°C温育组织。分离的细胞可用于起始或接种细胞培养物。将分离的细胞转移到未包被或包被有细胞外基质或配体诸如层粘连蛋白、胶原(天然的、变性的或交联的)、明胶、纤连蛋白和其它细胞外基质蛋白的无菌组织培养容器。细胞在能够维持细胞生长的任何培养基中培养， 诸如但不限于，DMEM (高或低葡萄糖)、高级DMEM、DMEM/MCDB 201、Eagle's基础培养基、 Ham's FlO 培养基(FlO) ,Ham's F-12 培养基(F12) ,Iscove's 改良 Dulbecco，s 培养基、 间充质干细胞生长培养基(MSCGM)、DMEM/F12、RPMI 1640和CELL-GR0-FREE。培养基可补加有一种或多种组分，包括例如，胎牛血清(FBS)，优选地约2-15% (ν/ν)；马血清(ES) ’人血清(HS) ； β-巯基乙醇(BME或2-ΜΕ)，优选地约0.001% (ν/ν)；一种或多种生长因子，例如，血小板衍生生长因子(PDGF)，表皮生长因子(EGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)，血管内皮生长因子(VEGF)，胰岛素样生长因子-1 (IGF-I)，白细胞抑制因子(LIF)和促红细胞生成素；氨基酸，包括L-缬氨酸；和一种或多种抗生素和/或抗真菌剂以控制微生物污染， 诸如青霉素G、硫酸链霉素、两性霉素B、庆大霉素和制霉菌素，单独的或组合的。培养基优选地包括生长培养基(例如DMEM-低葡萄糖、血清、BME和抗生素试剂)。以允许细胞生长的密度将细胞接种在培养容器中。优选地，以约0至约5体积％的空气中的ω2和约2至约25体积％的空气中的O2，优选地约5%至约20%的空气中的A培养细胞。细胞优选地在约25°C至约40°C培养和更优选地在37°C培养。细胞优选地在培养箱中培养。培养容器中的培养基可以是静态的或搅动的，例如，使用生物反应器。UTC优选在低氧化应激(例如，添加谷胱苷肽、维生素C、过氧化氢酶、维生素E、N-乙酰半胱氨酸)下生长。如本文使用的“低氧化应激“指对培养的细胞没有或具有最小自由基损害的条件。在本发明的一些实施方案中，可将UTC传代或移动至分开的培养容器中，所述分开的培养容器含有与最初使用的相同或不同类型的新鲜培养基，在所述分开的培养容器中细胞群可进行有丝分裂扩增。本发明的方法中使用的细胞可在介于传代0和衰老之间的任何点使用。优选将细胞传代约3至约25次，更优选传代约4至约12次，并优选传代10或 11次。可进行克隆和/或亚克隆以证实已经分离到细胞克隆群。此外，可将产后组织中存在的不同细胞类型分级分离为亚群，从所述亚群中可以分离UTC。这可使用用于细胞分离的标准技术来完成，包括，但不限于，酶促处理以将产后组织解离成其组分细胞，然后是具体细胞类型的克隆和选择，包括但不限于基于形态学和 /或生物化学标记的选择；希望的细胞的选择性生长(阳性选择)；不需要的细胞的选择性破坏(阴性选择)；基于在混合群中有差别的细胞可凝集性的分离，例如，采用大豆凝集素； 冻融程序；在混合群中有差别的细胞粘附性质；过滤；常规的和区带离心；离心淘析(逆流(counter-Streaming)离心)；单位重力分离；逆流分布；电泳；和荧光激活细胞分选术 (FACS)。按需要改变培养基。继续温育，直至足够数目或密度的细胞在皿中积累。其后，可除去存在的任何原始的外植组织部分，并且通过胰蛋白酶消化使用标准技术或通过使用细胞刮棒从皿中分离剩余的细胞。胰蛋白酶消化之后，收集细胞，移动到新鲜培养基和如上温育。在一些实施方案中，培养基在胰蛋白酶消化后大约M小时至少更换1次，以除去任何漂浮细胞。认为在培养物中剩余的细胞是UTC。UTC可被冷藏。因此，用于自体转移(对于母亲或孩子)的UTC可来源自孩子出生后的适当的产后组织，然后进行冷藏以便在随后需要它们用于移植的情况下是可用的。UTC可通过下列进行表征，例如，通过生长特征(例如，群体倍增能力、倍增时间、 传代至衰老)、核型分析(例如，正常核型、母源谱系或新生儿谱系)、流式细胞术(例如， FACS分析)、免疫组织化学和/或免疫细胞化学(例如，用于检测表位)、基因表达概况(例如，基因芯片阵列、聚合酶链反应(例如，逆转录酶PCR、实时PCR和常规PCR))、蛋白质阵列、蛋白质分泌(例如，通过血浆凝固测定或UTC条件培养基的分析，例如通过酶联免疫吸附测定(ELISA))、混合淋巴细胞反应(例如，作为PBMCs的刺激的测量)，和/或本领域已知的其它方法。脐组织来源的细胞的例子于2004年6月10日保藏在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)并指定为如下 ATCC 登记号(1)株名称 UMB 022803 (P7)指定为登记号PTA-6067 ；和O)株名称UMB 022803 (P 17)指定为登记号PTA-6068。本发明的方法中有用的UTC可拥有下列生长特征中的一个或更多(1)它们在培养物中需要L-缬氨酸用于生长；(2)它们能够在含约5%至约20%的氧的气氛中生长；(3) 它们在达到衰老之前具有在培养物中至少倍增约40次的潜能；和它们在未包被或包被明胶、层粘连蛋白、胶原、聚鸟氨酸、玻连蛋白或纤连蛋白的组织培养容器上贴壁和扩增。另外，本发明的方法中有用的UTC可拥有正常核型，所述核型随着细胞传代保持。 用于核型分析的方法是可用的并且是本领域的技术人员已知的。同样，本发明的方法中有用的UTC可通过某些蛋白质的产生表征，包括(1)组织因子、波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白中至少一种的产生；和O)⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、 ⑶90、PDGFr-α、PD-L2和HLA-A、B、C细胞表面标记中至少一种的产生，如通过流式细胞术检测的。此外，本发明的方法中有用的UTC可通过缺乏下列至少一种的产生表征⑶31、 CD34、CD45、CD80、CD86、CDl 17、CD141、CD178、Β7-Η2、HLA-G 和 HLA-DR、DP、DQ 细胞表面标记，如通过流式细胞术检测的。本发明的方法中有用的UTC可产生组织因子、波形蛋白和 α-平滑肌肌动蛋白中至少两种；或蛋白质组织因子、波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白中所有三种。此外，本发明的方法中有用的UTC可通过基因表达表征，所述基因表达相对于作为成纤维细胞、间充质干细胞或髂嵴骨髓细胞的人细胞，对于编码白细胞介素8、浆膜蛋白 (reticulon) 1、趋化因子(C-X-C基序)配体1 (黑色素瘤(melonoma)生长刺激活性，α )、 趋化因子(C-X-C基序)配体6 (粒细胞趋化蛋白2)、趋化因子(C-X-C基序)配体3、肿瘤坏死因子、α -诱导的蛋白3、C-型凝集素超家族成员2、Wilms瘤1、醛脱氢酶1家族成员 A2、肾素、氧化的低密度脂蛋白受体1、智人Qtomo sapiens)克隆IMAGE:4179671、蛋白激酶 C ζ、假设的蛋白质DKFZp564F013、卵巢癌中下调的1和来自克隆DKFZpM^dll3的智人基因中至少一种的基因增加。