专利名称：一种制备红景天苷的方法
技术领域：
本发明涉及一种制备红景天苷的方法，属于制药领域。
背景技术：
红景天为景天科红景天属多年生草本植物或亚灌木野生植物，植物资源丰富，品种众多，全世界约有96种，我国有73种。红景天中的红景天苷是该种植物所特有的有效成分，具有扶正固本、调和阴阳、滋补强身等作用，现代药理研究证明，红景天苷具有预防和抗痴呆作用、抗缺氧作用、延缓衰老作用和抑制快速型室性心率失常的作用，临床上用来治疗冠心病、高原低血压症、高原性红细胞增多症。毒性试验表明，红景天苷毒性甚小红景天苷 lg/Kg小鼠皮下注射，未见毒性反应。近年来，随着人们生活水平的提高，加上人口结构的老龄化，心血管疾病的发病率呈逐年上升的趋势，开发治疗效果较好的心脑血管疾病的药物已经成为当今药物研究的热点，临床研究报道显示高纯度单一成分的红景天苷在治疗心脑血管方面具有良好的应用前景。目前红景天苷的制备方法较多，邰韧辉等(高纯度红景天苷的制备工艺研究，现代中药研究与实践2004，18 (4) 58)用溶剂萃取结合大孔吸附树脂分离，然后用硅胶柱精制，但是，用该方法制得的红景天苷含量低，且成本高，不适合工业化大生产。丁朝武等(红景天苷和红景天苷元标准品的制备方法研究，分析测试学报1997，16(1) 38)用化学和高效液相制备色谱方法分离制备，所得的产品纯度高，但高效液相色谱制备量小，无法大规模生产。葛永潮等(红景天苷的制备工艺改进，中国药物化学杂志1994，4 (3) 196)将聚酰胺、 反相大孔吸附树脂、硅胶及葡聚糖凝胶四种柱层析组合使用制备红景天苷，然而，此方法分离介质品种较多，且成本较高，同样不适合工业化大生产。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题，本发明的一个目的是提供一种新的制备红景天苷的方法，本发明的另一个目的是提供一种根据上述方法制备的高纯度的红景天苷，本发明的再一个目的是提供一种红景天苷的用途。本发明的目的是通过以下技术方案实现的一方面，本发明提供了一种制备红景天苷的方法，其中，所述方法包括如下步骤1)浓缩将红景天提取液减压浓缩，得浓缩液I ；2)醇沉向步骤1)所得浓缩液I中加乙醇，静置，过滤，滤液浓缩，得浓缩液II ；3)纯化将步骤2、所得浓缩液II过聚酰胺柱，洗脱，洗脱液减压浓缩，得浓缩液 III ；4)精制将步骤幻所得浓缩液III过大孔吸附树脂柱，洗脱，洗脱液浓缩至干，得
干膏；5)结晶向步骤4)所得干膏中加入无水乙醇，使干膏溶解，过滤，向滤液中加入三氯甲烷除杂，再加入三氯甲烷结晶，过滤，即得红景天苷结晶。
进一步，根据前述的制备方法，在步骤1)中所述红景天提取液为以水或0 50% (ν/ν)的乙醇作为提取溶剂得到的红景天药材提取液；所述浓缩液I的相对密度在20°C为1. 00 1. 10。进一步，根据前述的制备方法，在步骤幻中所述加乙醇包括向浓缩液I加入95% (ν/ν)的乙醇使含醇量达到60% (ν/ν)；所述静置条件为2 8°C静置48h ；所述浓缩液II的相对密度根据红景天生药材质量与溶液体积比计算为0. 5 1. 5，优选为1. 5。进一步，根据前述的制备方法，在步骤幻中所述聚酰胺柱中的聚酰胺粉目数为14 80目，优选为60 80目；所述聚酰胺柱的径高比小于1 10，优选为1 10;所述红景天生药材与聚酰胺粉的质量之比优选为1:1;所述洗脱用水量为2 6BV (柱体积)，优选4BV ；所述洗脱流速优选为3BV/h ；所述浓缩液III的相对密度根据红景天生药材质量与溶液体积比计算为1. 0 1. 5。进一步，根据前述的制备方法，在步骤4)中所述洗脱的溶剂为5 10% (ν/ν)的乙醇，优选为10% (ν/ν)的乙醇；所述洗脱的溶剂用量为不少于30BV，优选为30BV。进一步，根据前述的制备方法，在步骤幻中所述加入无水乙醇包括加入无水乙醇使干膏溶解，使所得溶液的浓度根据红景天干浸膏质量与溶液体积比计算为4. 06 8. 12mg/mL ；所述加入三氯甲烷除杂包括向滤液中加入三氯甲烷至出现絮状沉淀，静置 30min，优选地，向滤液中加入2 3次三氯甲烷至澄清无色，每次静置时间不超过30min ；
