Hplc同时测定裸花紫珠制剂中三种苯乙醇苷类成分的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物检测技术领域，特别涉及同时测定裸花紫珠制剂中H种苯己醇巧 类成分的方法。
【背景技术】
[0002] 裸花紫珠制剂如裸花紫珠片、裸花紫珠栓、裸花紫珠分散片等，具有镇痛、消炎、解 毒、收敛止血等功效，其药效是多种活性成分共同作用的结果，目前裸花紫珠制剂如裸花紫 珠片的检测的方法主要为W分光光度法测定总黄丽含量，W高效液相法测定指标性成分如 木犀草素、毛蕊花糖巧、连翅醋巧等。紫珠属化学成分研究表明苯己醇巧类成分是该属植物 的主要成分类群之一。申请人通过研究也发现连翅醋巧B、毛蕊花糖巧与异毛蕊花糖巧是裸 花紫珠片的主要成分。同时现代药理研究表明连翅醋巧B、毛蕊花糖巧与异毛蕊花糖巧具 有抗血栓、降血脂、抗氧化、抑制肝细胞毒性和调节非特异性免疫反应等多方面的作用。但 目前还没有同时测定该H种成分的文献报道。《中成药》2011年3月收载的陈德金等《HPLC 法测定裸花紫珠片中毛蕊花糖巧及连翅醋巧的含量》，其样品处理繁琐，且没有检测出主要 成分异毛蕊花糖巧等问题。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的就是针对裸花紫珠制剂的检测现状，为有效地控制裸花紫珠制剂的 内在质量，提供一种同时测定裸花紫珠制剂中H种苯己醇巧类成分的方法，有利于对裸花 紫珠制剂产品质量的有效控制及保证其临床疗效。
[0004] 一种同时测定裸花紫珠制剂中H种苯己醇巧类成分的方法，包括如下步骤：
[0005] (1)对照品溶液的制备：
[0006] 分别称取连翅醋巧、毛蕊花糖巧、异毛蕊花糖巧对照品，置于容量瓶中，加25%? 75%己醇或甲醇，超声溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；
[0007] (2)供试品溶液的制备：
[0008] 裸花紫珠制剂供试品溶液的制备；取裸花紫珠制剂，置锥形瓶中，加25%?75%己 醇或甲醇，称重，超声处理30?90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤 膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液；
[0009] (3)HPLC 检测：
[0010] 分别吸取步骤（1)和（2)所得的裸花紫珠对照品溶液和裸花紫珠制剂供试品溶 液，分别注入高效液相色谱仪中进行测定；
[0011] 其中，色谱条件为：色谱柱为Ci8反相色谱柱；紫外检测器；柱温为30?35C ;检 测波长为320?340皿；流动相A为己膳，流动相B为0. 1?0. 5%磯酸溶液，流速为0. 8? 1. 2ml/min ;分析时间25分钟；等度洗脱，流动相A:流动相B = 18?20:82?80。
[0012] 所述步骤（1)供试品溶液的制备优选为下述方法进行：
[0013] 分别称取连翅醋巧对照品11. 70mg、毛蕊花糖巧对照品23. 15mg、异毛蕊花糖巧对 照品26. 75mg，置于容量瓶中，加25%?75%己醇或甲醇，超声溶解并定容至刻度，摇匀，制成 对照品溶液。
[0014] 所述步骤（2)供试品溶液的制备优选为下述方法进行：
[0015] a、裸花紫珠制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、栓剂：取裸花紫珠制剂内容物，研细，称 取0. 1?3g，置锥形瓶中，加25%?75%己醇或甲醇25?100ml，称重，超声处理30?90min， 放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂 供试品溶液；
[0016] b、裸花紫珠制剂为合剂、口服液；取裸花紫珠制剂混匀，精密量取5?10ml，置 25?100ml容量瓶中，加25%?75%己醇或甲醇20?90ml，超声处理30?90min，放冷，用 同种溶剂稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液。
[0017] 所述步骤（3)中的色谱柱优选柱长为250mm的反相色谱柱。
[0018] 所述步骤（3)中检测波长优选为327皿。
[0019] 所述步骤（3)中流动相B优选为0. 4%磯酸溶液。
[0020] 所述步骤（3)中流速优选为Iml/min。
[0021] 所述步骤（1)和（2)中己醇或甲醇浓度优选为50%。
