专利名称：一种从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法
技术领域：
本发明属于天然药物技术领域，具体涉及一种从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法。
背景技术：
车前子(Semenplantaginis)是我国传统药材之一，又名当道、牛遗、蛤蟆衣，此夕卜，还有称车前菜、牛舌草、车轮菜、猪耳草等，始见于《诗经》，药用始载于《神农本草经》，并被列为药中上品。车前子为车前科植物平车前(Plantago depressa Willd.)，又称小粒车前或车前 (Plantago asiatica Lirm.)，又称大粒车前的干燥种子，在全国各地均有分布，资源广泛。 具有利水通淋、渗湿止泻、清肝明目、清热化痰的作用。车前子中含大量粘液质(多糖类化合物)(参见 Tomoda Masashi, Yokoi Maemi, Ishikawa Kazuyo. Plant Mucilages. XXIX. [J], asiatica. J. Chen Pharm Bull, 1981，29 (10) :2884_2887.以及ohn F Kennedy, Jasbir S Sandhu, David A T. Southgate. [J]. Carbohydrate Research, 1979, 75 265-274.)及车前子酸、胆碱、腺嘌呤、琥珀酸、蛋白质、微量元素等。含有黄酮类化合物主要有木犀草素、 高车前苷、车前苷等。三萜类化合物主要有熊果酸、齐墩果酸等。挥发油主要有2，6_ 二叔丁基对甲酚和3-叔丁基-4-羟基茴香醚等；环烯醚苷类化合物如桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸；苯乙醇苷类化合物毛蕊花糖苷等(参见王劭华，罗光明等.中药车前子的化学成分及药理学研究进展.亚太传统医药，2008，9 (9)，133-135.)。其中最具有开发前景的活性部位之一的就是苯乙醇苷类化合物，包含毛蕊花糖苷等。现代研究表明，苯乙醇苷类化合物(phenylethanoid glycosides)是一类含有 (羟基、甲氧基)取代苯乙基和(羟基、甲氧基)取代肉桂酰基，通常以B—葡萄糖为母核的含有酯键及氧苷键的天然糖苷，广泛存在于双子叶植物中，生物活性很强，受到植物化学及药学工作者的高度重视。近年来许多研究表明，该类化合物具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、增强记忆、保肝、强心等作用(参见靖会，佐建锋等.时珍国医国药· 2006,17(3) 440-441)。车前子在全国各地均有分布，来源广泛，价格低廉，药材中含量较高，从车前子提取苯乙醇苷类活性具有广阔的市场前景。车前子成分复杂，很多化合物结构和性质相近，因此，从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的提取分离较为困难，收率很低。
发明内容
本发明的发明目的是提供一种从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法，所得提取物中苯乙醇苷类成分质量百分含量在50%以上。 本发明提供的从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法，包括以下步骤步骤1 将车前子粉碎，用第一极性溶剂提取1-4次或回流提取或超声提取或冷浸或渗漉提取，抽滤出提取液；提取液离心或抽滤，分离出上清液；所述第一极性溶剂是0-100% C1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮与水的混合溶液或含酸或碱的上述溶剂；步骤2 将上清液混合于硅胶或硅藻土后或者直接将上清液用色谱进行精制，洗脱溶剂洗脱，收集富含苯乙醇苷类化合物的流份，浓缩干燥，得所述车前子提取物，所述车前子提取物中苯乙醇苷类活性成分的质量百分含量在50%以上，优选为50%-95% ；其中所述色谱为大孔吸附树脂色谱、聚酰胺色谱、正相硅胶或反相硅胶色谱或其组合。作为优选，步骤1所述第一极性溶剂是50-95% C1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮与水的混合溶液或含酸或碱的上述溶剂，所述酸或碱为强酸、强碱或弱酸、弱碱，优选为 0. 5% HCL、1%醋酸、0. 5% NaOH、或的Na2CO3,所述含酸或碱的上述溶剂优选为含0. 5% HCL、1%醋酸、0. 5% NaOH、或的Na2CO3的50-95% C1-C6烷基醇的水溶液、丙酮或丙酮与水的混合溶液。作为优选，所述C1-C6烷基醇为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇或它们组成的混合溶剂。作为优选，步骤2所述洗脱溶剂为水，C1-C6烷基醇，卤代烃，醚类溶剂，酮类溶剂， 酯类溶剂，以及其两种以上组成的混合溶剂。作为优选，步骤2所述洗脱溶剂为选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、甲基叔丁醚、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯。更优选所述洗脱溶剂为三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、甲醇和水组成的混合溶剂。用色谱进行精制，当所述色谱为大孔吸附树脂色谱，优选洗脱溶剂为水和10-75% 的乙醇或甲醇水溶液，提取物中苯乙醇苷类成分总含量在50%-60%;所述色谱为聚酰胺色谱，优选洗脱溶剂为水和10-75%的乙醇或甲醇水溶液，提取物中苯乙醇苷类成分总含量在 50% -60% ；所述色谱为反相硅胶色谱，优选洗脱溶剂为水和10-50%的乙醇水溶液或甲醇水溶液，提取物中苯乙醇苷类成分总含量在70% -95% ；所述色谱为正相硅胶，优选洗脱溶剂为三氯甲烷、乙酸乙酯、90-100%乙醇水溶液、甲醇或其组成的混合溶剂，提取物中苯乙醇苷类成分总含量在60% -80%。在本发明的具体实施方式