同样，本发明的方法中有用的UTC可通过基因表达表征，所述基因表达相对于作为成纤维细胞、间充质干细胞或髂嵴骨髓细胞的人细胞，对于编码下列中至少一种的基因降低身材矮小症同源框2、热休克27 kDa蛋白2、趋化因子(C-X-C基序)配体12 (基质细胞来源的因子1)、弹性蛋白(主动脉瓣上狭窄，Williams-Beuren综合征)、智人mRNA、 cDNA DKFZp586M2022 (来自克隆KFZp586M2022)、间充质同源框2 (生长停滞特异的同源框)、Sine oculis同源框同源物1 (果蝇属⑵rosoMih))、晶体蛋白α B、形态发生的散乱相关活化剂2、DKFZP586BM20蛋白、类似于neuralin 1、四连蛋白(纤溶酶原结合蛋白)、src同源三(Sro)和富含半胱氨酸结构域、胆固醇25-羟化酶、runt-相关的转录因子 3、白细胞介素11受体α、前胶原C-内肽酶增强子、frizzled同源物7 (果蝇属)、假设的基因BC008967、类型VIII α 1胶原、生腱蛋白C (hexabrachion)、易洛魁族人同源框蛋白 5、h印haestin、整联蛋白β 8、突触小泡糖蛋白2、成神经细胞瘤致瘤性的抑制1、胰岛素样生长因子结合蛋白2(36kDa)、智人cDNA FLJ12280 f is克隆MAMMA1001744、细胞因子受体样因子1、钾中间的/小的电导钙-活化通道亚家族N成员4、整联蛋白β 7、含PDZ-结合基序的转录辅激活物(TAZ)、sine oculis同源框同源物2 (果蝇属)、KIAA1034蛋白、突触小泡相关膜蛋白5 (myobrevin)、含EGF的纤蛋白(fibulin)-样细胞外基质蛋白1、早期生长应答3、远端较小的(distal-less)同源框5、假设的蛋白FLJ20373、醛酮还原酶家族1成员C3 (3-α羟基类固醇脱氢酶类型II)、双糖链蛋白聚糖、含PDZ结合基序的转录辅激活物(ΤΑΖ)、纤连蛋白1、脑啡肽原、整联蛋白样1 (含EGF-样重复结构域)、智人mRNA 全长插入片段cDNA克隆EUR0IMAGE 1968422、EphA3、KIAA0367蛋白、利尿钠肽受体C/鸟苷酸环化酶C (心房钠尿肽受体C)、假设的蛋白FLJ140M、智人mRNA、cDNA DKFZp564B222 (来自克隆KFZp564B222)、BCL2/腺病毒ElB 19kDa相互作用蛋白3-样、AE结合蛋白1和细胞色素c氧化酶亚基VIIa多肽1 (肌肉)。另外，本发明的方法中有用的UTC可通过下列至少一种的分泌表征MCP_1、IL-6、 IL-8、GCP-2、HGF、KGF、FGF、HB-EGF, BDNF, TPO、MlPla、RANTES 和 TIMPl。此外，本发明的方法中有用的UTC可通过下列至少一种的分泌的缺乏表征JGF-β 2、ANG2、PDGFbb、MIPlb、 1309、MDC和VEGF，如通过ELISA检测的。本发明的方法中有用的UTC优选地包括上文列出的生长、蛋白质/表面标记产生、 基因表达或物质分泌特征中的两种或更多种。本发明的方法中有用的UTC可包括三、四、 五、六、七、八或更多种所述特征。本发明的方法中有用的UTC还可包括所有上述特征。在其几个方面中本发明的方法中有用的UTC中的是，具有上述特征的UTC，且更特别的是那些细胞，其中细胞具有正常核型并随着传代保持正常核型，并且此外，其中细胞表达标记 CD10、CD13、CD44、CD73、CD90、PDGFr- α 和 HLA-A、B、C 中的每一种，其中细胞产生免疫可检测的蛋白，所述蛋白对应于所列的标记。本发明的方法中有用的UTC还可包括除前述外不产生对应于标记⑶31、⑶；34、⑶45、⑶117、⑶141或HLA-DR、DP、DQ中任一种的蛋白质的细胞，如通过流式细胞术检测的。具有沿着导致各种表型的系分化的潜能的某些细胞是不稳定的，并且因而可以自发地分化。本发明的方法中有用的UTC是不自发分化的细胞，例如沿着神经系。本发明的方法中有用的UTC，当在生长培养基中生长时，就在它们表面上产生的细胞标记以及就各种基因的表达模式而言，基本是稳定的，例如使用AfTymetrix GENECHIP测定的。所述细胞例如在传代期间和经过多个群体倍增在它们的表面标记特征方面基本保持恒定。然而，本发明方法中有用的UTC的一个特征是，通过使它们经受分化-诱导细胞培养条件，可将它们故意地诱导以分化成神经谱系表型。这可通过本领域已知的一种或多种方法完成。例如，如本文所例示的，可将UTC铺平板在瓶上，所述瓶包被以在包含B27 (B27 补充物，hvitrogen)、L-谷氨酰胺和青霉素/链霉素的神经基础(NeurcAasal)-A培养基 (Invitrogen, Carlsbad, Ca.)中的层粘连蛋白，其组合在本文中称为神经祖先扩增(NPE) 培养基。NPE培养基可进一步补充以bFGF和/或EGF。可选地，本发明方法中有用的UTC 可通过下列进行体外诱导以分化(1)共培养UTC与神经祖细胞，或O)使UTC在神经祖细胞-条件培养基中生长。UTC的分化可通过具有延长突起的双极细胞形态学来证明。诱导的细胞群可对巢蛋白的存在染色阳性。分化的UTC可通过巢蛋白、TuJl (Bill微管蛋白)、GFAP、酪氨酸羟化酶、GABA、04和/或MBP的检测进行评估。另外，本发明方法中有用的UTC可展示形成三维体(three-dimensional bodies)的能力，所述三维体是神经球(neurosphere)的神经元干细胞形成特有的。本发明的方法中有用的UTC可包括异质的细胞群。本发明的方法中有用的异质细胞群可包含至少约5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%的如上所述的UTC。本发明的方法中有用的异质细胞群可进一步包含干细胞或其它祖细胞，例如神经祖细胞， 或其可进一步包含完全分化的神经细胞。此外，群体可基本上是同质的，即，包含基本上仅仅UTC(如至少约96%、97%、98%、99%或更多的UTC)。本发明的方法中有用的同质细胞群可包含脐或胎盘-来源的细胞。脐-来源的细胞的同质群优选地不含母源谱系的细胞。胎盘-来源的细胞的同质群可以是新生儿或母源谱系的。细胞群的同质性可通过本领域已知的任何方法实现，例如，根据已知方法通过细胞分选(例如，流式细胞术)或通过克隆扩增。 因而，本发明的方法中有用的同质UTC群可包含脐带组织来源的细胞的克隆细胞系。这种群体在具有高度希望的功能性的细胞克隆被分离时是特别有用的。另外，本发明方法中有用的UTC可包括在一种或多种因子存在下或在刺激干细胞沿神经原性途径分化的条件下温育的细胞群。这种因子是本领域已知的，并且技术人员将认识到，用于分化的合适条件的确定可以用常规实验完成。这种条件的最优化可以通过统计学实验设计和分析完成，例如反应表面方法学允许同时最优化多个变量，例如在生物学培养中。示范性因素包括但不限于因子诸如生长或营养因子、脱甲基化剂、与神经谱系细胞共培养或在神经谱系细胞-条件培养基中培养、以及本领域已知的刺激干细胞沿神经原性途径或谱系分化的其它条件。(参见，例如，Lang，KJD,等人，7； Neurosci. Res., 2004; 76:184-192; Johe, KK,等k ,Genes Devel. , 1996; 10:3129-3140; Gottleib, Y),Ann. Rev. Neurosci. , 2002; 25:381—407)。