专利名称：一种苦碟子有效成分组合物的制备、质量控制方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明提供了一种苦碟子有效成分组合物，还涉及该组合物的制备方法以及该组合物的用途，属于中药技术领域。
背景技术：
抱茎苦荬菜，俗称苦碟子、满天星等，为菊科苦荬菜属抱茎苦荬菜[Ixeris Sonchifolia(Bge)Hance]的两年生干燥地上部分，主产于我国东北、华北等地。《卫生部药品标准内蒙古分册》记载，抱茎苦荬菜味苦、辛，性凉，具开胃，解毒，接骨，去痞作用，用于不思饮食，解毒，骨折，牙痛。民间主要用于治疗阑尾炎、扁桃体炎、无名肿痛等症。对苦碟子药材及制剂的研究近几年有了很大的发展，据文献报道苦碟子含有黄酮、 腺苷、内酯等化学成分。药理研究表明总黄酮和有机酸是其中的主要活性成分，化学研究表明以苦碟子中菊苣酸(chicoric acid)和木犀草素-7_0_β-D-葡萄糖醛酸苷 (luteolin-7-Ο-β -D-glucuronide)含量较高，具有多种药理活性。现有的对于苦碟子的提取方法一般是溶剂提取法，该法一方面具有的普遍问题是有机溶剂用量大，种类多，对环境有较大的影响，且其操作步骤繁琐，在提取物中存在一定的残留量，而且多数具有一定的毒性。另一方面对于上述两个有效成分的提取没有针对性， 使菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷提取量较低，并且二者较难在同一个条件下提取完全，没有进行有效的提取纯化处理，发挥二者良好的治疗作用。目前研究苦碟子有效成分的提取方法可归纳为以下几种1、先用水或醇提取，将回收溶剂后的提取物混悬于水中，分别用氯仿、醋酸乙酯、 正丁醇提取，划分成几个提取部分。再用硅胶柱或高效液相半制备柱层析、分离成单组分物质。上述方法是实验室研究单一黄酮成分的常用分析方法，不适合医药工业化生产，并且， 该方法仅能在实验室的条件下，将木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷提取出来，菊苣酸的提取量较低。2、申请号2005100^836. 1的发明专利“木犀草素-7_0_ β-D吡喃葡萄糖醛酸苷及其提取方法和用途”，公开了从抱茎苦荬菜药材中提取分离木犀草素-7-0-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷的一种方法，先后采用钙-硫法得到粗黄酮提取物，再经过硅胶柱层析法和HPLC分离制备，得黄色无定型粉末。该制备方法仅仅适合实验室分析型工艺，获得的产品数量为毫微克级，且操作复杂，产品收率低，成本大，不适合工业化生产。3、申请号200610072744. X的发明专利申请“苦碟子总黄酮及其制备方法和含它的冻干粉针与质量控制方法”。公开了苦碟子提取物的制备方法，采用反复醇液调酸调碱处理法，由于木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷在碱性溶液中不稳定，易发生氧化和开环反应，且苦碟子中的菊苣酸在酸性溶液中不易析出，致使收率低，大量活性成分流失。同时，该专利虽然提供了提取物木犀草素7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷含量仅为8%左右，这一含量既未达到静脉注射用二类原料药的标准，即80%以上。4、申请号200410078168. 0的发明专利“一种含有抱茎苦荬菜提取物的制剂及其制备方法”，公开了一种含总黄酮成分不少于80，其中黄酮木犀草素7-0-葡萄糖醛酸不少于M，腺苷不少于0. 18的抱茎苦荬菜提取物及制剂，采用的是提取液加絮凝剂或直接进行柱层析，一方面絮凝工艺操作复杂，产品收率低，且易带入非药物性杂质，另一方面，简单的水或醇处理的提取液进行柱层析，杂质含量多，影响分离效果，致使生产负荷大，而且成品含量低。再有就是此方法不利于菊苣酸的提取。
发明内容
本发明的目的之一是克服上述已有技术的不足致使苦碟子提取物中有效成分含量低，提供一种苦碟子有效成分组合物。本发明的另一个目的是提供该组合物的制备方法和在配制苦碟子注射液，用于冠心病、心绞痛、心梗和脑梗的治疗方面的用途。本发明的又一个目的是提供菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷在含量测定苦碟子有效成分组合物和苦碟子药材质量控制中的用途。本发明的创新性优势在于以下三个方面1、酶法在苦碟子药材前处理中的应用。苦碟子中的有机酸和黄酮类成分的提取常以水、乙醇等作为溶剂提取。水浸提成本低，但提取率也低；而用乙醇等有机溶剂提取成本高。由于苦碟子中的有机酸和黄酮类成分几乎都被以纤维素为主体的细胞壁所包围，这些细胞间尚有原果胶粘结，因此，本发明应用复合酶液对苦碟子进行酶解前处理，然后再进行提取，可以大大提高苦碟子中有机酸和黄酮类成分的得率。2、超临界流体萃取法提取苦碟子中有机酸和黄酮类成分。