专利名称：虎皮兰皂苷及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种植物活性成份的提取，具体地说是虎皮兰皂苷及其制备方法和应 用
背景技术：
虎皮兰(Sansevieria trifasciata)又名虎尾兰、千岁兰，为龙舌兰科、虎尾兰属的多年生肉质草本植物。原产于非洲、印度，属于沙漠植物，能忍耐恶劣的环境条件，对环境 的适应性强，易繁殖、生长快，喜温暖气候，不耐寒，生长的适宜温度为20-30°C，当温度低于 13°C时会停止生长，越冬的气温不能低于8°C。虎皮兰具有匍匐生长的根状茎，叶片直接从 根茎上长出，叶片坚挺直立。目前，很多报道中指出，虎皮兰具有净化室内空气的作用。它能够在吸收二氧化碳 的同时释放出氧气，使室内空气中的负离子浓度增加。据报道，在15平方米的室内，摆放 2-3盆虎皮兰，就能够吸收室内80%以上的有害气体。它还有很强的吸收甲醛的能力，因此 被人们称为“天然的清道夫”。虎皮兰还具有清热解毒、行气活血、舒筋活络等作用，对心血管、胃溃疡、动脉硬化 等疾病有治疗功效。虎皮兰还具有消炎、清热解毒的作用，此外，还能降脂减肥降压。不但 不损伤元气，反而可以补充营养，增加人体精力等功效。皂苷(Saponins)是存在于植物界的一类结构比较复杂的苷类化合物，其苷元大 多属于具有螺留烷及其生源相似的留族化合物或三萜类化合物。大多数皂苷水溶液振摇后 可产生持久性的泡沫，故称皂苷。到目前为止，世界上发现的皂苷类化合物主要分布在15 个科的植物中，其中单子叶植物所占的数量较多，有9个科41个属，主要集中在薯蓣科、龙 舌兰科、百合科等科目中。一些常用的中药如人参、柴胡、三七、酸枣仁、绞股蓝等都含有大 量的留体皂苷。我国的皂苷资源丰富，其中以五加科植物中皂苷的报道较多、较系统，应用 也比较广泛，如人参、西洋参等。此外，近年来对薯蓣科、绞股蓝科、百合科中皂苷的研究报 道也日渐增多。皂苷是由皂苷元(Sapogenins)和糖、糖醛酸、还有可能是和其他的有机酸组成 的。组成皂苷的常见的糖有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木质糖以及其他的戊糖类。 常见的糖醛酸有半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸等。这些糖苷糖醛酸是先结合成糖链(寡糖)的 形式，再和皂苷元相连，少数情况是以单糖的形式和皂苷元相连。皂苷种类繁杂，按照皂苷元的化学结构不同，可以将皂苷分为三萜皂苷 (TriterpenoidSaponins)和留体皂苷(Steroid Saponins)。迄今为止，从植物中就分离出 了 400多种留体皂苷。但是单一成分皂苷直接应用于临床的药物还没有，而且随植物品种 不同，功效也不尽相同。取自龙血树的螺旋固醇烷皂苷和取自海星的紫菀皂苷具有抗革兰阳性菌作用。取自甘草的甘草酸单钾盐(一种香树脂素皂苷)体外浓度在5ymol/L时可灭活 麻疹病毒和疱疹病毒。柴胡皂苷(一种β香树脂皂苷)能抑制多种DNA和RNA病毒，能不可逆地灭活单纯疱疹病毒,对人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)也 有抑制作用。 从坡柳(无患子科)得到的Dodonoside A能减少小鼠爪角菜胶致水肿33%，而从 茜草科得到的Crossop tine B在减少小鼠爪角菜胶致水肿方面的作用强于阿斯匹林和七 叶皂苷。从皂树(蔷薇科)中得到的皂苷已在世界范围被研究多年，并将其作为免疫辅助 剂上市。强心苷(洋地黄苷)是一类对心脏有独特作用的重要化合物，它们在许多医药 书籍中都有记载。目前，单一成分的留体皂苷直接应用于临床的药物还没有，但总的甾体 皂苷作为治疗心脑血管系统疾病的药物在临床应用较多，而且疗效显著。