也可将本发明方法中有用的UTC进行基因修饰，例如，以产生神经治疗上有用的基因产物，或产生抗瘤剂用于治疗肿瘤。遗传修饰可用多种载体中的任一种完成，包括但不限于整合病毒载体，例如，逆转录病毒载体或腺伴随病毒载体；非整合复制载体，例如，乳头瘤病毒载体、SV40载体、腺病毒载体；或复制-缺陷型病毒载体。将DNA引入细胞中的其它方法包括使用脂质体、电穿孔、基因枪或通过直接DNA注射。宿主细胞可用DNA和选择标记转化或转染，所述DNA由一种或多种适当的表达控制元件控制或与所述控制元件操作性结合，控制元件诸如启动子或增强子序列、转录终止子、聚腺苷酸化位点等。任何启动子都可用于驱动插入的基因的表达。例如，病毒启动子包括但不限于CMV启动子/增强子、SV 40、乳头瘤病毒、EB病毒或弹性蛋白基因启动子。此夕卜，用于控制目的基因表达的控制元件可以允许基因的调节的表达以便只在体内需要时才合成产物。如果瞬时表达是希望的，那么可在非-整合和/或复制-缺陷型载体中使用组成型启动子。可选地，诱导型启动子可用于在需要时驱动插入的基因的表达。诱导型启动子包括但不限于与金属硫蛋白和热休克蛋白相关的那些。引入外来DNA后，可允许工程改造的细胞生长在富集培养基中并然后切换到选择性培养基。外来DNA中的选择标记赋予对选择的抗性并允许细胞稳定地将例如质粒上的外来DNA整合到它们的染色体中并生长以形成转化灶，其进而可以克隆和扩增为细胞系。该方法可以有利地用于工程改造表达基因产物的细胞系。本发明的方法中有用的UTC可被基因工程改造以“敲除“或“击倒“促进植入位点处的炎症或排斥的因子的表达。用于减少靶基因表达水平或靶基因产物活性水平的负调节技术在下文中讨论。如本文使用的“负调节“指靶基因产物的水平和/或活性相对于缺乏调节治疗情况下靶基因产物的水平和/或活性的减少。对神经元或神经胶质细胞为天然的基因的表达可以被降低或敲除，其中使用许多技术，包括例如，通过使用同源重组技术灭活基因抑制表达。一般地，编码蛋白质的重要区域的外显子(或该区域5’的外显子)被阳性选择标记例如neo打断，从而防止正常mRNA从靶基因的产生并导致该基因的失活。基因也可通过在部分基因中产生缺失，或通过缺失整个基因而灭活。通过使用带有与靶基因具有同源性的在基因组中相距很远的两个区域的构建体，插入这两个区域的序列可以被缺失。(Mombaerts 等人，Proc. Nat. Acad. Sci U. S. Α. , 1991; 88:3084)。反义、DNA 核酶、核酶、小干扰RNA (siRNA)和抑制靶基因表达的其它这种分子也可以用于降低靶基因活性水平。例如，抑制主要组织相容性基因复合体(HLA)表达的反义RNA分子已显示就免疫应答而言最通用。又进一步地，三股螺旋分子可以在降低靶基因活性水平中使用。这些技术由 Davis, L. G.等人，(eds), Basic Methods in Molecular Biology, 2nd ed. , 1994, Appleton & Lange, Norwalk, Ct.详细描述。另外，提供了从UTC、或包含UTC的异质或同质细胞群、以及已被基因修饰或已被刺激以沿神经原性途径分化的UTC或其群体制备的细胞裂解物和细胞可溶性级分，它们在本发明方法中是有用的。UTC裂解物可溶级分(S卩，基本上不含膜)的体内使用，例如，允许有益的细胞内环境在患者中同种异体使用，而不引入最有可能触发排斥或其它不利的免疫应答的可观量的细胞表面蛋白质。裂解细胞的方法是本领域公知的并包括机械破裂、酶促破裂或化学破裂或其组合的各种方式。这种细胞裂解物可在它们的生长培养基中从细胞直接制备，并且因而包含分泌的生长因子等，或它们可从例如，在PBS或其它溶液中洗涤而不含培养基的细胞制备。如果优选，那么洗涤的细胞可在大于原始群密度的浓度重悬浮。可制备发明的方法中有用的UTC的全细胞裂解物，例如，通过破裂细胞而不随后分离细胞级分。可选地，可通过本领域已知的常规方法从细胞可溶级分分离细胞膜级分，例如，离心、过滤或类似方法。从本发明的方法中有用的脐带组织来源的细胞群制备的细胞裂解物或细胞可溶级分可照原样使用，通过例如超滤或冻干进一步浓缩，或甚至干燥、部分纯化、与本领域已知的药学上可接受的载体或稀释剂组合、或与其它化合物诸如生物制品例如药学上有用的蛋白质组合物组合。细胞裂解物或其级分可在体外或体内使用，单独或例如连同自体或同系活细胞。裂解物如果体内引入，则可在治疗位点局部引入或远距离引入，以向患者提供例如所需的细胞生长因子。另外，本发明的方法中有用的UTC可以体外培养以高得率地产生生物学产物。例如，可以使用本文描述的培养技术克隆扩增天然产生特定的目标生物学产物(例如，营养因子)或已被基因工程改造以产生生物学产物的这种细胞。可选地，可在诱导分化为神经谱系或其他谱系的培养基中扩增细胞。在任一情况下，可以使用标准分离技术容易地从条件培养基分离细胞产生和分泌到培养基中的生物学产物，例如，诸如示差蛋白质沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析、电泳和HPLC，仅举几个例子。“生物反应器“可用于利用流动方法进行进料，例如，体外三维培养。基本上，随着新鲜培养基通过三维培养物，生物学产物被洗出培养物并且可然后从流出物中分离，如上述。可选地，目标生物学产物可保留在细胞内，并且因而其收集可需要细胞被裂解，如上文所述。生物学产物可然后使用上文列出的技术中的任何一种或多种进行纯化。另外，来自本发明的方法中有用的培养的UTC的条件培养基可在体外和体内使用，如下文所述。UTC的细胞条件培养基的应用允许UTC分泌的有益的营养因子在患者中同种异体地使用，而不引入可触发排斥或其它不利的免疫应答的完整细胞。条件培养基通过在培养基中培养细胞，然后从培养基取出细胞制备。从本发明的方法中有用的UTC群制备的条件培养基可照原样使用，通过例如超滤或冻干进一步浓缩，或甚至干燥、部分纯化、与本领域已知的药学上可接受的载体或稀释剂组合、或与其它化合物诸如生物制品例如药学上有用的蛋白质组合物组合。条件培养基可在体外或体内使用，例如单独或与自体或同系活细胞一起。条件培养基如果体内引入，则可在治疗位点局部引入或远距离引入，以向患者提供例如所需的细胞生长或营养因子。另外，可以制备、收集且使用由在液体、固体或半固体基质上培养本发明的方法中有用的UTC产生的细胞外基质(ECM)，作为将活细胞植入需要组织修复或置换的受试者中的替代方案。在需要量的ECM在框架上分泌的条件下，在如本文其它处描述的三维框架上体外培养UTC。取出构成新组织的细胞，并处理ECM用于进一步使用，例如，作为可注射制齐U。为了完成这一点，杀死框架上的细胞并从框架除去任何细胞碎片。该过程可以许多不同方式执行。例如，可以在液氮中瞬间冻结活组织，而不冷藏，或可以在无菌蒸馏水中浸入组织以使细胞响应于渗透压裂解。一旦细胞已被杀死，就可破裂细胞膜并通过用温和去污剂漂洗诸如EDTA、CHAPS 或两性离子去污剂处理除去细胞碎片。可选地，可以对组织进行酶促消化和/或用破坏细胞膜和允许去除细胞内容物的试剂提取。这种酶的例子包括但不限于，透明质酸酶、分散酶、蛋白酶和核酸酶。去污剂的例子包括非离子去污剂诸如，例如，烷基芳基聚醚醇(TRITON X-100)、辛基苯氧基聚乙氧基-乙醇(Rohm and Haas, Philadelphia, Pa.)