专利名称：一种硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及多肽类抗生素预混剂的制备，具体是一种硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法。
背景技术：
粘杆菌素(colistin)是一种对多重耐药性革兰氏阴性致病菌(如铜绿假单胞菌， Pseudomonas ae/T^i/^m )具有特效抗性的多肽类抗生素，粘杆菌素含有二氨基丁酸，存在游离氨基，因此呈碱性，在临床上常制成盐使用，目前商品化以两种形式存在，硫酸粘杆菌素(colistin sulphate，CS)是其中一种形式。硫酸粘杆菌素可用于猪、禽、牛和羊等动物， 由于其抗菌作用强、残留低，不易产生耐药性，中国、美国、欧盟和日本等许多国家批准作为饲料添加剂或兽药。可治疗多种病菌引起的动物饲养疾病，并能促进动物生长和提高饲料的利用率。目前从发酵液中分离硫酸粘杆菌素主要有离子交换法、泡沫分离法。采用离子交换法，此方法分离步骤长、能耗高，而且带来大量废水，严重污染环境。2006年7月12日公开的申请号为200510122187. 3的发明公开了一种泡沫分离法制备多粘菌素E的方法，起泡用到溶剂，给环境带来污染，且成本较高。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术存在的问题，经过申请人长期的研究和实验，发明了一种制备硫酸粘杆菌素预混剂的新工艺，它不仅提高了硫酸粘杆菌素预混剂的收率，而且更加绿色环保。本发明采用先过滤除去发酵液中的菌体，再浓缩滤液，然后沉淀分离，最后流化床造粒，得到硫酸粘杆菌素预混剂，具有专一性强、工序短、设备投资少、收率高、成本低，而且整个过程不采用溶剂，减少环境污染等优点。
本发明的目的是通过以下技术方案得以实现的
一种硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法，其特征在于，它依次包括如下步骤
(1)发酵液的预处理将含有粘杆菌素的发酵液用酸调PH为2.(Γ3. 5，边搅拌边加入 2^5%wt的助滤剂后过滤；
(2)减压浓缩将滤液在-0.095^-0. 098Mpa下浓缩，温度为5(T90°C，浓缩后得到液相含量为2500(T35000ug/ml的浓缩液；
(3)沉淀分离将浓缩液用碱调pH为10.(Γ12. 0，搅拌0. 5^4 h，在(TlO°C条件下静止 2^4 h，真空抽滤，得到滤饼，边搅拌滤饼边加入稀硫酸至pH为3. (Γ7. 0，得到酸化液；
(4)流化床造粒按酸化液与载体的重量比为6(Γ80%的比例将酸化液输入装有载体的流化床造粒机中，进风温度为14(T200°C，出风温度为7(T120°C，酸化液输完后，造粒0. 5^3 h，得到硫酸粘杆菌素预混剂。具体来说，本发明先除去菌体，再进行分离纯化；浓缩滤液的目的在于提高滤液的浓度，粘杆菌素的含量会随滤液浓度的提高而提高，这样会提高粘杆菌素沉淀分离时的收
3率，对于生产硫酸粘杆菌素预混剂降低成本具有重要意义；沉淀分离是在一定的条件下将粘杆菌素以某种形式沉淀出来，杂质溶解在溶质中，过滤后得到固体，再将固体用硫酸酸化溶解，得到高纯度的硫酸粘杆菌素溶液，起到分离纯化的效果，专一性强，重要的是不像离子交换法产生大量的废水，也不用到任何溶剂，不污染环境，成本低。作为优选，步骤(1)所述的酸为草酸、硫酸、盐酸、磷酸的一种或多种。作为优选，步骤(1)所述的助滤剂为珍珠岩、硅藻土、纤维素、酸性白土、活性炭、石棉的一种或多种。作为优选，步骤(2)所述温度为6(T70°C。作为优选，步骤(3)所述碱为氢氧化钠、氨水、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠的一种或多种。作为优选，步骤(3)所述用碱调PH为10. 5 11. 5。作为优选，步骤(3)所述用稀硫酸调pH为6. (Γ7. 0。作为优选，步骤(4)所述的载体为稻壳粉、玉米芯粉、米糠粉、麦麸、苜蓿粉、碳酸钙的一种或多种。作为优选，步骤(4)所述的进风温度为17(Tl80°C。作为优选，步骤(4)所述的出风温度为9(Tl00°C。本发明的主要优点是与现有技术相比，专一性强、工序短、成本低、废水少、污染少，而且收率高，达80 90%。