所述加入三氯甲烷结晶包括向除杂后的澄清无色溶液中，加入三氯甲烷，同时以 120r/min的速度搅拌，至溶液浑浊，2 8°C静置不少于72h，优选72h。在红景天纯化过程中，鞣质是比较难除的一类杂质，鞣质的存在会严重影响制剂的质量；特别是在注射剂和冻干粉针剂中，鞣质的存在会导致受试者局部肿痛甚至死亡； 因此鞣质的除去便显得尤为重要，目前除去鞣质的方法主要为明胶沉淀法、醇液碱沉淀法和聚酰胺吸附法。明胶沉淀法明胶溶液可与水溶液中鞣质生成沉淀，以pH = 4时沉淀效果最好。 沉淀后，还需要将水溶液浓缩，再加95% (ν/ν)乙醇使含醇量达75% (ν/ν)以上，除去过剩的明胶。将上述醇沉后的醇溶液回收乙醇至无醇味，加适量的水，然后加入10%的明胶水溶液，沉淀，放置，滤过，滤液浓缩，加入95% (ν/ν)乙醇使含醇量达75% (ν/ν)以上，除去过量的明胶。此法虽然可除去鞣质，但操作步骤繁多，在工业生产中耗能多，会提高产品成本。另外，明胶属于肽类化合物，有众多的肽键，与黄酮甙、蒽醌、香豆精等酚性成分有一定的亲和力，而红景天苷也属于酚类化合物，因此，明胶与鞣酸形成明胶鞣酸蛋白质沉淀的同时，也能吸附一定量的红景天苷形成沉淀。综上分析，此法不可行。
醇液碱沉淀法在85% (ν/ν)的乙醇中加入碱液，调pH = 8时，鞣质及有机酸类等形成钠盐，在醇溶液中析出，而红景天苷则保留在溶液中，但红景天苷分子结构上带有酚羟基，有一定的酸性，因此在碱性溶液中会部分成盐而被破坏，因此本方法也不可行。聚酰胺吸附法主要是利用酰胺和酚类或某些酸形成氢键，而具有吸附作用。可被聚酰胺吸附的化合物有黄酮类、蒽醌类、有机酸、酚类和鞣质等。鞣质是一种多元酚类的化合物，不论其低分子或高分子，都很容易被聚酰胺吸附，且吸附力比任何别的化学成分都强，因此可以利用聚酰胺除去提取液中的鞣质。所以，将红景天醇沉后的溶液通过聚酰胺柱层析，能够使鞣质被吸附，而红景天苷不被吸附，之后用水就可以将红景天苷洗脱下来，成本较低，除鞣质效果较好，适合工业化大生产。目前大孔吸附树脂分离纯化技术在中草药有效成分的提取分离中得到了日益广泛的应用，其优点在于吸附容量大、再生简单、效果可靠，尤其适合分离纯化苷类、黄酮类、 皂苷类等成分(李伯庭.大孔吸附树脂在天然产物分离中的应用[J].中草药1990，21(8) 42)，因此选择大孔吸附树脂来精制红景天苷。另一方面，本发明提供了一种根据上述制备方法得到的红景天苷及其药物组合物，其中，所述红景天苷的纯度在95 %以上。再一方面，本发明提供了一种根据上述制备方法得到的红景天苷在制备治疗心脑血管疾病或癌症的药物中的用途，其中，所述药物剂型为注射剂或冻干粉针。本发明提供的制备红景天苷的方法简单、成本低，适于工业化大生产，得到的红景天苷的纯度高。
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中图1为本发明实施例2的洗脱剂种类对红景天苷影响的梯度洗脱曲线；图2为本发明实施例2中洗脱剂用量对红景天苷洗脱率的影响曲线。
具体实施例方式以下各实施例中所使用的原料为红景天提取液由康美药业研发中心提供，聚酰胺粉由台州市路桥四甲生化塑料厂提供，SP825型大孔吸附树脂由日本三菱化学公司提供，乙醇由天津市大茂化学试剂厂提供，其浓度均为体积百分浓度，纯度级别为分析纯。乙醚由西陇化工有限公司提供，纯度级别为分析纯。三氯甲烷由西陇化工有限公司提供，纯度级别为分析纯。乙酸乙酯由天津大茂化学试剂厂提供，纯度级别为分析纯。以下各实施例中所使用的设备为高效液相色谱仪(HPLC)型号Angilent 1100系列，DAD检测器，生产厂家为美国安捷能科技有限公司，薄层色谱仪(TLC)型号REPR0STAR-3，生产厂家为瑞士卡玛(CAMAG)公司。
实施例1 红景天苷纯化工艺研究1.1聚酰胺粉目数的考察目前市场上常用的柱层析用聚酰胺粉的目数一般为14 30目、30 60目和60 80目，聚酰胺粉太粗分离效果差，太细则流速慢，以下就这3种型号的聚酰胺粉进行考察。方法取3份聚酰胺粉，每份20g，目数分别为14 30目、30 60目和60 80目， 分别装柱(Φ2. 4cmX 30cm)，另取取3份红景天醇沉液(每份相当于红景天生药材20g)，浓缩成相对密度为1. 0(红景天生药材质量与溶液体积之比)的浓缩液，将红景天醇沉浓缩液动态上样，静置池，用水洗脱，流速为2BV/h，共用水约5BV，收集洗脱液，浓缩定容至250ml， 每份洗脱液量取1 IOmL于试管中，向里面加入5mL新配置的(ν/ν)鸡蛋清的生理氯化钠溶液，实验结果见表1。表1聚酰胺粉目数考察
