专利名称：黄花草木犀总皂苷及其制备方法和药物用途的制作方法
技术领域：
本发明属于中药领域，涉及一种从黄花草木犀中提取获得的总皂苷，及该总皂苷制备方法和其药物用途。
背景技术：
黄花草木犀(Melilotus. officinalis. L.)是豆科草木犀属的一年生或二年生草本植物，又名黄香草木犀。目前，对黄花草木犀中香豆素类化合物研究较多，并就富含香豆素类化合物的草木犀提取物及富含黄酮、多酚和香豆素类物质的草木犀提取物在镇痛、止血及消炎等方面申报了专利。皂苷(saponins)是一类以三萜或留体为苷元具有较高分子量的糖苷类化合物，皂苷类化合物广泛分布于植物之中，是许多中药的重要生物活性成分， 已成国内外研究的热门课题。而目前国内外对黄花草木犀总皂苷类化学成分分离纯化技术及药理活性研究的还是空白。
发明内容
本发明提供一种黄花草木犀总皂苷及其制备方法和药物用途。本发明黄花草木犀总皂苷是由下列制法得到的(1)取黄花草木犀干燥全草，加入40 90%有机溶剂提取2 4次，每次0. 5 3小时，合并提取液，提取液浓缩，干燥，得提取物；(2)将此提取物以水溶解，通过大孔树脂柱，先用水洗至中性，再以10% 20%乙醇洗脱，至洗脱液无色，再用50% 80%乙醇洗脱，收集50% 80%乙醇洗脱液，浓缩干燥，得含量20% 90%黄花草木犀总皂苷。有机溶剂采用乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮；提取方法包括加热回流法、超声提取法、超临界提取法、浸渍法、微波法；大孔树脂采用SP825、D201、DS401、DS100、AB8、HPD600、HPD100, DlOU DM301、 DM130。本发明在制备抗炎、消肿、止血、抗肿瘤药物中的应用。本发明所指的肿瘤是乳腺癌、前列腺癌、腮腺癌、肺癌、肠癌及骨肉瘤。本发明还提供用本发明的草木犀总皂苷以及药学上可接受的载体或赋形剂制备的药物制剂。这些药物制剂选自以下剂型片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、 膏剂、口服液、混悬齐 、溶液齐 、气雾齐 、注射剂，注射乳齐 、冻干粉针，还可以根据需要制备成缓释或控释制剂。本发明的含有草木犀总皂苷的药物制剂，在制备药物制剂时可加入药物可接受的载体，所述药物可接受的载体来自抗氧剂、鏊合剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、 溶剂、缓释材料、肠溶材料、PH调节剂、矫味剂、色素等，常用载体如甘露糖醇、右旋糖苷、 乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化钠、硅衍生物、纤维素、纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、聚乙二醇、环糊精、磷脂类材料、 滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙等。本发明通过对黄花草木犀各有效部位的研究，发现富含总皂苷的草木犀提取物 总皂苷含量为20% 90%，具有较好的抗炎、消肿、止血、抑制肿瘤乳腺癌、前列腺癌、腮腺癌、肺癌、肠癌及骨肉瘤活性。本发明的有益效果填补了制备草木犀总皂苷的空白并扩展了其在医药领域的应用范围，从而提高了该类制剂在国际市场的况竞争力。口服一次200mg 600mg，每日两次。
图1是样品最大吸收图2是标准曲线图3是CMX-M对MCF-7细胞增殖的抑制作用图4是CMX-M对PC3M细胞增殖的抑制作用图5是CMX-M对ACC细胞增殖的抑制作用图6A是乳腺癌MCF-7对照组细胞形态图6B是乳腺癌MCF-7经CMX组作用后细胞形态图7A是腮腺癌ACC对照组细胞形态图7B是腮腺癌ACC经CMX组作用后细胞形态图8A是前列腺癌PC3M对照组细胞形态图8B是前列腺癌PC3M经CMX组作用后细胞形态图
图9A是肠癌SW620对照组细胞形态图9B是肠癌SW620经CMX组作用后细胞形态图IOA是肺癌A549对照组细胞形态图IOB是肺癌A549经CMX组作用后细胞形态图。
具体实施例方式实施例1(1)取黄花草木犀干燥全草，加入40%乙醇加热回流提取2次，每次3小时，合并提取液，提取液浓缩，干燥，得提取物；(2)将此提取物以水溶解，通过大孔树脂DlOl，先用水洗至中性，再以10%乙醇洗脱，至洗脱液无色，再用50 %乙醇洗脱，最后收集50 %乙醇洗脱液浓缩干燥，得到含量 20% 90%的黄花草木犀总皂苷。实施例2(1)取黄花草木犀干燥全草，加入65%乙醇加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，提取液浓缩，干燥，得提取物；(2)将此提取物以水溶解，通过大孔树脂D201，先用水洗至中性，再以15%乙醇洗脱，至洗脱液无色，再用65 %乙醇洗脱，最后收集65 %乙醇洗脱液浓缩干燥，得到含量 20% 90%的黄花草木犀总皂苷。