具体实施例方式以下实施例中所述粘杆菌素发酵液，由多粘芽孢杆菌产生的含有粘杆菌素的发酵液。实施例1
(1)发酵液的预处理
将发酵液用硫酸调PH值为3. 0，边搅拌边加入3. 5%wt的硅藻土助滤剂，通过板框过滤， 至无滤液滴出为止，得到板框过滤液。板框过滤收率为96. 5%。(2)减压浓缩
将板框过滤液进行减压浓缩，温度为80°C，真空度为-0. 095MPa,浓缩至液相含量为 34160ug/ml，得到浓缩液。浓缩收率为99%。(3)沉淀分离
将浓缩液用氢氧化钠调PH值为10. 5，搅拌1 h，在6°C条件下静止3 h，将沉淀后的浓缩液真空抽滤，得到滤饼，边搅拌滤饼边加入稀硫酸至PH为6. 1，得到酸化液。沉淀分离收率为89%。(4)流化床造粒
按酸化液与载体的重量比为78%的比例将酸化液输入装有玉米芯粉的流化床造粒机中，进风温度为170°C，出风温度为105°C，酸化液输完后，造粒2 h。得到硫酸粘杆菌素预混剂。造粒收率为98%。 实施例2(1)发酵液的预处理
将发酵液用硫酸调PH值为2. 5，边搅拌边加入3%wt的珍珠岩助滤剂，通过板框过滤，至无滤液滴出为止，得到板框过滤液。板框过滤收率为95%。(2)减压浓缩
将板框过滤液进行减压浓缩，温度为78°C，真空度为-0. 098MPa,浓缩至液相含量为 25000ug/ml，得到浓缩液。浓缩收率为99%。(3)沉淀分离
将浓缩液用氢氧化钠调PH值为10. 7，搅拌4h，在2°C条件下静止3 h，将沉淀后的浓缩液真空抽滤，得到滤饼，边搅拌滤饼边加入稀硫酸至PH为6. 4，得到酸化液。沉淀分离收率为 93%。(4)流化床造粒
按酸化液与载体的重量比为69%的比例将酸化液输入装有米糠粉的流化床造粒机中， 进风温度为162°C，出风温度为98°C，酸化液输完后，造粒2 h。得到硫酸粘杆菌素预混剂。 造粒收率为98%。 实施例3
(1)发酵液的预处理
将发酵液用硫酸调PH值为3. 5，边搅拌边加入2. 5%wt的珍珠岩助滤剂，通过板框过滤， 至无滤液滴出为止，得到板框过滤液。板框过滤收率为92%。(2)减压浓缩
将板框过滤液进行减压浓缩，温度为75°C，真空度为-0. 098MPa,浓缩至液相含量为 30810ug/ml，得到浓缩液。浓缩收率为98. 5%。(3)沉淀分离
将浓缩液用氢氧化钠调PH值为11，搅拌3 11，在41条件下静止3.5 h，将沉淀后的浓缩液真空抽滤，得到滤饼，边搅拌滤饼边加入稀硫酸至PH为6. 9，得到酸化液。沉淀分离收率为91%。(4)流化床造粒
按酸化液与载体的重量比为80%的比例将酸化液输入装有米糠粉的流化床造粒机中， 进风温度为165°C，出风温度为100°C，酸化液输完后，造粒2 h。得到硫酸粘杆菌素预混剂。 造粒收率为98. 5%。 实施例4
(1)发酵液的预处理
将发酵液用硫酸调PH值为2，边搅拌边加入5%wt的硅藻土助滤剂，通过板框过滤，至无滤液滴出为止，得到板框过滤液。板框过滤收率为91%。(2)减压浓缩
将板框过滤液进行减压浓缩，温度为50°C，真空度为-0. 096MPa,浓缩至液相含量为 ^090ug/ml，得到浓缩液。浓缩收率为98. H(3)沉淀分离将浓缩液用氢氧化钠调PH值为10，搅拌0.证，在0°C条件下静止2 h，将沉淀后的浓缩液真空抽滤，得到滤饼，边搅拌滤饼边加入稀硫酸至PH为3，得到酸化液。沉淀分离收率为 84% ο(4)流化床造粒
按酸化液与载体的重量比为60%的比例将酸化液输入装有米糠粉的流化床造粒机中， 进风温度为140°C，出风温度为120°C，酸化液输完后，造粒2 h。得到硫酸粘杆菌素预混剂。 造粒收率为98. 0%。 实施例5
(1)发酵液的预处理
将发酵液用硫酸调PH值为3，边搅拌边加入2%wt的珍珠岩助滤剂，通过板框过滤，至无滤液滴出为止，得到板框过滤液。板框过滤收率为92%。(2)减压浓缩
将板框过滤液进行减压浓缩，温度为90°C，真空度为-0. 097MPa,浓缩至液相含量为 35000ug/ml，得到浓缩液。浓缩收率为98. 3%。(3)沉淀分离
