肉苁蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了肉苁蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的应用， 申请人:通过实验证实肉苁蓉苯乙醇苷提取物可以通过抗缺氧、抗炎、抗氧化应激及调节水通道蛋白表达，使得生物体适应高原缺氧环境，预防脑水肿和肺水肿的发生。此外治疗给药实验证实肉苁蓉苯乙醇苷提取物可以降低慢性高原病大鼠四肢水肿发生率及死亡率，并能有效降低慢性高原病大鼠的肺动脉高压和心室肥厚程度，改善心肺病理改变。相应的，本发明还公开了一种含有肉苁蓉苯乙醇苷提取物的防治高原病的药物组合物。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明涉及肉苁蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的应用，属于药理学领域。 肉苁蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的应用
【背景技术】
[0002] 我国是世界上高原面积最大的国家，而我国地势整体呈西高东低分布，使得位于 西北及西部边陲的国界线主要为高原地形。新疆、西藏两个自治区面积占到我国总面积 3〇%以上，资源富集，拥有我国陆地边境线的很大部分，战略地位极为重要。新疆西藏矿藏 和旅游资源极其丰富，随着陆路国际通道的打通，两地的能源开发及旅游业将获得长足发 展，成为重要的经济支点。大力发展西部，对国家经济建设及稳定具有重要意义。西部一些 重要矿业和经济开发区海拔高度达到4000米至5000米，所以国家能源基地等四个基地的 建设以及旅游业的长足发展必然会带来大量的平原居住环境者进入高原环境，加上我国生 活在海拨3000米以上的人群有近6千万，所以防治由高原极端环境引发的高原病将极为重 要。
[0003] 常见的高原极端环境包含高寒低压低氧环境、干热的沙漠戈壁环境，高辐射环境 等重要组成因素 。高原病是由于人体对高原低压性缺氧不适应，导致机体病理生理上一系 列改变而引起的各种临床表现的总称。该病一般分为急性和慢性两类。急性高原病（Acute mountain sickness，AMS)指初入高原（海拔3000米以上）时出现的急性缺氧反应或疾 病，轻型急性高原病即急性高原反应；重型急性高原病又分为：高原脑水肿（high altitude cerebral edema'HACE)、高原肺水肿（high altitude pulmonary edema,HAPE)、混合型。慢 性高原病（Chronic mountain sickness，CMS)指原有急性高原病症状迁延不愈或抵高原后 半年以上方发病者。中国将慢性高原病又分为：高原心脏病、高原红细胞增多症、高原血压 异常、混合型慢性高原病 [1]。
[0004]目前急性高原病的治疗方法主要是预防为主，西药多采用地塞米松、乙酰唑胺、氨 茶碱等，会引起严重的不良反应。中药防治高原病在我国被公认为是一种有效的措施。在 这之中，银杏叶提取物的有效性尚存在争议，刺五加注射液仅适合高原低血压症的治疗。而 高原植物红景天提取物及其复方制剂应用较多，具有一定的预防效果。其中红景天苷具有 抗缺氧、抗氧化、抗疲劳、抗辐射作用，是预防高原反应的最有效成分之一。
[0005]中药肉苁蓉是肉苁蓉属植物的干燥带鳞叶的肉质茎，具有补肾壮阳、益精血等功 效。管花肉苁蓉（C_tubul〇Sa(Schrenk)Wight)主产于我国新疆南部，资源丰富。为目前 肉苁蓉的主要基源植物。
[0006]- 申请人:在长期研究中发现，肉苁蓉中的苷类成分具有抗氧化、抗衰老、清除自由 基、抗福射、提高免疫力和改善学习功能等作用，并且对脑缺血/脑缺血再灌注也有一定的 保护作用，可提高血液循环能力，对低氧诱导的氧化损害有强的抗氧化和细胞保护活性。具 备与红景天苷相似的药理作用并具有资源优势。
【发明内容】
[0007] 基于上述研究成果，本发明公开了肉苁蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的应 用。
[0008] 申请人:在实验过程中，利用西北地区人工实验舱模拟高原环境制备了急慢性高原 病大鼠模型，验证了肉苁蓉苯乙醇苷对其的防治作用。