比如由黄山药 (Dioscoreapanthaica)中提取出的含8种留体皂苷的纯中药制剂——地奥心血康胶囊， 由蒺藜(Tribulusterrestris)果实总留体皂苷所研制的制剂——心脑舒通。由盾叶薯蓣 (Dioscoreazingiberensis)根茎水溶性皂苷研制的制剂——盾叶冠心宁及临床上应用的 主要成分为留体皂苷的麦冬汤剂等。这些药物在治疗冠心病、心绞痛、心肌缺血、脑动脉硬 化症和脑血栓形成的后遗症、慢性肺原性心脏病等方面，临床效果十分显著。Chlorophytum malayense对肿瘤有潜在的细胞毒性；Solanum nigrum在中国和日 本都用于对各种癌症的治疗；虎眼万年青也在民间用于抗肿瘤的治疗。
发明内容
本发明目的是提供虎皮兰皂苷，它是将虎皮兰制成干粉，经皂苷提取液提取，石油 醚或乙醚萃取，再经正丁醇或戊醇萃取制得；所述的皂苷提取液为水、乙醇或甲醇；本发明又一个目的是，提供一种虎皮兰皂苷的制备方法1)虎皮兰干粉，用70%乙醇浸泡24h，2)将超声波发生器调至温度40°C，固液比为1 15，进行超声波浸提50min ；3)蒸发至无乙醇，用石油醚萃取3次，弃醚层。4)再用饱和正丁醇萃取3次，蒸发挥干，得总皂苷粗品浸膏。本发明虎皮兰皂苷的制备方法又一种技术方案是1)、取虎皮兰干粉，用90%乙醇浸泡过夜后；2)、在常恒温水浴锅中，加热至75°C，固液比例为1 12，回流提取4次，每次4h ；3)、合并提取液，过滤，蒸发浓缩至无乙醇；4)、将浓缩后的提取液用石油醚萃取3次，弃醚层；5)、再用饱和正丁醇萃取3次，回收正丁醇层后，蒸发挥干，既得虎皮兰总皂苷浸 膏；步骤1)所述的虎皮兰干粉，经过反复冻融后，再用酒精浸泡。本发明又一个目的是虎皮兰皂苷在制备治疗白血病药物的应用。本发明虎皮兰皂苷是将虎皮兰制成干粉，经皂苷提取液提取，石油醚或乙醚萃取， 再经正丁醇或戊醇萃取制得的虎皮兰总皂苷浸膏；本发明一种虎皮兰皂苷的制备方法，优 化了工艺条件，操作简单，费用低，工艺设备要求不高，可以减少溶剂的消耗，提高浸出效 率。灭菌后的虎皮兰皂苷，对人白血病细胞系JurKet的生长有明显的抑制作用，对人宫颈癌细胞系HeLa、人胃癌细胞系BGC823、中国仓鼠卵巢细胞CHO无伤害，细胞生长正常没有明 显的变化。
图1为本发明虎皮兰皂苷在紫外分光光度计下扫描图谱。图2为本发明虎皮兰皂苷细胞毒性试验结果，左人白血病细胞系JurKet加样组；右人白血病细胞系JurKet对照组。
具体实施例方式实施例11)取干燥的虎皮兰样品粉末10g，以70%乙醇为提取剂浸泡24h，2)用KQ-3200E超声波发生器(昆山市超声波仪器有限公司)，调至温度40°C，固 液比为1 15的条件下，进行超声波浸提50min;3)经用RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)将提取剂挥发至无醇味，将所 剩溶液用石油醚萃取3次，弃醚层。4)再用饱和正丁醇萃取3次，然后将正丁醇层用旋转蒸发仪将正丁醇挥干，得总 皂苷粗品浸膏。实施例21)、取干燥的虎皮兰粉末，用90%乙醇浸泡过夜后；2)、在常州市华普达教学仪器有限公司生产的HH-S6型数显恒温水浴锅中，加热 至75°C，固液比例为1 12，回流提取4次，每次4h;3)、合并提取液，过滤，用RE-52A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)蒸发浓缩至 无醇味。4)、将浓缩后的提取液用石油醚萃取3次，弃醚层；5)、再用饱和正丁醇萃取3次，回收正丁醇层后用旋转蒸发器浓缩至干，既得虎皮 兰总皂苷浸膏。实施例31)取干燥的虎皮兰粉末，按1 2加水，反复冻融3次，干燥；2)用90 %乙醇浸泡过夜；3)在常州市华普达教学仪器有限公司生产的HH-S6型数显恒温水浴锅中，加热至 75°C，固液比例为1 12，回流提取4次，每次4h;4)合并提取液，过滤，用RE-52A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)蒸发浓缩至 无醇味。5)将浓缩后的提取液用石油醚萃取3次，弃醚层；6)再用饱和正丁醇萃取3次，回收正丁醇层后用旋转蒸发器浓缩至干，既得虎皮 兰总皂苷浸膏。实施例4将虎皮兰总皂苷浸膏，用甲醇稀释；将稀释后的溶液用紫外可见分光光度计 (DU-7500紫外分光光度计，美国贝克曼公司生产)扫描，扫描的波长在200-800nm范围内，观察其吸收光谱特征。虎皮兰皂苷粗品的甲醇稀释液在325nm处有最大的吸收峰值，见图 2。实施例5