将浓缩液用氢氧化钠调PH值为12，搅拌4h，在10°C条件下静止4 h，将沉淀后的浓缩液真空抽滤，得到滤饼，边搅拌滤饼边加入稀硫酸至PH为7，得到酸化液。沉淀分离收率为 93%。(4)流化床造粒
按酸化液与载体的重量比为70%的比例将酸化液输入装有玉米芯粉的流化床造粒机中，进风温度为200°C，出风温度为70°C，酸化液输完后，造粒2 h。得到硫酸粘杆菌素预混剂。造粒收率为98. 1%。
权利要求
1.一种硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法，其特征在于所述方法依次包括如下步骤(1)发酵液的预处理将含有粘杆菌素的发酵液用酸调PH为2.(Γ3. 5，边搅拌边加入 2^5%wt的助滤剂后过滤；(2)减压浓缩将滤液在-0.095^-0. 098Mpa下浓缩，温度为5(T90°C，浓缩后得到液相含量为2500(T35000ug/ml的浓缩液；(3)沉淀分离将浓缩液用碱调pH为10.(Γ12. 0，搅拌0. 5^4 h，在(TlO°C条件下静止 2^4 h，真空抽滤，得到滤饼，边搅拌滤饼边加入稀硫酸至pH为3. (Γ7. 0，得到酸化液；(4)流化床造粒按酸化液与载体的重量比为6(Γ80%的比例将酸化液输入装有载体的流化床造粒机中，进风温度为14(T200°C，出风温度为7(T120°C，酸化液输完后，造粒0. 5^3 h，得到硫酸粘杆菌素预混剂。
2.根据权利要求1所述的硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法，其特征在于步骤(1)所述的酸为草酸、硫酸、盐酸、磷酸的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法，其特征在于步骤(1)所述的助滤剂为珍珠岩、硅藻土、纤维素、酸性白土、活性炭、石棉的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法，其特征在于步骤(2)所述温度为6(T70°C。
5.根据权利要求1所述的硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法，其特征在于步骤(3)所述碱为氢氧化钠、氨水、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法，其特征在于步骤(3)所述用碱调PH为10. 5^11. 5。
7.根据权利要求1所述的硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法，其特征在于步骤(3)所述用稀硫酸调PH为6. (Γ7.0。
8.根据权利要求1所述的硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法，其特征在于步骤(4)所述的载体为稻壳粉、玉米芯粉、米糠粉、麦麸、苜蓿粉、碳酸钙的一种或多种。
9.根据权利要求1所述的硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法，其特征在于步骤(4)所述的进风温度为17(Tl80°C。
10.根据权利要求1所述的硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法，其特征在于步骤(4)所述的出风温度为9(Tl00°C。
全文摘要
本发明公开了一种硫酸粘杆菌素预混剂的制备方法。该方法通过发酵液预处理、减压浓缩、沉淀分离和流化床造粒，从发酵液中提取粘杆菌素，制备硫酸粘杆菌素，然后制成硫酸粘杆菌素预混剂。本发明专一性强、工序短、设备投资少、废水少、污染少，而且收率高，达80~90%。
文档编号A61K38/12GK102258765SQ20111019280
公开日2011年11月30日 申请日期2011年7月11日 优先权日2011年7月11日
发明者余炜, 储消和, 吴雪萍, 孙振华, 熊莉 申请人:浙江升华拜克生物股份有限公司