专利名称：兽用增效恩诺沙星注射液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及兽用药领域，特别涉及一种兽用增效恩诺沙星注射液，还涉及该注射液的制备方法。
背景技术：
恩诺沙星为动物专用的第三代氟喹诺酮类药物，对多种细菌引起的感染有显著疗效，适用于牛、猪、禽、犬、猫和水生动物的敏感细菌及支原体所致的消化系统、呼吸系统、泌尿系统及皮肤软组织的各种感染性疾病，主要用于巴氏杆菌、嗜血杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌、支原体等所引起的感染。
随着近年来人们生活水平的提高，对肉食品的需求加大，规模化养殖场逐年增多，但很多养殖场的养殖环境并不理想，养殖技术和疾病防治技术也欠佳，滥用、乱用抗菌药的现象非常普遍，导致恩诺沙星出现耐药性，临床使用剂量越来越大，恩诺沙星注射液的浓度也由最初的0.5％(g/mL)逐步发展到目前的10％(g/mL)。由于恩诺沙星在水中极微溶解，在氢氧化钠试液中易溶，因此，现有技术中在制备恩诺沙星注射液时主要采用加入助溶剂氢氧化钠的方法增加恩诺沙星在水中的溶解度，同时考虑到产品的稳定性和恩诺沙星产生杀菌作用的最佳条件，控制注射液的pH值为9.5～10.5(农业部部颁标准1996年第一册)。但生产实践中发现，该方法在制备高浓度即5％～10％(g/mL)的恩诺沙星注射液时存在制备难度大、产品稳定性和抗冻性差等问题随着恩诺沙星浓度增大，使其完全溶解于水中所需的氢氧化钠量也增大，此时要将注射液的pH值控制在9.5～10.5非常困难，几乎不能做到；即使提高注射液pH值至11.5，产品也极不稳定，0℃冷藏1～2小时即析出结晶，且该结晶当温度升高时不能复溶，在北方冬季寒冷条件下使用极其不便。此外，单方恩诺沙星注射液在治疗畜禽细菌、病毒及支原体严重混合感染时，还存在抗病毒效果不理想等问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种兽用增效恩诺沙星注射液，不仅可以解决高浓度恩诺沙星注射液制备难度大、产品稳定性和抗冻性差的难题，而且可以大大增强其抗菌和抗病毒效果，有效减少耐药性的产生；目的之二在于提供一种所述兽用增效恩诺沙星注射液的制备方法，操作简便，成本低，适于工业化大规模生产。
为达到上述目的，本发明采用如下技术方案 1、兽用增效恩诺沙星注射液，每100mL注射液由以下组分组成恩诺沙星5～10g、水杨酸钠10～12g、板蓝根20～40g的水提物、甲氧苄啶1～2g、聚乙二醇400 20～40g、氢氧化钠0.1～1g、余量为注射用水；其中，恩诺沙星与甲氧苄啶的质量比为5∶1，甲氧苄啶与聚乙二醇400的质量比为1∶20。
进一步，所述注射液的pH值为9.5～11.5； 进一步，所述注射液的pH值为10.5～11.5。
2、所述兽用增效恩诺沙星注射液的制备方法，包括以下步骤 a、将水杨酸钠溶于部分注射用水中，再加入恩诺沙星，搅拌使完全溶解，得溶液A； b、将板蓝根粉碎过四号筛，加水煎煮3次，合并煎煮液，滤过，向滤液中加入质量体积分数为0.5％的壳聚糖，搅匀后静置过夜，再用200目尼龙网滤过，滤液浓缩至20～40mL，得溶液B； c、在聚乙二醇400中加入甲氧苄啶，加热搅拌使完全溶解，冷却至室温，得溶液C； d、将步骤a所得溶液A和步骤b所得溶液B混匀后加至步骤c所得溶液C中，用氢氧化钠水溶液调节pH值为9.5～11.5，再添加注射用水至100mL，混匀，滤过，灌封，灭菌，即得兽用增效恩诺沙星注射液。
本发明注射液采用水杨酸钠为恩诺沙星的助溶剂。与氢氧化钠相比，水杨酸钠具有助溶效果好，碱度稳定易控等优点，可以方便地将注射液的pH值控制在9.5～11.5之间，同时保证产品的稳定性。此外，水杨酸钠还具有一定的解热镇痛作用。