基于上述背景技术中所述的现有提取方法及不足，本发明采用超临界流体萃取技术，而使用的超临界流体是二氧化碳，因其无毒、不燃烧、对大部分物质不反应、价廉等特点，在超临界状态下，CO2流体兼有气液两项的双重特点，既具有与气体相当的高扩散系数和低粘度，又具有与液体相近的密度和物质良好的溶解能力。此法萃取能力增强，提取率高，超临界(X)2萃取温度低，能较完好地保存苦碟子中有机酸和黄酮类成分不被破坏，提取时间快，生产周期短等特点。酶法与超临界流体萃取法的有力结合，可以大大的加强有效成分的提取率。3.采用波长切换法，对苦碟子中菊苣酸和木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷进行含量测定。在通常情况下，利用高效液相色谱法测定样品时需要经过一系列复杂的提取和纯化程序，且大都是在恒定波长下进行检测，对单组份体系而言，在恒定波长下进行测定是行之有效的。但在对多组分体系进行测定时，由于各组分的最大吸收波长不尽相同，加之繁琐的提取前处理过程会使待测物质有一定的损失，因此利用恒定波长很难全面检出多组分体系中各组成分的真实含量，为了提高多组分体系检测的灵敏度并客观地反应多组分中被测组分的真实含量，应尽可能的在各物质的最大吸收波长下进行测定。本发明采用波长切换的方法，可以实现菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷在各自的最大吸收处，在同条件下被测定。本发明所提供的苦碟子有效成分组合物的制备方法如下
1.取苦碟子药材，用烘箱在65_70°C条件下烘干，粉碎至40目备用，再加1倍量的水(质量)，置微波炉中经微波处理5min，经微波处理的物料加入一定量的复合酶，使物料充分酶解，然后将酶解物干燥粉碎后投入(X)2萃取釜中；2.超临界CO2萃取将95%乙醇和大于99. 99%液态CO2按1 99-20 80比例关系混合，经热交换器达到超临界状态，再通入萃取釜，萃取压力为10-45MPa、萃取温度为 35-95 °C、萃取时间为2-4h ；3.将提取液进行浓缩，浓缩液经AB-8树脂柱吸附后，30 %乙醇洗至无色，取醇洗液进行浓缩；4.过滤，滤液调pH值4-5，静置，沉淀，过滤；5.所得滤液经聚酰胺树脂柱吸附，用30%乙醇洗脱，洗至无色后，再用60%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，即得。所述的制备方法，其特征在于步骤1中的复合酶主要是0. 2mg/mL的纤维素酶和0. lmg/mL果胶酶，加入量范围为 1-5% ο步骤3中滤液用盐酸调pH值4-5 ；步骤5中聚酰胺树脂柱型号为60-80目。
具体实施例方式实施例1取苦碟子药材500g，用烘箱在65_70°C条件下烘干，粉碎至40目备用，再加1倍量的水(质量)，置微波炉中经微波处理5min，经微波处理的物料加入一定量的复合酶，使物料充分酶解，然后将酶解物干燥粉碎后投入萃(X)2取釜，进行超临界(X)2萃取将95 %乙醇和大于99. 99%液态CO2按20 80混合，经热交换器达到超临界状态，再通入萃取釜，萃取压力为32MPa、萃取温度为60°C、萃取时间为池。将提取液进行浓缩，浓缩液经AB-8树脂柱吸附后，30 %乙醇洗至无色，取醇洗液进行浓缩。过滤，滤液调pH值4-5，静置，沉淀，过滤。所得滤液经聚酰胺树脂柱吸附，用30%乙醇洗脱，洗至无色后，再用60%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得提取物。提取物中菊苣酸占提取物质量的40%，木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷占提取物的45 %。实施例2取苦碟子药材500g，用烘箱在65_70°C条件下烘干，粉碎至40目备用，再加1倍量的水(质量)，置微波炉中经微波处理5min，经微波处理的物料加入一定量的复合酶，使物料充分酶解，然后将酶解物干燥粉碎后投入萃(X)2取釜，进行超临界(X)2萃取将95 %乙醇和大于99. 99%液态CO2按20 80混合，经热交换器达到超临界状态，再通入萃取釜，萃取压力为32MPa、萃取温度为60°C、萃取时间为池。将提取液进行浓缩，浓缩液经AB-8树脂柱吸附后，30 %乙醇洗至无色，取醇洗液进行浓缩。过滤，滤液调pH值4-5，静置，沉淀，过滤。所得滤液经聚酰胺树脂柱吸附，用30%乙醇洗脱，洗至无色后，再用40%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得提取物。提取物中菊苣酸占提取物质量的42%，木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷占提取物的39 %。本发明所制备的苦碟子有效成分组合物，可与药效学允许的药物赋形剂组合制备成制剂。其特征在于主要包括液体制剂和固体制剂。固体制剂主要包括片剂、胶囊剂(含软胶囊)、滴丸剂。液体制剂包括口服液体制剂和注射液体制剂。另外，也可用于现代苦碟子注射液的制备。