细胞取样装置的制作方法

专利名称：细胞取样装置的制作方法
技术领域：
本发明涉及细胞收集装置。具体地，本发明涉及用于沿食道排列的细胞的取样的细胞收集装置。
背景技术：
已知某些细胞收集装置。具体来说，胶囊海绵型细胞收集装置描述于PCT专利申请第PCT/GB2006/003913号中。这种装置包含能够从食道的表面收集细胞的磨料，以及将其由患者内收回的工具。通常，这种装置是可吞咽的。已知的装置通常通过吞咽呈压缩或充填形式的磨料而操作。在达到胃腔后，将该 装置维持在压缩或充填形式的材料被溶解或削弱，以允许被压缩的材料扩张回其原始尺寸。在此阶段之后，通过物理性地将装置从受试者口中拖曳出来而将其收回。此拖曳导致装置从胃腔移出向上回穿过食道以及穿出患者的口腔和口。在沿受试者食道移动的过程中，食道内层的细胞被收集于该装置的磨料部分中。这些细胞随后被分析以帮助对受试者的诊断或预后。一种如上所述的已知细胞取样装置称为胶囊海绵。该装置包含可压缩的海绵状材料。其一般与棉线连接。然后通过例如并入到明胶胶囊中而将装置压缩成可吞咽的形式。这种已知装置一般已具有作为收回工具而连接的棉绳。这是个问题，因为棉绳能够在受试者内部脱落纤维。此外，此类型的棉绳可能过于粗糙。另外，材料可能在使用期间从绳上分离。此外，已知装置受到遗落在被取样的受试者内部的问题的困扰。这一般是经由未压缩的装置与用于其收回的绳分离而发生。此外，已知的装置可能由于绳对口咽的摩擦而难以吞咽。因此，已知的细胞取样装置受到一系列问题和缺点的困扰。本发明设法克服与现有技术相关的问题。发明概述本发明人提供对已知细胞收集装置的改进。本发明人已使用连接至装置的可压缩磨料的不同绳或线以便改进装置的可吞咽性和易用性。此外，本发明人已设计了用于将绳连接至磨料的新连接系统。该连接系统包含提供优良强度的某些特定类别的结。此外，所用的结有利地表明减少装置在使用期间在受试者中的遗落。因此，本发明提供更强和更安全的细胞取样装置。该装置还具有优良的可吞咽性和易用性/易收回性的益处。因此，在一个方面，本发明提供一种可吞咽的细胞取样装置，其包含能够从食道的表面上收集细胞的磨料，和用于收回的工具，其中所述用于收回的工具包含绳，其特征在于所述绳通过套结(hitch knot)连接至所述磨料。适宜地，所述套结为双反手结(double overhand knot)。适宜地，所述磨料是可压缩的。适宜地，所述磨料包含网状聚氨酯。适宜地，所述绳经由设置在所述磨料的表面下方的绳的环而连接至所述磨料，所述环由所述套结闭合。
适宜地，所述磨料被压缩，并且其中所述磨料通过可溶性胶囊而维持在压缩状态。适宜地，所述可溶性胶囊包含明胶胶囊。适宜地，在浸入30°C水中后5分钟内，所述胶囊能够溶解并且所述可压缩的磨料能够回复至其未压缩的尺寸。适宜地，·所述装置在远离可吞咽的磨料的末端包含不可吞咽的元件。在另一方面，本发明涉及一种试剂盒，其包含根据任一前述权利要求所述的装置，和用于检测细胞标记物的试剂。在另一方面，本发明涉及一种用于在受试者中帮助诊断巴雷特食道或巴雷特相关的发育异常的方法，所述方法包含用如上所述的装置对所述受试者的食道的细胞表面取样以及分析细胞的细胞标记物，其中这种标记物的检测指示巴雷特或巴雷特相关的发育异常的存在的增加的可能性。如上所述的试剂盒或如上所述的方法,其中所述标记物选自表I所示的组。如上所述的试剂盒或如上所述的方法,其中所述标记物选自表2所示的组。如上所述的试剂盒或如上所述的方法，其中所述标记物选自表3所示的组。发明详述本发明的优选实施方案是‘胶囊海绵’装置，其中所述磨料包含海绵或海绵状材料如聚氨酯筛网，并且其中所述材料被填充或压缩到明胶胶囊中以便于吞咽。因此，通用术语‘海绵’或‘胶囊海绵’有时用于论述本发明的装置以便于理解，但显然，可想到本发明的其它实施方案并且本发明不应被理解为限于优选的胶囊海绵实施方案。术语‘包含’ (comprises, comprise, comprising)应理解为具有其在本领域内的通常含义，即，包括所叙述的特征或特征的组，但该术语不排除也存在任何其它所叙述的特征或特征的组。收回本发明的装置适宜地包含用于从被取样的受试者中收回的工具。适宜地，用于收回的工具包含绳。该绳有时在本文中称为线/带。所用的绳应适宜地为滑溜的。所谓滑溜的，是指具有低摩擦系数。