[0022] 所述步骤（3)中流动相A:流动相B的体积比优选为18. 2:81. 8。
[0023] 所述步骤（2)中超声处理时间优选为45分钟。
[0024] 本发明所述裸花紫珠制剂为：片剂、胶囊剂、颗粒剂、栓剂、合剂、口服液。
[0025] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明方法的操作简便、准确度高、专属 性好、精密度较高、重现性良好，有利于保证裸花紫珠制剂的质量稳定和临床疗效。
【附图说明】
[0026] 图1为检测波长3D图；
[0027] 图2为H种标准品的HPLC色谱图；
[0028] 图3为裸花紫珠片HPLC色谱图；
[0029] 图4为连翅醋巧B对照品标准曲线图；
[0030] 图5为毛蕊花糖巧对照品标准曲线图；
[0031] 图6为异毛蕊花糖巧对照品标准曲线图；
[0032] 图7为连翅醋巧B检测限；
[0033] 图8为毛蕊花糖巧检测限；
[0034] 图9为异毛蕊花糖巧检测限；
【具体实施方式】
[00巧]下面通过具体实施例对本发明作进一步说明，该些实施例仅用于说明本发明，并 不限制本发明的范围。实施例1同时测定裸花紫珠片中连翅醋巧B、毛蕊花糖巧、异毛蕊花 糖巧的方法
[0036] 1. 1药品与试剂
[0037] 对照品连翅醋巧B (批号；111811-201001，含量测定用，中国食品药品检定研究 院)、毛蕊花糖巧(批号；111530-201208，含量测定用，中国食品药品检定研究院)、异毛蕊 花糖巧(批号；Y-073-121023,含量测定用，成都瑞芬思生物科技有限公司），裸花紫珠片： 0. 5g/ 片，批号分别为 110930、110730、110280、110990、110590、110360、110510、110580、 110840、111160,由海南九芝堂药业有限公司提供。己膳为色谱纯(美国TEDIA公司），水为 超纯水，其余试剂均为分析纯。
[003引 1. 2仪器
[0039] Agilentl200高效液相色谱仪；KQ3200DE型数控超声波清洗器（昆山市仪器有限 公司）纯水系统(美国Millipore公司）；16K台式离也机(珠海黑马医学仪器有限 公司）;Z0RBAX SB C-18 分析柱（4. 6mmX250mm，5]im，美国 Agilent 公司）;BS110S 电子天平 (北京赛多利斯天平有限公司）。
[0040] 2方法与结果
[0041] 2. 1波长筛选、流动相选择、提取方法与时间选择
[004引采用SPD-M20A检测器对样品进行了全波长扫描(见图1)，根据3D效果图，综合峰 形、峰高、峰面积等因素，选择327nm为检测波长。
[0043] 考察了不同比例的水-己膳，己膳-磯酸溶液等流动相对样品的洗脱效果，综合考 虑图谱分离度、柱效、对称因子等结果，最后选择己膳-0.4%磯酸为流动相。又根据样品的 检测结果(见图2至图3)，发现H种苯己醇巧类成分色谱峰在检测25min之内全部出峰，从 而确定检测时间为25min。
[0044] 称取裸花紫珠片0. 5g，分别用水，25%甲醇，50%甲醇，75%甲醇，甲醇，25%己醇，50〇/〇 己醇，75%己醇，无水己醇超声提取。通过检测结果发现，50%己醇为溶剂提取，H个指标性 成分总体含量比较大，因此选择50%己醇为提取溶剂。随后考察精密加入50%己醇25ml， 50ml，75ml，100ml超声提取的效果，结果表明，精密加入50%己醇50ml已经能将化学成分提 取完全。最后考察超声提取时间对提取效果的影响，分别采用15min，30min，45min，60min 超声提取，结果显示随着提取时间增长，超声提取时间30min与45min指标性成分含量无明 显增大，为确保提取完全，选择超声45min为最终超声提取时间。
[0045] 通过对提取溶剂、方法、体积、时间考察，最终确定选择50%己醇50ml超声提取 45min为片剂提取方法。
[0046] 表1提取溶剂结果比较表
[0047]
【主权项】