、BRIJ-35、聚乙氧基乙醇十二烷基醚(Atlas Chemical Co. , San Diego, Ca.)、聚山梨醇酯20 (TWEEN 20)、聚乙氧基乙醇失水山梨糖醇单月桂酸酯(Rohm and Haas)、聚乙烯十二烷基醚(Rohm and Haas)；和离子去污剂诸如十二烷基硫酸钠、硫酸化高级脂族醇、包含7至22个碳原子的支链或非支链磺化烷和磺化烷基芳烃。ECM的收集可以以多种方式完成，这例如取决于新组织是否已在生物可降解的或非生物可降解的三维框架上形成。例如，如果框架是非生物可降解的，那么ECM可以通过使框架接受超声处理、高压水喷射、机械刮擦或用去污剂或酶温和处理或上述任何组合取出。如果框架是生物可降解的，那么ECM可以例如通过允许框架降解或在溶液中溶解收集。可选地，如果生物可降解的框架由本身可以连同ECM注射的材料组成，那么框架和 ECM可以整体(in toto)加工用于随后注射。可选地，ECM可以通过上文描述的用于从非生物可降解的框架收集ECM的方法中的任一种从生物可降解的框架取出。所有收集过程优选地进行设计以便不变性ECM。已收集后，可对ECM进一步地进行加工。例如，可以使用本领域公知的技术，诸如通过超声处理将ECM同质化为细粒，以便使其可以通过外科手术针。如果需要，那么可以通过Y照射交联ECM的组分。例如，可以在0. 25至2百万拉德之间照射ECM以对ECM灭菌和交联。使用毒性试剂，诸如戊二醛的化学交联是可能的，但通常不是优选的。通过混合本发明的方法中有用的UTC产生的ECM与一种或多种其它细胞类型的 ECM,可调整蛋白质诸如ECM中存在的各种类型的胶原的量和/或比。此外，生物活性物质诸如蛋白质、生长因子和/或药物可以掺入ECM。示范性的生物活性物质包括组织生长因子， 诸如TGF-β等，其在注射位点促进愈合和组织修复。这种另外的试剂可连同例如UTC产生的全细胞裂解物、可溶细胞级分或进一步纯化的组分和产物使用。在另一方面，本发明提供药物组合物，其在用于治疗神经学损伤、改进神经学功能、刺激SVZ再生能力或减少SVZ中凋亡的各种方法中利用UTC、UTC群、UTC组分和产物。 一些药物组合物包括活细胞(单独的UTC或与其它细胞类型混合)。其它药物组合物包括 UTC细胞组分(例如，细胞裂解物、可溶性细胞级分、条件培养基、ECM或前述任一种的组分) 或产物(例如，UTC天然产生或通过遗传修饰产生的营养和其它生物学因子，来自UTC培养物的条件培养基)。在任何情况下，药物组合物可进一步包括其它活性剂，诸如抗炎药、抗凋亡剂、抗氧化剂、生长因子、神经营养因子或神经再生或神经保护药物，如本领域已知的。可加入UTC药物组合物的其它组分的实例包括但不限于(1)其它神经保护或神经有益药物；( 选择的细胞外基质组分，诸如一种或多种类型的本领域已知的胶原，和/ 或生长因子，富血小板血浆和药物(可选地，UTC可被基因工程改造以表达和产生生长因子)；(3)抗凋亡剂(例如，促红细胞生成素(EPO)、ΕΡ0模拟体(mimetibody)、血小板生成素、胰岛素样生长因子(IGF)-I、IGF- II、肝细胞生长因子、胱天蛋白酶抑制剂)；(4)抗炎化合物(例如，p38 MAP激酶抑制剂、TGF-β抑制剂、抑制素、IL-6和IL-I抑制剂、吡嘧司特(PEMIR0LAST)、曲尼司特(TRANILAST)、REMICADE、西罗莫司(SIR0LIMUS)和非类固醇消炎药(NSAIDS)(诸如替波沙林(TEP0XALIN)、托美汀(T0LMETIN)和 SUPR0FEN ;(5)免疫抑制或免疫调谐剂，诸如钙依赖磷酸酶抑制剂、mTOR抑制剂、抗增殖剂、皮质类固醇和各种抗体；(6)抗氧化剂诸如丙丁酚(probucol)、维生素C和E、辅酶Q-10、谷胱苷肽、L-半胱氨酸和N-乙酰基半胱氨酸；和(7)局部麻醉剂，仅举几个例子。本发明包含的药物组合物包括用药学上可接受的载体或介质配制的UTC或其组分或产物。合适的药学上可接受的载体包括水，盐溶液(诸如林格液)，醇，油，明胶，和碳水化合物诸如乳糖、直链淀粉或淀粉，脂肪酸酯，羟甲基纤维素，和聚乙烯基吡咯烷。这种制剂可以是灭菌的，并且如果需要，则与辅助剂诸如润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、和用于影响渗透压的盐、缓冲液和着色剂混合。适于在本发明中使用的药物载体是本领域已知的禾口在例如 Pharmaceutical Sciences (17th Ed. , Mack Pub. Co. , Easton, Pa.)禾口 WO 96/05309中描述的。一般地但不是排他地，将包含UTC组分或产物而不是活细胞的药物组合物配制为液体(或在口服递送适当时配制为固体片剂、胶囊等)。可将这些配制用于通过本领域已知的任何可接受途径施用，以实现药物和生物分子向靶神经组织的递送，包括但不限于，口、 鼻、眼和肠胃外，包括静脉内。肠胃外施用的具体途径包括但不限于肌内、皮下、腹膜内、大脑内、心室内、脑室内、鞘内、脑池内、脊柱内和/或脊柱旁施用途径，其通过经颅内或脊椎内针和/或导管带有或不带有泵设备递送实施。一般地，包含活UTC细胞的药物组合物配制为液体、半固体(例如，凝胶)或固体 (例如，基质、支架等，适当地用于神经组织工程改造)。液体组合物被配制用于通过本领域已知的任何可接受的途径施用，以实现活细胞向靶神经组织的递送。一般地，这些包括注射或输注到CNS或PNS中，其或是以扩散方式或是靶向神经学损伤或痛苦位点，通过包括但不限于下列的施用途径实施眼内、大脑内、心室内、脑室内、鞘内、脑池内、脊柱内和/或脊柱旁施用途径，通过经颅内或脊椎内针和/或导管带有或不带有泵设备递送。包含半固体或固体载体中的活细胞的药物组合物一般地配制用于在神经学损伤或痛苦位点外科手术植入。将认识到，液体组合物也可通过外科手术程序施用。此外，半固体或固体药物组合物可包括半透凝胶、格栅、细胞支架等，其可为非生物可降解的或生物可降解的。例如，可希望或适于将外源细胞与它们的环境隔绝，而使得细胞能够分泌和递送生物分子(例如，神经营养因子)以包绕神经细胞。因此，细胞可配制为包含活UTC或含UTC 的细胞群的自主植入物，所述细胞或细胞群被物理上分开移植的细胞与宿主组织的非可降解的选择性可渗透屏障包绕。这种植入物有时被称为"免疫保护的"，这是因为它们具有在不存在药物诱导的免疫抑制下防止免疫细胞和大分子杀死移植的细胞的能力。可选地，不同种类的可降解凝胶和网络用于本发明药物组合物。例如，特别适合于持续释放制剂的可降解材料包括生物相容性聚合物，诸如聚(乳酸)、乳酸-乙醇酸共聚物、 甲基纤维素、透明质酸、胶原等。另外，可希望或适于将将细胞递送在生物可降解的，优选地生物可再吸收的或生物可吸收的支架或基质之上或之中。一般地，这些三维生物材料包含附着于支架、在支架中分散或掺入在支架中截留的细胞外基质中的活细胞。一旦植入到身体的靶区域，这些植入物就变得与宿主组织整合，其中移植的细胞逐渐确立。(参见，例如，Tresco，PA，等 A ,Adv. Drug Delivery Rev. , 2000; 42:3-27;也参见 Hutmacher, W, J. Biomater. Sci. Polymer Edn. , 2001; 12:107—174)。