将人宫颈癌细胞系HeLa、人白血病细胞系JurKet、人胃癌细胞系BGC823、中国仓 鼠卵巢细胞CH0，用含10%犊牛血清、1 %双抗的RPMI-1640培养基，在37°C、5% CO2的恒温 环境条件下传代培养；取对数生长期的细胞，经0. 5%。胰蛋白酶液消化，吹打分散成单细胞悬液，以每孔 50 μ 1的量加入到96孔细胞培养板中，调节细胞数至2X IO4个/孔，放入37°C 5% CO2培 养箱中2h使之贴壁。将虎皮兰总皂苷浸膏用水溶解，使原溶液浓度为2mg/ml，经过滤除菌，分别加入不 同细胞孔中，第一孔加10 μ g/ml (平行3孔)，以下各孔依次加入20 μ g/ml (平行3孔)，然 后添加不同量的培养基，使之总体积为100 μ L，每个梯度设三个平行孔；实验设空白对照 (加等体积的空菌蛋白和培养基)。37°C,5% CO2条件下培养48h，取出放于倒置显微镜下 观察结果。结果发现，虎皮兰总皂苷对人白血病细胞系JurKet的生长有明显的抑制作用。随 着虎皮兰总皂苷浓度的增加，细胞的死亡数目也逐渐增多，实验组细胞大部分变圆、色暗、 折光性差、甚至裂解死亡；对人宫颈癌细胞系HeLa、人胃癌细胞系BGC823无杀伤效果，对正 常的中国仓鼠卵巢细胞CHO无伤害，细胞生长正常没有明显的变化。见图2。虎皮兰总皂苷对各细胞系作用结果
HeLaJKBGC823CHO
20μ1-+--
10μ1-+--
空白___—注“ + ”表示效果显著，“士 ”表示效果不明显，“_”表示无效。
权利要求
虎皮兰皂苷，其特征在于它是虎皮兰经皂苷提取液提取，石油醚或乙醚萃取，再经正丁醇或戊醇萃取制得；所述的皂苷提取液为水、乙醇或甲醇。
2. 一种虎皮兰皂苷的制备方法1)虎皮兰干粉，用70%乙醇浸泡24h，2)将超声波发生器调至温度40°C，固液比为1 15，进行超声波浸提50min;3)蒸发至无乙醇，用石油醚萃取3次，弃醚层。4)再用饱和正丁醇萃取3次，蒸发挥干，得总皂苷浸膏。
3.一种虎皮兰皂苷的制备方法1)取虎皮兰干粉，用90%乙醇浸泡过夜后；2)在常恒温水浴锅中，加热至75°C，固液比例为1 12，回流提取4次，每次4h ；3)合并提取液，过滤，蒸发浓缩至无乙醇；4)将浓缩后的提取液用石油醚萃取3次，弃醚层；5)再用饱和正丁醇萃取3次，回收正丁醇层后，蒸发挥干，既得虎皮兰总皂苷浸膏。
4.根据权利要求3所述的虎皮兰皂苷的制备方法，其特征在于步骤1)所述的虎皮兰 干粉，经过反复冻融后，再用乙醇浸泡。
5.虎皮兰皂苷在制备治疗白血病药物的应用。
全文摘要
本发明公开了虎皮兰皂苷及其制备方法和应用，虎皮兰皂苷是将虎皮兰制成干粉，经水、乙醇或甲醇提取，石油醚或乙醚萃取，再经正丁醇或戊醇萃取制得的虎皮兰总皂苷浸膏；本发明一种虎皮兰皂苷的制备方法，优化了工艺条件，操作简单，费用低，工艺设备要求不高，可以减少溶剂的消耗，提高浸出效率。灭菌后的虎皮兰皂苷，对人白血病细胞系JurKet的生长有明显的抑制作用，对人宫颈癌细胞系HeLa、人胃癌细胞系BGC823无活性杀伤效果，对正常的中国仓鼠卵巢细胞CHO无伤害，细胞生长正常没有明显的变化。
文档编号A61P35/02GK101804132SQ20101015078
公开日2010年8月18日 申请日期2010年4月20日 优先权日2010年4月20日
发明者刘文涛, 刘洪章, 康立娟, 张国利, 张璐, 张继元, 李振华, 李昌浩, 李泽鸿, 樊敏 申请人:吉林农业大学