专利名称：一种miRNA的抗病毒作用、实施方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术和医学领域，具体地说，本发明涉及一种RNA小分子—— miR-155的抗病毒作用、实施方法及用途。
背景技术：
病毒是由一种以核酸(核糖核酸RNA或脱氧核糖核酸DNA)为核心，以蛋白质为外壳(衣壳，capsid)而组成的微小颗粒，其核酸可分为单股或双股、线形或球形。病毒是最小的生物病原体，从20nm到300nm不等其中最大的是痘类病毒，例如痘苗病毒为300nmX200nm，在普通光学显微镜下勉强可见；中等大小的病毒，如流行性感冒病毒，直径为80 IOOnm ；小型病毒，如流行性乙型脑炎病毒，直径仅为20nm，必须在电子显微镜下才能见到基础病毒学，莽克强等著，化学工业出版社，2005年第一版；分子病毒学， 黄文林等著，人民卫生出版社，2001年第一版。随着病毒学和免疫学研究的进展，人们对病毒性疾病(Viral diseases)的认识也逐渐发展。最常用的病毒分类方式是根据核酸的性质(RNA或DNA)来对病毒进行分类，一般将病毒分为DNA病毒和RNA病毒。常见的致病性DNA病毒主要有人乳头状瘤病毒(HPV)、 乙肝病毒(HBV)、非洲淋巴细胞瘤(EB病毒)等，常见的致病性RNA病毒包括流行性出血热病毒、人获得性免疫缺陷病毒(HIV)、严重急性呼吸综合征(SARQ病毒以及流感病毒等基础病毒学，莽克强等著，化学工业出版社，2005年第一版；分子病毒学，黄文林等著，人民卫生出版社，2001年第一版。病毒性疾病根据临床表现及传染方式，也可以分为呼吸道病毒、虫媒病毒、出疹性病毒、肠道病毒所致感染等。病毒性疾病往往引起比较严重的临床表现，每每引起暴发流行。除了短期内因病毒感染而引起的局部炎症外，长期的病毒感染可以导致肿瘤以及器官功能衰竭等严重的疾病，例如HPV感染引起的宫颈癌，HBV感染引起的肝癌、肝硬化和肝功能衰竭，EB病毒引起的鼻咽癌，HIV引起的免疫功能缺陷和卡波济氏肉瘤，SARS引起的呼吸功能衰竭以及流感病毒引起的呼吸功能障碍等基础病毒学，莽克强等著，化学工业出版社，2005年第一版； 分子病毒学，黄文林等著，人民卫生出版社，2001年第一版。我国是一个病毒性疾病高发的大国，如我国HBV感染患者估计约有1.2亿，是世界上感染人数最多的HBV大国；不能忘记的是2002年SARS在我国的大流行。另外，HIV以及可能的流感病毒爆发也时刻威胁着国民的身体健康。每一种流行性病毒感染都可以造成极大的人体健康危害和国民经济的损失。然而，本领域中至今对抗病毒尚无特效药，临床治疗重点就在对症和保守治疗，因此病毒性疾病的发病的分子和免疫学机理的研究和治疗策略的研究具有重大的科学意义和显示意义。微小RNAOnicro RNA,简称miRNA)是一类短序列、非编码、具有调控功能的单链小分子RNA，长约18 24nt。关于miRNA的最早报道是1993年Lee等报道的在秀丽线虫((C. elegants))体内发现的一种呈时间特异性表达的小分子RNA，即可调节线虫发育的lin4。 2000年，Reinhart等又发现不同时期表达的let-7。到目前，公用miRNA数据库中已收录
3了三百多种人类miRNA序列，其中三分之二已被实验证实。微小RNA来源于长度约为IOOObp的长链RNA初始转录产物(Pri-miRNA)， Pri-miRNA分子在细胞核中经Drosha酶剪切形成长度约60 80nt的具有茎环结构的 miRNA前体(Pre-miRNA)。miRNA前体转运至胞质后，被进一步加工成miRNA。微小RNA在动植物细胞中通过对目标mRNA的切割和转录抑制发挥重要作用，参与细胞生长、组织分化和肿瘤形成等多种过程。miRNA在物种间具有高度的保守性、时续性和组织特异性。目前认为，miRNA在细胞凋亡、增殖、分化、血管生成及肿瘤形成等方面均具有重要的调节作用，参与人体大约30 %的基因调节，与肿瘤、心血管疾病、肝病、免疫紊乱及代谢紊乱等多种发病有关。从最初发现到现在，已经在哺乳动物中发现了 700多种miRNA，其中绝大部分 miRNA的生物学功能是未知的。已有报道，miRNA参与免疫应答中多方面的调控作用。但目前为止，尚未见报道miRNA能够调控或影响抗病毒天然免疫，也没有报道miRNA参与到对免疫细胞功能的调控作用。通过转基因或基因敲除小鼠实验，miR-155已被证实在体液免疫和细胞免疫中发挥着不可或缺的作用Faraoni, I·等，miR_155gene :A typical multifunctional microRNA. Biochim Biophys Acta. 2009；1792 :497-505 ；Rodriguez, Α.