可在本发明中应用的支架或基质(有时统称为“框架”)材料的实例包括非编织的垫、多孔泡沫或自装配肽。非编织的垫可例如使用包含乙醇酸和乳酸的合成可吸收共聚物 (PGA/PLA)的纤维形成，其在商标VICRYL下出售(Ethicon, Inc. , Somerville, N. J·)。也可利用由诸如冷冻-干燥或冻干方法形成的、由例如聚(ε-己内酯)/聚(乙醇酸)(PCL/ PGA)共聚物组成的泡沫，如美国专利号6，355，699中论述的。也可应用水凝胶诸如自装配肽(例如，RAD16)。原位形成可降解网络也适于在本发明中应用(参见，例如，Anseth, KS,等人，7； Controlled Release, 2002; 78:199-209; Wang, D,等k,Biomaterials, 2003; 24:3969-3980;美国专利公开2002/002^76)。将这些材料配制为适于注射的流体， 然后可通过多种方式(例如温度、PH变化和暴露于光)诱导它们以在原位或体内形成可降解的水凝胶网络。同样，框架可以是毡，它可由从生物可吸收的材料制成的复丝纱(multifilament yarn)组成。所述生物可吸收的材料例如PGA、PLA、PCL共聚物或掺合物或透明质酸。使用标准的纺织工艺技术将所述纱制成毡，所述技术由卷曲、切割、梳理和针刺组成。在另一个实施方案中，可将细胞接种于泡沫支架上，所述支架可为复合结构。进一步地，可将框架模压成有用的形状，例如诸如具有用于神经束修复的分离柱(segregated column)的脊髓的男|3禾中(Friedman, JA, ^ A ,Neurosurgery, 2002; 51:742-51).另外，将认识到，可在预先形成的非可降解外科手术或可植入设备上培养 UTC，例如，如以相当于用于制备含成纤维细胞的GDC血管内线圈的方式(Marx，WF,等 X ,Am. J. Neuroradiol. , 2001; 22:323-333)。可在接种细胞之前处理基质、支架或设备以增强细胞附着。例如，在接种之前，可以用0. 1摩尔乙酸处理尼龙基质并将其在聚赖氨酸、PBS和/或胶原中温育以包被尼龙。 可以应用硫酸类似地处理聚苯乙烯。也可对框架的外表面进行修饰以改进细胞的附着或生长以及组织的分化，诸如通过框架的血浆包被或一种或多种蛋白(例如，胶原、弹性纤维、网状纤维)，糖蛋白，糖胺聚糖(例如，硫酸肝素、软骨素-4-硫酸盐、软骨素-6-硫酸盐、硫酸皮肤素、硫酸角蛋白)，细胞基质和/或其它材料诸如但不限于明胶、藻酸盐、琼脂、琼脂糖和植物树胶等的添加。含UTC框架是根据本领域已知的方法进行制备的。例如，可以使细胞在培养容器中自由生长至亚汇合或汇合，从培养物中取出并接种在框架上。可在接种细胞以触发分化和组织形成之前、期间或之后将生长因子加入培养基，如果需要的话。可选地，可对框架本身进行修饰以便其上的细胞生长得以增强，或以便植入物的排斥风险得以降低。因而，可将一种或多种生物活性化合物，包括但不限于抗炎药、免疫抑制剂或生长因子加入框架用于局部释放。可以多种方式应用UTC、或包含UTC的细胞群、或UTC产生的组分或产物，以支持和促进神经细胞和组织的修复和再生。这种效用包括体外、先体外后体内和体内方法。体外和先体外后体内方法
可将UTC在体外使用以针对药物试剂、生长因子、调节因子等的有效性和细胞毒性筛选多种化合物。例如，这种筛选可在基本上同质的UTC群中进行以评估与UTC配制或共施用来治疗神经学损伤的候选化合物的功效或毒性。可选地，这种筛选可在已被刺激以分化成神经细胞或神经祖细胞的UTC上进行，用于评价新的药物候选物的功效。在此实施方案中，将UTC在体外维持并暴露于待测试化合物。潜在的细胞毒性化合物的活性可以通过其损害或杀死培养物中的细胞的能力测量。这可通过活体染色技术容易地评估。生长或调节因子的作用可通过分析与未暴露于所述因子的细胞相比培养的细胞的数目或强壮性 (robustness)进行评估。这可应用标准的细胞学和/或组织学技术完成，包括利用限定类型特异性细胞抗原的抗体的免疫细胞化学技术的应用。另外，如上文论述的，可以在体外培养UTC以产生生物学产物，所述产物或是细胞天然产生的，或是由细胞在诱导以分化成神经或其它谱系时产生的，或是由细胞通过遗传修饰产生的。例如，发现 TIMPl、TPO、KGF、HGF、FGF、HBEGF、BDNF、MIPlb、MCPl、RANTES、1309、 TARC、MDC和IL-8从在生长培养基中生长的UTC分泌。这些营养因子中的一些，诸如BDNF 和IL-6，在神经再生中具有重要作用。如尚未检测到或尚未检查到的在神经修复和再生中有用的其它营养因子有可能由UTC产生并可能分泌到培养基中。 同样，可将UTC用于条件培养基的产生，其或是从未分化的UTC或是从在刺激分化成神经或其它谱系的条件下温育的UTC产生。例如，这种条件培养基预期应用于神经原性前体细胞的体外或先体外后体内培养中，或在体内应用以支持包含UTC同质群或含UTC和神经祖先的异质群的移植的细胞。另外，可将UTC裂解物、其可溶性细胞级分或组分、或ECM或其组分用于多种目的。 如上文所指出的，可将这些组分中的一些用在药物组合物中。另外，可将细胞裂解物或ECM 用于包被或以另外的方式处理待外科手术应用或用于植入或用于先体外后体内目的的物质或设备，以促进在这种治疗过程中接触的细胞或组织的愈合或存活。进一步地，可将UTC用于体外共培养中以对其它细胞，具体而言神经细胞和神经祖先提供营养支持。对于共培养，可需要UTC和需要的其它细胞在其中两种细胞类型接触的条件下共培养。例如，这可以通过将作为异质细胞群的细胞接种在培养基中或接种在合适的培养基质上而实现。可选地，可以首先使UTC生长至汇合，并且然后将其充当用于培养物中的第二所需细胞类型的基质。另外，可对细胞进行进一步物理分离，例如，通过膜或类似设备，以便在共培养时间段后其它细胞类型可被取出并单独应用。UTC在共培养物中促进神经细胞类型扩增和分化的应用可在研究和在临床/治疗领域中具有可用性。例如，可利用UTC共培养来促进神经细胞在培养物中的生长和分化，例如，用于基础研究目的或在药物筛选测定中应用。也可利用UTC共培养进行神经祖先的先体外后体内扩增，用于针对治疗目的的随后施用。例如，可将神经祖细胞从个体收获，在与UTC的共培养物中先体外后体内扩增，然后返回到该个体(自体转移)或另一个体(同系或同种异体转移)中。先体外后体内扩增之后，可将包含UTC和神经祖先的混合细胞群施用给需要治疗的患者。可选地，在其中自体转移是适当的或需要的情况下，可将共培养的细胞群在培养物中物理分离， 从而使得能够移动自体神经祖先用于给患者施用。体内方法