[0009] 本发明的肉苁蓉苯乙醇苷提取物，包含松果菊苷（根据具体制备工艺的差别，占 总质量的15-75%左右）及毛蕊花糖苷，可以通过多种方法制备，尤其可以通过下述制备方 法获得（具体的制备实施例可参考CN1268341C)，所述制备方法包括下述步骤：
[0010] a)将管花肉苁蓉的肉质茎以第一极性溶剂加予萃取；
[0011] b)将步骤a)获得的萃取物加到装有疏水大孔隙聚合物的柱中，使得苯乙醇苷成 分吸附在聚合物上；
[0012] C)用第二极性溶剂作为流动相流洗液洗脱该柱以除去游离的化合物，在此情况 下，大部份的苯乙醇苷仍然吸附在聚合物上；
[0013] d)用第三极性溶剂将苯乙醇苷从聚合物上洗脱下来，得到含有苯乙醇苷的洗脱 液，除去含有苯乙醇苷洗脱液中的溶剂以得到干燥产物。
[0014] 在上述方法中，步骤a)的第一极性溶剂为水或水与乙醇的混合溶剂；所述的步骤 c)的第二极性溶剂为水，步骤d)的第三极性溶剂为甲醇、乙醇、水与甲醇的混合溶剂，或水 与乙醇的混合溶剂。
[0015] 由于肉苁蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中效果优异，因此本发明还公开了含有 肉苁蓉苯乙醇苷提取物的防治高原病的药物组合物，包括辅料、肉苁蓉苯乙醇苷提取物，肉 苁蓉苯乙醇苷提取物与辅料的重量比为1 : 99?99 : 1。
[0016] 上述的辅料，可根据具体剂型的需要，选择药学上任意可用的药用辅料，具体的剂 型包括但不限于口服液、片剂、丸剂、胶囊、注射剂、滴丸剂或膏剂。
[0017] 在上述药物组合物中，肉苁蓉苯乙醇苷提取物包含松果菊苷及毛蕊花糖苷。
【专利附图】
【附图说明】
[0018] 图1为各组大鼠脑组织病理结果（HEX400)，其中A-F依次为正常对照组、模型组、 大花红景天组、肉苁蓉苯乙醇苷提取物（PhGCs)低剂量组、肉苁蓉苯乙醇苷提取物（PhGCs) 中剂量组、肉苁蓉苯乙醇苷提取物（PhGCs)高剂量组；
[0019] 图2为各组大鼠脑组织AQP4表达量图（X400)，其中A-F依次为正常对照组、模型 组、大花红景天组、PhGCs低剂量组、PhGCs中剂量组、PhGCs高剂量组；
[0020] 图3为各组大鼠肺组织病理结果（HEX400)，其中A-F依次为正常对照组、模型组、 大花红景天组、PhGCs低剂量组、PhGCs中剂量组、PhGCs高剂量组；
[0021] 图4为各组大鼠肺组织AQP5表达结果（X400)，其中A-F依次为正常对照组、模型 组、大花红景天组、PhGCs低剂量组、PhGCs中剂量组、PhGCs高剂量组；
[0022] 图5为各组大鼠肺组织病理结果（HEX40)，其中A-F依次为正常对照组、模型组、 大花红景天组、PhGCs低剂量组、PhGCs中剂量组、PhGCs高剂量组；
[0023] 图6为各组大鼠右心室病理结果（HExlOO)，其中A-F依次为正常对照组、模型组、 大花红景天组、PhGCs低剂量组、PhGCs中剂量组、PhGCs高剂量组；
[0024] 图7为各组大鼠肺组织HIF1 α表达图（ΙΟΟχ)，其中A-F依次为正常对照组、模型 组、大花红景天组、PhGCs低剂量组、PhGCs中剂量组、PhGCs高剂量组；
[0025] 图8为各组大鼠肺组织VEGF表达图（ΙΟΟχ)，其中A-F依次为正常对照组、模型组、 大花红景天组、PhGCs低剂量组、PhGCs中剂量组、PhGCs高剂量组。
【具体实施方式】
[0026] 实施例1 :小鼠常压缺氧实验
[0027] 实验动物：清洁级KM小鼠，体重18_22g，自由饮水摄食，清洁级动物SPF实验室适 应性饲养3天，温度（20±2)°C，湿度（60±5)%，12h光照周期。实验仪器与试剂：250mL广 口瓶，秒表，医用钠石灰（上海五四化学试剂有限公司，20121218)，凡士林，大花红景天口 服液（西藏藏药集团股份有限公司，120503,国药准字B20070002)，肉苁蓉苯乙醇苷提取物 (杏辉天力药业有限公司，1 2〇401)
[0028] 实验方法：