等，Requirement of bic/microRNA-155for normal immune function. Science. 2007 ;316 :608-611]。而对于天然免疫和炎症反应，miR-155能够被多种刺激所诱导表达，例如TLR激动剂(例如 TLR2, TLR3, TLR4和TLR9配体)、细胞因子(IL-1，TNF-α和IFN-β等)的刺激均可诱导其表达，提示miR-155可能参与天然免疫反应0' Connell, R. M.等，MicroRNA_155is induced during the macrophage inflammatory response. Proc Natl Acad Sci USA. 2007 ；104 :1604-1609；Tili, Ε.等，Modulation of miR_155and miR_125b levels following lipopolysaccharide /TNF-alpha stimulation and their possible roles in regulating the response to endotoxin shock. J Immunol. 2007 ; 179 :5082-5089]。但目前还没有关于miR-155调控抗病毒天然免疫应答的报道。综上所述，本领域中迫切需要开发出可有效针对病毒感染发挥作用的抗病毒天然免疫剂。
发明内容
本发明的主要目的就在于揭示miR-155对抗病毒天然免疫应答的调控作用，由此本发明提供了 miR-155有效抗病毒的新用途。在本发明的第一方面中，提供了微小RNA miR-155或其前体在制备预防和/或治疗病毒感染的组合物中的应用。在本发明的一个实施方式中，所述miR-155的序列如SEQ ID NO 1所示。在本发明的另一个实施方式中，所述miR-155的前体在对象体内经加工转化为 miR-155。在本发明的另一个实施方式中，所述miR-155或其前体来自人、大鼠、小鼠、犬、 马、牛、兔或猴。在本发明的另一个实施方式中，所述病毒是RNA病毒或DNA病毒。
在一个优选例中，所述病毒是RNA病毒。在本发明的另一个实施方式中，所述病毒选自人乳头状瘤病毒、肝炎病毒、非洲淋巴细胞瘤、流行性出血热病毒、人获得性免疫缺陷病毒、严重急性呼吸综合征病毒、流感病毒、水泡性口炎病毒或副粘病毒。在一个优选例中，所述肝炎病毒是乙肝病毒。在另一个优选例中，所述病毒是水泡性口炎病毒或仙台病毒。在本发明的另一个实施方式中，所述组合物是药物组合物或疫苗组合物。在本发明的第二方面中，提供了一种组合物，所述组合物包含(a)有效量的微小 RNA miR-155或其前体；和(b)药学上或免疫学上可接受的载体。在一个优选例中，组分(a)的含量占组合物总重量的0. 001 99. 9wt%，优选1 95wt %，更优选 5 90wt %。在本发明的一个实施方式中，所述组合物还包含选自下组的药物(c)治疗或预防病毒感染的其它活性成分；和/或(d)化疗药物。在一个优选例中，所述组分(C)选自抗甲型流感病毒表面M2受体、抗神经氨酸苷酶、抗单磷酸次黄嘌呤核苷酸脱氢酶、抗病毒DNA多聚酶、抗HIV逆转录酶、抗HIV蛋白酶、 抗唾液酸酶或抗解旋酶。在另一优选例中，所述组分(d)选自细胞有丝分裂抑制剂、喜树碱、高三尖杉酯碱、丙卡巴胼、门冬酰胺酶、顺钼、卡钼、米托蒽醌、他莫昔芬、环磷酰胺、盐酸氮芥、洛莫司汀、司莫司汀、塞替派、白消安、氮甲、苯丁酸氮芥、氟尿嘧啶、喃氟啶、优氟啶、卡莫氟、巯嘌呤、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、环胞苷、巯鸟嘌呤、六甲蜜胺、羟基脲、丝裂霉素、阿霉素、表柔比星、博莱霉素、培莱霉素、阿伐司汀、赫赛汀、格列卫、吉西他滨、托泊替康和/或亮丙瑞林。在另一个优选例中，所述细胞有丝分裂抑制剂选自长春碱、长春新碱、长春地辛、 长春瑞滨、秋水仙胺、秋水仙碱、秋水仙酰胺、鬼白毒素、依托泊苷、替尼泊苷、紫杉醇或多西他赛。在本发明的另一个实施方式中，所述组合物的形式适于直接裸RNA注射法、脂质体包裹RNA直接注射法、金包被RNA基因枪轰击法、繁殖缺陷细菌携带质粒RNA法或复制缺陷腺病毒携带目的RNA法。在本发明的另一方面中，提供了一种预防和/或治疗病毒感染的方法，所述方法包括给予需要预防和/或治疗的对象有效量的微小RNA miR-155或其前体。在一个优选例中，所述微小RNA miR-155或其前体是通过如下方法给予对象的 直接裸DNA注射法、脂质体包裹DNA直接注射法、金包被DNA基因枪轰击法、繁殖缺陷细菌携带质粒DNA法或复制缺陷腺病毒携带目的DNA法。本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