这具有使装置易于吞咽的优点。这还具有使装置易于收回的优点。另一优点为减少患者在使用期间的不适。所谓低摩擦系数，是指与具有类似直径的棉绳相比更低的摩擦系数。所用的绳应适宜地为光滑的。这具有更容易吞咽的优点。这还具有避免与口中、喉中或口咽中的粘膜粘着的优点。尺寸适宜地，应选择绳或线，以避免在使用期间损伤受试者的口咽。因此，在一个方面，本发明涉及以前仅用作缝合材料的手术线的新用途。缝合材料是用于本发明的适宜的绳的实例。适宜地，使用尽可能细的绳，同时维持足够的粗细度以避免在使用期间割伤患者。应注意选择绳的正确粗细度。过粗的绳可能难以吞咽，而过细的绳可能导致喉部划破。该绳应当适宜地粗，以避免在使用期间割伤患者。因此，适宜的是该绳具有至少O. 3mm的最小直径。该绳应当适宜地细，以便使不适感最小并且提高可吞咽性。因此，适宜的是该绳具有O. 7mm的最大直径。因此，根据本发明可以使用的绳适宜地包含具有O. 3至O. 7mm的直径范围、更适宜地为O. 4至O. 6mm的直径范围的绳。最适宜的绳直径为大约O. 5mm,最适宜地为O. 5mm。应注意，本文中对绳直径所给出的值毫无疑问服从于通常的测量公差。具体来说，给出的数字应当允许+/-0. 05mm的公差。因此，O. 5mm的尺寸应理解为包括具有所示公差的O. 45 至 O. 55mm。绳的长度对操作者而言是个问题。该绳需要足够长以允许将装置部署到受验者的胃腔中，同时保留足够的绳延伸到口腔中或更远，以允许开始收回。因此，最佳绳长度是从口腔至胃腔的距离加额外长度，如5cm，以允许抓紧并收回该装置。更长的绳可能是有利的， 以便提供拉取的容易性和/或向受试者提供安慰。适宜地,绳至少为60cm长。适宜地,绳小于75cm长。适宜地，绳长度在60至75cm范围内，适宜地为64至69cm范围内，适宜地为约67cm长，适宜地为67cm长。强度绳必须被选择为具有防止在拉取时断裂的必要强度。适宜地,绳对至少2. 4Kg、适宜地对至少3. 2Kg、适宜地对至少3. 5Kg、适宜地对至少4. 6Kg的负载是抗断裂的。其它性质适宜地，所用的线或绳为浅色，如白色。这具有受到受试者欢迎的优点。适宜地，所用的磨料或胶囊是深色，如黑色。这具有在使用期间受到受试者欢迎的优点。这具有另外的优点，既一旦从受试者收回，则掩饰截留在装置的研磨部分上的任何活检材料的外观或使得该外观较不突出。这可以帮助减少受试者在操作期间的不适。适宜地，该绳包含适于体内使用的绳。适宜地，该绳包含批准体内使用的绳。批准是指由相关卫生当局认可，例如由UK MHRA(药品和保健品管理局)认可。适宜地，该绳不应在受试者内部脱落纤维。适宜地，该绳应不显示从绳上将材料遗落到受试者的消化系统中。该绳可以包含手术缝合材料。在非细胞收集端，适宜的是将绳拴至锚状物以防止吞咽。适宜地，锚状物可以包含纸板。连接用于收回的工具(例如绳)必须连接至装置的细胞取样磨料。本发明的关键教导在于使用特定的结系统将绳连接至装置的研磨元件。适宜地，应使用双半结。特别适宜的双半结的实例为双反手结。该类结布置提供以下优点即第一半结落在第二半结上或抵靠在第二半结上。这是有利的，因为在收回期间越多力被施加至绳，则该结就会越紧(而不是更松)。本发明中所用结系统的优点在于，绳通过环连接至磨料。伴随施加的力，环的尺寸可以减小。明确的说，环的尺寸的减小会部分束紧或压缩磨料的内部部分。然而，重要的是，该结设置不会显著减小磨料的直径。具体来说，该环设置不会显著降低磨料的横向直径。所谓横向直径，是指在垂直于收回期间由绳施加的力的轴线上的直径。这样具有的优点在于，尽管磨料的形状可以在收回的力的作用下在环的束紧期间稍微改变，但磨料的横向直径维持基本恒定，并因此保持收回期间对食道的细胞有效地取样。针对以下对将绳连接 至海绵的结进行优化对许多结进行了研究，它们与滑溜的绳材料一起使用，所述材料包括当润湿时，例如当与来自口或胃的粘液混合时，可以变得更加滑溜的材料。可以使用多个结。适宜地，仅使用单个结，其具有简化装置构造的优点。当然，单个结可以包含多个套或元件，并且是指单一的整个结，而不是单独结内的单个线元件。适宜地，装置的结具有一个或多个以下性质(i)本发明的结在张力作用下适宜地拉紧以防止海绵在移除时从绳上脱离。(ii)该结适宜地不会在处于张力作用下时显著影响诸如海绵的磨料的外径。