权利要求
1.一种制备红景天苷的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤1)浓缩将红景天提取液减压浓缩，得浓缩液I；2)醇沉向步骤1)所得浓缩液I中加乙醇，静置，过滤，滤液浓缩，得浓缩液II；3)纯化将步骤2)所得浓缩液II过聚酰胺柱，洗脱，洗脱液减压浓缩，得浓缩液III；4)精制将步骤3)所得浓缩液III过大孔吸附树脂柱，洗脱，洗脱液浓缩至干，得干膏；5)结晶向步骤4)所得干膏中加入无水乙醇，使干膏溶解，过滤，向滤液中加入三氯甲烷除杂，再加入三氯甲烷结晶，过滤，即得红景天苷结晶。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤1)中所述红景天提取液为以水或0 50% (ν/ν)的乙醇作为提取溶剂得到的红景天药材提取液；所述浓缩液I的相对密度在20°C为1. 00 1. 10。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤幻中所述加乙醇包括向浓缩液I加入95% (ν/ν)的乙醇使含醇量达到60% (ν/ν)； 所述静置条件为2 8°C静置48h ；所述浓缩液II的相对密度根据红景天生药材质量与溶液体积比计算为0. 5 1. 5，优选为1.5。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤幻中 所述聚酰胺柱中的聚酰胺粉目数为14 80目，优选为60 80目； 所述聚酰胺柱的径高比小于1 10，优选为1 10;所述红景天生药材与聚酰胺粉的质量之比优选为1:1; 所述洗脱用水量为2 6BV (柱体积)，优选为4BV ； 所述洗脱流速优选为3BV/h ；所述浓缩液III的相对密度根据红景天生药材质量与溶液体积比计算约为1. 0 1. 5。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤4)中所述洗脱的溶剂为5 10% (ν/ν)的乙醇，优选为10% (ν/ν)的乙醇；所述洗脱的溶剂用量为不少于30BV，优选为30BV。
6.根据权利要求1 6中任一项所述的制备方法，其特征在于，在步骤幻中所述加入无水乙醇包括加入无水乙醇使干膏溶解，使所得溶液的浓度根据红景天干浸膏质量与溶液体积比计算为4. 06 8. 12mg/mL ；所述加入三氯甲烷除杂包括向滤液中加入三氯甲烷至出现絮状沉淀，静置30min，优选地，向滤液中加入2 3次三氯甲烷至澄清无色，每次静置时间不超过30min ；所述加入三氯甲烷结晶包括向除杂后的澄清无色溶液中，加入三氯甲烷，同时以 120r/min的速度搅拌，至溶液浑浊，2 8°C静置不少于72h，优选72h。
7.一种根据权利要求1 6中任一项所述制备方法得到的红景天苷，其特征在于，所述红景天苷的纯度在95%以上。
8.一种包含权利要求1 6中任一项所述制备方法得到的红景天苷或权利要求7所述红景天苷的药物组合物，其特征在于，所述红景天苷的纯度在95%以上。
9.一种根据权利要求1 6中任一项所述制备方法得到的红景天苷或权利要求7所述的红景天苷在制备治疗心脑血管疾病或癌症的药物中的用途，其特征在于，所述药物剂型为注射剂或冻干粉针。
全文摘要
本发明提供一种制备红景天苷的方法，该方法包括浓缩、醇沉、过聚酰胺柱纯化、过大孔吸附树脂精制和结晶5个步骤，该方法简单、成本低，适于工业化大生产，得到的红景天苷纯度高，适合于制成注射剂或冻干粉针。
文档编号A61P9/00GK102382152SQ201110306060
公开日2012年3月21日 申请日期2011年10月11日 优先权日2011年10月11日
发明者向飞军, 许冬瑾, 闵建华, 韦冬菊, 马兴田 申请人:康美药业股份有限公司