图1 病毒刺激巨噬细胞后miR-155的表达情况，其中图IA用VSV(Μ0Ι = 1)感染48小时过程中各时间点的miR-155表达情况；图IB为用SeV(MC)I = 10)感染96小时过程中各时间点miR-155表达情况；
图IC为用不同MOI (0. 01-10)的VSV感染36小时后的miR-155表达情况；图ID为用不同MOI (1-100)的SeV感染36小时后的miR-155表达情况。(结果显示为平均值士标准差，η= 3)。图2 :miR_155抑制VSV在巨噬细胞中的复制，其中图2A为巨噬细胞转染miR-155及小RNA对照后培养上清中VSV TCID50的检测结果；图2B为巨噬细胞转染miR-155抑制物及抑制物对照后培养上清中VSVTCID5ci的检测结果；图2C为巨噬细胞转染miR-155及小RNA对照后胞内VSV病毒RNA复制的qRT-PCR
结果；图2D为巨噬细胞转染miR-155抑制物及抑制物对照后胞内VSV病毒RNA复制的 qRT-PCR 结果。(结果显示为平均值士标准差，η= 3 ;*，P < 0. 05 ；#，P < 0. 01)
具体实施例方式本发明人经过长期而深入的研究发现病毒感染的巨噬细胞中微小RNAmiR-155 的表达会显著上调，从而证实了巨噬细胞中的miR-155是病毒感染的应答基因。发明人在此基础上进行进一步的研究发现miR-155可有效抑制病毒的增殖，从而发挥抗病毒的作用。由此，发明人发现了 miR-155在抗病毒中的新用途，从而在此基础上完成了本发明。如本文所用，“含有”、“具有”或“包括”包括了“包含”、“主要由……构成”、“基本上由……构成”、和“由……构成”；“主要由……构成”、“基本上由……构成”和“由……构成” 属于“含有”、“具有”或“包括”的下位概念。如本文所用，“分离的”或“分离纯化的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。本发明提到的特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的
一般性例子。miR-155 及其前体如本文所用，术语“miR-155”或“微小RNA miR-155”可互换使用，是指包含SEQ ID NO 1所示序列或其同源序列的微小RNA。本领域中已知各种来源的miR-155，例如人、黑猩猩、马、鸡等，这些同源序列均包含在本发明的术语“miR-155”中。本发明的术语中还包含上述天然存在的miR-155序列中经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸，或经过生物学化学修饰，且仍然具有抗病毒活性的衍生RNA。如本文所用，术语“miR-155前体”是指在被施予对象的细胞内或体内可被加工成为miR-155的miRNA前体。本领域普通技术人员知晓获得天然存在的miR-155前体的方法和手段，也可基于分子和遗传学理论和手段构建所述前体，例如0' Connell, RM.等，Sustained expression of microRNA_155in hematopoietic stem cells causes a myeloproliferative disorder. J Exp Med. 2008 ；205 :585_94。本领域中已知miR-155由BIC基因编码。BIC基因为非编码基因，其初始转录产物经过一系列的加工成熟之后，形成成熟的miR-155。MiR-155前体只有在加工成成熟的 miR-155后才具有相应的生物学功能，因此，本领域普通技术人员可合理预期利用miR-155 的成熟序列及能够产生或加工成为miR-155的各种其它形式的核酸物质(即本发明所述的 "miR-155前体”)均可获得本发明所需获得的效果，即起到抗病毒的效果，从而均可用于制备治疗或预防病毒感染的组合物。本发明还包括一种载体，它含有携带所述miRNA或其前体的构建物。所述的表达载体通常还含有启动子、复制起点和/或标记基因等。本领域的技术人员熟知的方法能用于构建本发明所需的构建物或表达载体。这些方法包括但不限于基因重组技术、体外合成技术等。所述的表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如卡拉霉素、庆大霉素、潮霉素、氨苄青霉素抗性。组合物本发明还提供了一种组合物(尤其是药物组合物或疫苗组合物)，所述的组合物可用于预防和/或治疗病毒感染、及由其引起的相关症状和疾病。所述组合物含有有效量的本发明的miR-155以及药学上或免疫学上可接受的载体。