(iii)该结适宜地不将绳材料的外伸环留在诸如海绵的磨料的底部。适宜地，装置的结具有所述性质中的两个或更多个；适宜地，装置的结具有所有三个所述性质。下文讨论具有这些性质的结的类型的实例以及特定结的实例。两半结(twohalf hitch knot)两个半结是一类结，明确地说是绑扎结(binding knot)或套结。其由系在杆周围的反手结(overhand knot),和随后的半结(half-hitch)组成。等同地,其由在杆周围的半圈(half-turn),和随后的在静置部分(standing part)周围的活动末端(running end)的双套结(clove hitch)组成。此结有时也称为自身上的双套结。本领域技术人员会熟悉本文所用的标准结名称和术语，并且会因此能够在没有进一步指导的情况下打这些结。尽管如此，为易于理解，提供以下用于拴两个半结的三步法-通过在柱周围形成顺时针的环开始，并且绳索的工作端处于上部。使工作端穿过该环。此时，得到在该柱周围的反手结。-使工作端向下并向左方。使其在静置端下方成环。拖曳该工作端穿过刚才形成的环，拉紧，并且沿静置端将该结滑动至杆。-正确拴好的两个半结类似于拴在线的静置端周围的双套结，而非双合结(cowhitch)。在对本文中所示结的讨论中，必须记住装置的上下文。例如，很明显，没有‘柱’包括在本发明的装置中。‘柱’仅仅是解释拴结的公共点，并且在本发明的上下文中应理解为正在其周围拴结的材料，例如磨料的核的中心(当绳适宜地运行于材料的表面下方，从而经过装置的磨料收集器部分的内部周围时)。替代的结适宜地，一个或多个以下的结可以用于连接锚状套结(这是套结中的变化)。适宜地，该结为套结。除不适宜的单套结以外，所有类型的套结均可能潜在地用于连接。应牢记，某些套结很复杂并因此对制造而言不太期望和/或不太实用。适宜地，该结为简单的套结，其具有易于制造的优点。
替代的套结替代的环结(ring hitching),锚状弯头变体(anchor bend variant),包索吊结(bale sling hitch),木桶吊结(barrel hitch),单编结(becket hitch),挂结(blackwallhitch),普鲁士结(blake ' s hitch),帆杆结(boom hitch),底部负载释放结(bottomloaded release hitch),帆索结(bunt line hitch),螺旋挂结(cat' s paw),锁链结(chain hitch), clinging clara,双套结，连续环结(continuous ring hitching),双合结变体，带栓扣双合结(cow hitch with toggle),双合结，双半结，Farrimond摩擦结，加达结(garda hitch),活拖网索(Ground-line hitch),半结，挂马结(halter hitch),highpoint 结，马贼结(highwayman1 s hitch),活索结(hitching tie),冰柱结(iciclehitch),石锚结(killick hitch), knute 结,驳船结(lighterman, s hitch),马格纳斯结(magnus hitch),吊铺捆结(marline hitching)，缆维结(marlinespike hitch),方萁杆结(masthead knot),副官索(midshipman' s hitch),意大利结(munter hitch),意大利摩擦结(munter friction hitch),刺网结(ossel hitch),帕洛马结(pa lomar knot),桅顶结(pile hitch),攀缘结(prusik knot),反向半结(reverse half hitches),圆结(roundhitch),系木结(round turn and two half hitches), 7jC 手抓握结(sailor' s grippinghitch),水手结(sailor, s hitch),西伯利亚结(Siberian hitch),单结(single hitch),小艇结(slippery hitch),斯内尔结(snell knot),依彳畏结(snuggle hitch),拉绳结(taut-line hitch),曳木结(timber hitch), trilene 结,货运索结(trucker' s hitch),拖船结(tugboat hitch)，单一节(uni knot)，车夫结(wagoner' s hitch)。