1. 一种同时测定裸花紫珠制剂中三种苯乙醇苷类成分的方法，包括如下步骤： (1) 对照品溶液的制备： 分别称取连翘酯苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品，置于容量瓶中，加25%?75%乙 醇或甲醇，超声溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液； (2) 供试品溶液的制备： 裸花紫珠制剂供试品溶液的制备：取裸花紫珠制剂，置锥形瓶或容量瓶中，加25%? 75%乙醇或甲醇，称重，超声处理30?90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液； (3) HPLC 检测： 分别吸取步骤（1)和（2)所得的对照品溶液和裸花紫珠制剂供试品溶液，分别注入高 效液相色谱仪中进行测定； 其中，色谱条件为：色谱柱为C18反相色谱柱；紫外检测器；柱温为30?35°C;检测波长 为320?340nm ;流动相A为乙腈，流动相B为0. 1?0. 5%磷酸溶液，流速为0. 8?1. 2ml/ min ;分析时间25分钟；等度洗脱，流动相A:流动相B = 18?20:82?80。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（1)对照品溶液的制备按照下述 方法进行： 分别称取连翘酯苷对照品11. 70mg、毛蕊花糖苷对照品23. 15mg、异毛蕊花糖苷对照品 26. 75mg，置于容量瓶中，加25%?75%乙醇或甲醇，超声溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照 品溶液。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（2)供试品溶液的制备按照下述 方法进行： 裸花紫珠制剂供试品溶液的制备： a、 裸花紫珠制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、栓剂：取裸花紫珠制剂内容物，研细，称取 0. 1?3g，置锥形瓶中，加25%?75%乙醇或甲醇25?100ml，称重，超声处理30?90min， 放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂 供试品溶液； b、 裸花紫珠制剂为合剂、口服液：取裸花紫珠制剂混匀，精密量取5?10ml，置25? 100ml容量瓶中，加25%?75%乙醇或甲醇20?90ml，超声处理30?90min，放冷，用同种 溶剂稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液。
4. 根据权利要求1-3任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述步骤（3)中的色谱柱 是柱长为250mm的C18反相色谱柱。
5. 根据权利要求1-3任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述步骤（3)中检测波长 为 327nm。
6. 根据权利要求1-3任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述步骤（3)中流动相B 为0. 4%磷酸溶液。
7. 根据权利要求1-3任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述步骤（3)中流速为 0? 8ml/min〇
8. 根据权利要求1-3任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述步骤（1)和（2)中乙 醇或甲醇浓度为50%。
9. 根据权利要求1-3任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述步骤（3)中流动相 A :流动相 B = 18. 2:81. 8。
10. 根据权利要求1-3任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述步骤（2)中超声处 理时间为45分钟。
【专利摘要】本发明公开了一种同时测定裸花紫珠制剂中三种苯乙醇苷类成分的方法。方法包括：（1）对照品溶液的制备；（2）供试品溶液的制备；（3）HPLC检测。本发明方法的操作简便、准确度高、专属性好、精密度较高、重现性良好，有利于保证裸花紫珠制剂的质量稳定和临床疗效。
【IPC分类】G01N30-02, G01N30-06
【公开号】CN104597139
【申请号】CN201310528326
【发明人】李典鹏, 卢凤来, 颜小捷, 谷陟欣, 黄胜, 张妮瑜, 袁莉, 任洁芳
【申请人】九芝堂股份有限公司
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2013年10月30日