专利名称：尾叶香茶菜总二萜的制备新方法
技术领域：
本发明是提供一种从唇形科(Labiatae.)植物尾叶香茶菜[Isodon excia(Maxin.)Hara]的全草或其它香茶菜属植物中制备总二萜的新方法。属于天然药物技 术领域。
背景技术：
尾叶香茶菜(Rabdosia excisa)系唇形科香茶菜属植物，又名龟叶草、狗日草、野 苏子等，全草入药，性味苦凉，具有清热解毒、健胃活血之功效，主治胃炎、腹胀、经闭、癌症 初期，蛇咬伤等(云南植物志)。在朝鲜多被用来治疗伤风感冒和咽喉肿痛。尾叶香茶菜的 植物资源分布很广，主要分布在东北。近年来研究发现，从香茶菜属植物中提取的二萜类化 合物中具有环外亚甲基环戊酮结构的化合物有抑制肿瘤以及抗癌活性。吉林大学桂明玉等 从尾叶香茶菜中分离得到4个贝壳杉型二萜类新化合物exeisanin H、I、J、K及8个贝壳 杉型二萜类已知化合物。二萜类化合物为香茶菜属植物典型特征性成分，具有抗肿瘤、抗菌 消炎、抗氧化及保护心血管等作用。现在有报道的提取尾叶香茶菜中成分的方法主要有公开号为CN101306987与 CN101274883的专利，利用70%的乙醇提取，石油醚脱脂，用D101型大孔吸附树脂和JTY-1 反相树脂柱分离，再进行硅胶柱层析，分别得到单一成分Kamebanin与萼西香茶菜甲素；一 种香茶菜的有效组分及其制备方法与用途(专利公开号CN101347501)，是用乙酸乙酯和 乙醇混合物作为溶剂对香茶菜进行提取，提取液经过色谱柱层析得洗脱液，用制备液相色 谱梯度洗脱得到的洗脱液，流动相为水和乙腈，收集洗脱液得到有效组分。此提取方法复 杂，所用的提取溶剂多数属于易燃、易爆危险品，且生产周期较长，成本也较高，对环境也造 成污染，不适合大批量生产；专利公开了一种狭基线纹香茶菜提取物及其制备方法和应用 (专利公开号CN1931230)，将狭基线纹香茶菜粉末，用水在10 60兆帕压力差的条件下 提取，浓缩，得到狭基线纹香茶菜提取物，是一种混合物，没有明确具体的成分；桂明玉公开 了一种新的天然药物有效部位-尾叶香茶菜总二萜(专利公开号CN1566061)，利用水提 取，经过大孔树脂、脱色树脂等的总二萜。本发明的特点在于尾叶香茶菜用乙醇或甲醇提取后提取液不浓缩直接上大孔树 脂柱，操作简单，并且解决了浓缩后有效成分部分析出，溶液浑浊不利于上柱的问题。再经 二次大孔树脂柱、用碱性水溶液或碱性醇溶液洗脱纯化，可获高纯度得尾叶香茶菜总二萜 成分；此方法整个生产工艺仅用乙醇，不使用易燃易爆和有毒溶剂，生产工艺简单、生产周 期短，安全、不污染环境，成本低，收率高，尾叶香茶菜总二萜纯度高达80 %以上，特别适合 产业化大量生产。与以往的专利有明显的技术进步和本质的区别。
发明内容
本发明的目的之一提供了一种从尾叶香茶菜及同属植物中提取含量较高的香茶 菜总二萜方法。
本发明的目的之二是提供了一种不使用有机试剂，是合理的使用了大孔树脂，将 提取物直接通过大孔树脂柱，吸附脂溶性杂质，避免使用石油醚等易燃易爆的有机试剂；二 次上柱后用碱性溶液洗脱杂质，除去酸性杂质及部分色素，药液浓缩后，过滤，除去一些水 溶性杂质，从而制备高纯度总二萜的方法，并且具有操作简单、周期短、纯度高的特点，总二 萜的含量可达80%以上。本发明是通过以下方法实施的尾叶香茶菜药材用5-50倍50-95%的乙醇或甲 醇溶液提取一次或多次，过滤，合并提取液，不经过浓缩，直接在大孔树脂柱上吸附纯化，经 过大孔树脂柱纯化后的乙醇或甲醇提取液，浓缩，至无醇味；然后通过已处理好的大孔树脂 柱，先用PH值为7. 5-14的碱水洗脱，再用水洗脱至中性，弃去洗脱液，最后用50-95%的乙 醇或甲醇洗脱，收集洗脱液，加入药液体积0. 2-2%的药用活性炭，搅拌，放置，过滤，回收溶 剂至无醇味，加水至每1ml含lg药材，放置，过滤，干燥，得尾叶香茶菜总二萜。本发明的有益效果在于在制备过程中以水、乙醇、甲醇为溶剂，加入的碱性溶液 均为医用试剂，成本低，污染小，提取工艺简单，生产周期短，收率高达5%以上，总二萜的纯 度可达80%以上。香茶菜总二萜含量利用紫外比色法测定对照品溶液的制备精密称取香茶菜甲素对照品，用乙醇溶解制成0.02mg/ml的 对照品溶液。供试品溶液的制备取组合物20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加乙醇80ml，超声 30min，放置至室温，乙醇定容至刻度，摇勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加乙醇至刻度， 作为供试品溶液。测定法分别取对照品溶液、供试品溶液、空白对照。照分光光度法(《中国药典》 2005年版一部附录V B)，在波长215nm处分别测定吸收度，计算。尾叶香茶菜中含总二萜以香茶菜甲素计不低于80 %。本发明的上述方法可以用于产业化大量制备尾叶香茶菜总二萜，在本发明完成以 前没有关于该工艺的报道。