最适宜地，所述套结为双反手结。这具有易拴的优点。该结具有上述给定的性质(i)、(ii)和(iii)中的每一个。其它优点可以从本申请的实施例部分显而易见。适宜地，在本发明中不使用双环称人结(Double loop bow line knot);适宜地，连接不包含双环称人结。已知的装置未使用本文所述的结系统。已知的装置仅使用了全结，而不是半结。具体来说，已知的装置使用了多个“老奶奶结(granny knot) ”并且未如本文所述使用用于连接的可滑动套索系统。自由端绳的自由端是指在绳的细胞收集器端处的结之后的自由部分。适宜地，自由端为至少1cm。适宜地，自由端为I. O至2. Ocm。适宜地，自由端可以为至少I. 5cm,适宜地为至少I. 7cm，适宜地为2. Ocm0有问题的结不适宜的结包括接绳结(Sheet Bend)-该结不应使用，因为其很滑溜并可能经不起绳上的拖曳力；双接绳结不应使用，因为其很滑溜并可能经不起绳上的拖曳力并还可能对实施而言较复杂；平结(reef knot)不应在滑溜的线/绳上使用；双套结是用于成环的线或绳的结，不用于单个自由端的线或绳，并且在自由端处留下两根线，这对本发明装置是不可接受的，所以适宜的是不应使用双套结。除上述以外，应注意，称人结是滑溜的；该结的结构类似于接绳结；因此适宜的是避免称人结。因此，适宜的是，对磨料的连接不包含本段中提及的结。非吞咽末端处的连接
应注意，对连接和结的讨论是指磨料与绳的接合。绳的非磨料端(即非吞咽末端)可以接合至另一元件，例如用于防止意外吞咽，有利于拉取或任何其它目的。绳在非吞咽末端处的接合可以通过任何适宜的方式进行，例如焊接、缝合、装订、编织、粘合或包括打结在内的任何其它方法，但当通过打结而接合时，该结可以是用于安全紧固的任何适宜的结，并且以针对将绳接合至磨料的作为本发明的一部分所描述的方式进行限制。磨料/胶囊磨料适宜地包含海绵或海绵状材料。磨料的品质在下文更详细讨论。关键特征在于该材料需要具有足够的研磨性来尽可能多地收集细胞并同时避免损伤食道内壁。这些有利特征可以例如通过使用海绵或蜂窝状的磨料来实现。该多孔或成穴形式的材料使得在材料内部或表面上的细胞的收集和/或夹带最大化。此外，海绵状或蜂窝状材料(如网状聚氨酯)中的空腔或中空还有利于压缩，这有利于在例如通过可溶性胶囊给药时减小材料的尺寸。适宜地，该材料具有均匀的形状。适宜地，该材料具有均匀的直径。适宜地，未压缩的形状是圆的，例如球状。适宜地，未压缩的直径是3cm。适宜地，设定材料的尺寸以便适宜地以压缩或充填的形式匹配入可吞咽的胶囊(例如明胶胶囊)中。适宜地，所述材料在被压缩在胶囊内部时不破坏该胶囊，而仅一旦例如在受试者内部使用时才变形或使胶囊破碎。 适宜地，该胶囊具有均匀的形状。适宜地，该胶囊具有均匀的尺寸。适宜地，该胶囊快速地溶解，例如在5分钟内溶于30°C水中。适宜地，所述胶囊整体完整，并且不具有任何破裂和尖锐的末端。这具有防止在吞咽时损伤的优点。其它有利特征适宜地，本发明的装置可以被辐照以便清洁。适宜地，本发明的装置可以被辐照以便无菌。在最优选的实施方案中，该装置具有以下性质-白色绳-绳的最小长度60cm-绳表面光滑-细胞收集磨料(如海绵)内部的绳圈应当正好在表面下成环-在细胞收集器端处的结之后的绳的自由端最小为Icm-经由结一双套结将绳连接至细胞收集器-绳抗断裂性最小要求为2.4kg-在非细胞收集器端将绳拴至纸板以防止吞咽在另一方面，本发明涉及一种用于帮助在受试者中诊断巴雷特食道或巴雷特相关的发育异常的方法，所述方法包含对所述受试者的食道的细胞表面取样，以及分析细胞的细胞标记物，其中这种标记物的检测指示巴雷特或巴雷特相关的发育异常存在的增加的可能性。优选地，所述取样不针对食道内的具体位点。优选地，仅对食道的表面取样。这具有避免更侵入性取样技术的优点，所述更侵入性取样技术例如穿透到食道的表面下的活检收集技术。