如实施例2-10列出的，UTC已显示出有效移植到体内，并且在对于其在人中的功效的可预测性公认的动物模型中提供丢失的神经功能。一旦移植到体内的靶向的神经位置，UTC 本身就可分化成一种或多种神经表型，或它们可原位提供对神经祖先和神经细胞的营养支持，或它们可以这两种方式施加有益作用，以及其它。可将UTC单独施用(例如，作为基本上同质群)或作为与其它细胞的混合物施用。 如上所述，可将UTC如在与基质或支架或与常规药学上可接受的载体的药物制剂中配制的而施用。在将UTC连同其它细胞施用的情况下，它们可与其它细胞同时或顺序施用(或是在其它细胞之前或是在其它细胞之后)。可与UTC —起施用的细胞包括但不限于神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞、神经祖细胞、神经干细胞和/或其它多能或多潜能干细胞。可在施用前立即或不久将不同类型的细胞与UTC混合，或可在施用前将它们一起共培养一段时间。可将UTC连同其它神经-有益药物或生物分子、或其它活性剂施用，诸如抗炎药、 抗凋亡剂、抗氧化剂、生长因子、神经营养因子或神经再生或神经保护药物，如本领域已知的。当将UTC连同其它试剂施用时，可将它们在单一药物组合物中一起施用，或在分开的药物组合物中与其它试剂同时或顺序施用(在其它试剂施用之前或之后)。可连同UTC施用的其它组分的实例包括但不限于(1)其它神经保护或神经有益药物；O)选择的细胞外基质组分，诸如一种或多种类型的本领域已知的胶原，和/或生长因子，富血小板血浆和药物(可选地，UTC可被基因工程改造以表达和产生生长因子)；(3) 抗凋亡剂(例如，促红细胞生成素(ΕΡ0)、ΕΡ0模拟体、血小板生成素、胰岛素样生长因子 (IGF)-I.IGF- II、肝细胞生长因子、胱天蛋白酶抑制剂)；(4)抗炎化合物(例如，p38 MAP 激酶抑制剂、TGF-β抑制剂、抑制素、IL-6和IL-I抑制剂、吡嘧司特(PEMIR0LAST)、曲尼司特(TRANILAST)、REMICADE、西罗莫司(SIR0LIMUS)和非类固醇消炎药(NSAIDS)(诸如替波沙林(TEP0XALIN)、托美汀(T0LMETIN)和SUPR0FEN) ； (5)免疫抑制或免疫调谐剂，诸如钙依赖磷酸酶抑制剂、mTOR抑制剂、抗增殖剂、皮质类固醇和各种抗体；(6)抗氧化剂诸如丙丁酚、维生素C和E、辅酶Q-10、谷胱苷肽、L-半胱氨酸和N-乙酰基半胱氨酸；和(7)局部麻醉剂，仅举几个例子。例如，可将UTC作为未分化细胞施用，S卩，如在生长培养基中培养的。可选地，可将UTC在在培养物中暴露于刺激向所需神经表型分化的条件之后施用，所述所需神经表型例如星形胶质细胞、少突胶质细胞或神经元，和更具体地，5-羟色胺能、多巴胺能、胆碱能、 Y -氨基丁酸-能或谷氨酸能神经元(参见，例如，Isacson, Q, Lancet Neurology, 2003; 2 (7) 417-424，或支持神经再生或修复的其它谱系。可将UTC外科手术植入、注射、递送(例如，通过导管或注射器的方式)或以其它方式直接或间接地施用到神经学损害或痛苦位点。UTC或其组合物的施用途径包括但不限于，静脉内、肌内、皮下、鼻内、大脑内、心室内、脑室内、鞘内、脑池内、脊柱内和/或脊柱旁施用途径，其通过经颅内或脊椎内针和/或导管带有或不带有泵设备递送实施。当将细胞在半固体或固体设备中施用时，外科手术植入到体内精确位置一般是合适的施用方式。然而，可将液体或流体药物组合物施用到CNS或PNS中的更全面位置(例如，遍及弥散性受侵袭区域，例如，诸如在弥散性缺血损害中的情况)，因为神经祖细胞已显示能够从向神经系统的进入点广泛迁移到具体位置，例如，通过跟随放射状神经胶质细胞或通过响应于化学信号。神经干细胞的该迁移能力已打开了用于恶性脑肿瘤治疗的新途径，S卩，应用祖细胞递送治疗性基因/基因产物用于这些迁移性肿瘤的治疗。例如，已报道，神经干细胞在植入成体啮齿类动物体内颅内神经胶质瘤时自身快速并且广泛地通过肿瘤床分布并与扩增和前进中的肿瘤细胞并列迁移，同时持续稳定地表达外来基因(Aboody，K,等人， Natl. Acad. Sci. USA, 2000 ； 97:12846-12851) 也预期 UTC 适于这种类型的应用， 艮口，可将基因修饰以产生凋亡或其它抗瘤剂，例如IL-12 (Ehtesham, M,等k, Cancer Research, 2002; 62 5657-5663)或肿瘤坏死因子相关凋亡-诱导配体(Ehtesham, M,等 k, Cancer Research, 2002; 62:7170-7174)的UTC注射或以其它方式施用到恶性肿瘤 (例如，成胶质细胞瘤)的全面位点，然后UTC可以迁移到肿瘤细胞用于治疗性试剂的局部递送。通过分化成一种或多种神经表型或通过对神经祖先和神经细胞提供营养支持，UTC也可以促进肿瘤治疗后的神经学修复，如上所述。另外，本发明提供了通过施用包含UTC细胞组分(例如，细胞裂解物或其组分)或产物(例如，UTC天然产生或通过遗传修饰产生的营养和其它生物学因子，来自UTC培养的条件培养基)的药物组合物治疗神经学损伤的方法。再次地，这些方法可进一步包括施用其它活性剂，诸如生长因子、神经营养因子或神经再生或神经保护药物，如本领域已知的。用于施用UTC或本文描述的任何其它药物组合物的剂型和方案依照医学规范 (good medical practice)考虑个别患者的状况开发，例如，神经变性状况的性质和程度、 年龄、性别、体重和一般医学状况、和医学专业人员已知的其它因素。因而，待施用给患者的药物组合物的有效量通过本领域已知的这些考虑确定。由于CNS是有些免疫特权的(immunoprivileged)组织，所以在起始应用UTC的细胞治疗之前可不必需或希望免疫抑制患者。以前已显示，UTC不刺激混合淋巴细胞反应中的同种异体PBMCs。(参见美国专利申请号10/877,269)。因此，用同种异体或甚至异种UTC 移植在一些情况下可耐受。在其它情况下，在起始细胞治疗之前，可希望或适于药学地免疫抑制患者。这可通过使用全身或局部免疫抑制剂完成，或其可通过在被囊化设备中递送细胞完成，如上文所述。用于降低或消除对移植的细胞的免疫应答的这些和其它方式是本领域已知的。作为替代，UTC可被基因修饰以降低它们的免疫原性，如上所述。
移植的UTC在活患者中的存活可以通过使用多种扫描技术测定，例如，计算机控制轴向X线断层摄影术(CAT或CT)扫描、磁共振成像(MRI)或正电子发射横体层摄影术 (PET)扫描。移植物存活的测定也可以在死后通过取出神经组织、并视觉或通过显微镜检测它进行。可选地，细胞可以用特异于神经细胞或其产物如神经递质的染料处理。移植的细胞也可以通过在先掺入示踪染料进行鉴定，诸如罗丹明或荧光素标记的小球体、坚牢蓝、高铁微粒、双苯甲酰胺或遗传引入的报道基因产物诸如半乳糖苷酶或葡糖醛酸糖苷酶。移植的UTC向受试者神经组织中的功能整合可以通过检查损害或患病的神经功能的恢复进行评估。根据神经生物学家和医师公知的程序，这种功能包括但不限于运动、认知、感觉和内分泌功能。可以将神经功能通过UTC的这种恢复用在神经学损伤后改进患者中神经学功能的方法中。另外，可将UTC用在刺激患者中SVZ的再生能力的方法中。例如，SVZ的再生能力可通过显示存在神经发生、血管发生或突触发生方面的增加得到刺激。神经发生方面的增加指示SVZ中的祖细胞在制剂中增殖以取代损伤或损害的神经细胞，并且存在新形成的成神经细胞和其它未成熟的神经元。血管发生方面的增加指示在损伤或损害区域发生新血管形成以对损伤或损害组织或对正在形成以取代损伤或损害组织的组织提供氧供应。突触发生方面的增加指示新突触正在形成，这最有可能是响应于引起已存在的功能突触的数目方面的减少的一些刺激物。UTC引起神经发生、血管发生和突触发生方面增加的能力在实施例 3-10中列出。进一步地，UTC可减少脑的损伤或损害部分中凋亡细胞的数目。凋亡可为外伤性脑损伤后继发性脑损伤的原因，并且高凋亡速度可与外伤性脑损伤后较差的预后相关。