所述“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即有合理的效益/风险比的物质。所述“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。所述“药学上/免疫学上可接受的载体”指用于治疗剂或疫苗给药的载体，包括各种赋形剂、稀释剂和佐剂。该术语指这样一些药剂或疫苗载体它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在 Remington' s Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co. ,N. J. 1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。这类载体包括(但并不限于)盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。通常药物/疫苗制剂应与给药方式相匹配，例如，本发明的组合物可以用生理盐水或含有葡萄糖和其它辅剂的水溶液通过常规方法进行制备，以制得针剂形式。所述组合物宜在无菌条件下制造。本发明的制剂还可制成缓释制剂。本发明的miR-155的有效量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等而变化。优选的有效量的选择可以由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如通过临床试验)。所述的因素包括但不限于miR-155的药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。当本发明的miR-155或其前体以适当剂量给予对象时可获得令人满意的效果。例如，当本发明的miR-155或其前体，每天以约2. 5-25nmol/20g (优选的为20nmol/20g)动物 (如小鼠)体重的剂量给予动物时，可获得令人满意的抗病毒效果。给药方式本发明的组合物，可以为固态(如颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片)或液态(如口服液)或其它合适的形状。
给药途径可采用例如(但不限于)(1)直接裸RNA注射法；(2)脂质体包裹RNA 直接注射法；(3)金包被RNA基因枪轰击法；(4)繁殖缺陷细菌携带质粒RNA法；(5)复制缺陷腺病毒携带目的RNA法；(6)电打孔法，等等。此外，本发明的组合物中还可含有用于改善和治疗病毒感染性疾病的其它活性物质，所述的其它活性物质选自下组(包括但不限于)临床常用抗病毒药物(包括抗甲型流感病毒表面M2受体、抗神经氨酸苷酶、抗单磷酸次黄嘌呤核苷酸脱氢酶、抗病毒DNA多聚酶、抗HIV逆转录酶、抗HIV蛋白酶、抗唾液酸酶、抗解旋酶)的一种或多种。本发明的miR-155还可以与其它药物和治疗手段联合，用于病毒感染性疾病的预防和治疗。本发明的优点本发明的优点主要在于(a)本发明揭示了 miR-155在预防和/或治疗病毒感染中的新用途，为miR-155、 乃至miRNA的研究和开发利用提供了新的思路和途径； (b)本发明的miR-155或其前体可有效用于抗病毒感染，从而为本领域提供了一 种新颖的病毒感染预防剂和/或治疗剂，具有一定的临床应用前景。实施例下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人《分子克隆实验室指南》(New York Co Id Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。实施例1 病毒感染对巨噬细胞中miR-155表达的上调作用水泡性口炎病毒(VSV，一种单链负链RNA病毒)和仙台病毒(％V，副粘病毒属的 RNA病毒)购自中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。小鼠(C57品系，雌性，4-6周龄，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司)腹腔注射肉汤(购自Sigma公司)Iml/只，三天后以PBS冲洗腹腔，按照文献报道方法获得原代腹腔巨噬细胞Hou，J.等，MicroRNA-146a feedback inhibits RIG-I-d印endent Type I IFN production in macrophages by targeting TRAF6, IRAKI, and IRAK2. J Immunol. 