在另一方面，本发明涉及一种用于帮助诊断巴雷特食道或巴雷特相关的发育异常的非侵入式方法，所述方法包含分析来自受试者食道的表面的细胞的细胞标记物，其中这种标记物的检测指示巴雷特或巴雷特相关的发育异常存在的增加的可能性。在此实施方案中优选的是，对细胞的实际取样并非本发明方法的一部分。在另一方面，本发明涉及一种用于帮助诊断在受试者中的鳞状细胞癌的方法，所述方法包含对所述受试者的食道的细胞表面取样，以及分析细胞的细胞标记物，其中这种标记物的检测指示鳞状细胞癌存在的增加的可能性。优选地，所述取样不针对食道内的具体位点。优选地，仅对食道的表面取样。这具有避免更侵入性取样技术的优点，所述更侵入性取样技术例如穿透到食道的表面下的活检收集技术。在另一方面，本发明涉及一种用于帮助诊断鳞状细胞癌的非侵入式方法，所述方 法包含分析来自受试者食道的表面的细胞的细胞标记物，其中这种标记物的检测指示鳞状细胞癌存在的增加的可能性。在此实施方案中优选的是，对细胞的实际取样并非本发明方法的一部分。优选，本发明的方法在体外进行。优选地对于巴雷特食道或巴雷特相关的发育异常而言，该标记物是非鳞状细胞标记物。优选地，该标记物是细胞增殖的标记物。这对本发明的鳞状细胞癌实施方案来说是优选的。优选地,该标记物是柱状细胞的标记物。在另一方面，本发明提供如上所述的方法，其中对食道的细胞表面的取样包含以下步骤(i)将如上所述的可吞咽的装置引入到受试者中，(ii)通过穿过食道拉取来收回装置，和(iii)从该装置中收集细胞。优选地，步骤(i)包含将如上所述的可吞咽的装置引入受试者的胃中。试剂盒在另一方面，本发明提供一种包含如上所述的装置的试剂盒。适宜地，所述试剂盒还包括局部麻醉剂。优选地，所述局部麻醉剂是喷雾剂或锭剂，优选是喷雾剂。在另一方面，本发明提供如上所述的试剂盒，其还包括用于在拉取之后接收所述可吞咽的装置的容器，所述容器中具有一定量的防腐液。优选地，该容器是防水容器。优选地，防腐液是细胞制备流体。优选地，所述流体是制造用于取样细胞的检查的载玻片的稀制备流体。在另一方面，本发明提供如上所述的试剂盒，其中所述装置包含胶囊海绵。在另一方面，本发明提供如上所述的试剂盒，其中所述可吞咽的装置包含例如带或绳的拉取工具。在另一方面，本发明提供如上所述的试剂盒，其还包含用于割断所述拉取工具的装置。优选地，所述装置包含刀片或剪刀。在另一方面，本发明提供如上所述的试剂盒，其还包含用于向受试者施用可饮用流体(如水)的容器。在另一方面，本发明提供如上所述的试剂盒，其还包含手套。这些有利地保护样品以免在拉取装置之后被污染。优选地，所述试剂盒还包含用于检测细胞标记物的试剂。在另一方面，本发明提供如上所述的试剂盒，其还包含用于检测至少一个标记物的试剂，所述标记物选自由表I所示的标记物组成的组、或由表2所示的标记物组成的组、或由表3所示的标记物组成的组。
在另一方面，本发明提供一种试剂盒，其还包含防水容器和防腐液。优选地，所述液体用于液基细胞学检查，优选地，所述流体是制造用于取样细胞检查的载玻片的市售稀制备流体。在另一方面，本发明提供如上所述的试剂盒，其还包含局部麻醉性喷雾剂或锭剂。在另一方面，本发明提供如上所述的装置在诊断巴雷特食道或巴雷特相关的发育异常中的用途。巴雷特食道和发育异常巴雷特食道可以在没有发育异常的情况下发生。每年，患巴雷特食道的患者的大约I %会发展成发育异常。在任意给定时间，患巴雷特食道的患者的大约20%会患有发育异常。癌症(如腺癌)由发育异常发展而来，并且被视为发育异常的一种极端形式，即便这些病况在病理上明确不同。腺癌被视为发育异常的一种极端形式，并且在本文中讨论其检测和诊断。因此，应当理解，本发明可以应用于检测和诊断具有可识别的不连续阶段的单一进展性疾病状态。这些阶段包含巴雷特食道，巴雷特食道相关的发育异常，所述发育异常包括由此引发的腺癌。食道中细胞的正常状态为鳞状上皮的正常状态。在巴雷特食道中，这些细胞呈现柱状上皮的特性，并且当它们经过上述疾病状态发展时经受进一步的变化。因此，食道中的非鳞状细胞是异常的，并且与巴雷特食道相关以及潜在地与发育异常和本文讨论的更严重异常相关。表面取样和技术所述装置有利于使用可吞咽的磨料从食道的表面对细胞取样，所述磨料从患者中被收回并且随后从其分离细胞用于分析。优选地，基本上食道的整个表面皆被取样，优选整个表面，如全部内腔。所谓研磨性，是指该材料能够从食道的内表面移除细胞。