实施例3(1)取黄花草木犀干燥全草，加入90%乙醇加热回流提取4次，每次0. 5小时，合并提取液，提取液浓缩，干燥，得提取物，(2)将此提取物以水溶解，通过大孔树脂AB8，先用水洗至中性，再以20%乙醇洗脱，至洗脱液无色，再用80 %乙醇洗脱，最后收集80 %乙醇洗脱液浓缩干燥，得到含量 20% 90%的黄花草木犀总皂苷。在实施例中，有机溶剂还可选取甲醇、乙酸乙酯、丙酮，提取方法采取超声提取法、 超临界提取法、浸渍法、微波法，大孔树脂选取SP825、DS401、DS100、HPD600、HPD100、DM301、 DM130。下面通过实验例对本发明作进一步说明。实验例一、黄花草木犀总皂苷的提取方法的研究实验仪器与材料超声提取器(KQ-250B型)、超临界萃取器(HA420-40-96-EX型)、渗漉器、电子天平(DT100型)、UV-1700(日本岛津)、HWC3L-1型微波萃取器(天水华圆制药设备广州分公司)、圆底烧瓶、冷凝管、其余试剂均为分析级。实验方法1、总皂苷提取方法的研究(1)加热回流提取法取黄花草木犀干燥全草(粉碎2 如m) 4份，每份各50g，分别加入40 90%有机溶剂(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮)250 350ml (溶剂量为药材量的5 7倍)，加热回流提取2 4次，每次0. 5 3小时。合并提取液，60 80°C回收溶剂，60 80°C减压干燥得干品，计算收率，结果见表1。(2)超声法提取法取黄花草木犀干燥全草(粗粉)4份，每份各50g，分别加入40 90%有机溶剂 (乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)250 350ml (溶剂量为药材量的5 7倍)，超声(30 60KHZ)提取2 4次，每次0. 5 1小时。合并提取液，60 80°C回收溶剂，60 80°C减压干燥得干品，计算收率，结果见表2。(3)超临界提取法取黄花草木犀干燥全草(粗粉)50g，投入萃取釜中，设置分离釜I温度40°C、分离釜I压力7. OMPa、分离釜II压力6MPa，温度!35°C，在萃取压力20 50Mpa，萃取温度30 50°C，萃取时间1 3小时，C02流量20 30L · h，萃取级数1 2，乙醇夹带剂浓度25 70%条件提取总皂苷。萃取达到预定时间后，收集提取物，除去水分称其质量，计算得率，结果见表3。(4)浸渍提取法取黄花草木犀干燥全草(20 60目)4份，每份各50g，分别加入40 90%有机溶剂(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)250 350ml (溶剂量为药材量的5 7倍)，浸泡提取2 4次，每次12 48小时。合并提取液，60 80°C回收溶剂，60 80°C减压干燥得干品，计算收率，结果见表4。(5)渗漉提取法
取黄花草木犀干燥全草(40 100目)4份，每份各50g，分别加入40 90%有机溶剂(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)50 IOOml (溶剂量为药材量的1 2倍)浸泡2 4小时，装入渗漉器中，缓缓从渗漉器顶部加40 90%有机溶剂(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)250 350ml (溶剂量为药材量的5 7倍)，放置M 48小时后打开下口开关，使渗漉液缓缓流出。60 80°C回收溶剂，60 80°C减压干燥得干品，计算收率，结果见表5。(6)微波提取法取黄花草木犀干燥全草(40 100目)4份，每份各50g，分别加入40 90%有机溶剂(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)4000 5000ml使用微波提取器提取，微波功率 (190 250W)提取2 4次，每次5 25min。合并提取液，过滤，60 80°C回收溶剂，60 80°C减压干燥得干品，计算收率，结果见表6。