(参 Himmhres 等)κ, Journal of Neurotrauma, 2008; 25(6) :581-591).因此，经历损伤或损害的脑区域中凋亡的减少可增加存活、改进神经学功能和从损伤中恢复，并且可充当其它治疗的辅助，诸如刺激损伤后患者中SVZ的再生能力。实施例7和9证明UTC减少脑组织的损害部分中凋亡的能力。另一方面，本发明提供在如上述用于神经再生和修复的各种方法中利用UTC、UTC 群、UTC的组分和产物的试剂盒。在用于神经学损伤的治疗或其它预定治疗的情况下，试剂盒可包含一种或多种细胞群，其包含至少UTC和药学上可接受的载体(液体、半固体或固体)。试剂盒也任选地可包含施用细胞的工具，例如通过注射。试剂盒还可包含细胞的使用说明书。制备用于野战医院应用，诸如用于军事应用的试剂盒可包含全部程序供应，包含组织支架、外科手术缝线等，其中将细胞与急性损伤的修复一起使用。用于如本文描述的测定和体外方法的试剂盒可包含下列中的一种或多种(1) UTC或UTC的组分或产物，(2)用于实践体外方法的试剂，(3)适当地，其它细胞或细胞群，和用于进行体外方法的说明书。提供下列实施例以更详细地描述本发明。它们意图举例说明而不是限制本发明。下列缩写可在实施例以及说明书和权利要求书中的其它处出现 AM72 (或Aj 松)表示促血管生成素2
^ 1表示抗原呈递细胞
厂表示脑衍生神经营养因子bFGF表示碱性成纤维细胞生长因子
bid (BID)表示“bis in die” (每日 2 次)
07S表示细胞角蛋白18
表示中枢神经系统 CXC歡体J表示趋化因子受体配体3 DMEM散示Dulbecco，s极限必需培养基 DMEM:lg、WLDMEM:Lg，DMEMLG)表示带有低葡萄糖的 DMEM 彻7 表示乙二胺四乙酸 EGF (SJcE)表示表皮生长因子 FACS表示荧光激活细胞分选术 / 表示胎牛血清
FGF (或F)表示成纤维细胞生长因子 GCF-J 表示粒细胞趋化蛋白-2
示胶质细胞原纤维酸性蛋白 HB-EGF^mm -结合表皮生长因子 HCAEC表示人冠状动脉内皮细胞
表示肝细胞生长因子 MST表示人间充质干细胞
HNF-I α表示肝细胞-特异性转录因子Ια ；表示人脐静脉内皮细胞
1309表示趋化因子和CCR8受体的配体
IGF-I表示胰岛素样生长因子1
7Ζ-6表示白细胞介素-6 ；TZ-S表示白细胞介素8
Λ7没表示角蛋白19 ；M表示角蛋白8
於^表示角质形成细胞生长因子
ZTF表示白血病抑制因子
MP表示髓鞘碱性蛋白
iCF-7表示单核细胞趋化蛋白1
表示巨噬细胞-来源的趋化因子 MIPla表示巨噬细胞炎性蛋白1 α MIPn表示巨噬细胞炎性蛋白1 β 表示基质金属蛋白酶(MMP) 表示间充质干细胞 NHDF表示正常人皮肤成纤维细胞 NPE表示神经祖先扩增培养基 04表示少突胶质细胞或神经胶质细胞分化标记04 /^JC表示外周血单核细胞 / 表示磷酸缓冲盐水 PDGFbb表示血小板/WS表示外周神经系统
Rantes ( iRANTES)表示调节活化、正常T细胞表达和分泌
表示重组人生长和分化因子5 SC表示皮下地
SDF-I α表示基质衍生因子1 α
表不 sonic hedgehog 5KF表示标准操作程序 7 ^表示胸腺和活化-调节的趋化因子
表示组织培养塑料 TCPS表示组织培养聚苯乙烯 TiFAJ 表示转化生长因子β 2 TiFA-J表示转化生长因子β-3 TIMPl表示组织基质金属蛋白酶抑制剂1 TPO表示血小板生成素 71/刀表示BIII微管蛋白防表示血管内皮生长因子 rfF 表不 von Willebrand 因子 σ所表示甲胎蛋白。另外，如下列实施例和说明书中其它处所用的，可根据美国专利申请号 10/877，269的公开内容对本发明方法中有用的UTC进行分离和表征，所述申请在其涉及 UTC的描述、分离和表征的情况下整体引入作为参考。实施例1 细胞的长期神经分化
对脐-来源的细胞经历向神经谱系细胞长期分化的能力进行了评价。如实施例13-15 中描述地对UTC进行分离和扩增。将先前在生长培养基中生长的UTC(脐(02280 Pll ； (042203)P11 ； (071003) P12)的冷冻等分试样解冻并以5，000细胞/cm2铺平板在T-75瓶中，所述瓶包被以含有B27 (B27补充物，InVitr0gen)、L-谷氨酰胺G mM)和青霉素/链霉素(10毫升)的神经基础-A 培养基 Gnvitrogen, Carlsbad, Ca.)中的层粘连蛋白(BD, Franklin Lakes, N.J·)，其组合在本文中称为神经祖先扩增(NPE)培养基。将NPE培养基进一步补充以bFGF QO ng/ ml, Peprotech, Rocky Hill, N. J.)禾口 EGF (20 ng/ml, Peprotech, Rocky Hill, N. J.)， 其在本文中称为NPE + bFGF + EGF。另外，将成体人皮肤成纤维细胞(Pll，Cambrex, ffalkersville, MD)和间充质干细胞(P5，Cambrex)解冻并以相同细胞接种密度在层粘连蛋白-包被的T-75瓶中铺平板在NPE + bFGF + EGF中。作为进一步的对照，将成纤维细胞、脐和胎盘-来源的细胞生长在生长培养基中，对所有培养物进行指定的时间段。每周1次将来自所有培养物的培养基替换以新鲜培养基，并观察细胞扩增。一般地，每一培养物在1个月时间段内传代1次，这是因为在NPE + bFGF + EGF中的有限生长。1个月时间段后，于室温将所有瓶用冷4% (w/v)低聚甲醛(Sigma)固定10分钟。应用针对iTuJl (Bill微管蛋白；1:500; Sigma, St. Louis, Mo.)和GFAP(胶质细胞原纤维酸性蛋白；1:2000; DakoCytomation, Carpinteria, Ca.)的抗体进行免疫细胞化学。简言之，将培养物用磷酸缓冲盐水(PBS)洗涤并将其暴露于含PBS、4% (ν/ν)山羊血清(Chemicon, Temecula, Ca.)和 0. 3% (v/v) Triton (Triton X-IOO ； Sigma)的蛋白封闭溶液中进行30分钟以接近细胞内抗原。然后将在封闭溶液中稀释的第一抗体应用到培养物中，在室温进行1小时时间段。然后，除去第一抗体溶液，并在应用含有连同山羊抗-小鼠 IgG - Texas Red (1 250,Molecular Probes,Eugene,OR)禾口山羊抗-兔 IgG - Alexa 488 (1:250,Molecular Probes) 一起的封闭的第二抗体溶液(在室温1小时)之前，将培养物用PBS洗涤。然后洗涤培养物，并应用10微摩尔DAPI (Molecular Probes)进行10 分钟以使细胞核可见。在免疫染色后，使用适当的荧光滤光片在Olympus倒置表面荧光显微镜 (Olympus, Melville, N. Y.)上显现荧光。在所有情况下，阳性染色代表高于对照染色的荧光信号，在对照染色中遵循上文概述的整个程序，除了应用第一抗体溶液外。代表性图像是使用数字彩色摄影机和ImagePro软件(Media Cybernetics, Carlsbad, Ca.)捕获的。对三重染色的样品而言，每一张图像均是使用一次仅一个发射滤光片采集的。然后使用Adobe Photoshop软件(Adobe, San Jose, Ca.)制备分层的蒙太奇。表1-1. 应用的第一抗体的概述