显然，由于这意味着在受试者的食道中使用，所以‘研磨性’必须依据应用来解释。最佳地，磨料需要具有足够的研磨性，以收集尽可能多的细胞，而不导致对受试者食道内层的损伤。在本发明的上下文中，术语‘研磨性’具有上文给出的含义，其可以通过如下来测试使材料以合适的量/构造穿过食道并且对其进行检查以确定细胞是否已从食道移除。材料必须具有足够的研磨性，以对食道中存在的任何发育异常细胞取样。优选地，材料具有足够的研磨性，以对存在的任何巴雷特或腺癌细胞取样。在最优选的实施方式中，优选的是材料具有足够的研磨性，以能够对整个食道取样，即，使得一些鳞状细胞与可能存在的任何巴雷特和/或柱状和/或腺癌细胞一起被收集。这是有利的，因为鳞状细胞比发育异常细胞更难以移除，并且因此其取样为操作者提供对照，使得如果正常鳞状细胞被材料移除，则未取样到所关注的细胞如巴雷特或发育异常细胞(如果存在的话)(其比正常鳞状细胞更容易移除)的机会相应地很小。优选地，可吞咽的磨料是可扩张的。在此实施方案中优选的是，磨料在吞咽时比在拉取时尺寸更小。可扩张的材料可以简单地为压缩的弹性材料，使得当从压缩状态释放时，其会再次扩张回近似其未压缩尺寸的尺寸。或者，其可以是例如在吸收水性流体后扩张至超过其原始尺寸的最终尺寸的材料。
换句话说，优选的是该装置的材料在吞咽和拉取之间扩张、溶胀、膨胀或以其它方式增加尺寸。优选地，该装置可自动扩张，即在吞咽和扩张之间不需要进一步干预。优选地，该装置不可膨胀。优选地，该装置在吞咽后约束移除之后，通过展开、铺开、伸开或以其它方式增长尺寸。优选地，该装置的材料是可压缩的，并且在吞咽之后回复近似其未压缩的尺寸的尺寸。优选地，该装置由被压缩的材料构建，所述被压缩的材料被可释放地约束在压缩状态下。优选地，该材料在吞咽之后从约束中释放，允许装置/材料在拉取之前的扩张。优选地，该装置包含被压缩成胶囊形式的可压缩材料。优选地，可压缩材料呈海绵材料的形式。优选地，被压缩的海绵至少部分地被可溶和/或可消化的包衣(如胶囊包衣)所包围。优选地，海绵是不可消化的。优选地，该海绵包含聚氨酯如聚氨酯海绵，优选为网状聚氨酯。优选地，胶囊包衣至少部分地由明胶形成。优选地，胶囊包衣完全由明胶形成。在一个实施方案中，可能期望的是用可消化的材料制造整个装置，以在装置遗落于受试者中的情况下增加安全性。自然地，磨料需要以比胶囊更慢的速率被消化，并且该绳需要类似地被缓慢消化。优选地，磨料是不可消化的。优选地，绳是不可消化的。优选地，该装置是胶囊海绵。如从说明书中显而易见的，胶囊海绵是包含可压缩海绵作为磨料的装置，所述海绵被压缩成胶囊形状，所述胶囊形的被压缩的海绵优选通过可溶和/或可消化的材料(如明胶)的至少部分包衣而被可逆地约束在其压缩状态下。优选地，在垂直于食道的轴线的平面中，装置的扩张的(如减压的)磨料为大约3cm。优选地，这是食道腔的近似直径。更优选地，这比食道腔的直径稍微大，从而有利地确保在拉取/取样进行时与食道腔的内表面的良好接触。本发明的特征在于，取样不针对(例如可视地针对)食道的任何具体部分。优选地，食道表面的至少10%被取样，优选至少20%被取样，优选至少30%被取样，优选至少40%被取样，优选至少50%被取样，优选至少60%被取样，优选至少70%被取样，优选至少80%被取样，优选至少90%被取样。在最优选实施方案中，优选基本上整个食道被取样，优选食道的整个内腔被取样。即便当本发明方法不包括样品的收集时，这也同样地应用于体外样品。筛选和监视本发明的筛选方面涉及对巴雷特食道的检测和/或诊断。一般地，在本发明的筛选实施方案中，被检查的受试者，或者从其中获得样品的受试者，其巴雷特的状态是未知的。本发明的监视方面涉及对发育异常(包括腺癌)的检测和/或诊断。尽管发育异常和腺癌明显是病理上不同的病况，但腺癌可以被视为发育异常的一种极端形式。如下文所述，取决于所用的分子标记物，本发明可以有利地应用于区分腺癌与发育异常。然而，一般说来，对本发明的监视方面的讨论涉及对发育异常(包括腺癌)的检测。通常，在本发明的监视实施方案中，被检查的受试者，或者从其中获得样品的受试者，其发育异常的状态是未知的，但通常已知患有巴雷特。原则上，筛选方面和监视方面之间的差异对本发明的实施来说具有极小的实际结果。该差异仅与所选标记物有夫。在筛选和监视之间，取样方面和组合方面保持相同。