2009 ；183 :2150_2158。将2X IO5个小鼠腹腔巨噬细胞铺入含0.5ml完全培养基(RPMI 1640培养基+10% 胎牛血清，均购自PAA公司)的M孔板中培养过夜，次日分组以以下方式进行感染(1) VSV (Μ0Ι 为 1)感染 48 小时；O) SeV (Μ0Ι 为 10)感染 96 小时；(3) VSV (Μ0Ι 为 0.01-10)感染36小时；或(4) SeV (Μ0Ι为1-100)感染36小时。采用实时定量反转录PCR(qRT-PCR)方法对感染后细胞中miR-155的表达进行了分析使用TRIzol (Invitrogen公司)抽提组织总RNA。qRT-PCR使用STORRT-PCR试剂盒 (Takara公司)并在LightCycler (Roche公司)实时定量PCR仪上完成。
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miR-155RT引物为5，_GTC GTA TCC AGT GCA GGG TCC GAG GTA TTCGCA CTG GAT ACG ACC CCC TA-3’ (SEQ ID NO :2)。定量PCR引物均为5，-CTC GTG GTT AAT GCT AAT TGT GA-3，(上游，SEQ ID NO 3)；和5，-GTG CAG GGT CCG AGG T-3，(下游，SEQ ID NO :4)。内参TO小核RNA的反转录反应引物与定量PCR的下游引物相同，序列为5，-AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT-3，(SEQ ID NO 5)；定量PCR引物为5，-CTC GCT TCG GCA GCA CA-3，(上游，SEQ ID NO 6)；和5，-AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT-3，(下游，同上 SEQ ID NO :5)。miRNA的相对定量使用2_ΔΔ"法计算(U6为内参)Livak，KJ.等，Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-Δ Δ Ctmethod. Methods. 2001 ；25 :402-408。病毒刺激巨噬细胞后miR-155的表达情况如图1所示。结果显示用VSV刺激巨噬细胞可诱导miR-155的表达水平显著提高，并且在VSV 感染后M小时到达平台期(图1A)。另外一种RNA病毒——SeV在巨噬细胞中也能像VSV 一样诱导miR-155的动态表达(图1B)。结果还显示，这两种病毒对miR-155的诱导都是剂量依赖的(图IC和1D)。
上述结果表明在巨噬细胞中miR-155是VSV、SeV等病毒感染的应答基因。实施例2 :miR-155抑制水泡件口炎病毒(VSV)在巨噬细胞中的复制分别采用如下序列(由上海吉玛公司合成)在小鼠腹腔巨噬细胞中使得miR-155 高表达或抑制miR-155的表达miR-155 :UUAAUGCUAAUC⑶GAUAGGGGU(SEQ ID NO 1)；小RNA 对照UUCUCCGAAC⑶⑶CACGUTT(SEQ ID NO 7,3 ‘端加 TT 突出是小 RNA序列合成中常用的修饰方法，对其功能没有影响，主要是起到稳定核苷酸的作用 [ffilda, M.等，Killing of leukemic cells with a BCR/ABL fusion gene by RNA interference (RNAi). Oncogene. 2002 ；21 :5176_5124)；miR-155 抑制物2' -O-Me-ACCCCUAUCACGAUUAGCAUUAA (SEQ IDNO :8);以及抑制物对照2'-0-Me-CAGUACUUUUGUGUAGUACAA(SEQ ID NO :9)。如实施例1所述制备小鼠腹腔巨噬细胞，并根据文献报道采用INTERFERin转染试剂(Polyplus 公司)转染小 RNA 至巨噬细胞Hou，J.等，MicroRNA_146afeedback inhibits RIG-I-dependent Type I IFN production in macrophages by targeting TRAF6,IRAKI, and IRAK2. J Immunol. 2009 ; 183 :2150-2158，使得 miRNA 转染的终浓度为 10nM。转染后48小时，以VSV (Μ0Ι为1)感染1小时，更换新鲜完全培养基(RPMI1640培养基+10%胎牛血清)。72小时后，取0. Iml细胞培养上清进行10倍梯度倍比稀释，并加入单层BHK21细胞(购自ATCC)。