[0029] (1)选用18?22g昆明种小鼠50只，雌雄各半，购自新疆医科大学实验动物中心， 动物生产许可证号SCXK (新）2011-0004,动物使用许可证号为SYXK (新）2011-0004。随机 区组法均衡体重性别随机分为5组：空白对照组，肉苁蓉苯乙醇苷低剂量组（112. 5mg/kg)、 肉苁蓉苯乙醇苷中剂量组（225mg/kg)、肉苁蓉苯乙醇苷高剂量组（450mg/kg)，大花红景天 口服液组（2.57mL/kg)，每组10只，各组均在SPF环境饲养。灌胃给药（空白对照组给蒸 馏水，其余各组按相应剂量给药，灌胃体积为0. 2mL/10g)，连续给药7d，末次给药lh后，将 小鼠放入含有15g钠石灰的250mL广口瓶中，每瓶1鼠。瓶底钠石灰上置滤纸，瓶塞用凡士 林密封。立即计时，观察小鼠从瓶塞封闭到呼吸停止时间，称为缺氧生存时间。计算各组小 鼠缺氧生存时间均值，并计算药物对生存时间的延长百分比。
[0030] 生存时间延长百分比=(给药组平均生存时间-正常对照组平均生存时间）/正 常对照组平均生存时间X 100%。
[0031] ⑵选用18?22g昆明种小鼠50只，雌雄各半，购自新疆医科大学实验动物中心， 动物生产许可证号SCXK (新）2011-0004,动物使用许可证号为SYXK (新）2011-0004。随机 区组法均衡体重性别随机分为5组：空白对照组，肉苁蓉苯乙醇苷剂量组（112. 5mg/kg)，中 剂量组（225mg/kg)，高剂量组（450mg/kg)，大花红景天口服液组（0. 42mL/kg)，每组10只， 各组均在SPF环境饲养。腹腔注射给药（空白对照组给蒸馏水，其余各组按相应剂量给药， 给药体积为〇· 2mL/10g)，给药0. 5h后，将小鼠放入含有15g钠石灰的250mL广口瓶中，每瓶 1鼠。瓶底钠石灰上面放置滤纸，瓶塞用凡士林密封。立即计时，观察小鼠从瓶塞封闭到呼 吸停止时间，称为缺氧生存时间。计算各组小鼠缺氧生存时间均值，并计算药物对生存时间 延长百分比。
[0032] 生存时间延长百分比=(给药组平均生存时间-正常对照组平均生存时间）/正 常对照组平均生存时间X 100%
[0033] 实验结果如下所示：
[0034] 与空白对照组相比，灌胃给肉苁蓉苯乙醇苷低、中、高剂量组及大花红景天组小 鼠缺氧生存时间显著延长（P < 0. 05)，延长百分率分别为22. 46 %、33. 75 %、41. 51 %和 30. 23%。腹腔注射肉苁蓉苯乙醇苷低、中、高剂量及大花红景天后小鼠缺氧生存时间也显 著延长（P <0· 01)，延长百分率分别为33. 38%、69· 39%、105. 67%和95. 52%。具体结果 见表1_1。
[0035] 表1-1各组小鼠缺氧存活时间<1·；^):
[0036]
【权利要求】
1. 肉苁蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述肉苁蓉苯乙醇苷提取物包含松果菊苷 及毛蕊花糖苷。
3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述肉苁蓉苯乙醇苷提取物制备方法包括 下述步骤：a)将管花肉苁蓉的肉质茎以第一极性溶剂加予萃取；b)将步骤a)获得的萃取 物加到装有疏水大孔隙聚合物的柱中，使得苯乙醇苷成分吸附在聚合物上；c)用第二极性 溶剂作为流动相流洗液洗脱该柱以除去游离的化合物；d)用第三极性溶剂将苯乙醇苷从 聚合物上洗脱下来，得到含有苯乙醇苷的洗脱液，除去含有苯乙醇苷洗脱液中的溶剂以得 到干燥产物。
4. 根据权利要求3的应用，其特征在于步骤a)的第一极性溶剂为水或水与乙醇的混合 溶剂；步骤c)的第二极性溶剂为水，步骤d)的第三极性溶剂为甲醇、乙醇、水与甲醇的混合 溶剂，或水与乙醇的混合溶剂。
5. 含有肉苁蓉苯乙醇苷提取物的防治高原病的药物组合物，其特征在于包括辅料、肉 苁蓉苯乙醇苷提取物，肉苁蓉苯乙醇苷提取物与辅料的重量比为1:99?99:1。
6. 根据权利要求5的药物组合物，其特征在于所述肉苁蓉苯乙醇苷提取物包含松果菊 苷及毛蕊花糖苷。
7. 根据权利要求5的药物组合物，其特征在于为口服液、片剂、丸剂、胶囊、注射剂、滴 丸剂或膏剂。
【文档编号】A61K31/7032GK104189099SQ201410270792
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年6月17日 优先权日:2014年6月17日
【发明者】陶义存, 毛新民, 李琳琳, 骆新, 王烨, 靳春丽 申请人:新疆医科大学