实际上，可以有利地将筛选和监视组合，即同时检查细胞样品的巴雷特的标记物以及包括腺癌在内的发育异常的标记物，从而增加所得的信息的价值并且实现更强カ的组合的诊断输出。标记物可以应用于巴雷特筛选和监视的标记物是不在正常食道组织中表达的任何标记 物，优选不在正常食道表面细胞中表达的任何标记物。标记物可以通过基于核苷酸的技术(例如通过RNA检测来检测表达)或通过基于蛋白的技术(例如使用识别所关注的多肽的ー种或多种抗体的免疫化学；通过例如制备重组蛋白并且使适宜的宿主如兔或小鼠免疫，抗体可以很容易地针对所关注的标记物基因而产生)来检测。一些标记物如阿尔新蓝事实上是活体染料(组织化学着色剂)，并因此被简单地直接分析。对于筛选方面(即对于巴雷特食道的检测)，优选使用区分肠化生(巴雷持)与鳞状食道细胞或胃贲门的标记物。这些标记物包括上皮分化的标记物。柱状标记物的使用是特别优选的。使用柱状标记物的技术有益性在于使用它们仅检测柱状细胞。这意味着鱗状细胞(无论正常的或癌性的)不被柱状标记物着色。这是有利的，因为巴雷特细胞和由其产生的发育异常细胞如腺癌细胞是柱状的，并因此可以通过使用柱状标记物而被选择性地识别。这有利地提高信号并减小背景，以及减少对应用另外的区别标记物的需要，从而通过以此方式直接检测柱状细胞而简化程序。可以使用已知在巴雷特和正常食道表面细胞中差异性表达的任何其它标记物。可以使用比较胃贲门与鳞状细胞活检的表达微阵列来识别替代性标记物。在这些细胞类型中差异性存在的任何标记物均可以在本发明中使用。对于监视方面，优选使用其表达与发育异常的程度相关的标记物。优选地，将这种标记物用于对有风险的患者进行分级。优选地，这种标记物包括増殖标记物，如Ki67和Mcm蛋白；増殖和DNA损伤标记物，如PCNA ;细胞周期蛋白，如细胞周期蛋白D和/或细胞周期蛋白A ;异常p53，例如p53L0H ；p53突变；或？53过表达，如其免疫组织化学检测；包括甲基化在内的P16丢失；和例如通过流式细胞计量术或图像细胞计量术测得的非整倍性。稍微更详细地讲，生长因子(如EGF)、生长因子受体(如EGFR)以及细胞因子(IL-4)和涉及炎性响应的分子(C0X-2)表明在BE和随后发展成AC中具有异常表达，并因此是根据本发明的有用的标记物。体外和体内工作已表明，酸和胆汁刺激诱发DNA损伤、MAP激酶通路和NF K B通路，并且减少细胞凋亡，因此涉及DNA突变和损伤的标记物(例如ATM、ATR)、细胞凋亡的标记物(P53)和来自MAPK通路的标记物(erk、p38)和来自NF κ B的标记物是有用的。此外，胆汁酸增加视黄酸通路(CYP26A1、RAR)，其与小鸡胚胎食道中化生的诱导有联系。BE的发展及向癌症的进展已涉及多种其它通路，例如TGFii和BMP通路。事实上，已知与发育异常的程度相关的任何标记物均是适宜的，包括许多致癌基因和肿瘤抑制基因。特别地，在以下文献中提及的标记物可能适用于本发明Fitzgerald RC しIin Gastroenterol Hepatol しomplex diseases in gastroenterologyand hepatology:GERDj Barrett ! s，and esophageal adenocarcinoma. 2005，3:529-37 ；或 Fitzgerald RC Recent Results in Cancer Res Genetics and prevention ofoesophageal adenocarcinoma 2005166:35—46。现在讨论根据本发明最适宜的标记物。我们描述具有潜力作为生物标记物以用于本发明(例如用于分析用胶囊海绵收集的細胞)的基因。因此，我们公开用于检测巴雷特食道的生物标记物。下表给出在实验方法的各阶段中基因断裂的数目。方法进行得越远，则具体基因越可能是更好的标记物。
方法/类型_公开數据集内部数据集
异常调节的基因謂191
采 W PCR1820由 PCR 确认39
采J+]j免疫组织化予法3IE在 行
由免疫组织化学法确认2N/A
采W胶囊海绵的基W2N/A根据以下来选择来自采用PCR的内部数据集的20个基因-高水平表达和高统计显著性-适宜抗体的存在现在更详细地讨论特异性标记物表I :目前与胶囊海绵一起使用的3个标记物