2、测定方法(1)最大吸收波长的确定①标准品溶液的制备精密称取黄花草木犀苷A对照品(自制)4. 40mg于25ml量瓶中，加甲醇超声使其完全溶解，并定容至刻度，使浓度为0. 176mg/ml。②样品溶液的制备取加热回流提取法所得干膏1. 0g，精密称定，用50ml水使其充分溶解，过滤，滤液置分液漏斗中，用等量的水饱和正丁醇萃取三次，合并萃取液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至IOOml容量瓶中，定容至刻度，为样品溶液。③最大吸收波长的测定分别取上述标准品溶液及样品溶液各0. 5ml，分别置于IOml具塞试管中，沸水浴中挥干，依次加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.細1，高氯酸1. 6ml，密塞，于65°C水浴中加热20min，取出，冰水浴中冷却后加入冰醋酸8ml，混勻，分别为对照品与样品液。以相应试剂为空白，在400 900nm波长范围内测定其吸收波长。结果显示，标准品与样品溶液在Mlnm处均有最大吸收，所以将测定波长设为541nm，结果见图1。(2)标准曲线的绘制精密量取上述标准品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml于IOml具塞试管中，沸水浴中挥干，照2. 2. 3项下自“加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0. 4ml, ”起，在Mlnm下测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。得芦丁标准曲线为Y = 15. 602x+0. 0877, r = 0. 9995 (n =幻。表明黄花草木犀苷 A 在 0. 0088 0. 044mg/ml 范围内与吸光度呈良好的线形关系。结果见图2。(3)总皂苷含量测定取上述样品溶液各0. :3ml，置于IOml具塞试管中，沸水浴中挥干，依次加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.細1，高氯酸1. 6ml，密塞，于65°C水浴中加热20min，取出，冰水浴中冷却后加入冰醋酸8ml，混勻，以相应的试剂为空白对照，在Mlnm处测定吸光度，计
笪弁。计算公式
6黄花草木犀总皂苷含量
权利要求
1.一种黄花草木犀总皂苷，其特征在于是由下列制法得到的(1)取黄花草木犀干燥全草，加入40 90%有机溶剂提取2 4次，每次0.5 3小时，合并提取液，提取液浓缩，干燥，得提取物；(2)将此提取物以水溶解，通过大孔树脂柱，先用水洗至中性，再以10% 20%乙醇洗脱，至洗脱液无色，再用50% 80%乙醇洗脱，收集50% 80%乙醇洗脱液，浓缩干燥，得含量20% 90%黄花草木犀总皂苷。
2.根据权利要求1所述的黄花草木犀总皂苷，其特征在于有机溶剂采用乙醇、甲醇、 乙酸乙酯、丙酮。
3.根据权利要求1所述的黄花草木犀总皂苷，其特征在于提取方法包括加热回流法、超声提取法、超临界提取法、浸渍法或微波法。
4.根据权利要求1所述的黄花草木犀总皂苷，其特征在于大孔树脂采用SP825、D201、 DS401、DS100、AB8、HPD600、HPD100、D101、DM301 或 DM130。
5.如权利要求1所述的黄花草木犀总皂苷的制备方法。
6.如权利要求1所述的黄花草木犀总皂苷在制备抗炎、消肿、止血、抗肿瘤药物中的应用。
7.如权利要求6所述的黄花草木犀总皂苷在制备抗炎、消肿、止血、抗肿瘤药物中的应用，其特征在于肿瘤是乳腺癌、前列腺癌、腮腺癌、肺癌、肠癌及骨肉瘤。
全文摘要
本发明涉及黄花草木犀总皂苷及其制备方法和药物用途，属于中药领域。取黄花草木犀干燥全草，加入40～90%有机溶剂提取2～4次，每次0.5～3小时，合并提取液，提取液浓缩，干燥，得提取物；将此提取物以水溶解，通过大孔树脂柱，先用水洗至中性，再以10%～20%乙醇洗脱，至洗脱液无色，再用50%～80%乙醇洗脱，收集50%～80%乙醇洗脱液，浓缩干燥，得含量20%～90%黄花草木犀总皂苷。本发明在制备抗炎、消肿、止血、抗肿瘤药物中的应用。本发明填补了制备草木犀总皂苷的空白并扩展了其在医药领域的应用范围。
文档编号A61P7/04GK102178725SQ20111011917
公开日2011年9月14日 申请日期2011年5月10日 优先权日2011年5月10日
发明者严铭铭, 于红威, 吴岩, 周媛, 张银玲, 杨智, 王医术, 赵大庆 申请人:长春中医药大学