中，大孔树脂选自HP-20型大孔树脂或AB-8型大孔树脂，用乙醇水溶液梯度洗脱，富含苯乙醇苷成分存在于30%乙醇的洗脱液中；用聚酰胺柱进行精制时，富含苯乙醇苷成分存在于50%乙醇的洗脱液中，这与不同层析柱的填充物的理化特性相关。作为优选，步骤1所述用第一极性溶剂提取为每次加4-20BV的第一极性溶剂在 0V至溶剂回流的温度下提取。作为优选，步骤1提取液在分离上清前进行浓缩处理，优选浓缩为至提取液与车前子原料的体积质量比以ml/g计为0. 1-1 10-1。作为优选，步骤1所述提取温度范围为室温至溶剂回流的温度。本发明提供的从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法，所得提取物中苯乙醇苷类成分总含量在50 %以上，且检测到含有毛蕊花糖苷及其衍生物成分，毛蕊花糖苷结构如下所示
权利要求
1.一种从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法，包括以下步骤步骤ι 将车前子粉碎，用第一极性溶剂提取1-4次或回流提取或超声提取或冷浸或渗漉提取，抽滤出提取液；提取液离心或抽滤，分离出上清液；所述第一极性溶剂是0-100% C 1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮与水的混合溶液或含酸或碱的上述溶剂；步骤2 将上清液混合于硅胶或硅藻土后或者直接将上清液用色谱进行精制，洗脱溶剂洗脱，收集富含苯乙醇苷类化合物的流份，浓缩干燥，制得车前子提取物，所述车前子提取物中苯乙醇苷类活性成分的质量百分含量在50%以上；其中所述色谱为大孔吸附树脂色谱、聚酰胺色谱、正相硅胶或反相硅胶色谱或其组合。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一极性溶剂为50-95%C 1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮与水的混合溶液或含酸或碱的上述溶剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述C1-C6烷基醇为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇或它们组成的混合溶剂。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱溶剂为水，C1-C6烷基醇，卤代烃，醚类溶剂，酮类溶剂，酯类溶剂，以及其两种以上组成的混合溶剂。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱溶剂为选自甲醇、乙醇、异丙醇、 正丁醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、甲基叔丁醚、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱溶剂为三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、甲醇和水组成的混合溶剂。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱为大孔吸附树脂色谱，洗脱溶剂为水和10-75%的乙醇或甲醇水溶液。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱为聚酰胺色谱，洗脱溶剂为水和 10-75 %的乙醇水溶液或甲醇水溶液。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱为反相硅胶色谱，洗脱溶剂为水和10-50%的乙醇水溶液或甲醇水溶液。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱为正相硅胶，洗脱溶剂为三氯甲烷、乙酸乙酯、90-100%乙醇水溶液、甲醇或其组成的混合溶剂。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述用第一极性溶剂提取为每次加4-20BV的第一极性溶剂在0°C至溶剂回流的温度下提取。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1提取液在分离上清前进行浓缩处理，优选浓缩为至提取液与车前子原料的体积质量比以ml/g计为0.1-1 10-1。
13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，步骤1所述用第一极性溶剂提取温度范围为室温至溶剂回流的温度。
全文摘要
本发明公开了一种从车前子中提取苯乙醇苷类活性成分的方法，本发明所述方法采用溶剂提取，经色谱方法精制，得到提取物；所制得的提取物中有效成分苯乙醇苷类总含量在50％以上，方法简单，适合于工业化生产，具有工业应用前景。
文档编号C07H15/18GK102311466SQ20111024352
公开日2012年1月11日 申请日期2011年8月23日 优先权日2011年8月23日
发明者王振辉, 王珂, 赵大龙, 陈明霞 申请人:北京科莱博医药开发有限责任公司