具体实施例方式实施例1尾叶香茶菜药材lkg，用10倍70%的乙醇提取3次，每次2小时，过滤，合并提取 液，不经过浓缩，直接经过D101大孔树脂柱，用2BV70%乙醇洗脱，收集流出液和洗脱液，浓 缩，至无醇味；然后通过已处理好的D101大孔树脂柱，先用PH值为8-9的碱水洗脱2BV， 再用水洗脱至中性，弃去洗脱液，最后用70 %的乙醇洗脱3BV，收集洗脱液，加入药液体积 0. 5%的药用活性炭，搅拌，放置，过滤，回收溶剂至无醇味，加水至每1ml含lg药材，放置， 过滤，干燥，得尾叶香茶菜总二萜。收率为1. 55%，总二萜含量为86. 5%。实施例2尾叶香茶菜药材lkg，用10倍80%的乙醇提取3次，每次2小时，过滤，合并提取 液，不经过浓缩，直接经过D101大孔树脂柱，用2BV80%乙醇洗脱，收集流出液和洗脱液，浓 缩，至无醇味；然后通过已处理好的D101大孔树脂柱，先用PH值为12的碱水洗脱1. 5BV, 再用水洗脱至中性，弃去洗脱液，最后用60 %的乙醇洗脱4BV，收集洗脱液，加入药液体积0. 3%的药用活性炭，搅拌，放置，过滤，回收溶剂至无醇味，加水至每1ml含lg药材，放置， 过滤，干燥，得尾叶香茶菜总二萜。收率为1.42%，总二萜含量为89.9%。实施例3尾叶香茶菜药材lkg，用10倍60%的乙醇提取3次，每次2小时，过滤，合并提取 液，不经过浓缩，直接经过AB-8大孔树脂柱，用3BV60%乙醇洗脱，收集流出液和洗脱液，浓 缩，至无醇味；然后通过已处理好的AB-8大孔树脂柱，先用PH值为7-8的碱水洗脱2BV， 再用水洗脱至中性，弃去洗脱液，最后用70 %的乙醇洗脱3BV，收集洗脱液，加入药液体积 0. 6 %的药用活性炭，搅拌，放置，过滤，回收溶剂至无醇味，加水至每1ml含lg药材，放置， 过滤，干燥，得尾叶香茶菜总二萜。收率为1.64%，总二萜含量为83.2%。实施例4尾叶香茶菜药材500g，用8倍70%的甲醇提取2次，每次3小时，过滤，合并提取 液，不经过浓缩，直接经过D201大孔树脂柱，用3BV70%甲醇洗脱，收集流出液和洗脱液，浓 缩，至无醇味；然后通过已处理好的D201大孔树脂柱，先用PH值为9-10的碱水洗脱2BV， 再用水洗脱至中性，弃去洗脱液，最后用70 %的甲醇洗脱3BV，收集洗脱液，加入药液体积 0.6%的药用活性炭，搅拌，放置，过滤，回收溶剂至无醇味，加水至每lml含lg药材，放置， 过滤，干燥，得尾叶香茶菜总二萜。收率为1.64%，总二萜含量为83.2%。
权利要求
一种尾叶香茶菜总二萜的制备方法，其特征为将尾叶香茶菜药材用乙醇、甲醇水溶液提取一次或多次，过滤，合并提取液，不经过浓缩，直接在大孔树脂柱上吸附纯化，经过大孔树脂柱纯化后的乙醇或甲醇提取液，浓缩，至无醇味；然后通过已处理好的大孔树脂柱，先用碱水洗脱，再用水洗脱至中性，弃去洗脱液，最后用乙醇或甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，加入活性炭，搅拌，放置，过滤，回收溶剂，至无醇味，加水至每1ml含1g药材，放置，过滤，干燥，得尾叶香茶菜总二萜。
2.根据权利1所述的方法，其特征在于提取用乙醇或甲醇水溶液为含乙醇或甲醇的浓 度为50% -95%，提取时用量为药材重的5-50倍；提取时间为lh-3h ；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于选用的大孔树脂为D101、AB-8、D201。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于用于洗脱的碱性水溶液可以为碱溶液或碱 性盐溶液其中包括氨水、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸 钠、磷酸氢二钠、醋酸钠、碳酸铵、碳酸氢铵及可以满足PH的有机碱和有机盐。
5.根据权利要求1、4所述的方法，其特征在于用于洗脱的碱性水溶液可为以上一种或 几种，也可是含5-20%乙醇或甲醇的碱性溶液。
6.根据权利要求1所述的用于洗脱的碱性水溶液的PH值为7.5-12。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于用于洗脱的乙醇或甲醇的含醇浓度为 50% -95%。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于加入活性炭为溶液体积的0.1-2%。
全文摘要
本发明公开了一种从唇形科(Labiatae.)植物尾叶香茶菜[Isodon excia(Maxin.)Hara]的全草或香茶菜属其它植物中制备总二萜的新方法。这种制备新方法是尾叶香茶菜药材利用乙醇提取，提取液不回收溶剂，直接通过大孔树脂柱吸附杂质，回收溶剂后，再次经过大孔树脂柱，先用碱水洗脱后，再用乙醇或甲醇洗脱，洗脱液加活性炭脱色，浓缩，干燥得总二萜。本方法具有工艺简单、成本低，无污染，先进、安全、适用的特点。
文档编号A61P39/06GK101940615SQ201010262110
公开日2011年1月12日 申请日期2010年8月25日 优先权日2010年8月25日
发明者南敏伦, 李庆杰, 赫玉芳, 赵全成, 赵雪娇 申请人:吉林天药药物研发有限公司