本发明所制备的苦碟子有效成分组合物，成分主要由菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷组成，选择二者作为该提取物的质量控制指标，在同一个色谱条件下利用波长切换法同时测定二者含量，方法简便，重现性好，与以往的单一条件测定单个成分相比，提高工作效率，能更好地控制组合物和药材的质量。1.仪器与试药SHIMAZU LC-10AT VP高效液相色谱仪(岛津公司)，乙腈、磷酸为色谱纯，其他试剂均为分析纯。菊苣酸(北京恒元启天化工技术研究所，纯度98%以上，批号20100302)木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷(沈阳双鼎药业研发实验室自制，纯度98% 以上)2.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，B为0.5%磷酸溶液(ml/ ml)，按表1进行梯度洗脱；流速为1. Oml/min ；柱温为40°C ；波长切换程序为0min-327nm， 15min-348nm。表1梯度洗脱程序表
权利要求
1.一种苦碟子有效成分组合物的制备，其特征在于包括下述工艺步骤(1)取苦碟子药材，用烘箱在65-70°C条件下烘干，粉碎至40目备用，再加1倍量的水， 置微波炉中经微波处理5min，经微波处理的物料加入一定量的复合酶，达到物料充分酶解， 然后将酶解物干燥粉碎后投入萃取釜中；(2)超临界CO2萃取将95%乙醇和大于99.99%液态CO2按1 99-20 80比例关系混合，经热交换器达到超临界状态，再通入萃取釜，萃取压力为10-45MPa、萃取温度为 35-95 °C、萃取时间为2-4h ；(3)将提取液进行浓缩，浓缩液经AB-8树脂柱吸附后，30%乙醇洗至无色，取醇洗液进行浓缩；(4)过滤，滤液调pH值4-5，静置，沉淀，过滤；(5)所得滤液经聚酰胺树脂柱吸附，用30%乙醇洗脱，洗至无色后，再用60%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，即得；苦碟子有效成分组合物中菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的含量不少于 80%。
2.如权利要求1所述的苦碟子有效成分组合物的制备方法，其特征在于步骤(1)中的复合酶主要是O.aiig/mL的纤维素酶和0. lmg/mL果胶酶，其加入量范围为 1-5% ο步骤⑵中滤液用盐酸调pH值4-5 ；步骤(3)中聚酰胺树脂柱型号为60-80目。
3.如权利要求1所述的一种苦碟子有效成分组合物的制备质量控制方法制得的苦碟子有效成分组合物质量控制方法是指波长切换法同时测定菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷在苦碟子注射液和苦碟子药材中的含量；其中测定方法为(1)对照品溶液的制备精密称取菊苣酸、木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品适量，分别置于IOmL棕色容量瓶中加甲醇溶解，制得浓度分别为0. 40mg/mL和0. 80mg/mL的对照品储备液，备用；精密吸取菊苣酸对照品储备液5mL和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷对照品储备液5mL置同一棕色IOmL容量瓶中，摇勻，制得对照品混合液；(2)供试品溶液的制备取样品，提取或稀释至适当浓度，用0.45μπι的微孔滤膜滤过， 作为供试品溶液；(3)色谱条件色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相 A为乙腈，流动相B为体积比0. 5%磷酸溶液进行梯度洗脱，梯度洗脱程序见表。流速度为 1. Oml/min ；柱温为40°C ；波长切换程序为0min-327nm，15min-348nm ；理论塔板数按菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷峰计算均应不低于3000 ；梯度洗脱程序表
4.如权利要求1所述的苦碟子有效成分组合物的用途，其特征是用于配制现代苦碟子注射液，用于冠心病、心绞痛、心肌梗塞和脑梗塞的治疗。
全文摘要
本发明公开了一种苦碟子有效成分组合物的制备、质量控制方法和用途。本发明公开的苦碟子有效成分组合物主要由菊苣酸和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷组成，其二者含量不少于80％。该组合物的提取方法是先经酶法进行前处理，再采用超临界流体萃取法，所得的萃取物分别经AB-8树脂柱和聚酰胺树脂柱进行分离、纯化、浓缩、干燥即得。另外，本发明还涉及在配制现代苦碟子注射液，用于冠心病、心绞痛、心梗和脑梗治疗方面的用途，以及在含量测定苦碟子注射液有效成分组合物和苦碟子药材质量控制中的用途。
文档编号A61K36/28GK102362883SQ20111032865
公开日2012年2月29日 申请日期2011年10月26日 优先权日2011年10月26日
发明者胡爽, 马占芝 申请人:沈阳双鼎科技有限公司