本发明注射液将板蓝根水提物与恩诺沙星配伍。板蓝根为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根，具有清热解毒、凉血利咽的功效，为我国使用历史悠久的传统中药，目前在临床上常用于病毒性疾病及细菌感染性疾病，尤其在抗病毒方面疗效确切。有关板蓝根抗病毒化学成分的研究较少。综合现有的研究成果表明，与板蓝根抗病毒作用相关的成分主要集中在大极性部位，这与板蓝根临床应用以水提物为主相符。日本学者认为板蓝根抗病毒成分为糖蛋白和多糖，且分离出单一分子量的抗病毒多糖，其研究结果还表明，板蓝根多糖除有直接抗病毒作用外，还可促进抗流感病毒IgG抗体的生成，可作为抗病毒疫苗的佐剂。我国学者也研究发现，板蓝根的抗病毒成分为其水提液中的凝集素成分，也有实验结果证实有效部位为结合氨基酸。板蓝根生物碱成分中的4(3H)-喹唑酮经药理实验证明具有抑制流感病毒、柯萨奇病毒的活性，还可显著促进脾细胞增殖及刀豆蛋白诱导的淋巴细胞增殖。此外，研究报道，板蓝根水浸液对枯草杆菌、金黄色葡萄球菌，八联球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、副伤寒甲杆菌、痢疾杆菌、肠炎杆菌等都有抑制作用。
本发明注射液中还加入了甲氧苄啶和聚乙二醇400。甲氧苄啶是二氢叶酸还原酶抑制剂，因干扰叶酸代谢而抗菌，但其单独应用对细菌作用弱，易产生耐药性，临床上多与其它药物联合应用，以增强抗菌强度，延缓耐药性产生，有抗菌增效剂之称。恩诺沙星是通过抑制细菌DNA螺旋酶和拓扑异构酶IV的活性阻断细菌DNA复制来发挥抗菌效力。甲氧苄啶和恩诺沙星合用，可同时阻断细菌生长繁殖所必需的核酸和蛋白质合成过程，使各自单一的抑菌效果转变为共同的杀菌作用，从而大幅度提高抗菌效果，并有效减少抗药菌株的出现。因甲氧苄啶水溶性差，本发明注射液采用聚乙二醇400作为甲氧苄啶的溶剂。文献报道，聚乙二醇400能与水任意混合，理化性质稳定，可作注射用溶剂；此外，当溶液中含有20％(g/mL)以上的聚乙二醇400时，可使溶液的凝固点下降，从而能够使本发明的注射液具有良好的抗冻性。
研究结果表明，当本发明注射液的pH值为10.5～11.5时，在冷藏或冷冻条件下的稳定性良好，且抗菌和抗病毒效果佳，因此，结合现有技术，本发明注射液的pH值控制在9.5～11.5之间，优选10.5～11.5。
本发明的有益效果在于本发明注射液将恩诺沙星和具有抗病毒作用的板蓝根水提物配伍，并加入抗菌增效剂甲氧苄啶，同时采用水杨酸钠作为恩诺沙星的助溶剂，聚乙二醇400作为甲氧苄啶的溶剂，不仅可以解决高浓度恩诺沙星注射液制备难度大、产品稳定性和抗冻性差的难题，而且可以大大增强其抗菌和抗病毒效果，有效减少耐药性的产生，特别适用于畜禽细菌、病毒及支原体严重混合感染，具有广谱、高效、疗程短、标本兼治等特点。同时，本发明注射液的制备方法简单，成本低，适于工业化大规模生产。
附图为兽用增效恩诺沙星注射液的药敏试验结果，其中，“K88-A”为对照组，“K88-B”为实验组，“1”表示原浓度药液，“10”表示10倍稀释药液，“100”表示为100倍稀释药液。
具体实施例方式 为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例中使用的恩诺沙星(批号080107-1，以干燥品计含量为99.6％)购自浙江国邦药业有限公司，水杨酸钠(以干燥品计含量为99.5％)购自武汉银河化工有限公司，聚乙二醇400(化学纯)购自武汉鑫恒隆工贸有限责任公司，板蓝根购自重庆市北碚区中医院。
