苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中的用图
【技术领域】
[0001]本发明属于医药领域，涉及苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中的用途。
【背景技术】
[0002]糖尿病肾病(diabeticnephropathy, DN)是糖尿病(diabetes mellitus, DM)常见的并发症，已成为糖尿病病死率增加的重要的原因。以往研究结果也发现，第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因编码的蛋白(phosphatase and tensin homo logdeleted on chromosome ten, PTEN)不仅是肿瘤抑制因子,而且在肾纤维化过程中表现出抗纤维化的作用。但是在糖尿病大鼠肾组织中PTEN表达显著减少，使TGF-β过度激活磷脂酸肌醇 3 激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶 B (protein kinaseB, PKB/Akt)通路，促进DN的发生发展[1]。PTEN作为PI3K/Akt的负调控因子，共同参与了 DN小管上皮细胞的分化、脂质代谢以及系膜细胞增生肥大等生理活动[2]。预防缓解糖尿病的并发症对于改善病人的生活质量具有非常重要的意义，苦瓜不仅有良好的食用价值，而且有抗病毒、抗癌、降血糖等多种药用功效，然而至于苦瓜皂苷缓解糖尿病发展的机制以及它能否有效缓解糖尿病肾病的发生均尚未明确。
[0003]
【发明内容】
[0004]要解决的技术问题:本发明的目的是明确苦瓜皂苷在治疗和缓解糖尿病肾病中的作用，进而明确苦瓜在治疗糖尿病肾病药物中的用途。
[0005]技术方案:本发明公开了苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中的用途，所述的治疗糖尿病肾病药物包括苦瓜皂苷和其他辅料。
[0006]优选的，所述的苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中的用途，所述的治疗糖尿病肾病药物剂型包括口服制剂、吸入剂、注射剂、栓剂。
[0007]优选的，所述的苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中的用途，所述的口服制剂包括片剂、丸剂、胶囊、颗粒、膏剂、脂质体、酊剂、汤剂。
[0008]优选的，所述的苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中的用途，苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中重量比为0.001wt%-50wt%o
[0009]进一步优选的，所述的苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中的用途，苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中重量比为0.01wt%-10wt%o
[0010]更进一步优选的，所述的苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中的用途，苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中重量比为0.lwt%_5wt%。
[0011]所述的苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中的用途，所述的其他辅料为粘合剂、润滑剂、甜味剂、润湿剂、载体、填充剂中的一种或几种。
[0012]有益效果:本发明通过明确苦瓜皂苷在缓解和治疗糖尿病肾病中的效果，进而对苦瓜皂苷在治疗糖尿病肾病药物中的用途进行开发，提出了含有苦瓜皂苷的治疗糖尿病肾病药物的新型药物。
【附图说明】
[0013]图1为免疫组织化学(Envis1n法)检测各组实验小鼠肾组织中p_PI3Kρ85 (Υ458)、p-Akt (Ser 473)及 PTEN 三种蛋白的表达情况(400Χ)。
[0014]图2为Western blotting检测各组中相关蛋白的表达情况。
[0015]图3为Western blotting检测各组中相关蛋白及相对灰度值分析。
[0016]
【具体实施方式】
[0017]实施例1
一、材料
1.药物苦瓜皂苷:相当于生药71.9g/Kg，购于由辽宁省中药现代化工程技术中心，用蒸馏水配制。
[0018]2.试剂:饲料配方基础饲料78.8%、蛋黄粉10%、猪油10%、胆固醇1%、胆酸钠0.2%);胰岛素注射液购自南京新百药业有限公司；链尿佐菌素(STZ)粉剂购自美国Sigma公司，格列本脲购自浙江嘉兴生化制药厂；ΡΤΕΝ、β-actin抗体购自Santa Cruz公司；SABC试剂盒和DAB试剂盒均购自武汉博士德生物技术有限公司；PI3K ρ85、ρ_ΡΙ3Κρ85 (Υ458)、Akt 和 p-Akt (Ser 473)抗体购自 B1world 公司；HRP 标记的二抗购自 Jackson公司。
[0019]3.动物:清洁级小鼠C57BL/6J，18_24g，实验动物均为雄性小鼠，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号为SCXK(沪)2012-0002，饲养在室温保持在22°C?25°C，湿度约50%的动物房中，每昼夜给予12h光照和12h黑暗。
[0020]二、方法
1.动物模型的制备和给药:高脂饮食2个月联合小剂量链尿佐菌素(STZ)制备糖尿病肾病小鼠模型，STZ注射剂量为85mg/kg，于高脂饮食诱导3周后开始注射，连续注射两次，每次间隔三天，正常对照组注射等量的柠檬酸缓冲液。注射链脲佐菌素(STZ)3天后，禁食12h，尾静脉取血测其空腹血糖>350mg/dl。实验分为模型组(A组)、格列本脲组(B组)、正常对照组(C组)、苦瓜皂苷低剂量组(Dl组)、中剂量组(D2组)、高剂量组(D3组)。B组采用优降糖蒸馏水溶液0.16 g-lkg-1 d-1灌胃，连续给药14天；D1组、D2组、D3组分别为给予苦瓜皂苷30、60、120mg-lkg-ld-l灌胃，连续给药14天。
[0021]2.组织芯片制备及免疫组化:肾脏组织标本经4%多聚甲醛固定后常规石蜡包埋切片，HE染色后，在显微镜下标记定位，制备成(2X2)的组织阵列的独立蜡块(每个标本取直径为1.6mm的组织芯片)，芯片技术的专利号为:200920350099.2。免疫组化按Envis1n免疫组化法说明书进行。
[0022]3.免疫组化结果判定:PTEN、PI3K/Akt阳性表达于肿瘤细胞核及细胞浆呈现棕黄色颗粒为阳性信号。在图像采集过程中保证设备参数一致性，每例标本在显微镜下随机选取5个视野(X400)，选择视野中呈棕黄色阳性反应的区域并统计这些区域的累积光密度值(1D)和面积(Area),计算光密度平均值10D/area( mean density )即为该标本的免疫组化评分(IHS)。
[0023]4.组织蛋白提取及Western bloting:剪碎20mg?40 mg新鲜的肾脏组织,加入1.0 ml预冷的RIPA裂解液，置冰浴用匀浆器充分匀浆后，冰浴10 min。将匀浆液转移至EP管中，12 000 Xg,4 °C离心15 min,取上清加等体积的2X loadding buffer,于100°C加热5min，蛋白质样品的分离用100 g/L SDS-PAGE，每泳道上样量为20 μ g，100 V电压，电泳90?120 min后，电转印至PVDF膜上。将膜相应的一抗抗体，4 °C孵育16 h，然后与相应的HRP标志的IgG 二抗(1:10 000)，室温孵育I h ;然后与内参鼠抗β-a