7 后，观察BHK21细胞的死亡情况并计算半数组织培养感染量(TCID50)。采用体液病毒DNA/RNA 微量制备试剂盒(Body Fluid Viral DNA/RNA Miniprepkit，购自Axygen公司)抽提细胞内VSV病毒RNA，并采用实施例1所述的qRT-PCR法定量。血清型VSV的定量PCR引物为5，-ACG GCG TAC TTC CAG ATG G—3，(上游，SEQ ID NO 10)；禾口5' -CTC GGT TCA AGA TCC AGG T-3'(下游，SEQ ID Ν0:11)。mRNA的相对定量使用β -肌动蛋白(β -actin)作为内参照。小鼠β -肌动蛋白mRNA定量PCR引物参照文献报道Liu，X.等，CaMKII promotes TLR-triggered proinflammatory cytokine and type I interferon production by directly binding and activating TAK land IRF3in macrophages. Blood. 2008 ; 112 :4961-4970。转染miR-155及其抑制物对VSV感染的巨噬细胞培养上清中VSV TCID5tl影响的结果如图2A和2B所示。结果显示高表达miR-155能够显著抑制VSV的增殖(图2A)，而抑制miR-155表达能够非常显著的促进VSV的增殖(图2B)；转染miR-155及其抑制物后对VSV感染的巨噬细胞胞内VSV RNA复制影响的结果如图2C和2D所示。结果显示高表达miR-155能够非常显著地抑制VSV的RNA (图2C)， 而抑制miR-155表达能够显著增加VSV的RNA复制(图2D)。
该结果表明miR-155可抑制VSV的增殖，发挥抗病毒的作用。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
权利要求
1.微小RNAmiR-155或其前体在制备预防和/或治疗病毒感染的组合物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-155的序列如SEQIDNO 1所示。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-155的前体在对象体内经加工转化为 miR-155。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-155或其前体来自人、大鼠、小鼠、犬、马、牛、兔或猴。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述病毒是RNA病毒或DNA病毒。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述病毒选自人乳头状瘤病毒、肝炎病毒、 非洲淋巴细胞瘤、流行性出血热病毒、人获得性免疫缺陷病毒、严重急性呼吸综合征病毒、 流感病毒、水泡性口炎病毒或副粘病毒。
7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组合物是药物组合物或疫苗组合物。
8.一种组合物，所述组合物包含(a)有效量的微小RNA miR-155或其前体；和(b)药学上或免疫学上可接受的载体。
9.如权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含选自下组的药物(c) 治疗或预防病毒感染的其它活性成分；和/或(d)化疗药物。
10.如权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述组合物的形式适于直接裸RNA注射法、脂质体包裹RNA直接注射法、金包被RNA基因枪轰击法、繁殖缺陷细菌携带质粒RNA 法或复制缺陷腺病毒携带目的RNA法。
全文摘要
本发明涉及一种miRNA的抗病毒作用、实施方法及用途。本发明具体涉及微小RNA分子miR-155在制备预防和/或治疗病毒感染的组合物中的用途，及其应用方法。本发明的miR-155在病毒感染的巨噬细胞中的表达显著升高；此外，本发明的miR-155能抑制病毒的复制，从而发挥抗病毒的作用。本发明的miR-155可用于制备有效抗病毒(尤其是RNA病毒)感染的药物，从而具有临床应用前景。
文档编号A61P31/14GK102406653SQ20101028833
公开日2012年4月11日 申请日期2010年9月21日 优先权日2010年9月21日
发明者曹雪涛, 李楠, 王品 申请人:中国人民解放军第二军医大学