标记物(如基因)名称详情，如基園库登录号m
阿尔新藍書基_靶标，而是繼■化学着色技术
Mcm2NMJ)04526Mem 2 WM-J T 鱗軟鑛脑癌
TFF3NMJ)03226表2 :在PCR水平下确认的11个标记物。(如果需要，可以在蛋白水平下 进行确
认。)标B物名称详情》如基園库晝录号
ABPlNMJJO1091
DDCMMJ)00790 NM^OO 1082971
HOXClONMJ) 17409
KCN E3NMJW5472
LAMC2NM—005562 NM^OI 8891 MUC13NM—033049
MUCl 7NM^OO 1040105
NMUR2NM—020167
PIGRNM—002644
TSPANlNM—005727
HOXB5NM-002147表3 :在巴雷特与正常食道和胃贲门之间差异性表达的161个基因。将基因以最有利至最不优选来排列(最高的统计显著性和表达水平至最低的显著性和表达水平)。基園》号基園库覺录号
RNF217NMJ52553
CCL28NMJ 48672
AGR3NMJ76813
CFTRNM—000492
PAQR5NMJWl 104554 NMJ) 17705
BNIP3NM—004052
GOLMlNMJ77937
PLA2G10NM—003561
KCN KSNM—003740
ML-STDINMJ) 18099
SLC16A7NM—004731
NFE2L2NMJM)6164
CGNLlNM—032866
CALML4NM—001031733 NMJI33429
ACSLSNM—016234NM 一2033S0 NM—203379
KRT8NM—002273
TMC7NM—024847
FATNM—005245
CES3NM—024922
SLC7A7NM_003982
REG4NMJB204权利要求
1.一种可吞咽的细胞取样装置，其包含能够从食道的表面上收集细胞的磨料，和用于收回的工具，其中所述用于收回的工具包含绳，其特征在于所述绳通过套结连接至所述磨料。
2.根据权利要求I所述的装置，其中所述套结为双反手结。
3.根据权利要求I或2所述的装置，其中所述磨料是可压缩的。
4.根据任一前述权利要求所述的装置，其中所述磨料包含网状聚氨酷。
5.根据任一前述权利要求所述的装置，其中所述绳经由设置在所述磨料的表面下方的绳的环而连接至所述磨料，所述环由所述套结闭合。
6.根据任一前述权利要求所述的装置，其中所述磨料被压缩，并且其中所述磨料通过可溶性胶囊而維持在压缩状态。
7.根据权利要求6所述的装置，其中所述可溶性胶囊包含明胶胶囊。
8.根据权利要求7所述的装置，其中在浸入30°C水中后5分钟内，所述胶囊能够溶解并且所述可压缩的磨料能够回复至其未压缩的尺寸。
9.根据任一前述权利要求所述的装置，其中所述装置在远离可吞咽的磨料的末端包含不可吞咽的元件。
10.ー种试剂盒，其包含根据任一前述权利要求所述的装置，和用于检测细胞标记物的试剂。
11.一种用于在受试者中帮助诊断巴雷特食道或巴雷特相关的发育异常的方法，所述方法包含用根据权利要求I至9中任一项所述的装置对所述受试者的食道的细胞表面取样以及分析细胞的细胞标记物，其中这种标记物的检测指示巴雷特或巴雷特相关的发育异常的存在的增加的可能性。
12.根据权利要求10所述的试剂盒或根据权利要求11所述的方法，其中所述标记物选自表I所示的组。
13.根据权利要求10所述的试剂盒或根据权利要求11所述的方法，其中所述标记物选自表2所示的组。
14.根据权利要求10所述的试剂盒或根据权利要求11所述的方法，其中所述标记物选自表3所示的组。
15.ー种装置、试剂盒或方法，其參考ー个或多个附图
在本文中公开。
全文摘要
本发明涉及可吞咽的细胞取样装置，其包含能够从食道的表面上收集细胞的磨料，和用于收回的工具，其中所述用于收回的工具包含绳，其特征在于该绳通过套结而连接至磨料。本发明还涉及包含所述细胞取样装置的试剂盒和方法。
文档编号A61B10/02GK102711628SQ201080061260
公开日2012年10月3日 申请日期2010年11月11日 优先权日2009年11月13日
发明者丽贝卡·C·菲茨杰拉德, 皮埃尔·劳-西里埃, 苏尼·苏达尔斯汉·R·卡德里 申请人:医药研究委员会