权利要求
1.治疗患有神经学损伤的患者的方法，包括以有效治疗所述神经学损伤的量给所述患者施用分离的脐带组织-来源的细胞，其中所述脐带组织-来源的细胞来源于基本上不含血液的人脐带组织，其中所述细胞能够在培养中自我更新和扩增，并具有分化成至少神经表型的细胞的潜能；并且其中所述细胞不表达CD117。
2.权利要求1的方法，其中所述神经学损伤是脑缺血、急性缺血后再灌注、围产期缺氧-缺血性损伤、心跳停止、颅内出血、颅内损害、颈椎挫伤或惊吓婴儿综合征。
3.权利要求1的方法，其中将所述细胞基因工程改造以产生促进所述神经学损伤治疗的基因产物。
4.权利要求1的方法，其中将所述细胞连同至少一种其它细胞类型施用。
5.权利要求4的方法，其中所述其它细胞类型是星形胶质细胞、少突胶质细胞、神经元、神经祖先、神经干细胞或其它多能或多潜能干细胞。
6.权利要求1的方法，其中将所述细胞在所述患者中枢或外周神经系统中的预定位点施用。
7.权利要求1的方法，其中所述脐带组织-来源的细胞不表达hTERT或端粒酶。
8.权利要求1的方法，其中将所述细胞通过注射或输注施用。
9.刺激患者室下区(SVZ)的再生能力的方法，包括以有效增加神经发生、血管发生或突触发生的量给所述患者施用分离的脐带组织-来源的细胞，其中所述脐带组织-来源的细胞来源于基本上不含血液的人脐带组织，其中所述细胞能够在培养中自我更新和扩增， 并具有分化成至少神经表型的细胞的潜能；并且其中所述细胞不表达CD117。
10.权利要求9的方法，其中将所述细胞基因工程改造以产生促进所述室下区的再生能力的基因产物。
11.权利要求9的方法，其中将所述细胞连同至少一种其它细胞类型施用。
12.权利要求11的方法，其中所述其它细胞类型是星形胶质细胞、少突胶质细胞、神经元、神经祖先、神经干细胞或其它多能或多潜能干细胞。
13.权利要求9的方法，其中将所述细胞在所述患者中枢或外周神经系统中的预定位点施用。
14.权利要求9的方法，其中将所述细胞通过注射或输注施用。
15.权利要求1的方法，其中所述细胞需要L-缬氨酸用于生长并且可以在至少约5% 氧中生长。
16.权利要求1的方法，其中所述细胞表达⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、PDGFr-a和 HLA-A、B、C中的一种或多种。
17.权利要求1的方法，其中所述细胞表达⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、PDGFr-a和 HLA-A、B、C中的每一种。
18.权利要求1的方法，其中所述细胞不表达⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和HLA-DR、DP、 DQ中的一种或多种。
19.权利要求1的方法，其中所述细胞不表达⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和HLA-DR、DP、 DQ中的任一种。
20.权利要求9的方法，其中所述细胞需要L-缬氨酸用于生长并且可以在至少约5% 氧中生长。
21.权利要求1的方法，其中所述细胞表达⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、PDGFr-a和 HLA-A、B、C中的一种或多种。
22.权利要求1的方法，其中所述细胞表达⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、PDGFr-a和 HLA-A、B、C中的每一种。
23.权利要求1的方法，其中所述细胞不表达⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和HLA-DR、DP、 DQ中的一种或多种。
24.权利要求1的方法，其中所述细胞不表达⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和HLA-DR、DP、 DQ中的任一种。
25.用于治疗患有神经学损伤的患者的药物组合物，包含药学上可接受的载体和有效治疗所述神经学损伤的量的分离的脐带组织-来源的细胞，其中所述脐带组织-来源的细胞来源于基本上不含血液的人脐带组织，其中所述细胞能够在培养中自我更新和扩增，并具有分化成至少神经表型的细胞的潜能；并且其中所述细胞不表达CD117。
26.权利要求25的药物组合物，其中所述细胞表达CD10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、 PDGFr- α禾口 HLA-A、B、C中的一种或多种。
27.权利要求25的药物组合物，其中所述细胞表达CD10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、 PDGFr- α 禾口 HLA-A、B、C 中的每一种。
28.权利要求25的药物组合物，其中所述细胞不表达⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和 HLA-DR、DP、DQ中的一种或多种。
29.权利要求25的药物组合物，其中所述细胞不表达⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和 HLA-DR、DP、DQ 中的任一种。
30.用于治疗患有神经学损伤的患者的试剂盒，所述试剂盒包含药学上可接受的载体、 分离的脐带组织-来源的细胞的群和在治疗所述患者的方法中应用所述试剂盒的说明书， 其中所述脐带组织-来源的细胞来源于基本上不含血液的人脐带组织，其中所述细胞能够在培养中自我更新和扩增，并具有分化成至少神经表型的细胞的潜能；并且其中所述细胞不表达CD117。
31.权利要求30的试剂盒，其还包含至少一种其它细胞类型的群。
32.权利要求30的试剂盒，其中所述细胞表达⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、PDGFr-a 和HLA-A、B、C中的一种或多种。
33.权利要求30的试剂盒，其中所述细胞表达⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、PDGFr-a 和HLA-A、B、C中的每一种。
34.权利要求30的试剂盒，其中所述不表达CD31、CD;34、CD45、CD141和HLA_DR、DP、DQ 中的一种或多种。
35.权利要求30的试剂盒，其中所述细胞不表达⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和HLA-DR、 DP、DQ中的任一种。
全文摘要
公开了用于在损伤后再生或修复神经组织、减少凋亡和改进神经学功能的方法、药物组合物和试剂盒。
文档编号A61P25/00GK102458425SQ200980157008
公开日2012年5月16日 申请日期2009年12月19日 优先权日2008年12月19日
发明者戈谢夫斯卡 A., 赛达 A. 申请人:伊西康公司