实施例1、5％(g/mL)兽用增效恩诺沙星注射液 配方恩诺沙星5.0g、水杨酸钠10.0g、板蓝根20.0g，甲氧苄啶1.0g，聚乙二醇40020.0g，氢氧化钠0.1～0.5g，注射用水加至100mL； 制法包括以下步骤 a、将水杨酸钠溶于注射用水40mL中，再加入恩诺沙星，搅拌使完全溶解，得溶液A； b、将板蓝根粉碎过四号筛，加水煎煮3次，每次加入1倍量的水煎煮1小时，合并三次煎煮液，滤过，向滤液中加入质量体积分数为0.5％的壳聚糖(强阳离子型天然生物絮凝剂)，搅匀后静置过夜，再用200目尼龙网滤过，除去淀粉、蛋白、鞣质和树脂等杂质，滤液浓缩至30mL，得溶液B； c、在聚乙二醇400中加入甲氧苄啶，加热搅拌使完全溶解，放冷至室温，得溶液C； d、将步骤a所得溶液A和步骤b所得溶液B混匀后加至步骤c所得溶液C中，用氢氧化钠水溶液调节pH值为9.5～11.5，再添加注射用水至100mL，混匀，用孔径为0.45μm的微孔滤膜滤过，灌封，用温度为120℃、压力为0.15MPa的流通蒸气25分钟灭菌，即得。
实施例2、10％(g/mL)兽用增效恩诺沙星注射液 配方恩诺沙星10.0g、水杨酸钠12.0g、板蓝根40.0g，甲氧苄啶2.0g，聚乙二醇400 40.0g，氢氧化钠0.5～1.0g，注射用水加至100mL； 制法与实施例1所述制法相同。
实施例3、10％(g/mL)对照单方恩诺沙星注射液 配方恩诺沙星10.0g，氢氧化钠3.0g，注射用水加至100mL。
制法将氢氧化钠2.0g溶于注射用水40mL中，再加入恩诺沙星，搅拌使完全溶解，用溶有氢氧化钠1.0g的水溶液调节pH值为9.5～11.5，再添加注射用水至100mL，混匀，用孔径为0.45μm的微孔滤膜滤过，灌封，用温度为120℃、压力为0.15MPa的流通蒸气25分钟灭菌，即得。
试验例1、兽用增效恩诺沙星注射液的稳定性试验 方法取实施例1～2的兽用增效恩诺沙星注射液和实施例3的对照单方恩诺沙星注射液，照中国兽药典2005年版一部附录兽药稳定性试验指导原则进行加速试验，按市售包装，在温度为40±2℃、相对湿度为75±5％、照度为4500±500LX的条件下放置6个月，在试验期间第1、2、3、6个月末分别取样一次，对注射液的外观性状、pH值和含量(按标示百分含量计)进行检测。
结果见表1。经过6个月加速试验后，本发明注射液的外观性状、pH值和恩诺沙星含量均无明显变化，而对照单方恩诺沙星注射液出现变色、pH值升高和恩诺沙星含量降低，说明本发明注射液的稳定性好于对照单方恩诺沙星注射液。
表1兽用增效恩诺沙星注射液的稳定性试验结果
试验例2、兽用增效恩诺沙星注射液的抗冻性试验 方法取实施例1～2的兽用增效恩诺沙星注射液和实施例3的对照单方恩诺沙星注射液，按市售包装，分别在0～5℃冷藏和-20±2℃冷冻条件下放置6个月，在试验期间第1、2、3、6个月末分别取样一次，对注射液的外观性状和冷冻后解冻情况(于10±2℃解冻)进行检测。
结果见表2。经过6个月冷藏试验后，本发明注射液的外观性状无明显变化，而对照单方恩诺沙星注射液析出恩诺沙星结晶，且结晶随放置时间延长逐渐增多。经过6个月冷冻试验后，本发明注射液析出少量恩诺沙星结晶，该结晶在10±2℃解冻试验时能够很好的复溶，不影响注射液的使用；而对照单方恩诺沙星注射液出现溶液结冰和恩诺沙星结晶现象，且该结晶在10±2℃解冻试验时不能复溶。上述结果表明本发明注射液的抗冻性好于对照单方恩诺沙星注射液。
表2兽用增效恩诺沙星注射液的抗冻性试验结果
试验例3、兽用增效恩诺沙星注射液的临床试验 方法选取患病动物，随机分为实验组、对照组和空白组，实验组视动物种类及体重给予实施例1或2的兽用增效恩诺沙星注射液，对照组给予实施例3的对照单方恩诺沙星注射液，空白组给予生理盐水；其中，①猪恶性痢疾(由致病性猪痢疾密螺旋体引起)实验组给予实施例1的兽用增效恩诺沙星注射液，给药剂量为每公斤体重10～20mg(以恩诺沙星计)，每日给药2次，连续给药2～3日，给药方式为肌肉注射；②猪混感高热(由猪圆环病毒、蓝耳病毒、流感病毒、链球菌和副嗜血杆菌交叉混合感染引起)实验组给予实施例2的兽用增效恩诺沙星注射液，给药剂量为每公斤体重10～20mg(以恩诺沙星计)，每日给药2次，连续给药2～3日，给药方式为肌肉注射；③奶牛乳房炎(由多种细菌、病毒和支原体混合感染引起)实验组给予实施例2的兽用增效恩诺沙星注射液，给药剂量为每个乳室250mg(以恩诺沙星计)，每日给药1次，连续给药2～3日，给药方式为乳房灌注；④鸡白痢(由鸡白痢沙门氏菌感染引起)实验组将实施例2的兽用增效恩诺沙星注射液按体积比为1∶1000加水稀释后供停水3小时后的病鸡自由饮用，每日给药1～2次，连续给药2～3日；对照组和空白组的给药剂量和给药方式与相应疾病的实验组相同；治疗开始后，每日记录患病动物身体变化情况，治疗2日后统计治疗结果。
结果见表3。本发明注射液对猪恶性痢疾、猪混感高热、奶牛乳房炎和鸡白痢均有良好疗效。
表3兽用增效恩诺沙星注射液的临床试验结果
试验例4、兽用增效恩诺沙星注射液的药敏试验 方法挑取肠毒性大肠杆菌(从养猪场和养鸡场的病猪、病鸡上采集典型病料，经病原分离鉴定而得)培养物，划线接种于麦康凯琼脂平板上，将灭菌的圆形不锈钢小管(内径6nm、外径8nm、高10nm)放置于平板上，轻轻加压，使其与平板接触无空隙，每个平板放置6支小管，分别向小管中滴加原浓度药液(以恩诺沙星计浓度为50mg/mL)、10倍稀释药液和100倍稀释药液，每个浓度药液各加两支小管，注意勿使药液溢出小管，其中实验组所用药液为实施例1的兽用增效恩诺沙星注射液，对照组所用药液为实施例3的对照单方恩诺沙星注射液，最后置37℃培养8～18小时，观察抑菌圈直径大小。
结果见附图，由附图可知，本发明的兽用增效恩诺沙星注射液对肠毒性大肠杆菌有更强的敏感性。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。
权利要求
1.兽用增效恩诺沙星注射液，其特征在于每100mL注射液由以下组分组成恩诺沙星5～10g、水杨酸钠10～12g、板蓝根20～40g的水提物、甲氧苄啶1～2g、聚乙二醇400 20～40g、氢氧化钠0.1～1g、余量为注射用水；其中，恩诺沙星与甲氧苄啶的质量比为5∶1，甲氧苄啶与聚乙二醇400的质量比为1∶20。
2.根据权利要求1所述兽用增效恩诺沙星注射液，其特征在于所述注射液的pH值为9.5～11.5。
3.根据权利要求2所述兽用增效恩诺沙星注射液，其特征在于所述注射液的pH值为10.5～11.5。
4.权利要求1所述兽用增效恩诺沙星注射液的制备方法，其特征在于包括以下步骤
a、将水杨酸钠溶于部分注射用水中，再加入恩诺沙星，搅拌使完全溶解，得溶液A；
b、将板蓝根粉碎过四号筛，加水煎煮3次，合并煎煮液，滤过，向滤液中加入质量体积分数为0.5％的壳聚糖，搅匀后静置过夜，再用200目尼龙网滤过，滤液浓缩至20～40mL，得溶液B；
c、在聚乙二醇400中加入甲氧苄啶，加热搅拌使完全溶解，冷却至室温，得溶液C；
d、将步骤a所得溶液A和步骤b所得溶液B混匀后加至步骤c所得溶液C中，用氢氧化钠水溶液调节pH值为9.5～11.5，再添加注射用水至100mL，混匀，滤过，灌封，灭菌，即得兽用增效恩诺沙星注射液。
全文摘要
本发明涉及兽用药领域，特别涉及一种兽用增效恩诺沙星注射液，每100mL注射液由以下组分组成恩诺沙星5～10g、水杨酸钠10～12g、板蓝根20～40g的水提物、甲氧苄啶1～2g、聚乙二醇400 20～40g、氢氧化钠0.1～1g、余量为注射用水；其中恩诺沙星与甲氧苄啶的质量比为5∶1，甲氧苄啶与聚乙二醇400的质量比为1∶20；该注射液的稳定性和抗冻性好，抗菌和抗病毒效果佳，并能有效减少耐药性的产生，特别适用于畜禽细菌、病毒及支原体严重混合感染；本发明还涉及该注射液的制备方法，具有操作简便、成本低等优点。
文档编号A61K31/496GK101810666SQ20101015463
公开日2010年8月25日 申请日期2010年4月23日 优先权日2010年4月23日
发明者陈力, 肖国君, 杨大成, 徐兴然 申请人:重庆金邦动物药业有限公司